一種高效負(fù)載表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效負(fù)載表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法，將鐵鹽溶于多元醇中，加入表面活性劑和尿素，形成混合溶液，置于反應(yīng)裝置中密封后，于150℃～250℃下進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后將沉淀物洗滌、干燥，接著對多孔Fe3O4微球進(jìn)行氨基化，加入縮合劑后進(jìn)行氨羧縮合反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)海藻酸鈉對多孔Fe3O4微球的改性。最后以該微球?yàn)檩d體負(fù)載表阿霉素。本發(fā)明開發(fā)了一種工藝簡單、成本低廉、負(fù)載率高、低毒、生物相容性好的磁靶向藥物載體的制備方法，對推廣磁靶向藥物載體在治療乳腺癌中的應(yīng)用具有重要意義。
【專利說明】一種高效負(fù)載表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及磁性納米材料領(lǐng)域，具體涉及一種高效負(fù)載表阿霉素多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的合成方法。

【背景技術(shù)】
[0002]磁性納米材料是一種具有磁性、結(jié)構(gòu)特殊的復(fù)合材料，在生物工程(固定化酶)、生物醫(yī)學(xué)(靶向給藥、臨床診斷)、細(xì)胞學(xué)(細(xì)胞分離、細(xì)胞標(biāo)記)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。四氧化三鐵(Fe304)是磁性納米材料中最典型的一種，利用多孔Fe304負(fù)載藥物不僅可以使復(fù)合微球Fe304@EPI具有磁靶向性，而且可以使藥物具有良好的控釋效應(yīng)。近年來，磁靶向化學(xué)治療已經(jīng)成為乳腺癌臨床治療中比較前沿的治療技術(shù)。磁性納米材料因其毒性較小，且具有生物可降解性，在抗癌藥物載體的研究領(lǐng)域一直是國內(nèi)外關(guān)注的焦點(diǎn)。
[0003]表阿霉素作為一種抗生素類抗腫瘤藥物，用于治療乳腺癌已取得了較好的效果。但是表阿霉素對乳腺癌細(xì)胞的選擇性較低，毒性較大，所以制備負(fù)載率高、毒性低、藥物控釋性和生物相容性好的具有靶向性能的載藥微球非常重要。
[0004]目前，F(xiàn)e304微球的合成方法有很多，常用的有共沉淀法、氧化沉淀法、噴霧法、乳化法、溶劑揮發(fā)分解法、溶膠-凝膠法、輻射化學(xué)合成法等，然而這些方法反應(yīng)條件苛刻，且制備步驟繁瑣，生產(chǎn)周期長，能耗多，污染大，因而使得制備成本較高。
[0005]CN200610122184.4公布了一種表阿霉素緩釋微球制劑的制備方法，此方法是將表阿霉素水溶液滴加到聚乳酸的二氯甲烷溶液中，通過高速攪拌形成初乳液，然后倒入聚乙烯醇溶液中以低速攪拌形成復(fù)乳，經(jīng)室溫?fù)]發(fā)有機(jī)溶劑18 h，高速離心后洗滌、冷凍干燥后得到負(fù)載表阿霉素緩釋微球。此方法制備的載藥微球雖然可以增加腫瘤病灶區(qū)的藥物濃度，減小給藥量，但仍然不能對病灶部位直接定位，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)依舊會殺死正常的細(xì)胞，并且也不能實(shí)現(xiàn)對表阿霉素的高效負(fù)載。
[0006]CN200710200383.7公布了一種含尼莫司汀及其增效劑的抗實(shí)體瘤緩釋藥劑，該專利的緩釋輔料主要為生物可溶性可降解的高分子多聚物，通過輔料降解來達(dá)到釋放表阿霉素的效果。該方法克服了腫瘤對尼莫司汀產(chǎn)生的耐藥性，降低了全身毒性反應(yīng)。但其側(cè)重點(diǎn)是研究藥劑的生物相容性，為其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[0007]因此，開發(fā)一種工藝簡單、成本低廉、負(fù)載率高、低毒、生物相容性好的磁靶向藥物載體的制備方法，對推廣磁靶向藥物載體在治療乳腺癌中的應(yīng)用具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有藥物載體缺乏靶向性、負(fù)載率低、藥物釋放效應(yīng)差，制備過程繁瑣、成本高等缺點(diǎn)，提供一種對表阿霉素高效負(fù)載的磁靶向藥物載體材料的制備方法。本發(fā)明將現(xiàn)有的化療技術(shù)和磁靶向藥物載體的制備技術(shù)聯(lián)合起來，結(jié)合溶劑熱法制備磁靶向藥物載體復(fù)合微球，該方法有效地解決了傳統(tǒng)化療技術(shù)對乳腺癌細(xì)胞的低選擇性、高毒性、負(fù)載率低等難題，滿足了臨床治療的需求。
