肝纖維化治療方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于抑制哺乳動(dòng)物S100A4基因表達(dá)的試劑在制備用于治療所述哺乳動(dòng)物的肝纖維化的藥物中的用途。
【專利說明】肝纖維化治療方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于肝纖維化治療領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及通過抑制哺乳動(dòng)物S100A4基因的表達(dá)來治療所述哺乳動(dòng)物的肝纖維化。
【背景技術(shù)】
[0002]肝纖維化是指肝臟中細(xì)胞外基質(zhì)成分的大量沉積，它是一種對(duì)肝臟慢性損傷的修復(fù)反應(yīng)^肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展成肝硬化的必經(jīng)階段，由于肝硬化是肝臟實(shí)質(zhì)性病變，醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為較難逆轉(zhuǎn)，在治療上除肝臟移植外，缺乏其它有效措施2。近年來，隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用，人們對(duì)肝纖維化發(fā)生的機(jī)制進(jìn)行了廣泛而深入的討論，明確提出了肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)的論點(diǎn)。因此，逆轉(zhuǎn)肝纖維化的研究已成為世界醫(yī)學(xué)攻關(guān)中的一個(gè)熱點(diǎn)課題。[0003]目前，國內(nèi)外對(duì)于肝纖維化治療的研究已經(jīng)取得了一些成果。臨床上常用的治療肝纖維化的藥物主要有干擾素、秋水仙堿、白介素-10等，但是這些藥物的治療效果有限，且副作用大，不宜長期使用。因此亟需肝纖維化治療的新靶點(diǎn)和新方法。
[0004]S100A4是SlOO鈣結(jié)合蛋白超家族中的一員，它在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核以及胞外基質(zhì)中均有分布3。S100A4在哺乳物種間的保守性很高，人S100A4(NCBI數(shù)據(jù)庫編號(hào):NP_002952)與小鼠S100A4(NCBI數(shù)據(jù)庫編號(hào):NP_035441)在氨基酸序列上的相似性高達(dá)93%。已有研究表明S100A4能通過多種途徑促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，如促進(jìn)腫瘤血管新生4、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性5以及上調(diào)胞外基質(zhì)中金屬蛋白酶的表達(dá)6’7等。但是S100A4在治療肝纖維化方面的作用至今還沒有報(bào)道。
[0005]為了探討新的肝纖維化治療的方法，發(fā)明人進(jìn)行了本發(fā)明。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明提供了一種通過靶向S100A4分子治療肝纖維化的方法。所述方法具體是通過RNA干擾沉默S100A4基因來治療肝纖維化。
[0007]為了抑制S100A4的表達(dá)，本發(fā)明采用了 RNA干擾技術(shù)。RNA干擾是指一種分子生物學(xué)上由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，其機(jī)制是通過阻礙特定基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄來抑制基因表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞中導(dǎo)入與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)同源的雙鏈RNA時(shí)，雙鏈RNA復(fù)合體先降解成為35nt左右的小RNA分子，然后他們通過序列互補(bǔ)與mRNA結(jié)合，從而導(dǎo)致mRNA降解8O其中短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)包括兩個(gè)短反向重復(fù)序列，中間由一莖環(huán)(loop)序列分隔的，組成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。
