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      具有止血功能的醫(yī)藥組合物的制作方法

      文檔序號:12805277閱讀:257來源:國知局

      本發(fā)明涉及一種手術(shù)止血材料,特別是指一種適用于進行靜脈注射的具有止血功能的醫(yī)藥組合物。



      背景技術(shù):

      眾所周知,人體血液充足是健康之本,許多手術(shù)(如癌癥手術(shù))及內(nèi)科治療過程均會引起失血,尤其對于血小板缺乏的病人來說,失血過多就可能有生命危險;另外,輸血又是個很復雜的過程。因此,在醫(yī)療現(xiàn)場亟需一種對凝血有幫助的物質(zhì),用以縮短止血時間,或?qū)⑹а靠刂圃谧钚〕潭取?/p>

      此類凝血物質(zhì)的功效如同血小板,可減少開刀和手術(shù)后病人及血小板缺乏的病人的失血量;一般來說,此類凝血物質(zhì)須具有能夠允許其參與血液凝固的表面分子,例如纖維蛋白原。而此類凝血物質(zhì)是以注射方式注入人體,故須滿足以下要求:其一,由于人體微血管的直徑約7微米,因此凝血物質(zhì)(如微粒)的直徑須小于7微米;其二,此類凝血物質(zhì)不能在血液中凝聚,卻能在傷口處凝聚,且此類凝血物質(zhì)不能引起血細胞在血液中凝聚,卻會參與促進血細胞在傷口處凝聚。

      現(xiàn)在技術(shù)中,k.i.widder等人在文獻“藥理及化學治療法的發(fā)展(v0l.16.213-271)”中的一篇文章《抗癌試劑生物物理示蹤中的磁活性微球體及其他載體》揭露“用蛋白質(zhì)水溶液和油,并通過加熱或聚合,得到乳化液合成蛋白質(zhì)微球體”的技術(shù)內(nèi)容;然而,在實際治療中需要能在血管中保存至少一天以上且不會變質(zhì)的凝血物質(zhì),所述蛋白質(zhì)微球體在合成過程中容易變質(zhì),故其半衰期很短。

      oppenhein等人在美國第us4,107,288號專利“注射組合物中有效的極微粒子及其生產(chǎn)方法”中揭露一種方法,主要是通過使用一種相反的增溶劑來調(diào)節(jié)去溶劑試劑的濃度,使蛋白質(zhì)溶液達到一個去溶劑極限。然而,此方法于反應(yīng)初始時條件極不穩(wěn)定,且反應(yīng)中間常伴隨著引起球體生成的大量的聚合,而聚凝球體的直徑通常都會大于7微米,易造成血管阻塞而引起生命 危險。



      技術(shù)實現(xiàn)要素:

      本發(fā)明的主要目的在于提供一種具有止血功能的醫(yī)藥組合物,其可用于治療血小板缺乏的患者,不僅無毒副作用、止血速度快且效果好。

      為達上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種具有止血功能的醫(yī)藥組合物,適于進行靜脈注射,所述具有止血功能的醫(yī)藥組合物包含以下組成成分:(a)16-22重量%的雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒,包含內(nèi)層的人體白蛋白球體及以共價鍵結(jié)合于所述人體白蛋白球體表面的纖維蛋白原;(b)0.8-2.3重量%的表面活性劑;(c)12-16重量%的交聯(lián)劑;以及(d)45-75重量%的溶劑;其中,相對于100重量份的所述人體白蛋白,所述纖維蛋白原的含量為0.8-5.7重量份。

      本發(fā)明具有益效果如下:本發(fā)明醫(yī)藥組合物中,由于纖維蛋白原可藉共價鍵結(jié)合于白蛋白球體表面,因此不會對懸浮液中的白蛋白球體的數(shù)量造成任何損失,且所形成的表面具有纖維蛋白原包覆的白蛋白球體不會發(fā)生團聚現(xiàn)象。

      再者,本發(fā)明通過選用特定的交聯(lián)劑,表面具有纖維蛋白原包覆的白蛋白球體的平均直徑可小于1微米,且變異系數(shù)很小,所以在通過靜脈注射后不會導致血管阻塞;進一步地,纖維蛋白原可作為示蹤分子(tracer),其用以攜帶白蛋白球體到達傷口部位,并使白蛋白球體會凝聚在一起,以達到止血或減少出血量的效果。

      此外,本發(fā)明醫(yī)藥組合物可作為血小板的替代品(fibrinoplate,plateletaggregationsubstitute),其用在外傷、手術(shù)或大量出血的病人身上時,不會產(chǎn)生抗體,不會有血源不足和血型不合的問題,可避免通過血液傳播的疾病。

