本申請要求2014年7月2日提交的美國臨時申請No.62/020,366、以及2014年8月14日提交的美國臨時申請No.62/037,558的權(quán)益，這些申請中的每一者通過引用以其全部并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開內(nèi)容主要涉及免疫刺激組合物，更具體地涉及含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物。

背景技術(shù)：

免疫系統(tǒng)由多方面的網(wǎng)絡(luò)組成。對人類來說，免疫系統(tǒng)分為兩個主要亞組，即先天性免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng)。先天性免疫系統(tǒng)是第一道防線，其快速響應以處理應激(handle stresses)并擊退入侵的病毒和微生物，而適應性免疫系統(tǒng)則參與到長期免疫中，其任務(wù)是保護宿主免受外來微生物的再次感染。盡管這兩個系統(tǒng)在保護宿主中的作用不同，但是兩者之間存在廣泛的交叉感知(crosstalk)從而促進整體健康。這些系統(tǒng)通信的一種方式涉及通過稱為細胞因子和趨化因子的蛋白質(zhì)信使來發(fā)送和接收信號。當處于適當?shù)钠胶鈺r，所涉及的信號分子幫助身體處理應激(deal with stresses)并保持良好健康。

使用草藥以及天然藥物和天然療法來促進保健和健康正變得越來越普遍。人們越來越認識到，由包括人參和蘑菇提取物的天然療法提供的至少一些益處歸功于這些提取物中所含的多糖(例如β-葡聚糖)的免疫刺激性質(zhì)(Curr Med Chem.2000Jul；7(7):715-29；Chan et al.,2009,Journal of Hematology and Oncology 2:25；Choi et al.,2008,Biosci.Biotechnol.Biochem 72:7；Johnson et al.,2009,Scandanavian Journal of Immunology 69；Kim et al.,2011,Immune Network 11:4)。β-葡聚糖是一類由不同長度的葡萄糖鏈組成的多糖，其被發(fā)現(xiàn)于各種細菌、酵母、真菌和植物中，并且已知是人類免疫系統(tǒng)的有效刺激物。據(jù)認為，天然療法的免疫增強性質(zhì)涉及響應于β-葡聚糖的各種免疫信號分子的分泌。

為了滿足對具有愈加有益的免疫增強性質(zhì)的天然療法的日益增長的需求，需要另外的和改進的含有天然組分的免疫刺激組合物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

一方面，本公開內(nèi)容涉及包含β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物；其中所述β-葡聚糖制劑以該組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約40％至約80％的范圍存在；其中所述人參提取物以該組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約30％的范圍存在；并且其中所述蘑菇提取物以該組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約20％的范圍存在。在一些實施方案中，β-葡聚糖制劑由酵母提取物制備。在一些實施方案中，所述酵母提取物獲自釀酒酵母。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約60％至約80％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度在該制劑總干重的約60％至約80％范圍內(nèi)。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度為該制劑總干重的約60％至約75％。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度為該制劑總干重的約65％至約70％。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度為該制劑總干重的至少約60％、約65％、約70％或約80％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物由中國人參或西洋參制備。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約30％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％、約25％或約30％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物中多糖的濃度為人參提取物總干重的約5％至約50％。在一些實施方案中，所述人參提取物中多糖的濃度為人參提取物總干重的約10％至約45％多糖。在一些實施方案中，所述人參提取物中多糖的濃度為人參提取物總干重的約20％至約35％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物由選自公主松茸、靈芝、香菇、樸蘑和松蕈的蘑菇制備。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約15％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物為β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％、約7.5％、約10％或約15％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物中多糖的濃度為蘑菇提取物總干重的約30％至約55％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物中多糖的濃度為蘑菇提取物總干重的約30％、約35％、約40％、約45％、約50％或約55％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約75％至約80％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約5％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約15％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自西洋參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自靈芝，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物可以包括本文所述的一種或多種添加劑。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及包含任何一個前述實施方案的組合物的口服消費產(chǎn)品。在一些實施方案中，所述口服消費產(chǎn)品選自食品組合物、飲料產(chǎn)品、膳食補充劑、營養(yǎng)食品、可食用凝膠混合物、可食用凝膠組合物、粒狀粉末、軟凝膠組合物、閃溶組合物和藥物組合物。在一些實施方案中，所述口服消費產(chǎn)品被配制成片劑或膠囊。在一些實施方案中，所述口服消費產(chǎn)品是選自糖果組合物、調(diào)味品、谷物組合物、烘焙物和乳制品的食品組合物。在一些實施方案中，所述口服消費產(chǎn)品是碳酸或非碳酸飲料產(chǎn)品。在一些實施方案中，所述口服消費產(chǎn)品是選自軟飲料、噴泉飲料(fountain beverage)、冷凍和即飲飲料、咖啡、茶、乳類飲料、粉狀軟飲料、液體濃縮物、果汁、運動飲料和能量飲料的飲料產(chǎn)品。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述口服消費產(chǎn)品包含一種或多種添加劑，所述添加劑選自碳水化合物、多元醇、氨基酸或其鹽、多聚氨基酸或其鹽、糖酸或其鹽、核苷酸、有機酸、無機酸、有機鹽、有機酸鹽、有機堿鹽、無機鹽、苦味化合物、食用香料、調(diào)味成分、收斂化合物、蛋白質(zhì)、蛋白水解物、表面活性劑、乳化劑、類黃酮、酒精、聚合物及其組合。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及一種制備組合物的方法，所述方法包括將β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物混合成為組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約40％至約80％的范圍存在，所述人參提取物以組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約30％的范圍存在，并且所述蘑菇提取物以組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約20％的范圍存在。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑由酵母提取物制備。在一些實施方案中，所述酵母提取物獲自釀酒酵母。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約60％至約80％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度在制劑總干重的約60％至約80％的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度為制劑總干重的約60％至約75％。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度為制劑總干重的至少約60％、約65％、約70％或約80％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物由中國人參或西洋參制備。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約30％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％、約25％或約30％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述人參提取物中多糖的濃度為人參提取物總干重的約5％至約50％。在一些實施方案中，所述人參提取物中多糖的濃度為人參提取物總干重的約10％至約45％多糖。在一些實施方案中，所述人參提取物中多糖的濃度為人參提取物總干重的約20％至約35％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物由選自公主松茸、靈芝、香菇、樸蘑和松蕈的蘑菇制備。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約15％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物是β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％、約7.5％、約10％或約15％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物中多糖的濃度為蘑菇提取物總干重的約30％至約55％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述蘑菇提取物中多糖的濃度為蘑菇提取物總干重的約30％、約35％、約40％、約45％、約50％或約55％。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約75％至約80％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約5％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約15％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自西洋參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自靈芝，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述方法還包括將一種或多種添加劑混合到所述組合物中。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述方法還包括將所述組合物制備成口服消費產(chǎn)品。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及增強受試者免疫功能的方法，所述方法包括向受試者施用任何一個前述實施方案的組合物或產(chǎn)品。在一些實施方案中，所述受試者是動物。在一些實施方案中，所述受試者是人類。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述增強的免疫功能包括增強的淋巴細胞增殖和/或增加的一種或多種細胞因子的生成。在一些實施方案中，所述一種或多種細胞因子選自IFN-γ、IL-12和IL-10。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及增強受試者免疫功能的方法，所述方法包括向受試者施用包含約220mg至約250mg的β-葡聚糖制劑、約75至約90mg的人參提取物和約20mg至約40mg的蘑菇提取物的組合物，其中，所述組合物每天施用一次。在一些實施方案中，所述組合物包括約220mg、約230mg、約240mg或約250mg的β-葡聚糖制劑。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約80mg、約82mg、約84mg、約86mg、約88mg或約90mg的人參提取物。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約20mg、約25mg、約30mg、約33mg、約35mg、約38mg或約40mg的蘑菇提取物。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約220mg、約230mg、約240mg或約250mg的β-葡聚糖制劑；約80mg、約82mg、約84mg、約86mg、約88mg或約90mg的人參提取物；和約20mg、約25mg、約30mg、約33mg、約35mg、約38mg或約40mg的蘑菇提取物。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及增強受試者免疫功能的方法，所述方法包括向受試者施用包含約250mg至約325mg的β-葡聚糖制劑、約90至約120mg的人參提取物和約30mg至約50mg的蘑菇提取物的組合物，其中，所述組合物每天施用一次。在一些實施方案中，所述組合物包括約250mg、約265mg、約275mg、約290mg、約300mg、約310mg或約325mg的β-葡聚糖制劑。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約90mg、約95mg、約100mg、約105mg、約110mg、約115mg或約120mg的人參提取物。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約30mg、約35mg、約40mg、約45mg或約50mg的蘑菇提取物。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約250mg、約265mg、約275mg、約290mg、約300mg、約310mg或約325mg的β-葡聚糖制劑；約90mg、約95mg、約100mg、約105mg、約110mg、約115mg或約120mg的人參提取物的人參提取物；和約30mg、約35mg、約40mg、約45mg或約50mg的蘑菇提取物。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及增強受試者免疫功能的方法，所述方法包括向受試者施用包含約150mg至約200mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約5mg至約10mg來自人參提取物的多糖和約8mg至約16mg來自蘑菇提取物的多糖的組合物，其中，所述組合物每天施用一次。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mg的β-葡聚糖、約175mg的β-葡聚糖或約200mg的β-葡聚糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg或約10mg的來自人參提取物的多糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg或約16mg的來自蘑菇提取物的多糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mg的β-葡聚糖、約175mg的β-葡聚糖或約200mg的β-葡聚糖；約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg或約10mg的來自人參提取物的多糖；和約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg或約16mg的來自蘑菇提取物的多糖。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及增強受試者免疫功能的方法，所述方法包括向受試者施用包含約150mg至約200mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約20mg至約30mg來自人參提取物的多糖和約10mg至約20mg來自蘑菇提取物的多糖的組合物，其中，所述組合物每天施用一次。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mg的β-葡聚糖、約175mg的β-葡聚糖或約200mg的β-葡聚糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約20mg、約25mg或約30mg的來自人參提取物的多糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約10mg、約12mg、約14mg、約16mg、約18mg或約20mg的來自蘑菇提取物的多糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mg的β-葡聚糖、約175mg的β-葡聚糖或約200mg的β-葡聚糖；約20mg、約25mg或約30mg的來自人參提取物的多糖；和約10mg、約12mg、約14mg、約16mg、約18mg或約20mg的來自蘑菇提取物的多糖。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及增強受試者免疫功能的方法，所述方法包括向受試者施用包含約175mg至約225mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約25mg至約45mg來自人參提取物的多糖和約15mg至約30mg來自蘑菇提取物的多糖的組合物，其中，所述組合物每天施用一次。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約175mg的β-葡聚糖、約195mg的β-葡聚糖、約200mg的β-葡聚糖、約205mg的β-葡聚糖、約210mg的β-葡聚糖、約215mg的β-葡聚糖或約225mg的β-葡聚糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約25mg、約28mg、約30mg、約32mg、約35mg、約38mg、約40mg、約42mg或約45mg的來自人參提取物的多糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括約15mg、約18mg、約20mg、約22mg、約24mg、約25mg或約30mg的來自蘑菇提取物的多糖。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約175mg的β-葡聚糖、約195mg的β-葡聚糖、約200mg的β-葡聚糖、約205mg的β-葡聚糖、約210mg的β-葡聚糖、約215mg的β-葡聚糖或約225mg的β-葡聚糖；約25mg、約28mg、約30mg、約32mg、約35mg、約38mg、約40mg、約42mg或約45mg的來自人參提取物的多糖；和約15mg、約18mg、約20mg、約22mg、約24mg、約25mg或約30mg的來自蘑菇提取物的多糖。

