治療關(guān)節(jié)炎的天然藥物提取物及制備藥物或保健品的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于天然藥物提取物領(lǐng)域,涉及治療骨性關(guān)節(jié)炎的鴉跖花提取物。該提取物采用如下方法制備:(1)將干燥的鴉跖花粉碎,加5~15倍量60%~80%乙醇,于60℃~70℃水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏Ⅰ;(2)將浸膏Ⅰ加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液Ⅱ;上清液Ⅱ用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:7~9,上樣體積6BV~8BV,流速為2BV/h~4BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑5BV~8BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液Ⅲ;將洗脫液Ⅲ濃縮,干燥,即得。
【專利說明】治療關(guān)節(jié)炎的天然藥物提取物及制備藥物或保健品的應(yīng)用
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于天然藥物提取物領(lǐng)域,涉及一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的鴉跖花提取物。
【背景技術(shù)】
[0003]膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎又稱為膝關(guān)節(jié)退行性關(guān)節(jié)炎,是一多見于年人的以關(guān)節(jié)軟骨退行性改變?yōu)樘卣?,無菌性、慢性、進(jìn)行性侵犯骨質(zhì)并包括滑膜、關(guān)節(jié)囊及關(guān)節(jié)其它結(jié)構(gòu)的全方位、多層次、不同程度的慢性炎癥性關(guān)節(jié)病。流行病學(xué)調(diào)查顯示55~64歲的人群中發(fā)病率達(dá)40 %,隨著世界老齡化人口的增加,其發(fā)病率也逐年上升。
[0004]骨關(guān)節(jié)炎的確切病因及發(fā)病機(jī)理至今仍未完全闡明,目前的治療方法也主要是以緩解疼痛,改善功能,提高患者生活質(zhì)量為目的,尚未有根治或延緩骨關(guān)節(jié)炎病情的藥物問世。西醫(yī)治療目前主要以非留體類消炎藥為主,但西藥價格較貴,長期服用胃腸道反應(yīng)大,老年患者依從性差。以中醫(yī)理論為指導(dǎo)的中醫(yī)藥療法具有獨(dú)特的辨證理論,治療該病針對性強(qiáng),標(biāo)本兼顧,療效顯著,且遠(yuǎn)期效果好,可以從整體上控制病情的發(fā)展,中醫(yī)藥療法安全性好,適合長期治療,因此越來越引起醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。
[0005]鴉妬花,為毛 茛科植物鴉妬花屬植物鴉妬花(Oxygraphis glacialis (Fisch.)Bunge)的花及全草。形態(tài):多年生小草本,高2~9厘米。葉全部基生,葉片卵形、倒卵形至長圓形,長6~20毫米,寬5~25毫米,質(zhì)地較厚,全緣,常有骨質(zhì)邊緣;葉柄較寬扁,長I~4厘米。6~7月開花,花葶I~3 ;花單生,直徑1.5~3厘米;萼片寬倒卵形,長4~10毫米,近革質(zhì),宿存;花瓣長7~15毫米,為寬的3~4倍,披針形或長圓形;花托寬扁,無毛。生于海拔3000~5100米的高山草甸、高山灌叢中及石礫草坡上。水邊草地。喜歡向陽濕地。分布于西藏、云南西北部、四川西部、陜西南部、甘肅、青海和新疆。西喜馬拉雅地區(qū)、俄羅斯西伯利亞至中亞也有。全草入藥。性味歸經(jīng):辛、苦,溫。入肺、肝二經(jīng)。功效:祛風(fēng)散寒、祛風(fēng)通絡(luò)、宣通鼻竅。主治:用于外感風(fēng)寒證、風(fēng)寒濕痹、鼻淵。
[0006]本發(fā)明提供了一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的鴉跖花提取物,實(shí)驗(yàn)研究表明該提取物對骨性關(guān)節(jié)炎具有較好的治療作用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的是提供一種鴉跖花提取物。
[0008]本發(fā)明的另一目的是提供該提取物的制備方法。
[0009]本發(fā)明的還提供該提取物在制備治療骨性關(guān)節(jié)炎以及骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的目的是通過以下方式實(shí)現(xiàn)的:
一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的鴉跖花提取物,該鴉跖花提取物是采用如下方法制備的:
(I)將干燥的鴉跖花粉碎,加5~15倍量60%~80%乙醇,于60°C~70°C水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ;(2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II ;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:7~9,上樣體積6BV~8BV,流速為2BV/h~4BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑5BV~8BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
[0011]所述鴉跖花提取物優(yōu)選是采用如下方法制備的:
(1)將干燥的鴉跖花粉碎,加5倍量80%乙醇,于60°C水浴回流提取4次,每次70min,合并提取液,回收乙醇 ,得到浸膏I ;
(2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:9,上樣體積6BV,流速為4BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑5BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
