一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，通過將鱷嘴花藥材用熱水回流提取，再經(jīng)醇沉和離心分離，得鱷嘴花多糖；離心后的上清液用大孔吸附樹脂，用80%～95%（v/v）乙醇洗脫得到水溶性部位。此外，將鱷嘴花藥材用50%～80%（v/v）乙醇回流提取，將乙醇提取物的含水懸浮液依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，得到乙酸乙酯活性部位，將剩余水相提取液用正丁醇萃取，蒸除溶劑后得正丁醇部位。本發(fā)明的鱷嘴花抗癌活性部位為鱷嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位以及正丁醇部位中的至少一種，可以用于制備抗腫瘤藥物，并且具有生命延長率高，毒副作用小的特點(diǎn)。
【專利說明】一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于抗癌活性部位提取領(lǐng)域，尤其涉及一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]鱷嘴花(Clinacanthusnutans (Burm.f.) Lindau),俗稱優(yōu)(憂)遁草、竹枝黃、扭序花等，屬于爵床科鱷嘴花屬，是東南亞傳統(tǒng)藥物中廣泛應(yīng)用的藥用植物，分布在中南半島、馬來半島以及中國大陸的廣西、廣東、云南、海南等地(中華本草(7)，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999,456-457)。在馬來西亞，泰國等地，鱷嘴花作為一種傳統(tǒng)的藥材用于治療精神緊張、糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、蛇叮咬、肝炎以及抗病毒等(Wanikiat P, et al.，J.Ethnopharmacol., 2008, 116(2): 234-244; Yoosook, C.et al., J.Ethnopharmacol.,1999，67(2):179-187;)，其中，鱷嘴花葉子的提取物可以作為消炎藥治療蚊蟲叮咬，作為補(bǔ)救措施治療皮膚皰疹和病毒病變的水痘帶狀皰疹。此外，鱷嘴花中的葉綠素a和葉綠素b衍生物有抗皰疫病毒的活性(Sakdarat S，et al., Bioorg.Med.Chem., 2009,17(5):1857-1860)。
[0003]隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)鱷嘴花還具有抗腫瘤作用并因此倍受醫(yī)藥研究人員的重視(Yong YK, et al., Evid-Based Compl.Alt., 2013，ID 462751)，但是，目前鱷嘴花抗癌成分及作用機(jī)理尚不明確，鱷嘴花的抗癌研究有待深入進(jìn)行。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法與應(yīng)用，旨在解決鱷嘴花抗癌活性部位不明確導(dǎo)致抗癌效果不甚理想的問題。
[0005]本發(fā)明中涉及的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，包括以下步驟:
(1)取鱷嘴花藥材粉末I回流提取后，將水提取物減壓濃縮，再加無水乙醇，過夜沉淀，且經(jīng)離心后得到沉淀和上清液兩部分，冷凍干燥沉淀部分得鱷嘴花多糖；上清液濃縮后過大孔吸附樹脂，先水洗至無色，再用乙醇以洗脫，收集洗脫液，濃縮、冷凍干燥得水溶性部位；
(2)取鱷嘴花藥材粉末2加入乙醇回流提取，將乙醇提取物的含水懸浮液，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到乙酸乙酯部位；剩余水相提取液經(jīng)正丁醇萃取，濃縮得正丁醇部位。
[0006]將所述 鱷嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位中任意一個部位或任意幾個部位按實(shí)際生藥提取量合并混勻，即為鱷嘴花抗癌活性部位。
[0007]其中，步驟(I沖所述回流提取為在100°C下用水回流提取兩次，每次3小時；所述乙醇洗脫為80%~95%乙醇以5~20 mL/min流速洗脫；所述鱷嘴花藥材粉末1、水1、無水乙醇和洗脫所用乙醇的質(zhì)量體積比為60~80g:480~800mL:600~1000mL:2~10 BV ；所述上清液濃縮至原體積的1/30~1/5。[0008]其中，步驟(2)中所述回流提取所用乙醇濃度為50%~80% ;所述鱷嘴花藥材粉末2和乙醇的質(zhì)量體積比為70~90g:560~1080mL。
[0009]優(yōu)選地，在步驟(1)中，洗脫所用乙醇的量優(yōu)選2~6 BV ;所述上清液濃縮至原體積的1/20~1/5 ;所述洗脫流速為5~10 mL/min。
[0010]優(yōu)選地，在步驟(2)中，所述鱷嘴花藥材粉末2和乙醇的質(zhì)量體積比為Ig:8~10
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[0011 ] 優(yōu)選地，所述大孔吸附樹脂為HP-20大孔吸附樹脂或XAD16N大孔吸附樹脂。
[0012]本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述鱷嘴花抗癌活性部位的應(yīng)用，用于制備抗腫瘤藥物。
[0013]優(yōu)選地，所述的鱷嘴花抗癌活性部位的應(yīng)用，用于制備抗腫瘤的片劑、膠囊、口服液、注射液、顆粒劑等常見劑型。
[0014]優(yōu)選地，所述腫瘤包括肝、前列腺、肺、胃、淋巴瘤等癌癥。[0015]有益效果:本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，通過將鱷嘴花藥材粉末用熱水回流提出再用無水乙醇分層離心后，得到的沉淀部分為鱷嘴花多糖活性部位，將得到的上清液用大孔吸附樹脂吸附并通過80%~95% (v/v)乙醇洗脫得到水溶性部位，此外，還通過將鱷嘴花藥材粉用50%~80% (v/v)乙醇回流提取，將乙醇提取物用水分散，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，得到乙酸乙酯活性部位，將溶劑中的水相提取液經(jīng)正丁醇萃取，得到正丁醇部位。本發(fā)明的鱷嘴花抗癌活性部位為多糖部位、水溶性部位、乙酸乙酯部位以及正丁醇部位中的至少一種，可以用于制備抗腫瘤藥物，并且具有生命延長率高，毒副作用小的特點(diǎn)。