在另一方面，本公開內(nèi)容涉及用于增強受試者免疫功能的試劑盒(kit)，其中，所述試劑盒包括任何前述實施方案的免疫刺激組合物或產(chǎn)品。在一些實施方案中，所述試劑盒包括用于向受試者施用所述免疫刺激組合物的說明書。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，所述試劑盒中的免疫刺激組合物存在于包裹中。

在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，使用本文所述的基于蒽酮試劑的分光光度法(參見實施例2)來測定本公開內(nèi)容的多糖含量。在可以與任何前述實施方案組合的一些實施方案中，使用本文所述的基于食品用化學品法典(FCC)的試驗法來測定本公開內(nèi)容的β-葡聚糖含量。

附圖說明

圖1示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的GM-CSF蛋白水平。

圖2A示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-8蛋白水平。圖2B示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的TNF-α蛋白水平。

圖3A示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-1β蛋白水平。圖3B示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-13蛋白水平。

圖4A示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-6蛋白水平。圖4B示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-7蛋白水平。

圖5A示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-12蛋白水平。圖5B示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IL-10蛋白水平。

圖6A示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的IFN-γ蛋白水平。圖6B示出了響應于各種濃度的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的淋巴細胞增殖。

圖7A示出了響應于各種組合物的淋巴細胞增殖。圖7B示出了響應于各種組合物的GM-CSF蛋白水平。圖7C示出了響應于各種組合物的IFN-γ蛋白水平。圖7D示出了響應于各種組合物的IL-10蛋白水平。

圖8A示出了響應于各種組合物的IL-8蛋白水平。圖8B示出了響應于各種組合物的IL-1β蛋白水平。圖8C示出了響應于各種組合物的TNF-α蛋白水平。圖8D示出了響應于各種組合物的IL-6蛋白水平。

圖9A示出了響應于各種組合物的IL-4蛋白水平。圖9B示出了響應于各種組合物的IL-7蛋白水平。圖9C示出了響應于各種組合物的IL-12蛋白水平。

圖10A示出了響應于各種組合物的IL-5蛋白水平。圖10B示出了響應于各種組合物的IL-2蛋白水平。圖10C示出了響應于各種組合物的IL-13蛋白水平。

具體實施方式

呈現(xiàn)如下描述以使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠制備并使用各種實施方案。具體裝置、技術(shù)和應用的描述僅作為示例提供。對本文描述的示例的各種改變對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將是顯而易見的，并且在不脫離各種實施方案的精神和范圍的情況下，本文所限定的一般原理可以應用于其他示例和應用。因此，各種實施方案不旨在限于本文所描述和示出的示例，而是符合與權(quán)利要求一致的范圍。

本公開內(nèi)容主要涉及免疫刺激組合物，更具體地涉及含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物。

本公開內(nèi)容至少部分地是基于申請人的發(fā)現(xiàn)，即含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的組合物出人意料地能夠產(chǎn)生相比于從僅含有純化的β-葡聚糖的組合物觀察到的免疫刺激更大的免疫刺激。相對于僅含有純化的β-葡聚糖的組合物，申請人的免疫刺激組合物能夠?qū)L-8、TNF-α、IL-1β、IL-13、IL-6和IL-7引發(fā)相似程度的免疫刺激，并且對IL-12、IL-10、IFN-γ和淋巴細胞增殖引發(fā)更大程度的免疫刺激。雖然申請人的免疫刺激組合物比僅含有純化的β-葡聚糖的組合物含有更少的多糖，但還是觀察到了以上這種效果，該多糖被認為是組合物中的活性免疫刺激劑。

因此，本文公開了用于增強免疫的方法和組合物。本公開內(nèi)容的組合物包含β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物，并且可以用于增強受試者免疫功能的方法。

在描述本公開內(nèi)容的上下文中(特別是隨后權(quán)利要求書的上下文中)，除非本文另有說明或與上下文明顯矛盾，術(shù)語“一”、“一個”和“所述”以及類似指示對象的使用應被解釋為囊括單數(shù)形式和復數(shù)形式。除非另有說明，術(shù)語“包含”、“具有”、“包括”和“含有”應被解釋為開放式術(shù)語(即，意思是“包括但不限于”)。除非本文另有說明，本文中數(shù)值范圍的列舉僅僅旨在用作單獨提及落入該范圍內(nèi)的每個單獨數(shù)值的速記方法，并且每個單獨數(shù)值被并入本說明書中，如同其在本文中被單獨列舉那樣。例如，如果公開了范圍10-15，則也公開了11、12、13和14。除非本文另有說明或與上下文明顯矛盾，本文所描述的所有方法可以以任何合適的順序進行。除非另有聲明，本文提供的任何和所有示例或示例性語言(例如，“諸如”)的使用僅僅旨在更好地闡明本公開內(nèi)容的實施方案，并且不對本公開內(nèi)容的范圍構(gòu)成限制。說明書中的語言不應被解釋為指示任何未要求保護的元素對于本公開內(nèi)容的實施方案的實施是必要的。

本文中提及的“約”某一數(shù)值或參數(shù)是指本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員容易知道的各個數(shù)值的通常誤差范圍。本文中提及的“約”某一數(shù)值或參數(shù)包括(并描述了)針對該數(shù)值或參數(shù)本身的方面。例如，涉及“約X”的描述包括對“X”的描述。

應當理解，本文所描述的本公開內(nèi)容的方面和實施方案包括“包含”、“由...組成”和“基本上由...組成”的方面和實施方案。

應當理解，本文所描述的各種實施方案的一個、一些或所有性質(zhì)可以組合以形成本公開內(nèi)容的其他實施方案。本公開內(nèi)容的這些和其他方面對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將變得顯而易見。本公開內(nèi)容的這些和其他實施方案通過以下詳細的說明被進一步描述。

本文引用的所有參考文獻通過引用以其整體并入本文。

β-葡聚糖制劑

本公開內(nèi)容的組合物含有β-葡聚糖制劑，其中所述β-葡聚糖制劑含有β-葡聚糖。例如，可以通過獲得β-葡聚糖來源并從該來源提取β-葡聚糖來制備β-葡聚糖制劑。然后可將提取的β-葡聚糖配制成β-葡聚糖制劑，從而使得該制劑含有基本純化的β-葡聚糖。β-葡聚糖制劑還可以采取來自含有β-葡聚糖的來源(例如酵母提取物)的粗提取物或部分純化的提取物的形式。含有β-葡聚糖的β-葡聚糖制劑也可以商購獲得。

β-葡聚糖是通過β-糖苷鍵連接的D-葡萄糖單體的多糖。β-葡聚糖是結(jié)構(gòu)多樣的分子并且可以具有不同程度的支化。β-葡聚糖的各種結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域已知的，并且可以用于本公開內(nèi)容的組合物和方法中。在一些實施方案中，β-1,3/1,6支化的β-葡聚糖存在于β-葡聚糖制劑中。

β-葡聚糖存在于多種有機體中，包括許多細菌、酵母、真菌和植物。各種β-葡聚糖的來源是本領(lǐng)域已知的，并且可以用于本公開內(nèi)容的組合物和方法中。β-葡聚糖的來源可以包括，例如蘋果炭疽病菌、多葉奇果菌(灰樹花)、香菇菌屬(香菇屬)香菇(香菇)、卡氏肺胞菌、靈芝、裂褶菌、齊整小核菌或小核菌、核盤菌(子囊菌門)、白色念珠菌、釀酒酵母、糞產(chǎn)堿菌、昆布屬植物物種(例如掌狀昆布)、諸如禾本科牧草、大麥、燕麥、小麥、黑麥、稻米的谷物、革蘭氏陰性細菌和諸如褐藻的藻類。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑由酵母提取物制備。在一些實施方案中，所述酵母提取物獲自釀酒酵母。

可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種方法來制備β-葡聚糖制劑。例如，可以獲得來自β-葡聚糖來源的細胞材料，并且該細胞材料經(jīng)受酶解作用以裂解細胞并釋放例如多糖的結(jié)構(gòu)組分。然后裂解提取物可經(jīng)歷分離步驟，隨后進行酸堿處理。然后可以將溶液離心以收集含有β-葡聚糖的溶液，該溶液而后可以用于配制β-葡聚糖制劑。β-葡聚糖制劑也可以例如根據(jù)食品用化學品法典(Food Chemicals Codex，F(xiàn)CC)概述的方法來制備。該FCC方法提供了從酵母中獲得β-葡聚糖的指導，并且包括從酵母提取物中分離細胞壁和處理以從壁材料中除去脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。然后進行酸處理，隨后進行滅菌和pH調(diào)節(jié)，從而得到基本純化的β-葡聚糖溶液。

制備β-葡聚糖制劑和定量其中發(fā)現(xiàn)的β-葡聚糖的各種另外的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括例如GEM試驗(Danielson et al.,2010,Journal of Agricultural and Food Chemistry 58:10305-10308)。簡言之，GEM試驗包括使β-葡聚糖溶液與KOH接觸，并用細胞溶解酶進行初步消化，然后與外切-1,3-β-D-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶混合物孵育以將樣品中的β-葡聚糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖。然后使用酶法測量由β-葡聚糖水解產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化的葡萄糖。GEM試驗在本領(lǐng)域中是公知的，并且可以用于測量高度支化的和非支化的β-1,3-葡聚糖。

β-葡聚糖制劑可以含有各種濃度的基本純化的β-葡聚糖。β-葡聚糖制劑可以含有β-葡聚糖制劑總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、或約100％的β-葡聚糖。

β-葡聚糖制劑可以含有β-葡聚糖制劑總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約100％的β-葡聚糖。β-葡聚糖制劑可以含有β-葡聚糖制劑總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約100％的β-葡聚糖。

β-葡聚糖制劑可以含有β-葡聚糖制劑總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、約90％至約95％、或約95％至約100％的β-葡聚糖。

在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度在制劑總干重的約60％至約80％的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑中β-葡聚糖的濃度在制劑總干重的約60％至約75％的范圍內(nèi)。

人參提取物

本公開內(nèi)容的組合物包含人參提取物。人參提取物可以例如通過獲得人參來源并從該人參來源提取細胞內(nèi)容物來制備。人參提取物可以由整個人參植物制備，或者它們可以由例如人參根的特定組織或區(qū)域制備。制備提取物的方法將裂解細胞材料并從細胞中釋放例如多糖的結(jié)構(gòu)組分。人參提取物也可以商購獲得。

人參是屬于五加科的人參屬的一類植物。人參具有多種品種，并且這些植物通常具有肉質(zhì)的根。各種人參植物是本領(lǐng)域已知的，并且可以用于本公開內(nèi)容的組合物和方法中。人參的來源可以是例如西洋參或中國人參。在一些實施方案中，本發(fā)明的人參提取物獲自中國人參(Panax ginseng C A Meyer)。

