鉤吻生物堿單體的應用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鉤吻生物堿單體的應用方法，屬于獸藥、動物保健品及保健飼料等【技術領域】，具體涉及鉤吻生物堿單體在制備獸藥、動物保健品和保健飼料中的應用。該單體能降低斷奶仔豬黃白痢發(fā)病率，對獸藥、動物保健品和保健飼料的開發(fā)將產生重大影響，為鉤吻的綜合利用開辟了新領域。
【專利說明】鉤吻生物堿單體的應用方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥、動物保健品和保健飼料【技術領域】，具體涉及鉤吻生物堿單體在 制備獸藥、動物保健品和保健飼料中的應用。

【背景技術】
[0002] 鉤吻為馬錢科植物胡蔓藤的全草，又名斷腸草，野葛、毒根、大茶藥等，味苦、微辛， 性熱，有大毒，主要分布在浙江、福建、廣東、廣西、湖南、貴州、云南等地。我國對于鉤吻的 應用歷史十分悠久，《神農本草》記載鉤吻"主金瘡、乳痛、中惡風、咳逆上氣，鬼"；民間因其 毒性大，一直外用為主，能消腫拔毒、殺蟲止癢；鉤吻對人的毒性很大，被認為是世界上最毒 的植物之一，據(jù)報道，人內服鉤吻莖葉l〇g或根2?8g或嫩芽10?38個即能引起中毒。然 而，小劑量的鉤吻卻對一些動物卻有促進生長的作用，如《唐本草》云"人或畜食其葉皆死， 羊食則大肥，豬食之能治熱性病";《本草綱目》曾載："人誤食鉤吻葉者致死，而羊食鉤吻則 大肥"；《廣東中獸醫(yī)常用草藥》記載："鉤吻，常定期對豬羊服本藥，可以健胃，殺蟲，催肥"； 《廣西中藥志》記載"當豬胃納不良時，用以飼喂，能增進食欲"；因此，豬羊食用鉤吻不但 無毒，而且還有令其毛澤光潤，增肥和放瘟之效。已有的一些研究證實了鉤吻具有抗炎、鎮(zhèn) 痛、鎮(zhèn)靜，催眠、提高機體免疫力和抗應激等功效。
[0003] 鉤吻中的主要的活性成分為生物堿，包括鉤吻素子（Koumine)、鉤吻素甲 (Geliemine)、鉤吻素寅（Kouminicine)、鉤吻素卯（Kouminidine)、鉤吻素辰（Kounidine)、 鉤吻素丙（Sempervirine)、鉤吻素丁（Koumicine)和鉤吻素戊（Koumidine)等40多種單體 成分，其中鉤吻素子和鉤吻素甲含量較高，而鉤吻素寅毒性最大。而鉤吻素子和鉤吻素甲在 制備獸藥、動物保健品和保健飼料方面的應用鮮見報道。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種鉤吻生物堿單體在制備獸藥、動物保健品和保健飼料上 的新應用。
[0005] 鉤吻生物堿單體的應用方法，用于制備激活豬AHR受體活性的制劑。
[0006] 所述的鉤吻生物堿單體包括：鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素寅、鉤吻素卯、鉤吻素 辰、鉤吻素丙、鉤吻素丁和鉤吻素戊中的一種或幾種。
[0007] 所述的鉤吻生物堿單體優(yōu)選包括：鉤吻素子、鉤吻素甲中的一種或兩種。
[0008] 所述的激活豬AHR受體活性的制劑為單方制劑或復方制劑。
[0009] 鉤吻生物堿單體的應用方法，用于制備治療斷奶仔豬黃白痢的獸藥、動物保健品 或動物保健飼料。
[0010] 所述的鉤吻生物堿單體包括：鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素寅、鉤吻素卯、鉤吻素 辰、鉤吻素丙、鉤吻素丁和鉤吻素戊中的一種或幾種。
[0011] 所述的鉤吻生物堿單體優(yōu)選包括：鉤吻素子、鉤吻素甲中的一種或兩種。
[0012] 所述的獸藥和動物保健品為單方制劑或復方制劑。
[0013] 所述的獸藥和動物保健品的劑型為口腔速溶藥膜、口服液、片劑、粉劑、膠囊或注 射劑。
[0014] 所述的動物保健飼料是在基礎日糧中添加0· 1-0. 5wt % (優(yōu)選0· 2wt % )的鉤吻 素子和鉤吻素甲的一種或兩種。
[0015] 本發(fā)明中所涉及的鉤吻生物堿單體是由天然植物鉤吻中提取的，可以與其他活性 成分形成復方制劑，或是其他輔料形成單方制劑。