[0016]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1為鱷嘴花正丁醇部位(CN-N)對H印S小鼠腫瘤生長的抑制作用結(jié)果；其中圖1A為CN-N對腫瘤增長的抑制圖；圖1B為CN-N對小鼠體重增長抑制圖；圖1C為Ifeps腫瘤細(xì)胞凋亡電鏡觀察圖。
[0017]圖2為鱷嘴花水溶性部位(CN-H)對PC-3小鼠腫瘤生長的抑制作用結(jié)果；其中圖2A為CN-H對腫瘤增長的抑制圖；圖2B為CN-H對小鼠體重增長抑制圖；圖2C為PC-3腫瘤細(xì)胞凋亡電鏡觀察圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0019]實(shí)施例1:
一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，包括以下步驟:
(1)取20目60g鱷嘴花藥材粉末在100°C下用480 mL水回流提取兩次，每次3小時，將提取液減壓濃縮后加600 mL無水乙醇，過夜沉淀，且經(jīng)3000 r/min離心20 min,冷凍干燥(<-50°C，0.7 mbar, 14 h)沉淀部分得鱷嘴花多糖(CNPS);上清液濃縮至原體積的1/30后過HP-20大孔吸附樹脂，水洗至無色，再用2 BV 95% (v/v)乙醇以20 mL/min流速洗脫，收集洗脫液，濃縮、冷凍干燥得水溶性部位(CN-H)；
(2)取20目90g鱷嘴花藥材粉末加入1080 mL 80% (v/v)乙醇回流提取，蒸除溶劑。將鱷嘴花乙醇提取物用水分散，再依次用80 mLX 2石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到乙酸乙酯部位(CNAE);剩余水相提取液用80 mLX 2，正丁醇萃取，蒸除正丁醇，得正丁醇部位(CN-N)；
(3)將鱷嘴花多糖(CNPS)、水溶性部位(CN-H)、乙酸乙酯部位(CNAE)以及正丁醇部位(CN-N)中至少一種按實(shí)際生藥提取量合并混勻，即為鱷嘴花抗癌活性部位。更具體的，將鱷嘴花多糖(CNPS)、水溶性部位(CN-H)、乙酸乙酯部位(CNAE)以及水溶性部位(CN-N)中至少一種配比后得到各鱷嘴花抗癌活性部位如下表1所示:
【權(quán)利要求】
1.一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取鱷嘴花藥材粉末I回流提取后，將水提取物減壓濃縮，再加無水乙醇，過夜沉淀，且經(jīng)離心后得到沉淀和上清液兩部分，冷凍干燥沉淀部分得鱷嘴花多糖；上清液濃縮后過大孔吸附樹脂，先水洗至無色，再用乙醇以洗脫，收集洗脫液，濃縮、冷凍干燥得水溶性部位； (2)取鱷嘴花藥材粉末2加入乙醇回流提取，將乙醇提取物的含水懸浮液，再依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯分級萃取，減壓濃縮回收溶劑，得到乙酸乙酯部位；剩余水相提取液經(jīng)正丁醇萃取，濃縮得正丁醇部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，將所得鱷嘴花多糖、水溶性部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位中任意一個部位或任意幾個部位按實(shí)際生藥提取量合并混勻，即為鱷嘴花抗癌活性部位。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步驟(I)中所述回流提取為在100°c下用水回流提取兩次，每次3小時；所述乙醇洗脫為用80%~95%乙醇以5~20 mL/min流速洗脫；所述鱷嘴花藥材粉末1、水1、無水乙醇和洗脫所用乙醇的質(zhì)量體積比為60~80g:480~800mL:600~1000mL:2~10 BV ;所述上清液濃縮至原體積的1/30~1/5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步驟(2)中所述回流提取所用乙醇濃度為50%~80% ;所述鱷嘴花藥材粉末2和乙醇的質(zhì)量體積比為 70 ~90g:560 ~1080mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步驟(1)中，洗脫所用乙醇的量為2~6BV ;所述上清液濃縮至原體積的1/20~1/5 ;所述洗脫流速為5~10 mL/min。`
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，步驟(2)中，所述鱷嘴花藥材粉末2和乙醇的質(zhì)量體積比為Ig:8~10 mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂為HP-20大孔吸附樹脂或XAD16N大孔吸附樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述鱷嘴花抗癌活性部位用于制備抗腫瘤藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述的鱷嘴花抗癌活性部位用于制備抗腫瘤的片劑、膠囊、口服液、注射液、顆粒劑常見劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種鱷嘴花抗癌活性部位的提取方法，其特征在于，所述腫瘤包括肝、前列腺、肺、胃、淋巴瘤癌癥。
【文檔編號】A61K36/19GK103877133SQ201410100939
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月19日
【發(fā)明者】黃丹民, 陳鈞, 劉旭, 高靜, 湯建 申請人:江蘇大學(xué)