可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種方法來制備人參提取物。例如，可以使用包括以下步驟的流程來制備人參提取物：人參根(0.5至～1cm)→提取/組織研磨→過濾→濃縮→乙醇沉淀→分離→沉淀→噴霧干燥至最終提取產(chǎn)物。一旦獲得最終提取物產(chǎn)品，可以使用沸水將提取物進一步純化兩次。

人參提取物可以含有各種濃度的多糖。人參提取物可以含有該提取物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、或約100％的多糖。

人參提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約100％的多糖。人參提取物可以包含該提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約100％的多糖。

人參提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、約90％至約95％、或約95％至約100％的多糖。

在一些實施方案中，所述人參提取物含有該提取物總干重的約1％至約75％的多糖。在一些實施方案中，所述人參提取物含有該提取物總干重的約5％至約50％的多糖。在一些實施方案中，所述人參提取物含有該提取物總干重的約30％至約60％的多糖。在一些實施方案中，所述人參提取物含有該提取物總干重的約30％的多糖。

蘑菇提取物

本公開內(nèi)容的組合物含有蘑菇提取物?？梢岳缤ㄟ^獲得蘑菇來源并從該蘑菇來源提取細胞內(nèi)容物來制備蘑菇提取物。蘑菇提取物可以由整個蘑菇制備，或者它們可以由例如莖(菌柄)或菇蓋的特定組織或區(qū)域制備。制備提取物的方法將裂解細胞材料并從細胞中釋放例如多糖的結(jié)構(gòu)組分。蘑菇提取物也可以商購獲得。

蘑菇是許多真菌的肉質(zhì)子實體。真菌在真菌界中被分門別類并且包括諸如子囊菌門、擔子菌門、壺菌門、球囊菌門、微孢子蟲目和接合菌門的各種門類。各種蘑菇是本領(lǐng)域已知的，并且可以用于本公開內(nèi)容的組合物和方法中。蘑菇的來源可以是例如公主松茸、靈芝、香菇、樸蘑和松蕈。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的蘑菇提取物獲自公主松茸(Agaricus blazei Murill)。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的蘑菇提取物獲自靈芝(Ganoderma lucidum)。

可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種方法來制備蘑菇提取物。例如，可以使用包括以下步驟的流程來制備蘑菇提取物：蘑菇原材料→提取/組織研磨→煎煮提取→過濾→收集濾液→濃縮→添加乙醇→噴霧干燥至最終提取產(chǎn)物。所述蘑菇原材料可以來自蘑菇菌絲體的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。煎煮提取物可以使用純化水制備。應使用過濾步驟以獲得濾液。濃縮步驟可以包括真空和低溫?？梢赃M行乙醇的添加以將雜質(zhì)從提取物中分離。噴霧干燥步驟可以通過向過濾的提取物中加入純化水、在90℃下溶解、并最后噴霧干燥以形成粉末狀提取物來進行。

蘑菇提取物可以含有各種濃度的多糖。蘑菇提取物可以含有該提取物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、或約100％的多糖。

蘑菇提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約100％的多糖。蘑菇提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約100％的多糖。

蘑菇提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、約90％至約95％、或約95％至約100％的多糖。

在一些實施方案中，所述蘑菇提取物含有該提取物總干重的約1％至約75％的多糖。在一些實施方案中，所述蘑菇提取物含有該提取物總干重的約5％至約50％的多糖。在一些實施方案中，所述蘑菇提取物含有該提取物總干重的約40％至約55％的多糖。

黃芪根提取物

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的組合物含有黃芪根提取物。黃芪根提取物可以例如通過獲得黃芪根來源并從該黃芪根來源中提取細胞內(nèi)容物來制備。制備提取物的方法將裂解細胞材料并從細胞中釋放例如多糖的結(jié)構(gòu)組分。

黃芪屬是屬于豆類蝶形花科和蝶形花亞科一大類植物。各種黃芪屬植物是本領(lǐng)域已知的，并且可以用于本公開內(nèi)容的組合物和方法中。

可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種方法來制備黃芪根提取物。

黃芪根提取物可以含有各種濃度的多糖。黃芪根提取物可以含有該提取物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、或約100％的多糖。

黃芪根提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約100％的多糖。黃芪根提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約100％的多糖。在一些實施方案中，黃芪根提取物含有該提取物總干重的約50％至約80％的多糖。

黃芪根提取物可以含有該提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、約90％至約95％、或約95％至約100％的多糖。

在一些實施方案中，所述黃芪根提取物含有該提取物總干重的約1％至約75％的多糖。在一些實施方案中，所述黃芪根提取物含有該提取物總干重的約5％至約50％的多糖。

制劑和提取物的分析

本公開內(nèi)容的方法可涉及本文所述的各種制劑和提取物的質(zhì)量控制分析。可以進行質(zhì)量控制分析以測定所述制劑和提取物中某些化合物的身份(identity)和/或濃度，例如所述制劑和提取物中多糖的濃度。關(guān)于各種化合物(諸如多糖)的濃度和/或身份的信息可以用于指導配制本公開內(nèi)容的組合物的方法。

測定樣品中多糖含量的方法是本領(lǐng)域熟知的并且在本文中被描述。例如，使用UV/VIS的分光光度法可以用于測定樣品中的多糖含量。在具體試驗中，糖與一種稱作蒽酮試劑的試劑(Morris et al.,1948,Science:107)在酸性條件下反應產(chǎn)生藍綠色。使用右旋糖酐作為標準品，通過分光光度法測定顏色的強度。還參見Dreywood,1946,Ind.Eng.Chem.(Anal.Ed.):18,499。對于該方法更詳細的分析，也參見實施例2。

確定樣品中多糖含量的方法可以涉及其他基于分光光度的方法。例如，基于苯酚-硫酸分光光度法的粗多糖試驗可以用于確定樣品中多糖的含量。在通過乙醇沉淀分離含有多糖的樣品并且除去其它可溶性糖類和雜質(zhì)后，多糖與苯酚-硫酸反應并產(chǎn)生橙紅色的化合物。樣品中橙紅著色的程度與樣品中多糖的濃度成正比。在485nm波長下對樣品的分析可以用于定量樣品的著色并由此確定樣品的多糖含量。

免疫刺激組合物

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物除了β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物之外還含有黃芪根提取物。在一些實施方案中，所述組合物可以包括本文公開的一種或多種添加劑。本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以用于增強受試者免疫功能的方法中。

本公開內(nèi)容還涉及用于增強受試者免疫功能的免疫刺激組合物。

本公開內(nèi)容還涉及免疫刺激組合物在制備用于增強受試者免疫功能的口服消費產(chǎn)品中的用途。

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以含有一種或多種添加劑。所述一種或多種添加劑可以存在以增加或增強口服消費產(chǎn)品的一種或多種特性，諸如風味、質(zhì)地、香味、顏色、保質(zhì)期等。所述一種或多種添加劑可以已經(jīng)存在于口服消費產(chǎn)品中或者可以被添加到口服消費產(chǎn)品中，或者被添加到用于制備該口服消費產(chǎn)品的一種或多種化合物或成分中。所述口服消費產(chǎn)品可以含有本領(lǐng)域已知的任何合適的添加劑。合適的添加劑的實例包括例如碳水化合物、多元醇、氨基酸或其鹽、多聚氨基酸或其鹽、糖酸或其鹽、核苷酸、有機酸、無機酸、有機鹽、有機酸鹽、有機堿鹽、無機鹽、苦味化合物、食用香料、調(diào)味成分、收斂化合物、蛋白質(zhì)、蛋白水解物、表面活性劑、乳化劑、類黃酮、酒精、聚合物、防腐劑、增稠劑、食品色素及其組合。

在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約70％存在。在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約25％存在。在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％存在。在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約70％存在；所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約25％存在；并且，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％存在。

在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以該組合物總干重的約10％存在。在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述人參提取物以該組合物總干重的約3.5％存在。在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述蘑菇提取物以該組合物總干重的約1.5％存在。在本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物的一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以該組合物總干重的約10％存在，所述人參提取物以該組合物總干重的約3.5％存在，并且所述蘑菇提取物以該組合物總干重的約1.5％存在。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物不含有綠豆、黃豆、紅棗、青蔥、大蒜、扁豆、韭蔥、山楂、洋蔥、當歸根、甘草、蒲公英根、塞內(nèi)加爾根(Senegal root)、姜、橄欖、芝麻籽、歐芹、其提取物、或其制劑中的一種或多種。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物不含有朝鮮薊(洋薊)、絨毛鉤藤(貓爪藤)、巴西香可可(瓜拉那)、秘魯巴豆(龍血巴豆)、西印度櫻桃(金虎尾)、馬黛茶(巴拉圭茶)、甜葉菊(甜菊)、銀杏、斑葉鐘花樹(保哥果樹)、紫錐菊、波爾多樹(波耳多葉)、庫拉索蘆薈(蘆薈)、鹽生肉蓯蓉、肉蓯蓉(及其它肉蓯蓉植物物種)、胭脂仙人掌(仙人掌)、甜橙(酸橙)和其它柑橘科成員(檸檬、青檸、桔子、葡萄柚)、茶類植物(茶)、歐車前(車前草)、莧屬植物及其它莧屬植物物種(莧菜)、印度沒藥樹(印度香膠樹脂)、塞潤櫚、鋸葉棕櫚(鋸棕櫚)、燕麥麩、米糠、亞麻子、大蒜、長角豆(來自角豆樹種子的刺槐豆膠或面粉)、瓜爾豆(瓜爾膠、歐洲食品添加劑法典E412)、野油菜黃單胞菌(黃原膠)、其提取物及其制劑中的一種或多種。

β-葡聚糖制劑

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以含有各種濃度的β-葡聚糖制劑。所述β-葡聚糖制劑可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％的量存在。在一些實施方案中，所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約70％存在。

所述β-葡聚糖制劑可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％的量存在于組合物中。所述β-葡聚糖制劑可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％的量存在于組合物中。

所述β-葡聚糖制劑可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％的量存在于組合物中。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有相對于該組合物的總干重的各種濃度的β-葡聚糖制劑。所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度為該組合物總干重的至少約50％。在一些實施方案中，所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度為該組合物總干重的至少約65％。在一些實施方案中，所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度為該組合物總干重的至少約70％。在一些實施方案中，所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度為該組合物總干重的至少約10％。

所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中β-葡聚糖制劑的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以含有各種濃度的來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖。所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度為該組合物總干重的至少約5％。在一些實施方案中，所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度為該組合物總干重的至少約50％。

所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖對所述免疫刺激組合物中多糖含量總干重的貢獻可以變化。所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度為多糖含量總干重的約80％。

所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

人參提取物

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以含有各種濃度的人參提取物。所述人參提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％的量存在。在一些實施方案中，所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約25％存在。

所述人參提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％的量存在于組合物中。所述人參提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％的量存在于組合物中。

所述人參提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％的量存在于組合物中。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有相對于該組合物總干重的各種濃度的人參提取物。所述組合物中人參提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中人參提取物的濃度為該組合物總干重的至少約25％。