      為便審查員能對本發(fā)明目的、技術(shù)特征及其功效,做更進一步的認識與了解,茲舉以下所描述的具體實施例僅用以解釋本發(fā)明,并不用于限定本發(fā)明范圍,實施例配合附圖,詳細說明如下。

      附圖說明

      圖1為本發(fā)明的具有止血功能的醫(yī)藥組合物的制造方法的流程示意圖。

      具體實施方式

      本發(fā)明較佳實施例提供一種醫(yī)藥組合物、其制造方法與用途,所述醫(yī)藥組合物的特點在于,白蛋白球體在懸浮液中不會發(fā)生團聚,白蛋白球體的直徑小于1微米,且表面具有纖維蛋白原。

      接下來將先說明醫(yī)藥組合物的制造方法及其具體施行方式,而后再適時地補充醫(yī)藥組合物中各組成成分的重量配比及其具體例;盡管本實施例中是使用人體白蛋白,但是人體其他蛋白質(zhì),例如免疫蛋白、肌紅蛋白、膠原、明膠等等,同樣也可使用并能夠形成球體。

      熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員可由本說明書內(nèi)容了解本發(fā)明的優(yōu)點與功效。應(yīng)理解,本說明書內(nèi)容中所記載的各項細節(jié)可基于不同觀點加以施行或應(yīng)用,因此在本發(fā)明的精神下進行各種修飾與變更,均屬本發(fā)明等效結(jié)構(gòu)的創(chuàng)意范疇內(nèi)。

      請參閱圖1,為本發(fā)明較佳實施例的具有止血功能的醫(yī)藥組合物的制造方法的流程示意圖。所述制造方法主要包括:

      步驟s100:將人體白蛋白分子溶于一緩沖液中,得到一人體白蛋白溶液,其中所述人體白蛋白溶液的濃度為5-20wt%。本實施例中,緩沖液的ph值范圍介于4-8,且較佳為5-7.3;緩沖液的滲透壓范圍介于14-680mosm,且較佳為250-400mosm。

      緩沖液的具體例包括以下成分中的一種或多種:tris、tris-hcl、醋酸鈉、hepes、hepes-na、aces、ada、ampso、bes、bicine、bis-tris、bis-trispropane、cabs、caps、capso、ches、檸檬酸、dipso、epps、甘氨酸、hepbs、heppso、咪唑、mes、mobs、mops、mopso、pipes、popso、二鉀胂酸鈉、檸檬酸鈉、甘氨酸、tabs、taps、tapso、tea、及tes。

      步驟s102:在所述人體白蛋白溶液中依特定時序分別加入一表面活性劑、一交聯(lián)劑、及一溶劑,得到一白蛋白球體懸浮液。理想化條件是,在形成所述白蛋白球體時,所述表面活性劑的濃度為0.1-10mg/ml,所述交聯(lián)劑的濃度為0.625-2.5mg/ml,所述溶劑的濃度至少大于48wt%;據(jù)此,所形成的白蛋白球體的平均直徑可小于1微米,且白蛋白球體可均勻分散于懸浮液中而不會發(fā)生團聚現(xiàn)象。

      本實施例使用的表面活性劑可選自于四癸基硫酸鈉、tritonx-151、或 tween80,亦可為洗滌劑。本實施例使用的交聯(lián)劑包括戊二醛的共價小分子。溶劑的具體例包括以下成分中的一種或多種:氯仿、2-丙醇、甲苯、苯、芐基醇、二氯甲烷、四氯化碳、環(huán)己烷、環(huán)己酮、三氯乙烷、甲基乙基酮、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、四氫呋喃、1,4-二惡烷、1-丙醇、苯酚、吡啶、乙酸、甲酸、六氟-2-丙醇、六氟丙酮、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、乙腈、n-甲基-2-吡咯烷酮、n-甲基嗎啉-n-氧化物、1,3-二氧雜環(huán)戊烷、及水;較佳地,本實施例使用的溶劑可為醇溶液,特別是2-丙醇或乙醇。

      步驟s104:在所述白蛋白球體懸浮液中加入纖維蛋白原,其中纖維蛋白原以共價鍵結(jié)合于白蛋白球體表面,形成雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒。理想化條件是,纖維蛋白原為溶液形式,且纖維蛋白原是在完成步驟s102后,等待10分鐘至1小時再加入于所述白蛋白球體懸浮液中;依此方式,雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒的產(chǎn)率可超過99%,反應(yīng)過程中幾乎不會對懸浮液中的白蛋白球體的數(shù)量造成任何損失。