[0009]本發(fā)明的目的具體可以通過以下措施達(dá)到:
一種高效負(fù)載表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法，其包括如下步驟:
A、將鐵鹽溶于多元醇中，加入表面活性劑和尿素，形成混合溶液，置于反應(yīng)裝置中密封后，于150°C?250°C下進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后將沉淀物洗滌、干燥，得到納米多孔Fe3O4磁性微球；
B、將納米多孔Fe3O4磁性微球加入由乙醇、H20和NH3 -H2O組成的混合溶劑中，超聲分散后加入3-氨丙基三甲氧基硅烷，于20?30°C下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)后將產(chǎn)物洗滌干燥，得到氨基化的磁性微球；接著氨基化磁性微球溶于PBS溶液中，加1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和羥基琥珀酰亞胺，超聲分散后再加入海藻酸鈉水溶液中，于20?30°C攪拌反應(yīng)，反應(yīng)后將沉淀物洗滌、干燥，得到海藻酸鈉改性的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球。
[0010]本發(fā)明中，所述無機(jī)鐵鹽選自硝酸鐵、硫酸鐵、氯化鐵、水合硝酸鐵、水合硫酸鐵或水合氯化鐵。所述多元醇選自1-2-丙二醇、二縮二乙二醇、三縮三乙二醇、乙二醇、甘油、山梨醇等。所述的表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、二辛基琥珀酸磺酸鈉、甘膽酸鈉。
[0011]本方法中無機(jī)鐵鹽和多元醇的用量接近或等于二者的理論用量，即分別以Fe元素和-OH基團(tuán)計(jì)，二者的摩爾用量比為1:1.9?2.1，以1:2為最佳。本方法對加入表面活性劑的用量并無明確要求，能夠得到金屬鹽溶液并對反應(yīng)無不良影響即可，例如形成0.01?lmol/L的溶液均可。尿素與鐵鹽的摩爾比為I?5:1，優(yōu)選3:1。
[0012]本方法步驟A中溶劑熱的反應(yīng)溫度優(yōu)選為150°C?250°C，以200°C為最佳；反應(yīng)時(shí)間為5?20h,優(yōu)選為14?18h,以16 h為最佳。
[0013]步驟A所制備的多孔Fe3O4的粒徑范圍為100?210 nm。
[0014]在步驟B中，納米多孔Fe3O4磁性微球與3_氨丙基三甲氧基硅烷的質(zhì)量體積比優(yōu)選為50?70:1?3mg/ml，二者的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為6?10小時(shí)，該反應(yīng)中的混合溶劑中乙醇、H2O和NH3.H2O的體積比優(yōu)選為80?100:8?10:2?4。該步驟中PBS溶液的pH值為7.4，氨基化磁性微球與1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和羥基琥珀酰亞胺的質(zhì)量比優(yōu)選為10?30:10?20:15?20 ;氨基化磁性微球與PBS溶液的質(zhì)量體積比優(yōu)選為10?30:10?20mg/ml。
[0015]步驟B中，海藻酸鈉水溶液的濃度為0.1?10g/L，優(yōu)選0.5?5g/L，納米多孔Fe3O4磁性微球與海藻酸鈉水溶液的質(zhì)量體積比優(yōu)選為0.5?7:5mg/mL ;在海藻酸鈉水溶液中的反應(yīng)時(shí)間為12?24小時(shí)。
[0016]在一種方案中，步驟B的過程為:將50?70重量份的納米多孔Fe3O4磁性微球，加入80?100體積份乙醇、8?10體積份H20、2?4體積份NH3.H2O,置于三口燒瓶中，超聲分散0.5?I小時(shí),加入I?3ml體積份的3-氨丙基三甲氧基娃燒,于20?30°C下攪拌反應(yīng)6?10小時(shí)，反應(yīng)后將產(chǎn)物洗滌干燥得到氨基化的磁性微球。接著將10?30重量份的氨基化磁性微球，溶于10?20體積份pH=7.4的PBS溶液中，加入10?20重量份的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和15?20重量份的羥基琥珀酰亞胺，混合溶液超聲分散10?20分鐘。再加入海藻酸鈉水溶液中，于20?30°C攪拌反應(yīng)12?24小時(shí)，反應(yīng)后將沉淀物洗滌、干燥，得到海藻酸鈉改性的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球。(該法中重量份與體積份之間以mg:ml計(jì))
