馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用，動物實(shí)驗結(jié)果表明馬齒莧多糖能夠顯著降低大鼠血清中ALT、GPP、LDH等生化指標(biāo)的活性，并能夠減輕肝細(xì)胞變性壞死，保護(hù)了肝細(xì)胞的穩(wěn)定性，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖，具有良好的抗肝纖維化作用，同時本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)馬齒莧多糖具有毒性低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，使用安全，能夠用于預(yù)防或治療肝纖維化相關(guān)疾病。
【專利說明】馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展成肝硬化的必經(jīng)階段，可由多種致病因素(常見的病因為病毒性肝炎，慢性酒精中毒，遺傳和代謝性疾病，化學(xué)毒物或藥物，肝淤血，寄生蟲，脂肪肝等)引起。各種肝病所致的肝纖維化嚴(yán)重危害人類健康，給家庭、社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。因此，研究開發(fā)治療肝纖維化且價廉的藥物具有重要的社會意義和經(jīng)濟(jì)意義。
[0003]目前，各種消除肝纖維化的措施在效果上各有不盡如人意的地方，在尋找安全有效的抗肝纖維化方法中，傳統(tǒng)中藥由于副作用小，開發(fā)成本低成為近年來抗肝纖維化研究的熱點(diǎn)。中藥馬齒莧為民間常用中草藥，來源于馬齒莧科馬齒莧屬植物馬齒莧Portulacaoleracea L.的干燥全草，性寒味酸，具有清熱解毒，利水去濕，散血消腫等功效，主治痢疾、腸炎、腎炎、產(chǎn)后子宮出血、便血、乳腺炎等多種疾病。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，馬齒莧提取物具有抗炎、抗氧化、降血脂等藥理作用。經(jīng)過對馬齒莧進(jìn)行系統(tǒng)研究，并結(jié)合文獻(xiàn)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，馬齒莧多糖是馬齒莧生物活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一，但馬齒莧多糖是否具有抗纖維化作用，至今未見文獻(xiàn)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供馬齒莧多糖在制備抗肝纖維化的藥物中的應(yīng)用，其治療效果好、安全性高。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，提供如下技術(shù)方案:
[0006]馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0007]進(jìn)一步，馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞壞死或/和肝纖維組織增生的藥物中的應(yīng)用。此外，馬齒莧多糖還可以降低血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGP)、血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白/球比(A/
G)、堿性磷酸酶(ALP)和乳酸脫氫酶(LDH)等肝功能系列生化指標(biāo)。
[0008]本發(fā)明中馬齒莧多糖可以采用文獻(xiàn)報道的方法制得，優(yōu)選為本發(fā)明的方法制備，該方法不需要添加有害成分，具體為:稱取馬齒莧，加水煎煮，離心收集上清液，然后將上清液用大孔吸附樹脂DlOl純化，將純化后的上清液濃縮后用體積分?jǐn)?shù)為65-80%的乙醇沉淀，再將沉淀加入相當(dāng)于沉淀重量3-5倍水煮沸10-20分鐘，冷卻至10-30°C，過濾，收集過濾液，濾液用體積分?jǐn)?shù)為65-85%的乙醇沉淀，收集沉淀，重復(fù)加水煮沸和乙醇沉淀步驟，最后沉淀經(jīng)干燥得馬齒莧多糖。
[0009]優(yōu)選的，所述加水煎煮為加入相當(dāng)于藥材重量10倍的水煎煮兩次，每次2小時。
[0010]優(yōu)選的，所述離心為在轉(zhuǎn)速為3000~4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘。
[0011] 優(yōu)選的，所述大孔吸附樹脂DlOl純化為將上清液加入活化的大孔吸附樹脂DlOl柱中，然后用相當(dāng)于樹脂重量5倍的蒸餾水洗脫。
[0012]優(yōu)選的，所述乙醇沉淀的條件為在溫度為0_8°C條件下靜置12-48小時。