[0008]目前常用的體內(nèi)RNA干擾方法是將干擾RNA序列作為“短發(fā)夾”克隆到質(zhì)粒載體中，在體內(nèi)該發(fā)夾序列被表達(dá)出來，形成一個(gè)雙鏈RNA，并被雙鏈RNA復(fù)合體降解為有效的小RNA分子。將雙鏈RNA導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)的方法主要包括:直接注射含RNA干擾序列的質(zhì)粒、將含RNA干擾序列的質(zhì)粒包裝成腺病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒注射入體內(nèi)、以及脂質(zhì)體介導(dǎo)的體內(nèi)轉(zhuǎn)染等。[0009]因此，靶向S100A4的RNA干擾可以通過直接注射含RNA干擾序列的質(zhì)粒、將含RNA干擾序列的質(zhì)粒包裝成腺病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒注射入體內(nèi)、以及脂質(zhì)體介導(dǎo)的體內(nèi)轉(zhuǎn)染等方法來實(shí)現(xiàn)。
[0010]在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，采用腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾。采用其他方式的RNA干擾同樣可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。
[0011]腺病毒是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。目前常用的應(yīng)用于基因治療的腺病毒多為復(fù)制缺陷型重組人V型腺病毒，刪除了與腺病毒復(fù)制相關(guān)的El和E3基因。盡管一些類型的腺病毒會(huì)引起人胃腸道、呼吸系統(tǒng)或眼部的急性感染，但是應(yīng)用于基因治療研究的腺病毒是安全的。由于腺病毒可以感染呼吸道和消化道，所以它所介導(dǎo)的基因治療不僅可以靜脈注射，還可以通過口服經(jīng)腸道吸收或通過噴霧、滴注經(jīng)呼吸道吸收，使得基因治療易于推廣應(yīng)用。腺病毒易于制備、純化和濃縮，病毒滴度可以高達(dá)10npfu/ml。所以，腺病毒是目前基因治療臨床試驗(yàn)中應(yīng)用最多的一種載體 。
[0012]因此本發(fā)明采用腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)抑制S100A4基因的表達(dá)。首先根據(jù)小鼠S100A4mRNA序列設(shè)計(jì)與其互補(bǔ)的shRNA序列，將其克隆到表達(dá)腺病毒載體中。進(jìn)而利用AdEasy?系統(tǒng)重組出攜帶靶向S100A4shRNA的腺病毒，經(jīng)氯化銫密度梯度離心純化出腺病毒。純化的腺病毒通過尾靜脈注射的方式給予誘導(dǎo)肝纖維化的小鼠。
[0013]更具體地，本發(fā)明提供以下各項(xiàng):
[0014]1.用于抑制哺乳動(dòng)物S100A4基因表達(dá)的試劑在制備用于治療所述哺乳動(dòng)物的肝纖維化的藥物中的用途。
[0015]2.根據(jù)I所述的用途，其中所述試劑是針對(duì)所述S100A4基因的RNA干擾試劑。
[0016]3.根據(jù)2所述的用途，其中所述RNA干擾試劑包含與遞送載體結(jié)合的針對(duì)所述S100A4基因的RNA干擾序列。
[0017]4.根據(jù)3所述的用途，其中所述遞送載體選自:質(zhì)粒載體、病毒載體、膽固醇、納米顆粒、殼聚糖和脂質(zhì)體。
[0018]5.根據(jù)3所述的用途，其中所述遞送載體選自:腺病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
[0019]6.根據(jù)3所述的用途，其中所述遞送載體是腺病毒載體。
[0020]7.根據(jù)1-6中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述哺乳動(dòng)物選自人、猴、狗、貓、牛、馬、羊、豬、兔、小鼠和大鼠。
[0021]8.根據(jù)7所述的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是小鼠，并且所述S100A4基因的序列如SEQ.1D.N0.1 所示。
[0022]9.根據(jù)7所述的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是人，并且所述S100A4基因的序列如SEQ.1D.N0.2 所示。