步驟A中的洗滌采用去離子水和無水乙醇交替洗滌，步驟B中的洗滌采用去離子水洗滌；步驟A和B中的干燥溫度為50?70V。
[0017]本發(fā)明進(jìn)一步公開了一種負(fù)載有表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法:將按上述方法得到的海藻酸鈉改性的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球配制成水分散液；取表阿霉素溶于水中，緩慢加入配好的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球水分散液，避光進(jìn)行充分?jǐn)嚢瑁缓蠹尤隒aCl2溶液進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后分離出微球，洗滌干燥，得到負(fù)載有表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球。其中，多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球水分散液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2?0.8 % ;表阿霉素與水的質(zhì)量體積比為2?8:20?40mg/ml,表阿霉素與多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球水分散液的質(zhì)量體積比為2?8:6?10 mg/ml，進(jìn)行避光充分?jǐn)嚢璧臅r(shí)間為4~10 h，所述CaCl2溶液的濃度為5~15 g/L，表阿霉素與CaCl 2溶液的質(zhì)量體積比為2?8:50-150 mg/ml，在CaCl2溶液中的反應(yīng)時(shí)間為0.l~lh，干燥步驟的溫度為30°C ~80°C，干燥時(shí)間為4-8 h。
[0018]在一種優(yōu)選方案中，表阿霉素的負(fù)載方法如下:將按上述方法得到的海藻酸鈉改性的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球?yàn)檩d體，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2?0.8 %的水溶液。取2?8 mg表阿霉素，加入20?40 ml蒸懼水中，置于三口燒瓶中，攪拌至完全溶解。往三口燒瓶中滴加6?10 ml配制好的Fe304@SA水溶液，避光攪拌4~10 h后，加入50~150 ml, 5-15g/L的CaCl2溶液，反應(yīng)0~1 h后，洗漆，于30°C ~80°C下干燥4~8 h，即得高效負(fù)載表阿霉素多孔Fe304復(fù)合納米球。
[0019]本方法得到的復(fù)合微球靶向性能高、毒性小、生物相容性好；工藝簡單、成本低廉、負(fù)載率高，因而在磁性納米材料領(lǐng)域具有極大的應(yīng)用前景。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為具體實(shí)施例中高效負(fù)載有表阿霉素的多孔Fe304復(fù)合納米球的合成路線的示意圖。
[0021]圖1中，首先以氯化高鐵(FeCl3)、尿素(Urea)、十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)、1，2_丙二醇(PG)為原料，采用溶劑熱法合成多孔Fe304納米球；接著加入3-氨丙基三甲氧基硅烷(APTMs)對多孔Fe304進(jìn)行氨基化，得到Fe 304-順2。再加入縮合劑1_乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDAC)和羥基琥珀酰亞胺(NHS)，使得Fe304-NH2和海藻酸鈉發(fā)生氨羧縮合反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)海藻酸鈉對多孔Fe304的改性。最后以海藻酸鈉(SA)修飾的Fe 304為載體，利用表阿霉素(EPI)中的_順2可與海藻酸鈉中帶負(fù)電荷的-C00H產(chǎn)生離子間作用力，同時(shí)加入海藻酸鈉的-C00H通過Ca交聯(lián)生成海藻酸鈉骨架，進(jìn)而形成了負(fù)載表阿霉素的多孔Fe304復(fù)合納米球。
