用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物的制作方法
【專利摘要】本說明書涉及一種用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，更具體而言，涉及包含以下肽的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的肽、與所述肽的氨基酸序列具有80％以上的序列同一性的肽、或者作為其片段的肽。根據(jù)本發(fā)明，提供了用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，所述組合物對類風濕性關節(jié)炎具有優(yōu)異效果，但具有最小的副作用。
【專利說明】用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，所述組合物包括：包 含SEQIDN0:1的氨基酸序列的肽，與所述肽序列具有至少80%的同源性的肽，或者作為其 片段的肽。

【背景技術】
[0002] 類風濕性關節(jié)炎是以多發(fā)性關節(jié)炎為特征的慢性炎性疾病。在最初階段，炎癥發(fā) 生在覆蓋關節(jié)的滑膜中，但其會擴散穿過周圍的軟骨和骨從而破壞和改變關節(jié)。除了關節(jié) 之外，關節(jié)外的其他癥狀包括貧血、干燥綜合征、皮下結節(jié)、肺纖維化、脈管炎、皮膚潰瘍以 及能夠進行系統(tǒng)性入侵的疾病。
[0003] 類風濕性關節(jié)炎的確切成因尚未發(fā)現(xiàn)，但已知自身免疫性是其主要的機制。自身 免疫性是指攻擊自己而不是抵御外界攻擊的免疫系統(tǒng)紊亂。通常一直認為遺傳因素和細菌 或病毒感染是類風濕性關節(jié)炎的成因。通常已知類風濕性關節(jié)炎是在受物理或生理應激之 后容易出現(xiàn)的疾病。換言之，類風濕性關節(jié)炎是涉及關節(jié)的腫脹、炎癥、僵硬和疼痛并在全 身顯示出系統(tǒng)性多發(fā)性關節(jié)炎癥狀的根深蒂固的自身免疫病。換言之，其是指身體將自身 認為是非自身、基于自身-非自身的識別缺陷而攻擊自己、并且產(chǎn)生異常的免疫應答以形 成結締組織炎癥的系統(tǒng)性疾病。
[0004] 退化性關節(jié)炎，即骨關節(jié)炎，意味著疾病。當在構成軟骨的軟骨細胞中發(fā)生老化和 退化時，II型膠原和蛋白聚糖的合成受到抑制，同時誘導產(chǎn)生了炎性細胞因子，包括白細胞 介素10和腫瘤壞死因子a，然后，降解關節(jié)基質(zhì)的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP)的合成和活性增 力口，從而使受破壞的軟骨組織引起疾病。
[0005] 此外，當一氧化氮的產(chǎn)生引起自擴增炎性細胞因子的合成并由此誘導多得多的 MMP合成時，關節(jié)基質(zhì)降解的加速使得類風濕性關節(jié)炎惡化。同時，炎性細胞因子通過增加 前列腺素E2 ( -種脂代謝物）的產(chǎn)量而在關節(jié)炎處誘導炎癥。
[0006] 作為慢性關節(jié)風濕病的療法，使用抗炎類固醇（例如潑尼松龍）、非類固醇抗炎藥 (例如吲哚美辛、阿司匹林）、免疫抑制劑（例如環(huán)孢菌素A、他克莫司（FK506)、甲氨蝶呤、 環(huán)磷酰胺、咪唑硫嘌呤）、疾病調(diào)節(jié)性抗風濕病藥（例如，金鹽試劑）。抗炎藥控制炎癥并減 少疼痛和腫脹，但難以抑制疾病的進展。因此，大多數(shù)藥物只是單純地緩解癥狀或延遲疾病 的進展，還有可能在長期施用時表現(xiàn)出副作用，因此沒有藥物能聲稱足以讓人滿意。
[0007] 另一方面，用于治療類風濕性關節(jié)炎的藥物可以根據(jù)炎癥的減少、疾病進展的延 遲和尿酸濃度的下降的主要機制而分類，并且用于治療神經(jīng)性關節(jié)炎的許多藥物可減少炎 癥。炎癥是引起疼痛、浮腫、發(fā)熱、癲癇和僵硬的疾病進程，快速舒緩炎癥的藥物包括非類固 醇抗炎藥（包括阿司匹林）和類固醇抗炎藥（包括可的松）。
[0008] 非類固醇抗炎藥具有通過減少疼痛來緩解炎癥和舒緩神經(jīng)性關節(jié)炎的效果，但是 對于具有活性胃潰瘍和胃區(qū)域出血病史的人而言，這種藥是禁用的，因為這種藥物可能引 起胃腸問題和胃痛。類固醇抗炎藥不常使用，因為該藥與其功效相比具有嚴重的副作用，包 括體重增加和高血壓。具體而言，類固醇抗炎藥與根治療法不相關，并且由于能暫時減少疼 痛，該藥物可能導致過度使用，因此需要小心地使用該藥物，該藥物可能引起神經(jīng)性關節(jié)炎 破壞和疾病惡化。
[0009] 因此，由于用于治療關節(jié)炎的現(xiàn)有療法的治療功效有限并且還包括副作用，現(xiàn)有 療法具有不能長期使用的問題。因此，需要能夠解決現(xiàn)有療法的問題的新療法。
[0010] 【現(xiàn)有技術文獻】
[0011] 【專利文獻】
[0012] KR2012-0121196A
[0013]KR2004-0015087A
[0014]【非專利文獻】
[0015]Kim等,"ExperimentalAnimalModelsforRheumatoidArthritis:Methodsand Applications，'，JournalofRheumaticDisease, 19 卷，4 期，2012 年 8 月；
[0016]Myers等，"Co11agen-1nducedArthritis,anAnimalModelof Autoimmunity"，LifeSciences, 61 卷，19 期，1861-1878, 1997


【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 【技術問題】