[0012]所述鴉跖花提取物還可以優(yōu)選采用如下方法制備:
(1)將干燥的鴉跖花粉碎,加15倍量60%乙醇,于70°C水浴回流提取2次,每次80min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ;
(2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:7,上樣體積88¥,流速為2BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑8BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
[0013]所述鴉跖花提取物還可以優(yōu)選采用如下方法制備:
(1)將干燥的鴉跖花粉碎,加10倍量70%乙醇,于65°C水浴回流提取3次,每次75min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ;
(2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:8,上樣體積78¥,流速為3BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑7BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
[0014]所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
[0015]所述口服制劑優(yōu)選制備為片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
[0016]所述鴉跖花提取物可采用如下方法制備為硬膠囊劑:取鴉跖花提取物,粉碎成細(xì)粉,加入輔料,混勻,裝入硬膠囊,即得。
[0017]所述鴉跖花提取物可采用如下方法制備為片劑:取鴉跖花提取物,粉碎成細(xì)粉,加入輔料,混勻,制成顆粒,干燥,壓制成片,即得。
[0018]本發(fā)明所述的鴉跖花提取物可用于在制備治療骨性關(guān)節(jié)炎藥物或保健品。
[0019]本發(fā)明所述的鴉跖花提取物還可用于在制備治療骨質(zhì)疏松癥藥物或保健品。
[0020]通過如下實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證本發(fā)明的技術(shù)效果:
實(shí)驗(yàn)一:本發(fā)明鴉跖花提取物治療骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究 I材料與方法
1.1藥物與試劑(1)鴉跖花藥材飲片,購于蘭州惠仁堂藥業(yè)連鎖有限責(zé)任公司,粉碎成細(xì)粉,備用。
[0021](2)鴉跖花水提取物:取鴉跖花藥材飲片加水煎煮2次,合并水煎液,濃縮,干燥,即得鴉跖花水提取物,備用。
[0022](3)本發(fā)明鴉跖花提取物,參照本發(fā)明說明書實(shí)施例1的制備方法制備,備用。
[0023](4)壯骨關(guān)節(jié)丸(陽性對照組),華潤三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。
[0024](5)羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品:由湖南省藥品檢驗(yàn)所生化室提供。
[0025](6)組織勻漿器,離心沉淀機(jī),721分光光度計,酸性與堿性磷酸酶試劑盒,TNF- α試劑盒,MDA試劑盒、SOD試劑盒,NO試劑盒,MMP-1及ΜΜΡ-3免疫組化試劑盒。
[0026]1.2實(shí)驗(yàn)動物家兔,體重1.5~2.2kg,雌雄各半。將48只白色家兔,雌雄不拘,體重1.95 ±0.5kg,隨機(jī)分成6組,分別為:
(O空白對照組:灌胃給蒸餾水4ml.kg—1 ;
(2)模型對照組:灌胃給蒸餾水4ml.kg—1 ;
(3)鴉跖花水提取物組:灌胃給鴉跖花水提取物16g-kg-1生藥,灌胃劑量為4ml ^kg'
[0027](4)鴉跖花藥材細(xì)粉組:灌胃給鴉跖花藥材飲片細(xì)粉16g.k^1生藥,灌胃劑量為4mI.kg-1。
[0028](5)壯骨關(guān)節(jié)丸組:灌胃給壯骨關(guān)節(jié)丸16g.k^1生藥,灌胃劑量為4ml.kg'
[0029](6)鴉跖花提取物組:灌胃給化本發(fā)明鴉跖花提取物16g.k^1生藥,灌胃劑量為4mI.kg-1。
[0030]1.3實(shí)驗(yàn)方法除空白對照組動物外,其余動物按Hulth法復(fù)制骨性關(guān)節(jié)炎模型:即用戊巴比妥麻醉,于內(nèi)側(cè)髕骨旁切口,切斷內(nèi)側(cè)副韌帶,打開關(guān)節(jié)腔,以眼科剪伸入,剪斷前、后交叉韌帶,切除內(nèi)側(cè)半月板,抽屜試驗(yàn)確認(rèn)前、后交叉韌帶完全剪斷后,沖洗關(guān)節(jié)腔,縫合,制成骨性關(guān)節(jié)炎模型。術(shù)后用青霉素抗炎治療3天。術(shù)后灌胃給藥3周,觀察藥物對家兔骨性關(guān)節(jié)炎的影響。
[0031]1.4觀察指標(biāo)參照Gotdbrg VM法(彭太平等.益腎蠲痹液離子導(dǎo)入治療骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.中醫(yī)正骨.1998.10(5): 6)對膝關(guān)節(jié)活動進(jìn)行臨床評分。同時進(jìn)行關(guān)節(jié)液量的測定,軟骨羥脯氨酸及含水量的測定和血清堿性磷酸酶與酸性磷酸酶含量的測定、兔血清中MDA、S0D含量的測定、兔血清和軟骨組織中NO含量的測定、兔血清TNF-α含量的測定、兔關(guān)節(jié)軟骨中MMp-1和ΜΜΡ-3含量的測定。
[0032]1.5 Gotdbrg VM 評分
1.5.1局部疼痛刺激反應(yīng)
分4級:①無異常疼痛反應(yīng);②患肢收縮;③患肢收縮、痙攣,伴輕度全身反應(yīng);④患肢收縮、痙攣,伴全身顫抖、掙扎。
[0033]1.5.2 步態(tài)
分4級:①患肢無跛行,蹬地有力;?患肢輕度跛行,蹬地有力患肢參與行走,但跛行明顯;④患肢不能參與行走,不能觸地。