[0022]圖2為具體實(shí)施例所制備的樣品的FTIR圖譜:(a)多孔Fe304; (b)多孔Fe 304iSAiEPI。
[0023]通過與文獻(xiàn)譜圖對照，圖2曲線a中581CHT1為Fe304的特征吸收峰，3431CHT1為-OH的伸縮振動峰。圖2曲線b中，1389和1620CHT1分別為海藻酸鈉中-C00_的對稱伸縮振動和反對稱伸縮振動峰，這是由于多孔Fe304納米球表面還存在未反應(yīng)完全的海藻酸鈉；982、1126、1214、1290cm 1對應(yīng)于表阿霉素的吸收峰。由此表明，表阿霉素已成功負(fù)載于多孔Fe3O4OSA復(fù)合微球上。
[0024]圖3為具體實(shí)施例所制備樣品的TEM圖譜:(a)多孔Fe3O4整體TEM圖；(b)多孔Fe3O4局部TEM圖；(c) Fe 304iSAiEPI納米球整體TEM圖片；(d) Fe3O4OSAOEPI納米球局部TEM 圖。
[0025]如圖3a所示，溶劑熱法所制得的Fe3O4納米球，粒徑均勻、分散性好，粒徑范圍在100?210 nm ;根據(jù)圖3b中Fe3O4納米球的局部TEM,結(jié)合BET的測試結(jié)果，F(xiàn)e 304納米球比表面積達(dá)86.39m2/g，孔徑達(dá)0.3528 cm3/g,由此證明所制備的Fe3O4具有多孔結(jié)構(gòu)，具備高效載藥的能力；圖3c所示為Fe3O4OSAlgEPI載藥磁性納米球樣品，負(fù)載表阿霉素之后的磁性納米球粒徑均勻，分散性保持良好；由圖3d局部TEM圖可明顯觀察到藥物已負(fù)載到多孔Fe3O4表面和孔隙當(dāng)中。
[0026]圖4為具體實(shí)施例所制備的多孔Fe3O4OSAIgEPI的磁滯回線。
[0027]如圖4所示，F(xiàn)e3O4OSAIgEPI載藥磁性納米球在室溫下沒有出現(xiàn)明顯的磁滯環(huán)現(xiàn)象，顯示了良好的超順磁性；其飽和磁化強(qiáng)度為70.797 emu/g，在外加磁場下具有很強(qiáng)的磁響應(yīng)性，由此證明Fe3O4OSAlgEPI載藥納米球具有很好的磁性能。
[0028]圖5為具體實(shí)施例所制備Fe3O4OSAIgEPI在37 °〇的藥物釋放曲線:(a)pH=5.8 ； (b)ρΗ=7.4ο
[0029]如圖5所示，圖5曲線a表阿霉素在pH = 5.8的醋酸緩沖溶液中，大約需要16小時(shí)藥物才釋放30%。相比之下，圖5曲線b表阿霉素在pH = 7.4的PBS緩沖溶液中，要達(dá)到相同釋放量需要37小時(shí)。Fe3O4OSAlgEPI在pH = 5.8下的藥物釋放率高于pH = 7.4.由此證明，F(xiàn)e3O4OSAlgEPI是一種優(yōu)良的磁靶向載藥體系，有望應(yīng)用于乳腺癌等腫瘤的磁靶向治療中。

【具體實(shí)施方式】
[0030]以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但下述實(shí)施例對本發(fā)明的保護(hù)范圍并無明確限制。
[0031]實(shí)施例1
將1.35 g氯化高鐵溶于72 ml 1，2-丙二醇中，加入0.5 g十二烷基苯磺酸鈉和0.9g尿素，形成混合溶液。置于反應(yīng)爸中密封后，放入馬弗爐于220 °C反應(yīng)6 ho用去離子水和無水乙醇交替洗滌產(chǎn)物。最后在50 °C下干燥即得納米多孔Fe3O4磁性微球，密封保存，備用。
[0032]實(shí)施例2
將60 mg實(shí)施例1的納米多孔Fe3O4磁性微球溶于90 ml乙醇、9 ml H 20和3 ml氨水的混合溶液中，置于三口燒瓶中，超聲分散30 min，再加入I ml 3-氨丙基三甲氧基硅烷，在25 °C下繼續(xù)攪拌8 h。用去離子水和無水乙醇洗滌產(chǎn)物，于50 °C下真空干燥，即得Fe3O4-NH2納米粒子。將15 mg EDAC -HCl (1-乙基_ (3-二甲基氨基丙基)-碳酰二亞胺鹽酸鹽)和18 mg NHS (N-羥基琥珀酰亞胺)溶于10 ml PBS(50mM pH=7.4)中，再加入20mgFe3O4-NHjA米粒子，超聲分散10 min，然后加入50 ml lg/L海藻酸鈉，室溫下機(jī)械攪拌24h，用去離子水洗滌產(chǎn)物，最后在50 °C下干燥即得海藻酸鈉改性的Fe3O4OSA納米微球，密封保存，備用。