[0013]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明公開了馬齒莧多糖在制備抗肝纖維化的藥物中的應(yīng)用，其治療效果好，能夠有效降低肝功能系列生化指標(biāo)，降低肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞壞死或/和肝纖維組織增生的發(fā)生，本發(fā)明不僅拓寬了馬齒莧多糖的應(yīng)用范圍，同時還提高了馬齒莧多糖的市場價值，同時安全性好，在高劑量用藥范圍內(nèi)未見急性毒性反應(yīng)，因此本發(fā)明為抗肝纖維化治療提供了一種安全、高效的備選藥物，利于滿足臨床治療的多方面需求。
【具體實(shí)施方式】
[0014]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對馬齒莧多糖的抗肝纖維化作用及其抗肝纖維化效果進(jìn)行詳細(xì)的描述。
[0015]實(shí)施例1
[0016]馬齒莧多糖的制備，具體步驟如下:
[0017]方法1:稱取2kg馬齒莧藥材，加入相當(dāng)于藥材重量10倍的水煎煮兩次，每次2小時，過濾，合并濾液，將濾液在轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘，收集上清液，將上清液活化的大孔吸附樹脂DlOl柱，然后用相當(dāng)于樹脂重量5倍的蒸餾水進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，將洗脫液濃縮至相當(dāng)于藥材重量的I倍，然后加入乙醇至乙醇的體積分?jǐn)?shù)為65%，(TC冷藏靜置12小時，除去上清液，收集沉淀；向沉淀中加入相當(dāng)于沉淀重量3倍的水，煮沸10分鐘，放置至室溫(10~30°C)，過濾，收集濾液，向濾液中加入乙醇使乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%，(TC冷藏靜置12小時，除去上清液，收集沉淀，重復(fù)加水煮沸、乙醇沉淀步驟2次，得馬齒莧多糖沉淀，干燥得馬齒莧多糖。
[0018]方法2:稱取2kg馬齒莧藥材，加入相當(dāng)于藥材重量10倍的水煎煮兩次，每次2小時，過濾，合并濾液，將濾液在轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘，收集上清液，將上清液活化的大孔吸附樹脂DlOl柱，然后用相當(dāng)于樹脂重量5倍的蒸餾水進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，將洗脫液濃縮至相當(dāng)于藥材重量的2倍，然后加入乙醇至乙醇的體積分?jǐn)?shù)為80%，8°C冷藏靜置48小時，除去上清液，收集沉淀；向沉淀中加入相當(dāng)于沉淀重量5倍的水，煮沸20分鐘，放置至室溫(10~30°C)，過濾，收集濾液，向濾液中加入乙醇使乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%，8°C冷藏靜置48小時，除去上清液，收集沉淀，重復(fù)加水煮沸和乙醇沉淀3次，得馬齒莧多糖沉淀，干燥得馬齒莧多糖。
[0019]本實(shí)施例制得的馬齒莧多糖純度為85.74%。
[0020]實(shí)施例2
[0021]一、馬齒莧多糖的抗肝纖維化作用
[0022]1、實(shí)驗動物
[0023]選取體重為160~180g的Wistar大鼠,雌雄各半。Wistar大鼠由解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供。
[0024]2、病理學(xué)分級方法
[0025]肝細(xì)胞脂肪變性病理學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn):(_)肝細(xì)胞內(nèi)未見空泡變性；(+ )部分肝細(xì)胞(〈25%)內(nèi)出現(xiàn)空泡；(++)較多的肝細(xì)胞(25%~50%)內(nèi)出現(xiàn)空泡；(+++)大量肝細(xì)胞(>50%)內(nèi)出現(xiàn)空泡。
[0026]肝細(xì)胞壞死病理學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn):(-)肝細(xì)胞未見壞死；(+)肝細(xì)胞呈點(diǎn)、灶狀壞死，散在分布；(++)肝細(xì)胞呈點(diǎn)、灶狀壞死，分布范圍較廣；(+++)肝細(xì)胞呈大片狀或橋接壞死、彌散分布。
[0027]肝纖維組織增生病理學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn):(-)肝組織正常；(+)膠原纖維含量增加，很少形成條索分隔肝小葉，可見匯管區(qū)擴(kuò)大，纖維化；(++)膠原纖維呈細(xì)條索狀分隔肝小葉、散在分布，表現(xiàn)為不完全分隔假小葉；(+++)膠原纖維呈較寬的條索狀分隔肝小葉，表現(xiàn)為完全分隔成假小葉。