[0034]1.5.3關(guān)節(jié)活動
4 級:① 90° 以上;② 45 ~90° ;@15 ~45° ;@0 ~15°。
[0035]1.5.4 畸形
分2級:① 無畸形改變;②局部腫脹,并有內(nèi)翻或外翻畸形伴屈曲攣縮超過10°。[0036]2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1對骨性關(guān)節(jié)炎家兔膝關(guān)節(jié)臨床表現(xiàn)的影響
如表1-1所示,與空白對照組比較,骨性關(guān)節(jié)炎模型組家兔的臨床評分經(jīng)Ridit檢驗(yàn),其局部疼痛刺激反應(yīng)、步態(tài)(如患肢有無跛行、蹬地有無力等)、關(guān)節(jié)活動范圍及有無畸形改變等均有顯著改變(P〈0.01),有明顯骨性關(guān)節(jié)炎表現(xiàn),表明模型成功。與模型對照組比較,鴉跖花提取物組動物的局部疼痛刺激反應(yīng)、步態(tài)、畸形改變等均有顯著改變(P〈0.01),鴉跖花提取物組家兔關(guān)節(jié)活動有好轉(zhuǎn)的趨勢,表明鴉跖花提取物組能改善骨性關(guān)節(jié)炎模型家兔關(guān)節(jié)炎的臨床癥狀,對骨性關(guān)節(jié)炎具有較好的治療作用。
[0037]表1-1對骨性關(guān)節(jié)炎家兔膝關(guān)節(jié)臨床改變評分
【權(quán)利要求】
1.一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物是采用如下方法制備的: (1)將干燥的鴉跖花粉碎,加5~15倍量60%~80%乙醇,于60°C~70°C水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ; (2)將浸膏1加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:7~9,上樣體積6BV~8BV,流速為2BV/h~4BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑5BV~8BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物是采用如下方法制備的: (1)將干燥的鴉跖花粉碎,加5倍量80%乙醇,于60°C水浴回流提取4次,每次70min,合并提取液,回 收乙醇,得到浸膏I ; (2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:9,上樣體積6BV,流速為4BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑5BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
3.如權(quán)利要求1所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物是采用如下方法制備的: (1)將干燥的鴉跖花粉碎,加15倍量60%乙醇,于70°C水浴回流提取2次,每次80min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ; (2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:7,上樣體積88¥,流速為2BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑8BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
4.如權(quán)利要求1所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物是采用如下方法制備的: (1)將干燥的鴉跖花粉碎,加10倍量70%乙醇,于65°C水浴回流提取3次,每次75min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ; (2)將浸膏I加入水溶解,離心,收集上清液,得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附樹脂進(jìn)行柱層析純化,樹脂柱徑高比為1:8,上樣體積7BV,流速為3BV/h,分別以去離子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脫大孔樹脂,洗脫液棄去,以30%乙醇為洗脫劑7BV洗脫,收集洗脫液,得洗脫液III ;將洗脫液III濃縮,干燥,即得鴉跖花提取物。
5.如權(quán)利要求1~4任意一項所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
6.如權(quán)利要求5所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
7.如權(quán)利要求6所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物采用如下方法制備:取鴉跖花提取物,粉碎成細(xì)粉,加入輔料,混勻,裝入硬膠囊,即得。
8.如權(quán)利要求6所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物采用如下方法制備:取鴉跖花提取物,粉碎成細(xì)粉,加入輔料,混勻,制成顆粒,干燥,壓制成片,即得。
9.如權(quán)利要求1~4任意一項所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物在制備治療骨性關(guān)節(jié)炎藥物或保健品中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1~4任意一項所述的鴉跖花提取物,其特征在于,該鴉跖花提取物在制備治療骨質(zhì)疏松癥藥 物或保健品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/10GK103948693SQ201410211263
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月20日
【發(fā)明者】吳平安, 劉玲 申請人:王恒信