所述組合物中人參提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中人參提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中人參提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有各種濃度的來自人參提取物的多糖。所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度為該組合物總干重的至少約8％。

所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

來自人參提取物的多糖對所述免疫刺激組合物中多糖含量總干重的貢獻可以變化。所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度為多糖含量總干重的約13％。

所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自人參提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

蘑菇提取物

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有各種濃度的蘑菇提取物。所述蘑菇提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％的量存在。在一些實施方案中，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％存在。

所述蘑菇提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％的量存在于組合物中。所述蘑菇提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％的量存在于組合物中。

所述蘑菇提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％的量存在于組合物中。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有相對于該組合物總干重的各種濃度的蘑菇提取物。所述組合物中蘑菇提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中蘑菇提取物的濃度為該組合物總干重的至少約10％。

所述組合物中蘑菇提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中蘑菇提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中蘑菇提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有各種濃度的來自蘑菇提取物的多糖。所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度為該組合物總干重的至少約5％。

所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

來自蘑菇提取物的多糖對所述免疫刺激組合物中多糖含量總干重的貢獻可以變化。所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度為多糖含量總干重的約8％。

所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自蘑菇提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

黃芪根提取物

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有各種濃度的黃芪根提取物。所述黃芪根提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％的量存在。在一些實施方案中，所述黃芪根提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約35％存在。

所述黃芪根提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％的量存在于組合物中。所述黃芪根提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％的量存在于組合物中。在一些實施方案中，所述黃芪根提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約10％至約40％存在。

所述黃芪根提取物可以以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％的量存在于組合物中。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有相對于該組合物總干重的各種濃度的黃芪根提取物。所述組合物中黃芪根提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中黃芪根提取物的濃度為該組合物總干重的至少約35％。

所述組合物中黃芪根提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中黃芪根提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。在一些實施方案中，所述黃芪根提取物以該組合物總干重的約10％至約40％存在。

所述組合物中黃芪根提取物的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以含有各種濃度的來自黃芪根提取物的多糖。所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度為該組合物總干重的至少約5％。

所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

來自黃芪根提取物的多糖對所述免疫刺激組合物中多糖含量總干重的貢獻可以變化。所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如至少約5％、至少約10％、至少約15％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、或至少約95％。在一些實施方案中，所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度為多糖含量總干重的約8％。

所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約40％、約10％至約50％、約20％至約60％、約30％至約70％、約40％至約80％、約50％至約90％、或約60％至約95％。所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約20％、約10％至約30％、約20％至約40％、約30％至約50％、約40％至約60％、約50％至約70％、約60％至約80％、約70％至約90％、或約80％至約95％。

所述組合物中來自黃芪根提取物的多糖的濃度可以是多糖含量總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％。

制備免疫刺激組合物

本公開內(nèi)容還提供了制備本公開內(nèi)容的含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的所述免疫刺激組合物的方法。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物除了β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物之外還含有黃芪根提取物。

制備免疫刺激組合物的方法是本領(lǐng)域公知的并且在本文中被描述。一旦制備了合適的β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和/或黃芪根提取物，這些組分可以被組合成組合物。在一些實施方案中，已經(jīng)將β-葡聚糖制劑、人參提取物，蘑菇提取物和/或黃芪根提取物中的一種或多種制備成儲備水溶液。特定含量的每種組分，無論是以水溶液、粉末、或其它合適形式的形式，可以被組合成組合物?？梢愿鶕?jù)每種組分在所述組合物中理想的端點濃度來選擇該含量。

在一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約40％至約80％的范圍存在；所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約30％的范圍存在，并且；所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約20％的范圍存在。上述百分比范圍反映了每種組分相對于所述組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的濃度，而不一定是相對于該組合物整體總干重的濃度。

在另一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約40％至約80％的范圍存在；所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約10％至約30％的范圍存在；所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約1％至約20％的范圍存在，并且；所述黃芪根提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約10％至約40％的范圍存在。上述百分比范圍反映了每種組分相對于所述組合物中β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的濃度，而不一定是相對于該組合物整體總干重的濃度。

在一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。

在一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約75％至約80％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約5％存在。

在一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約15％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在。

在一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自西洋參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。

在一個示例性實施方案中，所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自靈芝，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物不含有來自西洋參的人參提取物和來自靈芝的蘑菇提取物。在這些實施方案中，所述人參提取物來自除了西洋參之外的人參來源，并且所述蘑菇提取物來自除了靈芝之外的蘑菇來源。例如，本公開內(nèi)容的組合物可以不含有以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在的來自西洋參的人參提取物，和以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在的來自靈芝的蘑菇提取物。

不會用于本公開內(nèi)容的方法和組合物中的含有來自西洋參的人參提取物和來自靈芝的蘑菇提取物的示例性組合物包括以下組合物，該組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自西洋參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自靈芝，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物不含有黃芪根提取物。

本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物可以具有不同濃度的總多糖含量。免疫刺激組合物可以含有該組合物總干重的例如約1％至約5％、約5％至約10％、約10％至約15％、約15％至約20％、約20％至約25％、約25％至約30％、約30％至約35％、約35％至約40％、約40％至約45％、約45％至約50％、約50％至約55％、約55％至約60％、約60％至約65％、約65％至約70％、約70％至約75％、約75％至約80％、約80％至約85％、約85％至約90％、或約90％至約95％的多糖。

口服消費產(chǎn)品

本公開內(nèi)容的所述組合物可以被配制成口服消費產(chǎn)品。如本文所使用的，術(shù)語“口服消費產(chǎn)品”是指與人或動物的口腔接觸的可食用物質(zhì)，包括被攝入并隨后從口腔排出的物質(zhì)以及被飲用、食用、吞咽或以其他方式咽下的物質(zhì)；并且當以通?？山邮艿臐舛确秶褂脮r，所述物質(zhì)對于人或動物消費是安全的。可以將含有免疫刺激組合物的所述口服消費產(chǎn)品施用給受試者以增強受試者的免疫功能。在一些實施方案中，被配制成口服消費產(chǎn)品的免疫刺激組合物含有一種或多種非免疫刺激賦形劑。

本公開內(nèi)容的口服消費產(chǎn)品可以采取各種形式。本公開內(nèi)容的口服消費產(chǎn)品可以包括例如食品組合物、飲料產(chǎn)品、膳食補充劑、營養(yǎng)食品、可食用凝膠混合物、可食用凝膠組合物和藥物組合物。

口服消費產(chǎn)品還可以被配制成粒狀粉末、軟凝膠組合物和閃溶組合物。

口服消費產(chǎn)品可以含有一種或多種甜味劑。所述一種或多種甜味劑可以已經(jīng)存在于所述口服消費產(chǎn)品中，或者可以被添加到所述口服消費產(chǎn)品、或用于制備所述口服消費產(chǎn)品的一種或多種化合物或成分中。在某些實施方案中，所述一種或多種甜味劑可以包括例如天然甜味劑、和人造甜味劑或合成甜味劑。可以為了所期望的營養(yǎng)特性、風味屬性、口感和其它感官因素來選擇合適的甜味劑和甜味劑的組合。在一些實施方案中，所述一種或多種甜味劑包括高強度甜味劑和/或天然高強度甜味劑，包括例如甜菊提取物、甜菊醇糖苷、甜菊苷、萊鮑迪苷A、萊鮑迪苷B、萊鮑迪苷C、萊鮑迪苷D、萊鮑迪苷F、杜爾可苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷、蔗糖、高果糖玉米糖漿、果糖、低聚果糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、赤蘚糖醇、木糖醇、甘露醇、山梨醇、肌醇、醋磺內(nèi)酯鉀(AceK)、阿斯巴甜、紐甜、低聚果糖、三氯蔗糖、糖精、柚皮苷二氫查耳酮(NarDHC)、新橙皮苷二氫查耳酮(NDHC)、甜茶苷、羅漢果苷IV、賽門苷I、羅漢果苷V、莫那甜、索馬甜、莫內(nèi)林、布那珍、L-丙氨酸、甘氨酸、羅漢果、hernandulcin、葉甜素、trilobtain、及其組合。

本公開內(nèi)容的口服消費產(chǎn)品可以含有一種或多種添加劑。所述一種或多種添加劑可以存在以增加或增強所述口服消費產(chǎn)品的一種或多種特性，諸如風味、質(zhì)地、香味、顏色、保質(zhì)期等。所述一種或多種添加劑可以已經(jīng)存在于口服消費產(chǎn)品中或者可以被添加到口服消費產(chǎn)品中，或者被添加到用于制備該口服消費產(chǎn)品的一種或多種化合物或成分中。所述口服消費產(chǎn)品可以含有本領(lǐng)域已知的任何合適的添加劑。合適的添加劑的實例包括例如碳水化合物、多元醇、氨基酸或其鹽、多聚氨基酸或其鹽、糖酸或其鹽、核苷酸、有機酸、無機酸、有機鹽、有機酸鹽、有機堿鹽、無機鹽、苦味化合物、食用香料、調(diào)味成分、收斂化合物、蛋白質(zhì)、蛋白水解物、表面活性劑、乳化劑、類黃酮、酒精、聚合物、防腐劑、增稠劑、食品色素及其組合。

食品組合物

在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以以食品組合物存在。如本文所使用的，“食品組合物”是指可以但不必具有營養(yǎng)價值并且旨在供人或動物消費的任何固體或液體可攝取材料。

合適的食品組合物的實例可以包括例如，諸如咖啡、茶、草藥茶、果汁飲料、軟飲料(例如可樂)等等的飲料(碳酸化的和非碳酸化的)；諸如糖果、薄荷糖、果味滴劑、可可制品、巧克力等等的糖食組合物；諸如番茄醬、芥末、蛋黃醬等等的調(diào)味品；口香糖；谷物組合物；諸如面包、蛋糕、餡餅、餅干等等的烘焙食品；諸如牛奶、奶酪、奶油、冰淇淋、酸奶油、酸奶、果汁凍等等的乳制品；桌面甜味劑組合物；湯；燉菜；方便食品；諸如火腿、培根、香腸、肉干等等的肉類；諸如果醬、果凍、蜜餞等等的明膠和明膠狀產(chǎn)品；水果；蔬菜；蛋制品；糖霜；包括糖蜜的糖漿；小吃；堅果仁和堅果制品；以及動物飼料。

食品組合物還可以包括草藥、香料和調(diào)味品、天然和合成調(diào)味料、以及增味劑。在一些實施方案中，食品組合物包括例如調(diào)制好的包裝產(chǎn)品，諸如膳食甜味劑、液體甜味劑、在用水重構(gòu)后提供非碳酸飲料的粒狀調(diào)味料混合物、速溶布丁混合物、速溶咖啡和茶、咖啡增白劑、麥乳精混合物、寵物食品、牲畜飼料以及用于烘焙用途的材料，諸如用于制備面包、餅干、蛋糕、薄煎餅、甜甜圈等等的粉末狀烘焙混合物。