[0028]3.動物分組及模型制作方法[0029]將Wistar大鼠60只，隨機(jī)分為預(yù)防組和治療組，預(yù)防組又分為預(yù)防馬齒莧多糖組、預(yù)防護(hù)肝片組和預(yù)防模型組，治療組又分為治療馬齒莧多糖組、治療護(hù)肝片組和治療模型。造模采用四氯化碳皮下注射法，皮下注射四氯化碳原液(0.5mL/100g),以后每周皮下注射40%四氯化碳2次(0.3ml/100g)，進(jìn)行反復(fù)強(qiáng)化刺激，共持續(xù)7周。
[0030]預(yù)防組:預(yù)防馬齒莧多糖組在造模的同時給馬齒莧多糖，給藥途徑采用灌胃給藥法(2mL/100g，l次/d)，劑量為臨床成人用藥量的10倍；預(yù)防護(hù)肝片組在造模的同時給用生理鹽水制成的護(hù)肝片混懸液(0.9mL/100g, I次/d);預(yù)防模型組在造模的同時給等量的水。處理7周，然后在第8周左心室取血離心取血清測生化指標(biāo)；處死后稱體重及肝、脾重量并計算肝、脾指數(shù)；剖腹取肝組織，肝組織固定在10%的中性甲醛液中，用于病理學(xué)的HE染色和天狼猩紅染色，HE染色用于觀察肝細(xì)胞脂肪變性和肝細(xì)胞壞死情況，天狼猩紅染色用于觀察肝纖維組織增生情況。
[0031]治療組:治療馬齒莧多糖組造模成功后(造模時間為7周)，從第8周開始給藥馬齒莧多糖；治療護(hù)肝片組從第8周開始給藥護(hù)肝片；治療模型組在造模成功后給等量的生理鹽水，處理7周，給藥劑量和方法同預(yù)防組，共14周，在第15周左心室取血離心取血清測生化指標(biāo)；動物處死后的處理同預(yù)防組。
[0032]處理后采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行檢驗。
[0033]( I)檢測預(yù)防組各生化指標(biāo)
[0034]采用全自動生化分析儀檢測預(yù)防組中馬齒莧多糖組、護(hù)肝片組和預(yù)防模型組大鼠血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGP)、血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白/球比(Α/G)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)肝功能系列生化指標(biāo)，結(jié)果如表1所示。
[0035]表1、預(yù)防組模型組大鼠肝功能系列生化指標(biāo)檢測結(jié)果(i 士S，n=10)
[0036]
【權(quán)利要求】
1.馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝細(xì)胞脂肪變性的藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝細(xì)胞壞死的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:馬齒莧多糖在制備預(yù)防或治療肝纖維組織增生的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述馬齒莧多糖采用如下方法制備:稱取馬齒莧，加水煎煮，離心收集上清液，然后將上清液用大孔吸附樹脂DlOl純化，將純化后的上清液濃縮后用體積分?jǐn)?shù)為65-80%的乙醇沉淀，再將沉淀加入相當(dāng)于沉淀重量3-5倍水煮沸10-20分鐘，冷卻至10-30°C，然后過濾，收集過濾液，濾液用體積分?jǐn)?shù)為65-85%的乙醇沉淀，收集沉淀，重復(fù)加水煮沸和乙醇沉淀步驟，最后沉淀經(jīng)干燥得馬齒莧多糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述加水煎煮為加入相當(dāng)于藥材重量10倍的水煎煮兩次，每次2小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述離心為在轉(zhuǎn)速為3000~4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述大孔吸附樹脂DlOl純化為將上清液加入活化的大孔吸附樹脂D lOl柱中，然后用相當(dāng)于樹脂DlOl重量5倍的蒸餾水洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于:所述乙醇沉淀的條件為在溫度為0-8°C條件下靜置12-48小時。
【文檔編號】A61K31/715GK103919799SQ201410160265
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月21日
【發(fā)明者】林恒, 孫鳳軍, 王顯鳳 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院