[0023]10.一種藥物組合物，其包含與遞送載體結(jié)合的針對(duì)哺乳動(dòng)物S100A4基因的RNA干擾序列，
[0024]11.根據(jù)10所述的藥物組合物，其中所述遞送載體選自:質(zhì)粒載體、病毒載體、膽固醇、納米顆粒、殼聚糖和脂質(zhì)體。
[0025]12.一種治療哺乳動(dòng)物肝纖維化的方法，所述方法包括抑制所述哺乳動(dòng)物S100A4基因的表達(dá)。
[0026]13.用于抑制哺乳動(dòng)物S100A4基因表達(dá)的試劑作為治療所述哺乳動(dòng)物的肝纖維化的藥物的用途。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0027]圖1:用于將干擾序列構(gòu)建到其上的腺病毒載體pRNAT-Hl.1/Adeno (上海閃晶分子生物科技有限公司)的載體圖譜。
[0028]圖2:注射到體內(nèi)的攜帶綠色熒光蛋白(GFP)腺病毒可以感染肝臟組織幾乎所有細(xì)胞，如圖所示腺病毒組肝組織全部為綠色，沒有注射腺病毒的空白對(duì)照組則沒有綠色。圖中藍(lán)色為細(xì)胞核。
[0029]圖3:通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所有肝臟細(xì)胞GFP的表達(dá)情況，sh-con及sh_S100A4組GFP的表達(dá)峰明顯高于空白對(duì)照組。
[0030]圖4:sh-S100A4重組腺病毒可以有效降低肝臟組織中S100A4，圖中所示為肝組織勻衆(zhòng)后的western blot結(jié)果，β-actin為內(nèi)參。
[0031]圖5:sh-S100A4 重組腺病毒降低S100A4基因后肝纖維化水平降低。
【具體實(shí)施方式】
[0032]以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡明本發(fā)明。但是應(yīng)該理解，所述實(shí)施例只是舉例說明的目的，并不意欲限制本發(fā)明的范圍和精神。
[0033]實(shí)施例1:RNA干擾敲低S100A4基因
[0034]1.針對(duì)小鼠S100A4基因的shRNA序列設(shè)計(jì)及合成
[0035]小鼠S100A4(NM_011311.2)的序列如SEQ.1D.N0.1所示，針對(duì)其第3外顯子序列(194-499)，設(shè)計(jì)出與其互補(bǔ)的一段序列，如下:
[0036]sh-S100A4:5，-GGACAGATGAAGCTGCATT-3’
[0037]同時(shí)，設(shè)計(jì)一段無關(guān)的對(duì)照序列，如下:
[0038]sh-con:5’ -TTCTCCGAACGTGTCACGT-3，
[0039]按照酶切位點(diǎn)(Mlu I) +正向序列+莖環(huán)序列+反向序列+polyT+酶切位點(diǎn)(HindIII)的原則，合成如下寡核苷酸序列:
[0040]sh-SlOOA4-正向:5，-cgcgtGGACAGATGAAGCTGCATTTTC[0041 ] AAGAGAAATGCAGCTTCATCTGTCCTTTTTTCCAAa-3，
[0042]sh-S100A4-反向:5’ -agcttTTGGAAAAAAGGACAGATGAAGC
[0043]TGCATTTCTCTTGAAAATGCAGCTTCATCTGTCCa-3，
[0044]sh-con-正向:5，-cgcgtTTCTCCGAACGTGTCACGTTTC
[0045]AAGAGAACGTGACACGTTCGGAGAATTTTTTCCAAa-3，
[0046]sh-con-反向:5’ -agcttTTGGAAAAAATTCTCCGAACGTGTCA
[0047]CGTTCTCTTGAAACGTGACACGTTCGGAGAAa-3，
[0048]shRNA序列的合成由上海閃晶分子生物科技有限公司完成。
[0049]將合成得到的正向和反向兩條單鏈DNA序列用TE溶解，兩條單鏈各取5ul混合，退火(95°C 2min, 72°C 2min,37°C 2min,25°C 2min,4°C IOmin)形成雙鏈結(jié)構(gòu)，待連接(注:對(duì)sh-S100A4以及sh-con分別進(jìn)行以下步驟2-步驟6的處理)。
[0050]2.腺病毒載體雙酶切，凝膠回收[0051]根據(jù)pRNAT-Hl.1/Adeno質(zhì)粒(Genscript, SD1209)白勺結(jié)構(gòu)圖，該質(zhì)粒攜帶珊瑚蟲 GFP(cGFP)標(biāo)簽(圖1)，將 pRNAT-Hl.1/Adeno 質(zhì)粒用 Mlu I (Promega, R6381)和HindIII (Promega, R6041)進(jìn)行酶切(酶切體系為:質(zhì)粒 IOul, 10Xbuffer2ul, BamHllul,Hind III lul,雙蒸水 6ul,總體系為 20ul,37°C 4h)。