飲料產(chǎn)品

在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以以飲料產(chǎn)品存在。本公開內(nèi)容的飲料產(chǎn)品包括碳酸飲料產(chǎn)品和非碳酸飲料產(chǎn)品。合適的飲料產(chǎn)品的實例包括例如軟飲料、噴泉飲料、冷凍飲料、即飲飲料、咖啡、茶、乳類飲料、粉狀軟飲料、液體濃縮物、加味水、強化水、果汁、果汁口味飲料、運動飲料、能量飲料以及諸如啤酒、葡萄酒和烈酒的酒精飲料。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的飲料產(chǎn)品包括一種或多種飲料成分，所述一種或多種飲料成分包括例如酸化劑、果汁和/或蔬菜汁、果漿等、調(diào)味品、色素、防腐劑、維生素、礦物質(zhì)、電解質(zhì)、赤蘚醇、塔格糖、甘油和二氧化碳。可以以任何合適的形式提供這種飲料產(chǎn)品，諸如飲料濃縮物或碳酸即飲飲料。

在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的飲料產(chǎn)品可以具有多種不同具體配方或組成中的任何一種。本公開內(nèi)容的飲料產(chǎn)品的配方可以根據(jù)諸如該產(chǎn)品的目標細分市場、其所期望的營養(yǎng)特性、風味屬性等等因素在一定程度上變化。例如，在某些實施方案中，向特定飲料產(chǎn)品的配方中加入另外的成分通常是一種選擇。例如，通?？梢詫⑻鹞秳?、調(diào)味品、電解質(zhì)、維生素、果汁或其他水果產(chǎn)品、滋味劑(tastents)、掩蔽劑等等、增味劑和/或碳酸化劑加入任何這樣的配方中，以改變味道、口感、營養(yǎng)特性等。在一些實施方案中，口服消費產(chǎn)品被配制成表現(xiàn)出特定的風味?？梢允褂玫娘L味可以包括例如香草風味、巧克力風味、香蕉風味、草莓風味以及對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的各種其它風味。示例性的其它調(diào)味品包括例如可樂調(diào)味劑、柑橘調(diào)味劑和香料調(diào)味劑。在一些實施方案中，可以加入二氧化碳形式的碳酸化劑用于發(fā)泡。在其它實施方案中，可以根據(jù)其它成分、生產(chǎn)技術(shù)、所期望的保質(zhì)期等來添加防腐劑。在某些實施方案中，可以加入咖啡因。在一些實施方案中，所述飲料產(chǎn)品是可樂味的碳酸飲料，其具有的特點在于含有碳酸化水、甜味劑、可樂果提取物和/或其它調(diào)味品、焦糖色素、一種或多種酸、以及任選的其它成分。

膳食補充劑和營養(yǎng)食品

在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以以膳食補充劑存在。如本文所使用的，“膳食補充劑”是指旨在補充飲食并提供諸如維生素、礦物質(zhì)、纖維素、脂肪酸、氨基酸等的營養(yǎng)物質(zhì)的化合物，所述營養(yǎng)物質(zhì)可能是缺少的或可能在飲食中沒有消費足夠的量?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何合適的膳食補充劑。合適的膳食補充劑的實例包括例如營養(yǎng)物質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、纖維素、脂肪酸、草藥、植物性藥物、氨基酸和代謝物。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物以營養(yǎng)食品存在。如本文所使用的，“營養(yǎng)食品”是指包括可以提供醫(yī)藥或健康效益的任何食物或食物部分的化合物，所述醫(yī)藥或健康效益包括疾病或病癥(例如疲勞、失眠、老化效應、記憶喪失、情感障礙、心血管疾病和血液中高膽固醇水平、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、炎癥、自身免疫性疾病等)的預防和/或治療?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何合適的營養(yǎng)食品。在一些實施方案中，營養(yǎng)食品可以用作食物和飲料的補充劑，以及用作腸內(nèi)或腸外應用的藥物制劑，其可以是諸如膠囊或片劑的固體制劑、或諸如溶液或懸浮液的液體制劑。

在一些實施方案中，膳食補充劑和營養(yǎng)食品可以進一步含有保護性親水膠體(諸如樹膠、蛋白質(zhì)、改性淀粉)、粘合劑、成膜劑、包封劑/包封材料、壁材料/殼材料、基質(zhì)化合物、包衣、乳化劑、表面活性劑、增溶劑(油、脂肪、蠟、卵磷脂等)、吸附劑、載體、填充劑，聯(lián)合化合物(co-compounds)、分散劑、潤濕劑、加工助劑(溶劑)、流化劑、掩味劑、增重劑、膠凍劑(jellyfying agent)、凝膠形成劑、抗氧化劑和抗微生物劑。

可食用凝膠混合物和凝膠組合物

在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以以凝膠混合物和凝膠組合物存在。如本文所使用的，“凝膠”是指其中顆粒網(wǎng)絡(luò)跨越液體介質(zhì)體積的膠體系統(tǒng)。雖然凝膠主要由液體組成并由此表現(xiàn)出類似于液體的密度，但是凝膠由于跨越液體介質(zhì)的顆粒網(wǎng)絡(luò)而具有固體的結(jié)構(gòu)連貫性。由于這一原因，凝膠通?？雌饋硎枪虘B(tài)的膠狀材料?？梢员怀缘舻哪z被稱為“可食用凝膠組合物”?？墒秤媚z組合物通常作為小吃、甜點、主食的一部分、或與主食一起食用。合適的可食用凝膠組合物的實例包括例如凝膠甜點、布丁、果醬、果凍、糊狀物、膠狀蛋糊糕(trifles)、肉凍、棉花糖、軟糖等等。在一些實施方案中，可食用凝膠混合物通常是粉末狀或顆粒狀固體，可以向其中加入液體以形成可食用凝膠組合物。合適的液體的實例包括例如水、乳制品液體、乳制品類似物液體、果汁、酒精、酒精飲料及其組合。合適的乳制品液體的實例包括例如牛奶、酸奶、奶油、液體乳清及其混合物。合適的乳制品類似物液體的實例包括例如豆奶和非乳制品咖啡增白劑。

如本文所使用的，術(shù)語“膠凝成分”是指可以在液體介質(zhì)中形成膠體系統(tǒng)的任何材料。合適的膠凝成分的實例包括例如明膠、藻酸鹽、角叉菜膠、樹膠、果膠、魔芋、瓊脂、食品酸、凝乳酶、淀粉、淀粉衍生物及其組合。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知，可食用凝膠混合物或可食用凝膠組合物中使用的膠凝成分的量根據(jù)許多因素而顯著變化，所述許多因素包括例如所用的特定膠凝成分、所用的特定液體基質(zhì)和所期望的凝膠性質(zhì)。

可以通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法來制備本公開內(nèi)容的凝膠混合物和凝膠組合物。在一些實施方案中，可以使用除了本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物和膠凝劑之外的其它成分來制備本公開內(nèi)容的可食用凝膠混合物和可食用凝膠組合物。其它合適的成分的實例包括例如食品酸、食品酸的鹽、緩沖系統(tǒng)、膨脹劑、螯合劑、交聯(lián)劑、一種或多種調(diào)味品、一種或多種色素(colors)及其組合。

藥物組合物

在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以以藥物組合物存在?？梢允褂帽绢I(lǐng)域已知的任何合適的藥物組合物。在某些實施方案中，本公開內(nèi)容的藥物組合物含有本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物和一種或多種藥學上可接受的賦形劑。在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的藥物組合物可以用于配制含有一種或多種發(fā)揮生物效應的活性劑的藥療藥物。因此，在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的藥物組合物可以含有一種或多種發(fā)揮生物效應的活性劑。合適的活性劑是本領(lǐng)域公知的(例如，《醫(yī)生案頭參考》(The Physician's Desk Reference))。可以根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法來制備這樣的組合物，例如，如Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA.,USA中所述的方法。

合適的活性劑的實例包括例如支氣管擴張劑、厭食劑、抗組胺藥、營養(yǎng)補充劑、瀉藥、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑，抗酸藥、H2-受體拮抗劑(H.sub.2-receptor antagonists)、抗膽堿能藥、止瀉藥、緩和劑、鎮(zhèn)咳藥、止嘔藥、抗微生物劑、抗菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、祛痰藥、抗炎藥、解熱藥及其混合物。在一個實施方案中，所述活性劑選自解熱藥和鎮(zhèn)痛藥，例如布洛芬、對乙酰氨基酚或阿司匹林；輕瀉劑，例如酚酞二辛基琥珀酸酯磺酸鈉；食欲抑制劑，例如苯丙胺、苯丙醇胺、鹽酸苯丙醇胺或咖啡因；抗酸藥，例如碳酸鈣；平喘藥，例如茶堿；抗利尿劑，例如鹽酸地芬諾酯；抗胃腸脹氣活性劑，例如二甲基硅油(simethecon)；偏頭痛藥，例如酒石酸麥角胺；精神性藥物，例如氟哌啶醇；解痙藥或鎮(zhèn)靜劑，例如苯巴比妥；抗多動癥藥，例如甲基多巴或哌醋甲酯；鎮(zhèn)定劑，例如苯二氮卓類、羥基甲丙氨酯類或吩噻嗪類；抗組胺藥，例如阿司咪唑、馬來酸氯苯那敏、馬來酸美吡拉敏、琥珀酸多西拉敏、馬來酸溴苯那敏、枸櫞酸苯托沙敏、鹽酸氯環(huán)利嗪、馬來酸非尼拉敏和酒石酸苯茚達明；解充血藥，例如鹽酸苯丙醇胺、鹽酸苯腎上腺素、鹽酸偽麻黃堿、硫酸偽麻黃堿、重酒石酸苯丙醇胺和麻黃堿；β-受體阻斷劑，例如普萘洛爾；酒精戒斷劑，例如雙硫侖；鎮(zhèn)咳藥，例如苯佐卡因、右美沙芬、氫溴酸右美沙芬、諾斯卡品、枸櫞酸噴托維林和鹽酸氯苯達諾；氟補充劑，例如氟化鈉；局部抗生素，例如四環(huán)素或氯林可霉素；皮質(zhì)類固醇補充劑，例如潑尼松或潑尼松龍；抗甲狀腺腫形成劑，例如秋水仙堿或別嘌醇；抗癲癇藥，例如苯妥英鈉；抗脫水劑，例如電解質(zhì)補充劑；殺菌劑，例如西吡氯銨；非甾體抗炎藥(NSAIDs)，例如對乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生或其鹽；胃腸活性劑，例如洛哌丁胺和法莫替丁；各種生物堿，例如磷酸可待因、硫酸可待因或嗎啡；微量元素補充劑，例如氯化鈉、氯化鋅、碳酸鈣、氧化鎂和其它堿金屬鹽和堿土金屬鹽；維生素；離子交換樹脂，例如考來烯胺；膽固醇抑制劑和降脂物質(zhì)；抗心律失常藥，例如N-乙酰普魯卡因胺；以及祛痰藥，抗菌劑，諸如環(huán)丙沙星、氧氟沙星和培氟沙星；抗癲癇藥，諸如唑尼沙胺；大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，諸如紅霉素；β-內(nèi)酰胺類抗生素，諸如青霉素和頭孢菌素；精神活性物質(zhì)，諸如氯丙嗪；活性物質(zhì)，諸如安乃近；以及抗?jié)兓钚詣?，諸如西咪替丁。在一些實施方案中，本發(fā)明的所述藥物組合物含有至少一種選自以下的氨基酸：甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-甲硫氨酸、L-鳥氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸、肌氨酸及其混合物。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的藥物組合物是用于口服施用的液體制劑，包括例如藥學上可接受的乳劑、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物之外，所述液體制劑例如可以含有本領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油類(諸如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、山梨糖醇酐聚乙二醇和山梨糖醇酐脂肪酸酯及其混合物。除活性化合物之外，懸浮液可以含有懸浮劑，例如乙氧基異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和黃芪膠及其混合物。