[0016] 本發(fā)明中的鉤吻生物堿單體作為豬AHR(芳香烴受體）的配體顯著的激活了豬 AHR，而AHR激活可以反向調節(jié)NFkB介導的炎癥通路，這可能是降低斷奶仔豬黃白痢發(fā)病率 的主要原因，這些發(fā)現(xiàn)對獸藥及動物保健品的開發(fā)將產生重大影響，為鉤吻的綜合利用開 辟新領域。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0018] 1.采用的是鉤吻生物堿單體對于豬、羊、雞等畜禽安全性更好，其毒性較低。
[0019] 2.鉤吻生物堿單體通過激活AHR，進而反向調節(jié)NFkB介導的炎癥通路。鉤吻生物 堿單體不僅可以抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致小鼠足腫脹和小鼠腹腔毛細血管通透 性增加，減輕急性炎癥反應；還顯著抑制了斷奶仔豬黃白痢發(fā)病率。
[0020] 3.由于鉤吻生物堿單體來自于天然植物-鉤吻中的有效成分，副作用小，具備良 好的應用前景。
[0021] 4.本發(fā)明公開了鉤吻生物堿單體作為獸藥及動物保健品，具有安全，高效，副作用 小，可口服、可注射等優(yōu)點。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022] 圖1為鉤吻素子、鉤吻素甲對豬AHR活性的影響圖；
[0023] 圖2鉤吻素子、鉤吻素甲對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響圖；
[0024] 圖3鉤吻素子、鉤吻素甲對蛋清所致小鼠足腫脹的影響圖；
[0025] 圖4鉤吻素子、鉤吻素甲對毛細血管通透性增強的影響圖；
[0026] 圖5鉤吻素子、鉤吻素甲對斷奶仔豬黃白痢的發(fā)病率的影響圖；
[0027] 圖6鉤吻素子、鉤吻素甲對斷奶仔豬死亡率的影響圖。

【具體實施方式】
[0028] 以下結合具體實施例對上述方案進一步說明。應理解，這些實施例是用于說明本 發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實施例中采用的實施條件可以根據(jù)實驗的條件做進一步 的調整，未注明的實施條件通常為常規(guī)實驗中的條件。
[0029] 實施例1 :
[0030] 將豬AHR質粒和熒光素酶報告基因質粒共轉染進Η印G2細胞，構建豬AHR激活檢 測系統(tǒng)。將轉染成功的細胞，培養(yǎng)后分為4個組，每組3個平行樣，分別加入DMSO、ΙΟηΜ二 n惡英（AHR激活劑）、10nM鉤吻素子、ΙΟηΜ鉤吻素甲，作用24h，加入突光素底物反應后，用 熒光檢測儀測定熒光強度。從圖1可以看出，二噁英、鉤吻素子、鉤吻素甲與DMS0相比，均 可以顯著激活AHR受體，但鉤吻素子、鉤吻素甲對于豬AHR受體的激活效果要低于二噁英。 Jensen等在研究中發(fā)現(xiàn)可以通過激活AHR，進而反向調節(jié)NFkB介導的炎癥通路，達到有效 抑制炎癥反應的效果（Brenda A Jensen, Rebecca J Leeman, Jennifer J Schlezinger and David H Sherr. Aryl hydrocarbon receptor (AhR)agonists suppress interleukin-6 expression by bone marrow stromal cells:an immunotoxicology study[J]. Environ Health, 2 (1) : 16)。由此可以看出鉤吻素子和鉤吻素甲可能可以通過激活AHR達到防治畜 禽炎癥反應的效果。
[0031] 實施例2
[0032] 對鉤吻生物堿單體中鉤吻素子、鉤吻素甲防治研究效果的研究：選取昆明雄性小 鼠，隨機分成4組，分別為對照組、鉤吻素子組、鉤吻素甲組和吲哚美辛組（抗炎陽性組），每 組10只小鼠。灌胃給藥，對照組灌胃等體積的生理鹽水，每天1次，給藥3天，末次給藥45 分鐘后涂二甲苯于小鼠右耳〇. 〇5ml/只。25min后脫頸處死，將雙耳剪下，用直徑8mm打孔器 打孔，電子天平上稱重，以左耳和右耳的重量差為腫脹度，進行統(tǒng)計分析；給藥60min后于 小鼠右后足拓皮下注射10%蛋清溶液0. lml，30min后，用毛細管放大裝置左右足拓容積， 以兩足拓容積差值作為腫脹度；灌胃給藥每天1次，連續(xù)7天，最后一次給藥后30min，以 2%的伊文思藍生理鹽水溶液尾靜脈注射0. lml/10g。同時腹腔注射0. 6%的冰醋酸0. 2ml/ 只，25min后處死，用生理鹽水5ml沖洗腹腔，將沖洗液1000轉/min離心10min，取上清液 用可見紫外分光光度計在波長590nm處讀取光密度0D值。由圖2、3、4可以得出鉤吻素子、 鉤吻素甲對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、蛋清致小鼠足腫脹以及小鼠腹腔毛細血管通透性均 有顯著增強作用，減輕了急性炎癥反應。