[0052]參照凝膠回收試劑盒(天根生化科技有限公司，DP214)說明書步驟，對(duì)酶切后產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定并回收較大的(約8kb)pRNAT-Hl.1/Adeno線性化片段。
[0053]3.載體與shRNA DNA雙鏈連接與轉(zhuǎn)化
[0054]步驟I中的DNA雙鏈片段與步驟2中的線性化載體的摩爾數(shù)比為3:1，反應(yīng)體系為 1.5ul T4DNA 緩沖液(Promega, C126A)，lul T4DNA 連接酶(Promega, M1801), 8.5ul 雙蒸水，總體系為15ul，充分混勻，37 °C反應(yīng)4h。
[0055]將連接后的體系轉(zhuǎn)化到大腸桿菌ToplO感受態(tài)細(xì)胞(全式金生物技術(shù)有限公司，⑶101)。轉(zhuǎn)化的具體步驟:將連接體系與感受態(tài)細(xì)胞混合后冰浴30min，42°C水浴熱激90s，冰浴lmin。在混合體系中加入Iml LB培養(yǎng)基(配方:胰蛋白胨10g/L,酵母提取物5g/L,氯化鈉10g/L)于37°C搖床溫育lh。鋪板37°C培養(yǎng)12-16h。將平皿中單菌落挑入5ml LB培養(yǎng)基培養(yǎng)過夜，用試劑盒提取質(zhì)粒(天根生化科技有限公司，DP103)。
[0056]4.重組腺病毒質(zhì)粒的構(gòu)建
[0057]I)準(zhǔn)備大腸桿菌 BJ5183-AD1 感受態(tài)細(xì)胞(Stratagene，200157)；
[0058]2)利用Pme I (New England Biolabs, R0560)酶切、線性化并回收步驟3中得到的質(zhì)粒，濃度約為IOOng/μ I ；
[0059]3)取出2管I)中準(zhǔn)備好的BJ5183-AD1感受態(tài)細(xì)胞，放在冰上融化，將1_5 μ I (約I μ g)在2)中制備的線性化的質(zhì)粒加入至含約50 μ I BJ5183-AD1感受態(tài)的1.5ml離心管中混勻，冰上放置30min,42°C熱激90s轉(zhuǎn)化,快速將離心管移至冰上,放置Imin后每管加Iml LB培養(yǎng)基，在37°C搖床溫育lh，使細(xì)菌復(fù)蘇；
[0060]4)取50 μ I步驟3)中的轉(zhuǎn)化細(xì)胞液涂于50 μ g/ml卡那霉素(Sigma，K0879)抗性平板，37°C培養(yǎng)16-20h ；
[0061]5)次日挑取平板上長出的菌落(選擇最小的菌落)，接種于3ml含50 μ g/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基，37 °C培養(yǎng)15h ；
[0062]6)用試劑盒提取質(zhì)粒(天根生化科技有限公司，DP103)，0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，大質(zhì)粒為可能陽性克隆，進(jìn)一步酶切鑒定。以Pac I (NewEngland Biolabs,R0547)單酶切，0.8%瓊脂糖凝膠電泳如顯示出一條大片段(約30kb)，及一條小片段(約3.0或4.5kb)，則確定為陽性克??；
[0063]7)取1-5 μ I陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌ToplO感受態(tài)細(xì)胞(全式金生物技術(shù)有限公司，⑶101)擴(kuò)增細(xì)菌并提取質(zhì)粒，得到的即為重組腺病毒質(zhì)粒；
[0064]8)利用Pac I酶切，線性化并回收重組質(zhì)粒。
[0065]5.重組腺病毒的包裝
[0066]l)AD-293細(xì)胞(Stratagene，240085)在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)接種于六孔板的I個(gè)孔中，Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM)培養(yǎng)基(Gibco, 12800-017)中，在 pH值7.2-7.4、溫度37°C、相對(duì)濕度95%、5%C02的條件下培養(yǎng)，使之在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合率為50-70% ；[0067]2)用 Lipofectamine? 2000Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen,11668027)，依照說明書將4 μ g線性化的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染AD-293細(xì)胞；