在其它實施方案中，本公開內(nèi)容的藥物組合物可以是以下形式：咀嚼片(例如，美國專利No.4,684,534和6,060,078)；口腔崩解組合物(例如，美國專利No.6,368,625和6,316,029)；固體制劑，諸如水和/或唾液活化的泡騰顆粒劑(例如，美國專利No.6,649,186)；和膜狀或晶片狀藥物組合物；具有本公開內(nèi)容的藥物或藥劑和免疫刺激組合物的膠基制劑，其中本公開內(nèi)容的藥物或藥劑和免疫刺激組合物的膠基制劑被包含在包圍所述膠基制劑的包衣中(例如，美國專利No.6,773,716)。

增強免疫功能

本公開內(nèi)容提供了增強受試者免疫功能的方法。增強受試者免疫功能的方法可以包括向受試者施用本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物。

在一些實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約40％至約80％的范圍存在；所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約30％的范圍存在，并且；所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約20％的范圍存在。在一些實施方案中，將含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的所述免疫刺激組合物配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一些實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約40％至約80％的范圍存在；所述人參提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約10％至約30％的范圍存在，所述蘑菇提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約1％至約20％的范圍存在，并且；所述黃芪根提取物以β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物總干重的約10％至約40％的范圍存在。在一些實施方案中，將含有β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物的所述免疫刺激組合物配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一個示例性實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。該組合物可以被配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一個示例性實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約75％至約80％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約1％至約5％存在。該組合物可以被配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一個示例性實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約10％至約15％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約15％至約20％存在。該組合物可以被配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一個示例性實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自西洋參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自公主松茸，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。該組合物可以被配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一個示例性實施方案中，給受試者施用含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物，其中所述組合物被配制成使得所述β-葡聚糖制劑以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約65％至約70％存在；所述人參提取物來自中國人參，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在，并且；所述蘑菇提取物來自靈芝，并且以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在。該組合物可以被配制成用于施用給受試者的口服消費產(chǎn)品。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的待施用給受試者的免疫刺激組合物不含有來自西洋參的人參提取物和來自靈芝的蘑菇提取物。在這些實施方案中，所述人參提取物來自除了西洋參之外的人參來源，并且所述蘑菇提取物來自除了靈芝之外的蘑菇來源。例如，本公開內(nèi)容的組合物可以不含有以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約20％至約25％存在的來自西洋參的人參提取物，和以β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物總干重的約5％至約10％存在的來自靈芝的蘑菇提取物。

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的待施用給受試者的免疫刺激組合物不含有黃芪根提取物。

受試者

在一些實施方案中，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以以適于實現(xiàn)其預期目的的任何形式施用于受試者。在某些實施方案中，所述組合物是可以口服施用的組合物。合適的受試者包括例如具有免疫系統(tǒng)的任何動物，諸如人。其他合適的受試者包括例如犬科動物、貓科動物、狗、貓、倉鼠、沙鼠、家畜、馬、牛、綿羊、魚等等。如本文所使用的，獸藥組合物是指適用于非人類動物的藥物組合物。這樣的獸藥組合物是本領(lǐng)域公知的。

免疫功能

探查受試者增強的免疫功能的各種測定法是本領(lǐng)域已知的，并描述在本文中。例如，增強的免疫功能可以表現(xiàn)為針對抗原的增強的體內(nèi)遲發(fā)型超敏反應(包括接觸性超敏反應)，受試者先前暴露于該抗原、對該抗原敏感、或接種過抵抗該抗原的疫苗。受試者增強的免疫功能還可以包括響應于該受試者先前暴露過、對其敏感或接種過抵抗其的疫苗的病原體相關(guān)物、病原體類似物、促有絲分裂刺激物或抗原的增強的細胞增殖、細胞因子生成、氧化爆發(fā)反應或吞噬活性。

研究受試者免疫功能的狀態(tài)還可以包括例如，測量血清中或獲自受試者的其他身體樣品中的抗體水平和/或一種或多種其它標記物(例如，補體蛋白質(zhì)生成)水平。響應于病原性刺激物或接種疫苗的抗體產(chǎn)生的增加是體液免疫增強的標志。增強的免疫功能可以包括受試者增強的淋巴細胞增殖和/或一種或多種細胞因子增加的生成。在一些實施方案中，在受試者中增加的生成的細胞因子包括IFN-γ、IL-12和IL-10。

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以用于增強受試者的免疫功能，從而使得受試者對急性病原性刺激物的響應能力增強。例如，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以用于增強對外源性病原體或?qū)ψ泽w引發(fā)物(諸如，腫瘤細胞)的保護性免疫反應。在這種意義上，本文公開的所述免疫刺激組合物可以用作預防性的，例如，以避免感染或降低感染或另一免疫相關(guān)疾病的嚴重性。

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以通過以下方式來增強受試者的免疫功能：例如，增加自然殺傷(NK)細胞的活性或數(shù)量、增加病原體特異性或腫瘤特異性IgA、IgG或IgM抗體產(chǎn)生、將具有低于正常水平的IgA、IgG或IgM的哺乳動物的血液中所述抗體的濃度增加至正常范圍值、增加治療或疾病引起白血球數(shù)量減少的哺乳動物中白血球的總數(shù)、增加治療或疾病引起吞噬細胞數(shù)量減少的哺乳動物中吞噬細胞的數(shù)量或活性、提高針對病原體、病原體感染的細胞或腫瘤細胞的細胞介導的細胞毒性反應、通過增加sIgA分泌來提高粘膜上皮細胞的屏障功能、增加腸粘液產(chǎn)生、降低上皮細胞通透性或減少跨越上皮細胞的微生物移位(除了由局部免疫細胞非感染性攝取微生物之外)、通過以下方式來改善腸道菌群的組成：通過提高諸如雙歧桿菌或乳酸桿菌的有益細菌的數(shù)量或活性、通過提高腸道菌群的抗移植性、通過減少腸道菌群中潛在致病微生物的數(shù)量、或通過降低腸內(nèi)容物的pH。

通過向受試者施用本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物來增強受試者免疫功能的方法可以包括治療例如由老化、疾病、病癥和/或創(chuàng)傷引起的受試者的任何免疫功能降低。在一些實施方案中，降低的免疫功能可以表現(xiàn)為例如感染、炎癥、血管并發(fā)癥、傷口愈合不良、粘膜炎和口腔炎的癥狀。非自愿的體重減輕和肌肉減少癥可以進一步惡化受試者的免疫功能。

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以單獨使用或與用于治療患有疾病或病癥(包括例如癌癥、腫瘤生長、糖尿病、慢性阻塞性肺病、細菌性疾病、諸如HIV感染的病毒性疾病、腎病、腎衰竭、自身免疫性疾病和心力衰竭)的受試者的其它藥物組合使用。在本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物用于治療創(chuàng)傷的實施方案中，所述創(chuàng)傷可以包括例如手術(shù)、藥物治療、化學治療和放射治療。

施用免疫刺激組合物

本公開內(nèi)容的所述方法可以包括向受試者施用有效量的本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物。本文所使用的術(shù)語“有效量”是指足以增強免疫反應并改善、緩和、減輕和/或延遲病癥、病況或疾病的一種或多種癥狀的化合物或組合物的量。有效量的所述免疫刺激組合物可以或可以不與另一種藥物、藥物組合物或治療聯(lián)合實現(xiàn)。因此，在施用一種或多種治療劑的上下文中可以認為是“有效量”，并且如果與一種或多種其他藥劑聯(lián)合給藥而可以或已經(jīng)獲得期望的結(jié)果，可以認為單一藥劑以有效量給藥。

為了按照本公開內(nèi)容的所述方法增強受試者的免疫功能，可以使用各種劑型的本公開內(nèi)容的所述免疫刺激組合物的組分。以下段落中的劑量可以施用給例如人的受試者。

關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的量，所施用的β-葡聚糖的量可以是例如約20mg至約1,000mg、約20mg至約500mg、約20mg至約200mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約100mg至約200mg、約150mg至約500mg、約150mg至約300mg、約150mg至約250mg、或約150mg至約200mg。關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的量，所施用的β-葡聚糖的量可以是例如至少約50mg、至少約75mg、至少約100mg、至少約125mg、至少約150mg、至少約175mg、至少約200mg、至少約225mg、至少約250mg、至少約275mg、至少約300mg、至少約400mg、或至少約500mg。在一些實施方案中，關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖的量，所施用的β-葡聚糖的量為約100mg至約300mg。

關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自人參提取物的多糖的量，所施用的來自人參提取物的多糖的量可以是例如約5mg至約300mg、約6mg至約300mg、約7mg至約300mg、約8mg至約300mg、約9mg至約300mg、約10mg至約300mg、約5mg至約100mg、約7.5mg至約100mg、約5mg至約50mg、或約7.5mg至約50mg。關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自人參提取物的多糖的量，所施用的來自人參提取物的多糖的量可以是例如至少約5mg、至少約6mg、至少約7mg、至少約8mg、至少約9mg、至少約10mg、至少約15mg、至少約30mg、至少約40mg、至少約50mg、至少約60mg、至少約75mg、至少約100mg、或至少約200mg。在一些實施方案中，關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自人參提取物的多糖的量，所施用的來自人參提取物的多糖的量為約5mg至約100mg。

關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自蘑菇提取物的多糖的量，所施用的來自蘑菇提取物的多糖的量可以是例如約10mg至約300mg、約10mg至約50mg、約12mg至約300mg、約15mg至約300mg、約25mg至約200mg、約50mg至約200mg、約50mg至約150mg、約50mg至約100mg、約75mg至約100mg、約10mg至約100mg、或約10mg至約75mg。關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自蘑菇提取物的多糖的量，所施用的來自蘑菇提取物的多糖的量可以是例如至少約10mg、至少約12mg、至少約14mg、至少約16mg、至少約18mg、至少約20mg、至少約25mg、至少約30mg、至少約40mg、至少約50mg、至少約60mg、至少約75mg、至少約100mg、或至少約200mg。在一些實施方案中，關(guān)于本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物中來自蘑菇提取物的多糖的量，所施用的來自蘑菇提取物的多糖的量為約10mg至約100mg。

在一些實施方案中，所施用的所述免疫刺激組合物含有約100mg至約300mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約5mg至約100mg來自人參提取物的多糖、和約10mg至約100mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所施用的所述免疫刺激組合物含有至少約150mg、約175mg或約200mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、至少約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg或約10mg來自人參提取物的多糖、以及至少約10mg、至少約12mg、至少約14mg或至少約16mg來自蘑菇提取物的多糖。

為了增強受試者的免疫功能，本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物的適當劑量(當單獨使用或與一種或多種其它額外治療劑組合使用時)可以取決于待治療或預防的疾病類型、疾病或病癥(如果已經(jīng)存在于受試者中)的嚴重程度和病程、是否是以預防或治療的目的而施用所述免疫刺激組合物、受試者接受的先前治療和治療類型、受試者的臨床病史、以及任何主治醫(yī)師的判斷(如果適用的話)。