[0018] 本發(fā)明的發(fā)明人努力開發(fā)出了能有效治療類風濕性關節(jié)炎且沒有有害的副作用 的組合物,并且完成了本發(fā)明。
[0019] 本發(fā)明涉及提供能有效治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，所述組合物包含源自端粒 酶的肽。
[0020] 【技術方案】
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，提供了一種用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合 物，所述組合物包括：包含SEQIDNO: 1的氨基酸序列的肽，包含與所述氨基酸序列具有 80%以上的序列同一性的氨基酸序列的肽，或者上述肽的肽片段。
[0022] 在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述肽片段包 含三個以上氨基酸。
[0023] 在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述肽可以源 自人端粒酶。
[0024] 在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述組合物可 以基本上消除、預防或治療與類風濕性關節(jié)炎相關的癥狀。
[0025] 在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述組合物可 以以5nM/kg以下、更優(yōu)選以0. 15nM/kg?5nM/kg的溶液濃度提供。
[0026] 在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述組合物可 以是外用皮膚組合物。
[0027] 在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述組合物可 以是藥物組合物。
[0028]在本發(fā)明實施方式的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的組合物中，所述組合物可 以是食品組合物。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的實施方式，提供了一種預防和治療類風濕性關節(jié)炎的方法，所述方 法包括向有需要的受試對象施用有效量的用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的上述組合物 的步驟。
[0030] 在本發(fā)明實施方式的預防和治療類風濕性關節(jié)炎的方法中，所述組合物可以以低 于5nM/Kg/天、更優(yōu)選以0. 15nM/Kg/天?5nM/Kg/天施用。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的實施方式，提供了所述組合物在預防和治療類風濕性關節(jié)炎中的應 用。
[0032] 在一個實施方式中，提供了一種用于預防和治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，所述 試劑盒包括：包含SEQIDNO: 1的氨基酸序列的肽，包含與所述氨基酸序列具有80%以上 的序列同一性的氨基酸序列的肽，或者上述肽的肽片段；以及包括所述肽或組合物的施用 劑量、施用途徑、施用頻率和適應證中的至少一種的使用說明書。
[0033]【有益效果】
[0034] 根據(jù)本發(fā)明，可以提供一種具有以最小的副作用預防或治療類風濕性關節(jié)炎的良 好功效的組合物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0035] 圖1和圖2分別顯示了使用CIA動物模型誘導類風濕性關節(jié)炎并用肽進行處理的 第一和第二實驗的按時間的計劃方案。
[0036] 圖3通過照片顯示了關于類風濕性關節(jié)炎指數(shù)的分數(shù)的各個狀況。
[0037] 圖4顯示了用于確認類風濕性關節(jié)炎的治療效果的組織病理學圖。
[0038] 圖5通過圖表顯示了第一實驗的結果，其呈現(xiàn)了對照組、InM預防組和InM治療組 的類風濕性關節(jié)炎指數(shù)。
[0039] 圖6通過圖表顯示了第一實驗的結果，其呈現(xiàn)了對照組、10nM預防組和10nM治療 組的類風濕性關節(jié)炎指數(shù)。
[0040] 圖7顯示了對照組和治療組的體重變化，其中Y軸的值表示體重變化（以克為單 位）。X軸的值表示治療經(jīng)歷的時間。
[0041] 圖8顯示了第二實驗的結果，其呈現(xiàn)了對照組和0? 2nM、lnM、2nM及5nM治療組的 類風濕性關節(jié)炎指數(shù)（上圖），并單獨繪出了低濃度（〇. 2nM，InM)的肽治療的更有效展示的 結果（下圖）。
[0042] 圖9顯示了第二實驗的結果，其呈現(xiàn)了對照組和0? 2nM、lnM、2nM及5nM治療組的 體重變化（上圖），并單獨繪出了低濃度（〇.2nM，InM)的肽治療的更有效展示的結果（下 圖）。
[0043] 圖10顯示了HeLa細胞內(nèi)的毒性測試的結果。

【具體實施方式】
[0044] 本發(fā)明可以以各種方式修改和實施。下文中，將通過示例性實施方式更詳細地描 述本發(fā)明。但是，以下實施例不意圖限制本發(fā)明。反而本發(fā)明可以基于所附權利要求進行 各種改變。應該理解的是，本發(fā)明包括落入本發(fā)明的技術思想和范圍內(nèi)的任何改變、等價物 或替代物。在本說明書中，可能省略了公知的特征和技術的細節(jié)，以避免不必要地模糊了所 呈現(xiàn)的實施方式。