[0033]將65 mg實(shí)施例1的納米多孔Fe304磁性微球溶于85 ml乙醇、8ml Η 20和3 ml氨水的混合溶液中，置于三口燒瓶中，超聲分散30 min，再加入2 ml 3-氨丙基三甲氧基硅烷，在25 °C下繼續(xù)攪拌9 h。用去離子水和無水乙醇洗滌產(chǎn)物，于50 °C下真空干燥，SP得Fe304-NH2納米粒子。將16 mg EDAC.HC1 (1_乙基_ (3-二甲基氨基丙基)-碳酰二亞胺鹽酸鹽)和19mg NHS (N-羥基琥珀酰亞胺)溶于11 ml PBS(50mM pH=7.4)中，再加入21mg Fe304-NH2m米粒子，超聲分散10 min,然后加入45 ml lg/L海藻酸鈉,室溫下機(jī)械攪拌22h，用去離子水洗滌產(chǎn)物，最后在50 °C下干燥即得海藻酸鈉改性的Fe304@SA納米微球，密封保存，備用。
[0034]實(shí)施例3
將5 mg表阿霉素溶于30 ml蒸餾水中，置于三口燒瓶中，在機(jī)械攪拌的作用下逐滴加入實(shí)施例2制備的海藻酸鈉改性的Fe304@SA磁性納米球(40 mg, 8 ml水，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.5%)，攪拌反應(yīng)6 h，再加入10 g/L的CaCl2溶液100 ml，反應(yīng)30 min后離心分離得到載藥磁性納米球。用蒸餾水洗滌產(chǎn)物，最后在50 °C下干燥即得最終產(chǎn)物Fe304@SA@EPI，密封保存，備用。
[0035]實(shí)施例4
表阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取一定體積的濃度為0.05mg/mL EPI的PBS溶液(pH=7.4)稀釋成一系列已知濃度的溶液，用紫外-可見分光光度計(jì)測定這些溶液在485nm處的吸光度，以吸光度對藥物濃度作圖，得到表阿霉素的吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，該標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程為:Y=17.504Χ+0.0176 (相關(guān)系數(shù)R =0.9981)。Fe304@SA磁性納米球的載藥率的計(jì)算公式為Φ= (Moepi MEPI)/MM1T1T，其中Φ表示載藥率，Μ.表示EPI的初始量，MEPI為上層清液中的EPI量(實(shí)施例3中為1.236 mg), Mea?iej Fe 304iSA磁性納米球的用量。根據(jù)實(shí)驗(yàn)可計(jì)算出實(shí)施例3中Fe304@SA磁性納米球?qū)Ρ戆⒚顾氐妮d藥率達(dá)9.41%。
[0036]實(shí)施例5
將10.0 mg負(fù)載了表阿霉素的磁性多孔球超聲分散于10 ml去離子水中，然后放入透析袋中，置于不同pH值的50 ml的水溶液(pH=7.4的PBS緩沖溶液和pH=5.8的醋酸緩沖溶液)中透析，在恒溫振蕩器中于37 1:以100 rpm速度攪拌，在特定的時(shí)間間隔里取2.0ml的緩沖液作為樣品，使用紫外單分光光度計(jì)測定波長為485 nm時(shí)的吸光度，并補(bǔ)加2.0ml的緩沖液。
[0037]通過線性回歸方程得到各個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品的濃度，根據(jù)以下公式計(jì)算藥物累積釋放率并得到其關(guān)于時(shí)間的曲線。Wn=(C1/C2) *100%，其中Wn表示藥物累積釋放率，(^表示溶出介質(zhì)中藥物濃度，C2為總的藥物濃度。
【權(quán)利要求】
1.一種高效負(fù)載表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法，其特征在于包括如下步驟: A、將無機(jī)鐵鹽溶于多元醇中，加入表面活性劑和尿素，形成混合溶液，置于反應(yīng)裝置中密封后，于150°C?250°C下進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后將沉淀物洗滌、干燥，得到納米多孔Fe304磁性微球； B、將納米多孔Fe304磁性微球加入由乙醇、Η20和ΝΗ3.