本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物的劑量可以一次或通過一系列給藥而施用給受試者。例如，可以向受試者施用所述免疫刺激組合物，例如每日一次、每日兩次、每日三次或更多次、每兩天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每隔六天一次、每周一次、每兩周一次、或者每月或更長時間一次。對于經(jīng)過幾天或更長時間的重復給藥，根據(jù)病況，通常會持續(xù)給藥直到發(fā)生對疾病和/或病癥癥狀所期望的抑制、或者直到有足夠的信心不會出現(xiàn)疾病和/或病癥癥狀或任何疾病和/或病癥癥狀在出現(xiàn)時嚴重程度會降低。所述免疫刺激組合物的給藥持續(xù)時間可以是例如至少一天、至少三天、至少一周、至少兩周、至少一個月、至少兩個月、至少三個月、至少六個月、至少九個月、或至少一年或更長。

在一些實施方案中，所述免疫刺激組合物包括約220mg至約250mg的β-葡聚糖制劑、約75至約90mg的人參提取物、和約20mg至約40mg的蘑菇提取物。在一些實施方案中，所述組合物包括約220mg、約230mg、約240mg、或約250mg的β-葡聚糖制劑。在一些實施方案中，所述組合物包括約80mg、約82mg、約84mg、約86mg、約88mg、或約90mg的人參提取物。在一些實施方案中，所述組合物包括約20mg、約25mg、約30mg、約33mg、約35mg、約38mg、或約40mg的蘑菇提取物。在一些實施方案中，所述組合物包括約220mg、約230mg、約240mg、或約250mg的β-葡聚糖制劑；約80mg、約82mg、約84mg、約86mg、約88mg、或約90mg的人參提取物；和約20mg、約25mg、約30mg、約33mg、約35mg、約38mg、或約40mg的蘑菇提取物。在一些實施方案中，上述組合物每天一次施用給受試者。上述組合物還可以例如每兩天一次、每三天一次、每四天一次、或每周一次施用給受試者。

在一些實施方案中，所述免疫刺激組合物包括約250mg至約325mg的β-葡聚糖制劑、約90至約120mg的人參提取物、和約30mg至約50mg的蘑菇提取物。在一些實施方案中，所述組合物包括所述組合物包括約250mg、約265mg、約275mg、約290mg、約300mg、約310mg、或約325mg的β-葡聚糖制劑。在一些實施方案中，所述組合物包括約90mg、約95mg、約100mg、約105mg、約110mg、約115mg、或約120mg的人參提取物。在一些實施方案中，所述組合物包括約30mg、約35mg、約40mg、約45mg、或約50mg的蘑菇提取物。在一些實施方案中，所述組合物包括約250mg、約265mg、約275mg、約290mg、約300mg、約310mg、或約325mg的β-葡聚糖制劑；約90mg、約95mg、約100mg、約105mg、約110mg、約115mg、或約120mg的人參提取物的人參提取物；和約30mg、約35mg、約40mg、約45mg、或約50mg的蘑菇提取物。在一些實施方案中，上述組合物每天一次施用給受試者。上述組合物還可以例如每兩天一次、每三天一次、每四天一次、或每周一次施用給受試者。

在一些實施方案中，所述免疫刺激組合物包括約150mg至約200mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約5mg至約10mg來自人參提取物的多糖、和約8mg至約16mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mgβ-葡聚糖、約175mgβ-葡聚糖、或約200mgβ-葡聚糖。在一些實施方案中，所述組合物包括約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg、或約10mg來自人參提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg、或約16mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mgβ-葡聚糖、約175mgβ-葡聚糖、或約200mgβ-葡聚糖；約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg、或約10mg來自人參提取物的多糖；和約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg、或約16mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，上述組合物每天一次施用給受試者。上述組合物還可以例如每兩天一次、每三天一次、每四天一次、或每周一次施用給受試者。

在一些實施方案中，所述免疫刺激組合物包括約150mg至約200mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約20mg至約30mg來自人參提取物的多糖、和約10mg至約20mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mgβ-葡聚糖、約175mgβ-葡聚糖、或約200mgβ-葡聚糖。在一些實施方案中，所述組合物包括約20mg、約25mg、或約30mg來自人參提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括約10mg、約12mg、約14mg、約16mg、約18mg、或約20mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約150mgβ-葡聚糖、約175mgβ-葡聚糖、或約200mgβ-葡聚糖；約20mg、約25mg、或約30mg來自人參提取物的多糖；和約10mg、約12mg、約14mg、約16mg、約18mg、或約20mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，上述組合物每天一次施用給受試者。上述組合物還可以例如每兩天一次、每三天一次、每四天一次、或每周一次施用給受試者。

在一些實施方案中，所述免疫刺激組合物包括約175mg至約225mg來自β-葡聚糖制劑的β-葡聚糖、約25mg至約45mg來自人參提取物的多糖、和約15mg至約30mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約175mgβ-葡聚糖、約195mgβ-葡聚糖、約200mgβ-葡聚糖、約205mgβ-葡聚糖、約210mgβ-葡聚糖、約215mgβ-葡聚糖、或約225mgβ-葡聚糖。在一些實施方案中，所述組合物包括約25mg、約28mg、約30mg、約32mg、約35mg、約38mg、約40mg、約42mg、或約45mg來自人參提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括約15mg、約18mg、約20mg、約22mg、約24mg、約25mg、或約30mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，所述組合物包括來自β-葡聚糖制劑的約175mgβ-葡聚糖、約195mgβ-葡聚糖、約200mgβ-葡聚糖、約205mgβ-葡聚糖、約210mgβ-葡聚糖、約215mgβ-葡聚糖、或約225mgβ-葡聚糖；約25mg、約28mg、約30mg、約32mg、約35mg、約38mg、約40mg、約42mg、或約45mg來自人參提取物的多糖；和約15mg、約18mg、約20mg、約22mg、約24mg、約25mg、或約30mg來自蘑菇提取物的多糖。在一些實施方案中，上述組合物每天一次施用給受試者。上述組合物還可以例如每兩天一次、每三天一次、每四天一次、或每周一次施用給受試者。

在關(guān)于向受試者施用本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物的一些實施方案中，施用所述組合物以使得在單獨一天內(nèi)施用不超過250mg的β-葡聚糖。在關(guān)于向受試者施用本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物的一些實施方案中，施用所述組合物以使得在單獨一天內(nèi)施用不超過3克的人參提取物。

通過常規(guī)技術(shù)和試驗很容易監(jiān)測免疫刺激組合物給藥方案的進展。在一些實施方案中，通過監(jiān)測受試者的病毒載量來監(jiān)測給藥進展。在一些實施方案中，通過監(jiān)測受試者疾病和/或病癥癥狀的狀態(tài)來監(jiān)測給藥進展。

試劑盒

本文還提供了用于增強受試者免疫功能的試劑盒。所述試劑盒可以包含例如含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的免疫刺激組合物。所述試劑盒可以包含例如含有免疫刺激組合物的口服消費產(chǎn)品，所述免疫刺激組合物含有β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物。所述試劑盒可以包含例如含有β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物的免疫刺激組合物。所述試劑盒可以包含例如含有免疫刺激組合物的口服消費產(chǎn)品，所述免疫刺激組合物含有β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪根提取物。

在一些實施方案中，所述試劑盒包含用于向受試者施用本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物的說明書。在一些實施方案中，所述免疫刺激組合物被配制成本公開內(nèi)容的口服消費產(chǎn)品。所述說明書可以提供關(guān)于例如針對所述免疫刺激組合物的給藥方案和給藥持續(xù)時間的建議指南的信息。存在于所述試劑盒中的免疫刺激組合物也可以在包裝中提供。本公開內(nèi)容的免疫刺激組合物可以在例如紙包裝、塑料包裝、或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種其它合適的包裝之一中提供。

實施例

提供以下實施例用于說明性目的，并用來幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本公開內(nèi)容的各個實施方案。以下實施例不旨在以任何方式限制本公開內(nèi)容的范圍。

實施例1：評價由“混合物A”引發(fā)的免疫刺激

該實施例表明“混合物A”溶液(含有β-葡聚糖、人參提取物和蘑菇提取物)是有效的免疫刺激物。盡管“混合物A”具有比對照溶液更低的總多糖含量，但是與含有β-葡聚糖的對照溶液相比，“混合物A”能夠刺激淋巴細胞增殖增加和多種免疫刺激蛋白標記物的積累增加。

簡介

β-葡聚糖是一類由不同長度的葡萄糖鏈組成的多糖，其被發(fā)現(xiàn)于各種細菌、酵母、真菌和植物中，并且已知是人免疫系統(tǒng)的有效刺激物。此外，已經(jīng)顯示來自人參和蘑菇的多糖在免疫刺激中具有積極作用。探索了含有純化的β-葡聚糖、人參提取物和蘑菇提取物的組合物引發(fā)免疫刺激的能力。

材料和方法

“混合物A”組分

“混合物A”是純化的β-葡聚糖制劑、人參提取物和蘑菇提取物的混合物。來自釀酒酵母的純化的β-葡聚糖是商購獲得的。質(zhì)量分析確定所述商購獲得的純化的β-葡聚糖組合物含有約70％(w/w)的β-葡聚糖。來自中國人參(Panax ginseng C A Meyer)的提取物也是商購獲得的。質(zhì)量分析確定所述商購獲得的人參提取物含有約30％(w/w)的多糖。來自公主松茸(Agaricus blazei Murill)的提取物也是商購獲得的。質(zhì)量分析確定所述商購獲得的蘑菇提取物含有約50％(w/w)的多糖。

“混合物A”組合物

將特定含量的每種商購獲得的純化的β-葡聚糖、人參提取物和蘑菇提取物的合并以生成“混合物A”組合物。以干重計，“混合物A”組合物含有約70％的純化的β-葡聚糖制劑、約20％的人參提取物和約10％的蘑菇提取物。

淋巴細胞增殖試驗

從單個供體獲得血液，通過泛影葡胺密度梯度法離心、然后洗滌來制備外周血單核細胞(PBMCs)。使用Beckman Coulter Vi-細胞XR細胞活力分析儀測定細胞活力和細胞濃度。在完全培養(yǎng)基中將細胞調(diào)節(jié)至2×10⁶/mL濃度，所述完全培養(yǎng)基含有添加有25mM HEPES緩沖液、10％胎牛血清、1X抗生素/抗真菌劑(100μg/mL鏈霉素、100U/mL青霉素G、0.25μg/mL兩性霉素B)和50μM 2-巰基乙醇的RPMI 1640培養(yǎng)基。將PBMCs(100μL/孔)一式三份(復制品(replicates))置于96孔微量滴定板中。隨后，將100μL完全培養(yǎng)基、含有1％DMSO的完全培養(yǎng)基(背景對照)和5種濃度(0.1μg/mL-300μg/mL)的純化的β-葡聚糖溶液或“混合物A”組合物加入到恰當?shù)目字?。對于DMSO可溶性化合物和伴隨的背景對照孔，最終DMSO濃度保持恒定為0.5％。