[0068]3) 6個(gè)小時(shí)后移去上清液，加入3ml DMEM37°C預(yù)熱的完全DMEM培養(yǎng)液(含10%胎
牛血清，1%青霉素/鏈霉素)；
[0069]4)在轉(zhuǎn)染后7到10天，在顯微鏡下看到含綠色熒光的彗星狀細(xì)胞脫落，將細(xì)胞從瓶中刮下并移入15ml錐形管。4000g, 5min離心后將細(xì)胞重懸于0.5ml磷酸鹽緩沖液(PBS，配方:NaC1137mmol/L，KC12.7mmol/L，Na2HP0410mmol/L，KH2P042mmol/L)中。液氮中凍結(jié)細(xì)胞，37°C水浴中溶解40s-60s。此步驟共重復(fù)3次，中間可劇烈振蕩一次；之后lOOOOg，IOmin離心，取上清液(含重組腺病毒)，存于-80°C冰箱。
[0070]6.重組腺病毒的擴(kuò)增和純化
[0071]I) AD-293細(xì)胞鋪于含IOml完全DMEM培養(yǎng)基的IOOmm2培養(yǎng)皿中，在pH值7.2-7.4、溫度37 °C、相對(duì)濕度95%、5%C02的條件下培養(yǎng)。至50-70%的匯合率時(shí)，用不含血清的DMEM5ml培育細(xì)胞半小時(shí)，之后加入100 μ I步驟5中得到的含重組腺病毒的上清液，10小
時(shí)后棄掉上清，換為正常完全培養(yǎng)基；
[0072]2)上述細(xì)胞被感染3-4天后，觀察到有1/3到1/2的細(xì)胞脫離漂??；此時(shí)，將細(xì)胞從皿中刮下并移入15ml錐形管。4000g，5min離心后將細(xì)胞重懸于Iml PBS中。液氮中凍結(jié)細(xì)胞，37°C水浴中溶解40s-60s。此步驟共重復(fù)3次，中間可劇烈振蕩一次；之后lOOOOg，IOmin離心，取上清液(含重組腺病毒)，分裝后存于-80°C冰箱。
[0073]3)為了進(jìn)一步擴(kuò)增和純化，新鋪20個(gè)175mm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶的AD-293細(xì)胞，在pH值
7.2-7.4、溫度37°C、相對(duì)濕度95%、5%C02的條件下培養(yǎng)。至50-70%的匯合率時(shí)，用不含血清的DMEMlOml培育細(xì)胞半小時(shí)，之后加入步驟2)中的病毒上清(每瓶50 μ I)孵育10h，之后換為含血清的完全培養(yǎng)基。2-3天后，將細(xì)胞從皿中刮下并移入15ml錐形管。4000g，5min離心后將細(xì)胞重懸于12ml PBS中。液氮中凍結(jié)細(xì)胞，37°C水浴中溶解40s-60s。此步驟共重復(fù)3次，中間可劇烈振蕩一次；之后lOOOOg，IOmin離心，取上清液(含重組腺病毒);
[0074]4)病毒純化:CsCl不連續(xù)梯度離心，20ml超速離心管中緩慢加入8mll.4g/mlCsCl(53g+87mL10mM Tris-HCl，ρΗ=7.9)，上面小心加入 6mLl.2g/mlCsCl (26.8g+92mL10mM Tris-HCl，pH=7.9)，再小心加入3)中獲得的病毒上清液至體積達(dá)到20ml。平衡后，4°C,23000rpm,離心90min,用注射器抽吸下層藍(lán)白色病毒帶；
[0075]5)病毒透析去鹽:配置透析液(IOmM Tris pH8.0, 2mM MgCl2,5%鹿糖)，滅菌處理。4°C透析，更換3次透析液，每次一小時(shí)，可基本去除CsCl，病毒保存于-80°C。
[0076]6)病毒滴度測(cè)定:在Eppendorf Biophotometer中測(cè)量透析后的病毒中的總蛋白量，Iyg病毒蛋白相當(dāng)于4XIO9病毒顆粒；
[0077]7.RNA干擾沉默S100A4治療肝纖維化
[0078]18只6周齡的BALB/c小鼠(購自維通利華公司)，分為兩組(實(shí)驗(yàn)組:sh_S100A4組，以及對(duì)照組:sh-con組)，每組9只小鼠。將CCl4與玉米油(Sigma, C8267)按體積比1:9混合，按照每20g小鼠100 μ I的劑量腹腔注射，16小時(shí)后，通過尾靜脈注射4X 101°個(gè)步驟6中制備的病毒顆粒，之后繼續(xù)按照相同劑量一周兩次注射CCl4與玉米油的混合液，共注射5次，在第5次注射CCl4與玉米油的混合液后48小時(shí)，斷頸處死小鼠，取肝臟組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色觀察肝纖維化程度。[0079]在尾靜脈注射腺病毒7天后，取小鼠肝臟，通過免疫熒光染色檢測(cè)肝臟細(xì)胞(具體方法參照文獻(xiàn) Zhang，J.，et al.FSPl+fibroblasts promote skin carcinogenesis bymaintaining MCP-l—mediated macrophage infiltration and chronic inflammation.The American journal of pathologyl78，382-390 (2011))，如圖 2 所不，攜帶 GFP 標(biāo)簽的腺病毒在所釆用劑量下，即AXIOki個(gè)步驟5中制備的病毒顆粒，可以感染所取的全部肝臟組織。