      在完成步驟s104后,所述制造方法可進一步包括步驟s106:對雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒的懸浮液進行后處理,例如進行稀釋、過濾、滲析、再過濾、離心分離、電泳分離和色譜柱分離等程序,然后再通過真空冷凍干燥及冷凍后的粉末重構(gòu)化,以制成適于進行靜脈注射的凍干型醫(yī)藥組成物(即蛋白質(zhì)顆粒組成物),其中相對于100重量份的所述人體白蛋白,所述纖維蛋白原的含量為0.02-6重量份,較佳為0.8-5.7重量份;順帶一提,重構(gòu)化的過程中需加入緩沖液或改變緩沖液及防腐劑等生物相溶體,而這類試劑的種類和用量是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的,故在此不予贅述。

      值得注意的是,通過重構(gòu)化形成的雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒(即表面具有纖維蛋白原包覆的蛋白質(zhì)顆粒),其平均直徑可介于0.1至100μm,遠小于人體微血管的直徑,因此在通過靜脈注射后不會導致血管阻塞。

      在不損害本發(fā)明所期望的效果的范圍內(nèi),在具體施行步驟s106時,可再加入類凝血酶、賦形劑(excipient)及/或其他添加劑。類凝血酶可為任何一種將纖維蛋白原催化為非交聯(lián)的纖維蛋白的酶;賦形劑的添加不妨礙雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒的發(fā)揮,且能增加醫(yī)藥組成物的均勻性和穩(wěn)定性,同時減少醫(yī)藥組成物的刺激性和不良氣味等,賦形劑的具體例包括:乳糖、蔗糖、甘露糖醇、及甘露糖醇的醣類等;添加劑可包括以下成分中的一種或多種:

      (1)甘氨酸;

      (2)離子濃度為1-200mmol的鈣離子;

      (3)凝血因子xiii;

      (4)具有抑菌或殺菌作用的成分;

      (5)抑制蛋白分解的物質(zhì);以及

      (6)促進細胞生長的細胞生長因子。

      根據(jù)本發(fā)明物的制造方法所制成的具有止血功能的醫(yī)藥組合物,其包括:(a)16-22重量%的雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒,包含內(nèi)層的人體白蛋白球體及以共價鍵結(jié)合于所述人體白蛋白球體表面的纖維蛋白原;(b)0.8-2.3重量%的表面活性劑;(c)12-16重量%的交聯(lián)劑;以及(d)45-75重量%的溶劑;其中,相對于100重量份的所述人體白蛋白,所述纖維蛋白原的含量為0.8-5.7重量份。理想化條件是,所述醫(yī)藥組成物中成分(a)雙層蛋白質(zhì)球狀顆粒的含量為20重量%,成分(b)表面活性劑的含量為1.5重量%,成分(c)交聯(lián)劑的含量為14重量%,成分(c)表溶劑的含量為64.5重量%。

      再者,在不損及本發(fā)明目的的范圍內(nèi),所述醫(yī)藥組合物可進一步包括:成分(e)2-5重量%的類凝血酶;成分(f)1-10重量%的添加劑;以及成分(g)0.4-1.3重量%的賦形劑。

      [實施例1]

      沒有纖維蛋白原形成微粒的方法:

      將人體白蛋白粉末放入0.9%的氯化鈉溶液中,并加入濃度在0.05mg/ml-15mg/ml的表面活性劑,如四癸基硫酸鈉、tween-80或tritonx-151,形成濃度在5-20%重量體積比的蛋白質(zhì)溶液。然后于含有不同濃度的表面活性劑的含2ml上述蛋白質(zhì)溶液的系列試管中加入2ml以氯化鈉溶液稀釋過的,其濃度范圍為0.01-3.0%的戊二醛。10分鐘以后,再加入10ml的乙醇〔用水釋到80%(體積比)〕,這時溶液立刻出現(xiàn)混濁。再過10分鐘,以5倍體積的氯化鈉溶液稀釋來觀察此懸浮液是否澄清,結(jié)果為否定的。此后以1000倍的顯微鏡觀察此懸浮液,發(fā)現(xiàn)此懸浮液中粒子的直徑小于1微米。

      同時也發(fā)現(xiàn),用濃度為1-2.5mg/ml的tritonx-151和濃度為100-200mg/ml的白蛋白制成的合劑效果最好。另外也發(fā)現(xiàn)用濃度為1-12mg/ml的四癸基硫 酸鈉制成的合劑其微粒直徑的變異系數(shù)最小。

      [實施例2]

      將纖維蛋白原連到蛋白粒子上作為示蹤粒子的方法:

