一種關(guān)于自然殺傷t細胞活化劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有活化自然殺傷T細胞，抑制腫瘤壞死因子釋放酶、具有減輕急性炎癥反應(yīng)對機體破壞的多肽。其序列為MEPLFPASTPDDGSWN是全新的序列，它們可以在1微摩爾水平上體外抑制腫瘤壞死因子釋放酶的活力，并在體內(nèi)試驗中增加內(nèi)毒素休克小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【專利說明】一種關(guān)于自然殺傷T細胞活化劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及自然殺傷T細胞活化劑4及其應(yīng)用，具體涉及具有活化自然殺傷T細胞，治療急性淋巴細胞性白血病的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]急性淋巴細胞性白血病(ALL)是一種進行性惡性疾病，其特征為大量的類似于淋巴母細胞的未成熟白細胞。這些細胞可在血液、骨髓、淋巴結(jié)、脾臟和其它器官中發(fā)現(xiàn)。急性淋巴細胞性白血病占兒童急性白血病的80%，發(fā)病率高峰在3歲至7歲之間。ALL也可發(fā)生于成年人，占所有成年人白血病的20%。近年來隨著醫(yī)學研究的深入，對急性淋巴細胞性白血病的認識和治療取得了很大進展。生物靶向治療腫瘤是非常有前景的，靶向治療是阻斷腫瘤發(fā)生的某個過程，達到治療腫瘤的目的。
[0003]自然殺傷T (natural killer T cells, NKT)細胞是一種具有特定標志的T細胞亞群，既表達T細胞表面標志，如CD3、TCRaB (人類表達Va24 Vfill，小鼠表達Val4 Jal8)，又表達NK細胞的表面標志。NKT細胞只能識別由⑶Id分子遞呈的特異性糖脂類分子，而不是由主要組織相容性復合物(major histocompatibility complex, MHC)遞呈的多肽。NKT細胞活化后可迅速分泌一系列的細胞壞死相關(guān)因子，如穿孔素和TNF-α，增強其殺傷腫瘤細胞的作用；還可通過激活其他具有殺傷活性的效應(yīng)細胞，如NK細胞和CD8 +細胞，發(fā)揮抗腫瘤作用。
[0004]因此，活化自然殺傷T細胞，抑制急性淋巴細胞性白血病發(fā)展，是治療急性淋巴細胞性白血病的新靶點。但是，尚未有開發(fā)成熟的自然殺傷T細胞活化劑多肽的治療急性淋巴細胞性白血病的藥物。
[0005]本專利中的自然殺傷T細胞活化劑多肽已證明在急性淋巴細胞性白血病中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列自然殺傷T細胞活化劑，對急性淋巴細胞白血病具有很好的療效。
[0007]技術(shù)方案
自然殺傷T細胞活化劑，其特征在于其序列為MEPLFPASTTODGSWN。
[0008]自然殺傷T細胞活化劑在制備治療急性淋巴細胞白血病藥物中的應(yīng)用。
[0009]有益效果
利用固相合成法化學合成自然殺傷T細胞活化劑，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外活化自然殺傷T細胞，治療急性淋巴細胞白血病。在I微摩爾水平上體外抑制腫瘤壞死因子釋放酶的活力，并在體內(nèi)試驗中增加內(nèi)毒素休克小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值?！揪唧w實施方式】
[0010]本發(fā)明多肽由吉爾生化(上海)合成。
[0011]實施例1
多肽的化學合成方法
多肽用Fmoc化學方法合成。合成反應(yīng)從C端向N端進行，Rink介質(zhì)(可在AdvancedChemTech公司購得)上有自由氨基，順序連接氨基酸。每一步連接過程中，氨基酸殘基都要活化，活化混合物中有4倍于介質(zhì)上自由氨基的HBTU，HOBt7DIEA和Fmoc-氨基酸。每次氨基酸的連接反應(yīng)之后，都用一個吡啶/醋酸/N-甲基咪唑(4:1:0.5)的混合物來封閉未連接的自由氨基，封閉反應(yīng)10 min0每次氨基酸的連接反應(yīng)之后，下一個氨基酸連接之前，都要把介質(zhì)上的Fmoc-基團去掉，去Fmoc-基團使用含20%哌啶的二甲基甲酰胺，需15分鐘。最后，當所有氨基酸殘基順序連接之后，多肽用98%三氟乙酸從介質(zhì)上切割下來，切割在室溫下進行2小時。
[0012]應(yīng)用上述化學條件可合成并獲得多肽，序列為MEPLFPASTTODGSWN,該序列為全新序列。
[0013]實施例2
用內(nèi)毒素休克模型檢測自然殺傷T細胞活化劑的體內(nèi)活力
在建立內(nèi)毒素休克模型之前，我們首先測定了 LPS(E.coli 0111:B4，sigma公司購買)小白鼠的LD50為50 μg 每只小鼠，在實驗中我們采用了 100 μg每只小鼠，這樣，對照組的小鼠可全部死亡。在我們前面的科研工作中，發(fā)現(xiàn)Regas印in2 (另外一條多肽抑制劑，已公開，見Chemically Synthesized Matrix Metalloproteinase and Ang1genesis-1nhibitingPeptides as Anticancer Agents.Jialiang Hu, Ming Yan, Chunyan Pu, Jingjing Wang,Philippe E Van den Steen, Ghislain Opdenakker, Hanmei XuAnti—cancer agents inmedicinal chemistry 03/2014; 14(3):483-94.)可提高 C57BL/6 小鼠在內(nèi)毒素休克過程中的生存率。為了在我們的小白鼠上建立內(nèi)毒素休克模型，我們用Regas印in2做了一個陽性對照實驗。對照組小鼠注射100 μδ LPS，而Regas印in2實驗組的小鼠在注射LPS 5分鐘之后，每只小鼠再注射0.7 mg的多肽。通過制作Kaplan-Meier生存曲線發(fā)現(xiàn)Regasepin2可有效的保護注射了 100 Pg的小鼠，提高了生存率。成功地在小白鼠上建立內(nèi)毒素休克模型之后，用該模型檢測自然殺傷T細胞活化劑4的體內(nèi)活力。對照組小鼠(12只)注射100 μgLPS,而自然殺傷T細胞活化劑4組小鼠(12只)在注射LPS 5 min后，每只小鼠注射0.7 mg自然殺傷T細胞活化劑4。用Kaplan-Meier生存曲線分析，自然殺傷T細胞活化劑4可有效地保護小白鼠，提高內(nèi)毒素休克小鼠的生存率。
[0014]實施例3
自然殺傷T細胞活化劑對體外腫瘤壞死因子釋放酶的IC50值。
[0015]腫瘤壞死因子釋放酶的活力是通過切割熒光產(chǎn)生底物Mca-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Dpa-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-NH 檢測的(激發(fā)波長=320 nm,發(fā)射波長=405 nm)。反應(yīng)在37° C下100 μL反應(yīng)體系中進行。反應(yīng)開始時向反應(yīng)體系中加4 μL自然殺傷T細胞活化劑4存儲液(I ng/μL)底物的終濃度為10 μΜ。計算IC50值為0.75 μΜ。
【權(quán)利要求】
1.自然殺傷T細胞活化劑，其特征在于其序列為MEPLFPASITDDGSWN。
2.一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述自然殺傷T細胞活化劑與一種以上藥學上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
4.如權(quán)利要求1所述的自然殺傷T細胞活化劑，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
5.自然殺傷T細胞 活化劑在制備治療急性淋巴細胞性白血病藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K38/10GK104031124SQ201410295759
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司