[0033] 實施例3
[0034] 在一個規(guī)?；i場，選取三個批次的斷奶仔豬，每個批次分為三個組，分別飼喂基 礎日糧、基礎日糧+0. 2%鉤吻素子、基礎日糧+0. 2%鉤吻素甲，連續(xù)飼喂15d，統(tǒng)計仔豬黃 白痢的發(fā)病率及死亡率，由圖5, 6可以看出鉤吻素子、鉤吻素甲可以顯著的降低斷奶仔豬 黃白痢的發(fā)病率和死亡率。
[0035] 實施例1-3僅是本發(fā)明的較佳實施實例而已，并非對本發(fā)明做任何形式上的限 制，任何未脫離本發(fā)明技術方案內容、依據(jù)本發(fā)明的技術實質對以上實施實例所作的任何 簡單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術方案的范圍內。
【權利要求】
1. 鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，用于制備激活豬AHR受體活性的制劑。
2. 根據(jù)權利要求1所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的鉤吻生物 堿單體包括：鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素寅、鉤吻素卯、鉤吻素辰、鉤吻素丙、鉤吻素丁和鉤 吻素戊中的一種或幾種。
3. 根據(jù)權利要求2所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的鉤吻生物 堿單體包括：鉤吻素子、鉤吻素甲中的一種或兩種。
4. 根據(jù)權利要求1或2或3所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的激 活豬AHR受體活性的制劑為單方制劑或復方制劑。
5. 鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，用于制備治療斷奶仔豬黃白痢的獸藥、動 物保健品或動物保健飼料。
6. 根據(jù)權利要求5所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的鉤吻生物 堿單體包括：鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素寅、鉤吻素卯、鉤吻素辰、鉤吻素丙、鉤吻素丁和鉤 吻素戊中的一種或幾種。
7. 根據(jù)權利要求6所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的鉤吻生物 堿單體包括：鉤吻素子、鉤吻素甲中的一種或兩種。
8. 根據(jù)權利要求5或6或7所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的獸 藥和動物保健品為單方制劑或復方制劑。
9. 根據(jù)權利要求8所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的獸藥和動 物保健品的劑型為口腔速溶藥膜、口服液、片劑、粉劑、膠囊或注射劑。
10. 根據(jù)權利要求5或6或7所述的鉤吻生物堿單體的應用方法，其特征在于，所述的 動物保健飼料是在基礎日糧中添加〇. 1-0. 5wt%的鉤吻素子和鉤吻素甲的一種或兩種。
【文檔編號】A61K31/439GK104147008SQ201410379252
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月4日 優(yōu)先權日:2014年8月4日
【發(fā)明者】孫志良, 鄔靜 申請人:湖南農業(yè)大學