      采用與實施例1相同的條件,使用1-125的標志的人體白蛋白。通過以離心法沉淀球體,測量沉淀中和清液中各自含有的放射性蛋白質(zhì)微粒數(shù)目,發(fā)現(xiàn)有95%的白蛋白粒子形成球體。如果將溶液的溶質(zhì)度由0.9%的氯化鈉溶液濃度提2倍,即變成1.8%的氯化鈉溶液或?qū)?.9%的氯化鈉溶液降到0.09%的氯化鈉溶液,發(fā)現(xiàn)對球體的產(chǎn)量沒有很大影響。如果將緩沖溶液的ph降到4以下,則發(fā)現(xiàn)在形成球體時所需的醇的量比ph為8時所需醇的量要多,且ph在4以下時使球體的產(chǎn)率稍微有所下降。

      [實施例3]

      在最優(yōu)先的條件下重復實施例2,所不同的是用熒光異硫氰酸酯包覆人體白蛋白,采用實施例1的最佳條件,在出現(xiàn)混濁后不同的時間間隔內(nèi)將纖維蛋白原加到球懸浮液中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在球體形成后十五分鐘內(nèi)加入纖維蛋白原能夠使球體穩(wěn)定且獲得最好的合劑。另外,必須對球體懸浮液進行進一步處理,其中包括進行稀釋、過濾、滲析、再過濾、離心分離,電泳分離和色譜柱分離,通過真空冷凍干燥及冷凍粉末的重構(gòu)化后完成,其中在此過程中需加入或改變緩沖液或防腐劑。

      根據(jù)mcgill等人的在j.lab.clin.med.1987,109:127-133上的“血小板模腔可降低血小板缺乏的兔子的流血時間”一文,使用血小板缺乏的兔子進行藥理試驗,以70mg/kg的busulfan法處理過的十只兔子的流血時間為697秒,經(jīng)過注射1ml/kg的纖維蛋白原包覆的球體(用0.9%的氯化鈉溶液溶解冷凍的粉末),流血時間降為115秒(標準偏差為43秒)。將兔子耳朵傷處切片并移至熒光顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)凝血內(nèi)有熒光粒子。如果對血小板缺乏的兔子注射不含纖維蛋白原的球體懸浮液(1mg/ml),發(fā)現(xiàn)流血時間并未縮短,在耳朵凝血處也沒有發(fā)現(xiàn)熒光粒子,這說明纖維蛋白原是作為引導分子將粒子導至凝血活躍區(qū)域,并導致縮短流血時間及減少失血量。

      對于那些有外傷或可能并未患有血小板缺乏癥的手術(shù)患者來說,本發(fā)明的粒子同樣具有療效,并能感受較快的凝血時間和較少的失血量之利。

      [本發(fā)明實施例可能帶來的功效]

      本發(fā)明醫(yī)藥組合物中,由于纖維蛋白原可藉共價鍵結(jié)合于白蛋白球體表面,因此不會對懸浮液中的白蛋白球體的數(shù)量造成任何損失,且所形成的表面具有纖維蛋白原包覆的白蛋白球體不會發(fā)生團聚現(xiàn)象。

      再者,本發(fā)明通過選用特定的交聯(lián)劑,表面具有纖維蛋白原包覆的白蛋白球體的平均直徑可小于1微米,且變異系數(shù)很小,所以在通過靜脈注射后不會導致血管阻塞;進一步地,纖維蛋白原可作為示蹤分子(tracer),其用以攜帶白蛋白球體到達傷口部位,并使白蛋白球體會凝聚在一起,以達到止血或減少出血量的效果。

      此外,本發(fā)明醫(yī)藥組合物可作為血小板的替代品(fibrinoplate,plateletaggregationsubstitute),其用在外傷、手術(shù)或大量出血的病人身上時,不會產(chǎn)生抗體,不會有血源不足和血型不合的問題,可避免通過血液傳播的疾病。

      雖然本發(fā)明是以實施例作說明,但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不離本發(fā)明精神與范疇下制作各種不同形式的改變,以上所舉實施例僅用以說明本發(fā)明,并非用來限制本發(fā)明范圍,本發(fā)明不限于上述各實施形態(tài)者,可在權(quán)利要求書所示的范圍內(nèi)進行各種變更,且在不同實施形態(tài)中分別揭示的適當組合技術(shù)手段而得的實施形態(tài),亦包含在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi),即凡依本發(fā)明權(quán)利要求書所作的均等變化與修飾,皆應(yīng)仍屬本發(fā)明的專利涵蓋范圍內(nèi)。

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