[0045] 已知端粒為染色體末端的遺傳物質(zhì)重復序列，其防止染色體受損或與其它染色體 融合。端粒的長度會在每次細胞分裂時縮短，在細胞分裂一定次數(shù)后，端粒的長度會縮得非 常短以使細胞停止分裂并死亡。另一方面，已知端粒的延長可延長細胞的壽命。舉例而言， 癌細胞分泌一種稱為端粒酶的酶，其防止端?？s短，因而導致癌細胞增殖。
[0046] 在本發(fā)明的一個實施方式中，提供了編碼肽的多核苷酸，其中，所述肽包含SEQID N0:1的氨基酸序列，所述肽與SEQIDN0:1的同源性超過80%，或者所述肽是上述肽的片 段。上述多核苷酸允許大量生產(chǎn)所述肽。例如，培養(yǎng)包括編碼肽的多核苷酸的載體允許大 量生產(chǎn)肽。
[0047] 本發(fā)明公開的肽可以包括：包含與肽SEQIDNO: 1具有至少80%、至少85%、至少 90 %、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %、至少99 %的序列同源性的氨基酸序列的 肽或其片段。另外，本發(fā)明公開的肽可以包括：與SEQIDNO: 1或其片段有差別的肽，所述 差別在于至少1個氨基酸、至少2個氨基酸、至少3個氨基酸、至少4個氨基酸、至少5個經(jīng) 轉變（transformed)的氨基酸、至少6個經(jīng)轉變的個氨基酸、或至少7個氨基酸。
[0048] 在本發(fā)明的一個實施方式中，氨基酸的改變包括對肽的物理和化學特性的修飾。 例如，可以進行氨基酸修飾以改善肽的熱穩(wěn)定性、改變底物特異性和改變最佳pH。
[0049] 在本發(fā)明的示例性實施方式中，SEQIDNO: 1的肽、SEQIDNO: 1的肽的片段 肽或與所述肽具有80%以上的序列同一性的肽是源自端粒酶、特別是人（智人（Homo sapiens))端粒酶的肽。
[0050] 本文中術語"氨基酸"不僅包括天然整合成肽的22種標準氨基酸，還包括D-異構 體和經(jīng)修飾的氨基酸。因此，在本發(fā)明的特定實施方式中，本文的肽包括具有D-氨基酸的 肽。另一方面，肽可以包括非標準氨基酸，例如，具有翻譯后修飾的那些。翻譯后修飾的實例 包括磷酸化、糖基化、?；òㄒ阴；?、肉豆蘧酰化、棕櫚酰化）、烷基化、羧基化、羥基化、 糖化、生物素化、泛素化、化學性質(zhì)的修飾（例如、消除脫酰亞胺化和脫酰胺化）以及結 構修飾（例如形成二硫鍵）。另外，氨基酸的改變包括與用于形成肽綴合物的交聯(lián)劑的結合 過程中的化學反應所導致的氨基酸的改變，例如氨基、羧基或側鏈的改變。
[0051] 本文公開的肽可以是從天然來源鑒定和分離出的野生型肽。另一方面，當與SEQ IDNO: 1或其片段比較時，本文公開的肽可以是包含一個或多個替換、缺失和/或插入的氨 基酸的人工突變肽。不僅在人工突變肽中，在野生型肽中的氨基酸改變也包括不顯著影響 蛋白質(zhì)折疊和/或活性的保守性氨基酸替換。保守性替換的實例可以在下述組內(nèi)：堿性氨 基酸（精氨酸、賴氨酸和組氨酸）、酸性氨基酸（谷氨酸和天冬氨酸）、極性氨基酸（谷氨 酰胺和天冬酰胺）、疏水性氨基酸（亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸和甲硫氨酸）、芳香族氨基酸 (苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸）以及小氨基酸（甘氨酸、丙氨酸、絲氨酸和蘇氨酸）。通常不 影響特定活性的氨基酸替換是本領域已知的。最常發(fā)生的改變是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/ Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、 ASp/ASn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、ASp/Gly以及其相反的改變。保守性替換的其他實例 示于以下表1中。
[0052]【表1】
[0053]

【權利要求】
1. 一種用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，所述組合物包括下述肽作為活性成 分：包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的肽，與所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性 的肽，或者作為其片段的肽。
2. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述片段由 至少3個氨基酸組成。
3. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述肽源自 人端粒酶。
4. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述組合物 用于消除與類風濕性關節(jié)炎有關的癥狀或預防和治療類風濕性關節(jié)炎。
5. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述肽以 0? 001ng/kg?lng/kg的單劑量施用。
6. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述肽以 0? 01ng/kg?0? 4ng/kg的單劑量施用。
7. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述肽每1 天?5天施用1次。
8. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述肽每1. 5 天?2. 5天施用1次。
9. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述組合物 包含0. 05nM?5nM濃度的肽。
10. 如權利要求1所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的組合物，其中，所述組合物 被配制成用于注射。
11. 如權利要求1所述的組合物，其中，所述組合物是用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎 的藥物組合物。
12. 如權利要求1所述的組合物，其中，所述組合物是用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎 的食品組合物。
13. -種預防或治療類風濕性關節(jié)炎的方法，所述方法包括：向有需要的受試對象施 用有效量的包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有80%以上的序列 同一性的肽、或者作為其片段的肽。
14. 如權利要求13所述的預防或治療類風濕性關節(jié)炎的方法，其中，所述肽以 0? 001ng/kg?lng/kg的單劑量施用。
15. 如權利要求13所述的預防或治療類風濕性關節(jié)炎的方法，其中，所述肽以0. Olng/ kg?0. 4ng/kg的單劑量施用。
16. 如權利要求13所述的預防或治療類風濕性關節(jié)炎的方法，其中，所述肽每1天?5 天施用1次。
17. 如權利要求13所述的預防或治療類風濕性關節(jié)炎的方法，其中，所述肽每1. 5天? 2. 5天施用1次。
18. 肽在預防或治療類風濕性關節(jié)炎中的應用，所述肽包括有效量的包含SEQ ID NO: 1 的氨基酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的肽、或者作為其片段 的肽。
19. 如權利要求18所述的肽在預防或治療類風濕性關節(jié)炎中的應用，其中，所述肽以 0? 001ng/kg?lng/kg的單劑量施用。
20. 如權利要求18所述的肽在預防或治療類風濕性關節(jié)炎中的應用，其中，所述肽以 0? 01ng/kg?0? 4ng/kg的單劑量施用。
21. 如權利要求18所述的肽在預防或治療類風濕性關節(jié)炎的應用，其中，所述肽每1 天?5天施用1次。
22. 如權利要求18所述的肽在預防或治療類風濕性關節(jié)炎的應用，其中，所述肽每1. 5 天?2. 5天施用1次。
23. -種用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的肽，所述肽包括：包含SEQ ID NO: 1的氨基 酸序列的肽、與所述氨基酸序列具有80%以上的序列同一性的肽、或者作為其片段的肽。
24. 如權利要求23所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的肽，其中，所述肽以 0? 001ng/kg?lng/kg的單劑量施用。
25. 如權利要求23所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的肽，其中，所述肽以 0? 01ng/kg?0? 4ng/kg的單劑量施用。
26. 如權利要求23所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的肽，其中，所述肽每1天? 5天施用1次。
27. 如權利要求23所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的肽，其中，所述肽每1. 5 天?2. 5天施用1次。
28. -種用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，所述試劑盒包含肽和使用說明書， 其中，所述肽包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，所述肽與SEQ ID NO: 1具有高于80%的氨基 酸序列同源性，或者所述肽是上述肽的片段；所述使用說明書包括所述肽的施用劑量、施用 途徑、施用頻率和的適應證中的至少一種。
29. 如權利要求28所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，其中，所述肽以 0? 001ng/kg?lng/kg的單劑量施用。
30. 如權利要求28所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，其中，所述肽以 0? 01ng/kg?0? 4ng/kg的單劑量施用。
31. 如權利要求28所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，其中，所述肽每1 天?5天施用1次。
32. 如權利要求28所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，其中，所述肽每 1. 5天?2. 5天施用1次。
33. 如權利要求28所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，其中，所述組合 物包含0. 05nM?5nM濃度的肽。
34. 如權利要求28所述的用于預防或治療類風濕性關節(jié)炎的試劑盒，其中，所述組合 物被配制成用于注射。
【文檔編號】A61P19/02GK104507489SQ201380036874
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2013年5月10日 優(yōu)先權日:2012年5月11日
【發(fā)明者】金商在 申請人:凱爾杰姆維克斯有限公司, 金商在