專利名稱：一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物。
背景技術(shù)：
隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體彈性的喪失引起皮膚皺紋的增加是衰老的典型特征。因此延緩皮膚衰老的分子篩選可以篩選能提高機(jī)體彈性的分子來實(shí)現(xiàn)?，F(xiàn)在已知，機(jī)體彈性主要由空間上高度有序交聯(lián)的彈性纖維提供，其中彈性纖維的交聯(lián)度是評(píng)估彈性的主要指標(biāo)。早于2004及2006年，有研究發(fā)現(xiàn)，賴酰基氧化酶I (Lysyl oxidase-like I, LOXLl)是特異地維護(hù)機(jī)體彈性纖維的發(fā)育及其更新的關(guān)鍵因子。沒有LOXLl直接特異性地影響彈性纖維的交聯(lián)形成，進(jìn)而導(dǎo)致一系列的動(dòng)態(tài)結(jié)締組織的病變，包括皮膚松弛、肺氣腫、心血管異常、血管增生 誘發(fā)的視網(wǎng)膜黃斑退變、性器官脫垂及尿失禁。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，隨著組織器官的老化，LOXLl的水平大大降低，并伴隨著彈性纖維交聯(lián)度的下降及彈性蛋白單體無序堆積的增加。這些發(fā)現(xiàn)揭示通過增強(qiáng)LOXLl蛋白的表達(dá)水平或活性能延緩生物有機(jī)體胞外基質(zhì)的衰老過程(Nature Genetics 2004 (36):178 ；Am J Path 2006(168): 519 ； IOVS2008 (49):2599 ；W0/2005/069975, US Patent 7255856, US Patent 7255857, Europeanpatent 1706139)。但是，現(xiàn)有技術(shù)還有沒有出現(xiàn)一種藥物篩選方法，能用于篩選出對(duì)LOXLl蛋白的表達(dá)水平或活性有效促進(jìn)作用的物質(zhì)，并將此類物質(zhì)用于制備抗衰老的藥物、化妝品等。另夕卜，現(xiàn)有技術(shù)中用于抗衰老的藥物，其活性成分采用了一定量的化學(xué)合成材料。這些化學(xué)合成材料對(duì)皮膚都有一定刺激性，不同程度的毒副作用。而且，并不能從基因水平上解決皮膚衰老問題。因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物，旨在解決現(xiàn)有抗衰老藥物問題。本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種中藥的應(yīng)用，其中，所述中藥具有進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動(dòng)態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。所述的中藥的應(yīng)用，其中，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。一種抗衰老藥物，其中，所述抗衰老藥物中含有如上所述的中藥的抽提物。所述的抗衰老藥物，其中，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。一種篩選藥物的方法，其中，用于篩選具有進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用的藥物，所述篩選藥物的方法包括以下步驟:研磨粉碎中藥藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥；將抽提物粉末加入到生理鹽水中，制備抽提物溶液，加入到待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24-48小時(shí)之后，通過實(shí)時(shí)PCR的方法檢測(cè)LOXLl mRNA水平，并通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOXLl蛋白水平。所述篩選藥物的方法，其中，所述篩選方法，還包括以下步驟:
將培養(yǎng)過的待測(cè)細(xì)胞經(jīng)過IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測(cè)鎖鏈素的含量，通過鎖鏈素的含量確定彈性纖維交聯(lián)度是否提高。有益效果:本發(fā)明中提供了所述的中藥的應(yīng)用，所述中藥具有促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述藥物用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動(dòng)態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。所述中藥具有提高皮膚彈性，延緩皮膚衰老的作用。而且本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的藥物的篩選方法，篩選出具有促進(jìn)胞外基質(zhì)交聯(lián)的中藥，此方法操作簡(jiǎn)單，能快速檢測(cè)出具有促進(jìn)作用的中藥。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中人成纖維細(xì)胞的LOXLl mRNA水平檢測(cè)結(jié)果。圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中人成纖維細(xì)胞的LOXLl蛋白水平檢測(cè)結(jié)果。圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中人成纖維細(xì)胞的LOXLl鎖鏈素含量檢測(cè)結(jié)果。圖4為本發(fā)明實(shí)施例3中人皮膚組織細(xì)胞的LOXLl mRNA水平檢測(cè)結(jié)果。圖5為本發(fā)明實(shí)施例3中人皮膚組織細(xì)胞的LOXLl蛋白水平檢測(cè)結(jié)果。圖6為本發(fā)明實(shí)施 例4中人皮膚組織細(xì)胞的LOXLl鎖鏈素含量檢測(cè)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。為尋找能夠提高體內(nèi)LOXLl水平的藥物分子，本發(fā)明通過實(shí)時(shí)PCR的方法，發(fā)現(xiàn)了一系列能促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的中藥，將這些中藥作用于組織細(xì)胞，從而提高了細(xì)胞中的LOXLl蛋白及彈性纖維的交聯(lián)度。所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。這些中藥的抽提物分子均具有能促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，從而促進(jìn)胞外基質(zhì)交聯(lián)。其中，虎杖的促進(jìn)作用最為突出。因此，本發(fā)明提供一種中藥的應(yīng)用，所述中藥具有進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動(dòng)態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。由于此類中藥的抽提物可以通過提高胞外基質(zhì)彈性纖維交聯(lián)度的方式，以延緩皮膚衰老。因此本發(fā)明中還提供一種抗衰老藥物，所述抗衰老藥物中含有具有促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的中藥的抽提物。本發(fā)明中還提供所述中藥的篩選方法，通過簡(jiǎn)單的步驟，有效快速地篩選出具有促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的中藥。所述篩選方法，包括以下步驟:
研磨粉碎適量中藥藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥；將抽提物粉末加入到生理鹽水中，制備抽提物溶液，加入到待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24-48小時(shí)之后，通過實(shí)時(shí)PCR的方法檢測(cè)LOXLl mRNA水平，并通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOXLl蛋白水平。這樣，通過實(shí)時(shí)PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)雙重檢測(cè)，確定中藥是否具有促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用。為了進(jìn)一步評(píng)估經(jīng)所述藥物抽提物處理之后彈性纖維交聯(lián)度是否提高，所述篩選方法，還包括以下步驟:
將培養(yǎng)過的待測(cè)細(xì)胞經(jīng)過IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測(cè)鎖鏈素的含量，通過鎖鏈素的含量確定彈性纖維交聯(lián)度是否提高。其中，所述待測(cè)細(xì)胞可以是人成纖維細(xì)胞或人皮膚組織細(xì)胞。以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實(shí)施例1:中藥粗提物的制備及刺激人成纖維細(xì)胞中LOXLl基因表達(dá)的藥物篩選 研磨粉碎適量藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥。將粗提物粉
末加入到生理鹽水中，制備濃度為I mg/ml的儲(chǔ)液。使用時(shí)藥物粗提物以200倍稀釋加入到人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24小時(shí)之后檢測(cè)LOXLl mRNA水平和蛋白水平。LOXLl mRNA水平檢測(cè)結(jié)果如圖1所示，LOXLl蛋白水平如圖2所示。實(shí)時(shí)PCR結(jié)果表明，郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖抽提物能顯著性提高LOXLl mRNA水平；免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明，LOXLl的蛋白水平增加了 1.3-2.1倍，圖示的是平均值土SEM (η=6; Ρ〈0.01)。實(shí)施例2:中藥粗提物對(duì)人成纖維細(xì)胞中彈性纖維交聯(lián)的促進(jìn)作用
為評(píng)估經(jīng)藥物處理之后彈性纖維交聯(lián)度，本實(shí)施例中測(cè)定了人成纖維細(xì)胞經(jīng)IN鹽酸110°C消化過夜后反應(yīng)彈性纖維交聯(lián)度的鎖鏈素的含量，檢測(cè)結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明經(jīng)郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖抽提物處理細(xì)胞之后24小時(shí)，細(xì)胞的鎖鏈素含量提高了