Η20組成的混合溶劑中，超聲分散后加入3-氨丙基三甲氧基硅烷，于20?30°C下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)后將產(chǎn)物洗滌干燥，得到氨基化的磁性微球；接著氨基化磁性微球加入PBS溶液中，加1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和羥基琥珀酰亞胺，超聲分散后再加入海藻酸鈉水溶液中，于20?30°C攪拌反應(yīng)，反應(yīng)后將沉淀物洗滌、干燥，得到海藻酸鈉改性的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述無機(jī)鐵鹽選自硝酸鐵、硫酸鐵、氯化鐵、水合硝酸鐵、水合硫酸鐵或水合氯化鐵中的一種或幾種；所述多元醇選自1-2-丙二醇、二縮二乙二醇、三縮三乙二醇、乙二醇、甘油、山梨醇中的一種或幾種；所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、二辛基琥珀酸磺酸鈉或甘膽酸鈉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟A中，無機(jī)鐵鹽和多元醇的用量以Fe元素和-OH基團(tuán)計(jì)，二者的摩爾用量比為1:1.9?2.1 ;表面活性劑在所述混合溶液濃度為0.01?lmol/L ;尿素與鐵鹽的摩爾比為1?5:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟A中反應(yīng)溫度為200°C，反應(yīng)時(shí)間為5?20h，優(yōu)選14?18h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟B中，納米多孔Fe304磁性微球與3-氨丙基三甲氧基硅烷的質(zhì)量體積比為50?70:1?3mg/ml，二者的反應(yīng)時(shí)間為6?10小時(shí)，該反應(yīng)中的混合溶劑中乙醇、H20和ΝΗ3.H20的體積比為80?100:8?10:2?4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在步驟B中，所述PBS溶液的pH值為7.4，氨基化磁性微球與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和羥基琥珀酰亞胺的質(zhì)量比為10?30:10?20:15?20 ;氨基化磁性微球與PBS溶液的質(zhì)量體積比為10?30:10 ?20mg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟B中海藻酸鈉水溶液的濃度為0.1?10g/L，納米多孔Fe304磁性微球與海藻酸鈉水溶液的質(zhì)量體積比為0.5?7:5mg/mL ;在海藻酸鈉水溶液中的反應(yīng)時(shí)間為12?24小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟A中的洗滌采用去離子水和無水乙醇交替洗滌，步驟B中的洗滌采用去離子水洗滌；步驟A和B中的干燥溫度為50?70°C。
9.一種負(fù)載有表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球的制備方法，其特征在于將權(quán)利要求1中得到的海藻酸鈉改性的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球配制成水分散液；取表阿霉素溶于水中，緩慢加入配好的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球水分散液，避光進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，然后加入CaCl2溶液進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后分離出微球，洗滌干燥，得到負(fù)載有表阿霉素的多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于所述多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球水分散液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2?0.8 % ;表阿霉素與水的質(zhì)量體積比為2?8:20?40mg/ml，表阿霉素與多孔四氧化三鐵復(fù)合納米微球水分散液的質(zhì)量體積比為2?8:6?10 mg/ml，進(jìn)行避光充分?jǐn)嚢璧臅r(shí)間為4~10 h，所述CaCl2溶液的濃度為5~15 g/L，表阿霉素與CaCl 2溶液的質(zhì)量體積比為2?8:50-150 mg/ml，在CaCl2溶液中的反應(yīng)時(shí)間為0.l~lh，干燥步驟的溫度為30°C ~80°C，干燥時(shí)間為4~8 h。
【文檔編號】A61K47/04GK104436199SQ201410670351
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月16日
【發(fā)明者】張小娟, 郝凌云, 魏智勇, 田湘萍, 朱星群, 李景, 顧菁菁 申請人:金陵科技學(xué)院