[0080]同時(shí)，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝臟細(xì)胞(具體方法參照文獻(xiàn)Zhao，X.，et al.TNFsignaling drives myeloid-derived suppressor cell accumulation.The Journal ofclinical investigationl22, 4094-4104 (2012))，如圖 3 所示，攜帶 GFP 標(biāo)簽的腺病毒在所釆用劑量下，即4X 101°個(gè)步驟5中制備的病毒顆粒，可成功感染肝臟組織中的細(xì)胞。
[0081]在第5次注射CCl4與玉米油的混合液后48小時(shí)，通過肝組織勻漿的Westernblot檢測(cè)S100A4蛋白質(zhì)的表達(dá)，可以觀察到sh-S100A4可成功抑制肝臟中S100A4的表達(dá)(圖 4)。同時(shí)，通過參照所引文獻(xiàn)(Wang，J.，et al.CD137_mediated pathogenesis fromchronic hepatitis to hepatocellular carcinoma in hepatitis B virus-transgenicmice.Journal of immunology 185，7654-7662 (2010))中所述的方法對(duì)肝臟組織切片進(jìn)行天狼星紅染色(組織中膠原蛋白染色呈紅色，其他組織染色呈綠色)，如圖5所示，sh_S100A4組中的膠原含量明顯少于sh-con組(p=0.0019，t檢驗(yàn))，說明sh_S100A4組的肝纖維化水平低于sh-con組。
[0082]參考文獻(xiàn)
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【權(quán)利要求】
1.用于抑制哺乳動(dòng)物S100A4基因表達(dá)的試劑在制備用于治療所述哺乳動(dòng)物的肝纖維化的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述試劑是針對(duì)所述S100A4基因的RNA干擾試劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述RNA干擾試劑包含與遞送載體結(jié)合的針對(duì)所述S100A4基因的RNA干擾序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述遞送載體選自:質(zhì)粒載體、病毒載體、膽固醇、納米顆粒、殼聚糖和脂質(zhì)體。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述遞送載體選自:腺病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述遞送載體是腺病毒載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述哺乳動(dòng)物選自人、猴、狗、貓、牛、馬、羊、豬、兔、小鼠和大鼠。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是小鼠。
9.根據(jù)權(quán)利要求 7所述的用途，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
10.一種藥物組合物，其包含與遞送載體結(jié)合的針對(duì)哺乳動(dòng)物S100A4基因的RNA干擾序列，所述遞送載體選自:質(zhì)粒載體、病毒載體、膽固醇、納米顆粒、殼聚糖和脂質(zhì)體。
【文檔編號(hào)】A61P1/16GK103520740SQ201310495250
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月21日
【發(fā)明者】秦志海, 陳琳, 李潔 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院生物物理研究所