0.4-1.7倍，說明彈性纖維的交聯(lián)度顯著性提高，圖示的是平均值土SEM (n=6; P〈0.01)。實(shí)例3:中藥抽提物對(duì)人皮膚組織中LOXLl表達(dá)的促進(jìn)作用
本實(shí)施例中進(jìn)一步測(cè)定了人皮膚組織培養(yǎng)48小時(shí)之后，藥物200倍稀釋對(duì)LOXLl表達(dá)的影響。LOXLl mRNA水平檢測(cè)結(jié)果如圖4所示，LOXLl蛋白水平如圖5所示。實(shí)時(shí)PCR的結(jié)果表明，LOXLl mRNA水平提高了 0.4-1.9倍；免疫印跡的實(shí)驗(yàn)表明，LOXLl蛋白水平提高7 0.7-1.6 倍，圖示的是平均值土SEM (η=6; Ρ〈0.01)。實(shí)施例4:中藥抽提物對(duì)人皮膚組織中彈性纖維交聯(lián)的促進(jìn)作用
本實(shí)施例中進(jìn)一步測(cè)定了人皮膚組織培養(yǎng)48小時(shí)之后，細(xì)胞的彈性纖維交聯(lián)度。人皮膚組織經(jīng)IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測(cè)彈性纖維交聯(lián)度的鎖鏈素的含量，結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明經(jīng)郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖抽提物處理后，鎖鏈素含量提高了 0.5-1.8倍，說明彈性纖維的交聯(lián)度顯著性提高，圖示的是平均值土SEM (n=6; P〈0.01)。綜上，本發(fā)明提供了一種促進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的藥物的篩選方法，篩選出具有促進(jìn)胞外基質(zhì)交聯(lián)的中藥，此方法操作簡(jiǎn)單，能快速檢測(cè)出具有促進(jìn)作用的中藥。而且本發(fā)明中還提供了所述的中藥的應(yīng)用，將所述藥物用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動(dòng)態(tài)結(jié)締組織 病變所致的疾病的藥物。所述中藥具有提高皮膚彈性，延緩皮膚衰老的作用。 應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進(jìn)或變換，所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種中藥的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥具有進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動(dòng)態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥的應(yīng)用，其特征在于，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。
3.一種抗衰老藥物，其特征在于，所述抗衰老藥物中含有如權(quán)利要求1所述的中藥的抽提物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗衰老藥物，其特征在于，所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。
5.一種篩選藥物的方法，其特征在于，用于篩選具有進(jìn)LOXLl基因轉(zhuǎn)錄的作用的藥物，所述篩選藥物的方法包括以下步驟: 研磨粉碎中藥藥材，以乙醇回流法抽提數(shù)次，過濾并合并濾液，冷凍干燥；將抽提物粉末加入到生理鹽水中，制備抽提物溶液，加入到待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24-48小時(shí)之后，通過實(shí)時(shí)PCR的方法檢測(cè)LOXLl mRNA水平，并通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOXLl蛋白水平。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述篩選藥物的方法，其特征在于，所述篩選方法，還包括以下步驟: 將培養(yǎng)過的待測(cè)細(xì)胞經(jīng)過IN鹽酸110°C消化過夜后，檢測(cè)鎖鏈素的含量，通過鎖鏈素的含量確定彈性纖維 交聯(lián)度是否提高。
全文摘要
本發(fā)明公開一種中藥的應(yīng)用及其篩選方法和抗衰老藥物，所述中藥具有進(jìn)LOXL1基因轉(zhuǎn)錄的作用，將所述中藥用于制備化妝品添加劑、食品添加劑，或用于制備治療或改善因動(dòng)態(tài)結(jié)締組織病變所致的疾病的藥物。所述中藥為郁金、大黃、姜黃、蘆薈、虎杖。這些中藥的抽提物分子均具有能促進(jìn)LOXL1基因轉(zhuǎn)錄的作用，從而促進(jìn)胞外基質(zhì)交聯(lián)。
文檔編號(hào)A61P19/04GK103239380SQ20131018673
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月20日
發(fā)明者劉小青 申請(qǐng)人:劉小青