將培養(yǎng)物在37℃、5％CO₂中孵育3天，最后6-16小時在1μCi的氚化胸腺嘧啶核苷(H₃-TdR)存在下施加脈沖，采收并計數(shù)以測定H₃-TdR結(jié)合(增殖讀數(shù))。

細胞因子生成

如上所述制備PBMCs，這些細胞按100μL/孔一式三份置于96孔微量滴定板中。隨后，加入100μL完全培養(yǎng)基、含有1％DMSO的完全培養(yǎng)基(背景對照)和5種濃度的純化的β-葡聚糖溶液或“混合物A”組合物(參見上文)。在37℃、5％CO₂中孵育約24小時后，移除培養(yǎng)上清液(SNs)并冷凍。通過Luminex 200系統(tǒng)中多路復用來分析SNs，并測定SNs中的以下細胞因子蛋白：GM-CSF、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12(p70)、IL-13和TNF-α。

結(jié)果

分析了與單獨純化的β-葡聚糖相比，“混合物A”組合物(含有β-葡聚糖、人參提取物和蘑菇提取物)引發(fā)免疫刺激的能力?！盎旌衔顰”的組分及其各自多糖含量的詳細分析示于表1中?！盎旌衔顰”組合物比單獨純化的β-葡聚糖的對照溶液(總干重為約70％的多糖)含有更少的多糖(總干重為約60％的多糖)。

表1-“混合物A”參數(shù)

將各種濃度的純化的β-葡聚糖溶液和“混合物A”溶液加入到裝有外周血單核細胞(PBMCs)的微量滴定孔中。孵育一段時間后，測定各種免疫刺激參數(shù)和/或標記物。

如圖1所示，觀察到響應于增加的β-葡聚糖溶液和“混合物A”溶液濃度的GM-CSF蛋白增加。然而，與在增加的“混合物A”濃度下觀察到的GM-CSF增加相比，在一系列β-葡聚糖溶液濃度下GM-CSF蛋白含量的增加更大。不希望受到理論的束縛，考慮到多糖被認為是有助于免疫刺激的主要活性成分，這一結(jié)果可能被預料為“混合物A”含有比β-葡聚糖溶液更少的總多糖。

當測定包括IL-8(圖2A)、TNF-α(圖2B)、IL-1β(圖3A)、IL-13(圖3B)、IL-6(圖4A)和IL-7(圖4B)的其它免疫刺激標記物時，β-葡聚糖溶液和“混合物A”溶液都引起這些蛋白質(zhì)在一系列濃度范圍內(nèi)的類似增加。對于這些標記物中的幾種，盡管β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液的濃度增加，蛋白質(zhì)水平似乎達到平穩(wěn)，這表明反應達到飽和。總之，對于上述標記物，β-葡聚糖溶液和“混合物A”溶液似乎具有相似的免疫刺激性質(zhì)。這很有趣，因為“混合物A”溶液含有比β-葡聚糖溶液更少的總多糖，但卻能夠引發(fā)相似的免疫刺激。

令人驚訝的是，觀察到“混合物A”對IL-12(圖5A)、IL-10(圖5B)和IFN-γ(圖6A)比由β-葡聚糖溶液引發(fā)具有更強的免疫刺激作用。這在一系列濃度范圍內(nèi)是很明顯的，特別是在測試較高濃度的β-葡聚糖溶液和“混合物A”時。這很令人驚訝；“混合物A”組合物含有比β-葡聚糖溶液更少的總多糖，但是卻能夠引發(fā)更強的免疫刺激。

為了進一步探索該結(jié)果，測試了響應于增加的β-葡聚糖溶液或“混合物A”溶液濃度的樣品中的淋巴細胞增殖。如圖6B所示，觀察到“混合物A”在一系列濃度范圍內(nèi)比β-葡聚糖溶液引發(fā)更高的淋巴細胞增殖。淋巴細胞增殖是免疫刺激的標志特征，并且該結(jié)果表明“混合物A”組合物是比β-葡聚糖溶液更強的對該增殖的刺激物。

如上所述，認為來自人參和蘑菇的對免疫刺激有活性的組分是多糖。然而，“混合物A”(以干重計，約60％的多糖)的總多糖含量實際上小于β-葡聚糖溶液的總多糖含量(以干重計，約70％的多糖)。因此，令人驚訝的是，“混合物A”組合物能夠?qū)L-8、TNF-α、IL-1β、IL-13、IL-6和IL-7引發(fā)相似程度的免疫刺激，并且對IL-12、IL-10、IFN-γ和淋巴細胞增殖引發(fā)更大程度的免疫刺激。不同細胞因子在免疫系統(tǒng)中具有獨特的作用和功能。例如，IFN-γ對于增強宿主免疫細胞對癌細胞或病毒感染細胞的殺傷是很重要的，并且觀察到該細胞因子與“混合物A”接觸后具有相比于β-葡聚糖溶液而言增加的刺激。此外，不希望受到理論的束縛，認為觀察到的與“混合物A”接觸后淋巴細胞增殖的增加在增強先天性免疫和適應性免疫(包括抗體產(chǎn)生)中會發(fā)揮重要作用。

總之，總體結(jié)果將“混合物A”定位為有效的免疫刺激物，并且與純化的多糖(例如β-葡聚糖溶液)組合物相比具有引發(fā)增強的免疫反應的能力。

實施例2：“混合物A”中多糖含量的測定/計算

本實施例描述了用于使用基于UV/VIS的分光光度法測定“混合物A”中多糖含量的方法。在該具體試驗中，糖與一種稱作蒽酮試劑的試劑在酸性條件下反應產(chǎn)生藍綠色。使用右旋糖酐作為標準品，通過分光光度法測定顏色的強度。

材料和方法

儀器

用于該儀器的材料包括：設(shè)定為90℃+/-2℃的水??；電子移液器和移液器吸頭；各種尺寸的容量瓶；50mL塑料錐形離心管、各種尺寸的A類玻璃定量移液管；分析天平；分光光度計HP8453或等同物、電子計時器、GF/C Whatman過濾器(>1.2mm)或等同物；水>16兆歐、1厘米的塑料比色杯和所需的雜項設(shè)備。

試劑

所用試劑包括：右旋糖酐粉末(Sigma目錄號#D-1537或等同物)、蒽酮(Sigma目錄號#31,989-9或等同物)、硫酸(Fisher目錄號#A300或等同物)、無水乙醇試劑(B&J目錄號#AH090或等同物)。

標準品的制備

儲備標準品溶液(1mg/mL)：稱取50mg右旋糖酐標準品放入50mL容量瓶中，溶解，用水調(diào)節(jié)至體積(volume)并混勻。以mg/mL計算濃度。儲備標準品溶液可使用12小時。

工作標準品溶液：將2、4、6和8mL的儲備標準品溶液移液到四個分別標記的200mL容量瓶中，用水填充至體積并混勻。濃度為約10、20、30和40μg/mL。

溶液的制備

蒽酮溶液：稱取200mg+/-1mg的蒽酮放入100mL燒瓶中并用硫酸填充至體積。將該溶液輕輕搖動以溶解。

80:20乙醇/水溶液：將800mL乙醇和200mL水加入1升介質(zhì)瓶中并混勻。

步驟

標準曲線的構(gòu)建

標記五個10mL容量瓶，四個用于四個工作標準品，一個用作留空品(blank)，并將4.0mL的蒽酮試劑移液到每個各自標記的燒瓶中。

將燒瓶不帶蓋子放置在冰浴中。使燒瓶靜置5-7分鐘，輕輕搖動，再靜置額外的5-7分鐘。冰浴水平線略高于燒瓶中的溶液水平線。

使用電子移液器，在冰浴中將2.0mL的四個工作標準品中的每一者移液到各自標記的燒瓶中，并將2.0mL的水移液到標記為留空品的一個燒瓶中。將燒瓶在水浴中靜置額外的5-7分鐘。在此期間，工作標準品溶液和留空品在蒽酮試劑上形成了一層。

5分鐘后，輕輕搖動每個燒瓶以混勻各層，然后用箔紙覆蓋并置于20mL閃爍管支架中。

將該支架在90℃+/-2℃水浴中放置20分鐘+/-10秒。使用環(huán)圈壓重物來保持支架在水浴中穩(wěn)定。熱水浴水平線略高于燒瓶中的溶液水平線。

20分鐘后，從熱水浴中取出工作標準品和留空品，并放入冰浴中以將樣品冷卻至室溫(1.5分鐘至2分鐘)。

在使用留空品對儀器歸零之后立即分析工作標準品。使用1cm比色杯讀取625nm處的吸光度。

通過相對于標準品濃度標繪吸光度讀數(shù)來構(gòu)建標準曲線，并計算斜率、Y-截距和線性回歸系數(shù)。R²值為約0.990。

樣品制備

稱取約120mg粉末狀的“混合物A”放入50mL錐形離心管中。使用容量移液管加入50mL 80:20乙醇/水，短暫渦旋攪動，然后將樣品在室溫下超聲處理1小時。這種前期提取被設(shè)計為從樣品基質(zhì)中除去任何賦形劑或低分子量糖。將樣品在約20℃+/-1℃下以6000rpm離心20分鐘。立即傾析上清液，并非常小心以避免任何沉淀物質(zhì)在傾析過程中損失。棄去上清液并保留沉淀物用于多糖測試。

使用容量移液管將50mL水加入具有沉淀物的每個離心管中，短暫渦旋攪動，然后在室溫下超聲處理5-7分鐘。將樣品在6000rpm下再次離心20分鐘。將約20mL樣品通過GF/C Whatman過濾器過濾到空管中。將所得經(jīng)過濾的上清液用于多糖測試。

將8.0mL經(jīng)過濾的“混合物A”溶液移液至50mL容量瓶中。將溶液用水填充至體積并混勻。

樣品測試

將4.0mL蒽酮試劑移液至各自的10mL容量瓶中，并遵循上文在“標準曲線的構(gòu)建”下的相同步驟，但不用實驗樣品進行這些步驟。吸光度讀數(shù)應當在0.13-0.77AU的范圍內(nèi)。

計算

基于如上所述構(gòu)建的標準曲線并使用下式計算總多糖含量(右旋糖酐等同物)：

總多糖(％w/w，如右旋糖酐)：

＝(A-b)×V3×V1×100/S×1000×V2×SW，

其中：A＝樣品的吸光度讀數(shù)，b＝截距，SW＝以毫克為單位的樣品重量，S＝斜率，V1＝初始體積＝50mL，V2＝從V1到稀釋的體積，V3＝最終體積＝50mL

參考文獻

Morris,D.L.1948,“Quantitative Determination of Carbohydrates With Dreywood’s Anthrone Reagent”.Science,March 5,1948,Vol.107.

Dreywood,R.1946.Ind.Eng.Chem.(Anal.Ed.),1946,18,499.

實施例3：評價由免疫刺激組合物引發(fā)的免疫刺激

本實施例表明各種免疫刺激組合物(含有β-葡聚糖、人參提取物和蘑菇提取物)充當有效的免疫刺激物。與含有β-葡聚糖的組合物相比，這些組合物中的多者能夠刺激淋巴細胞增殖增加和多種免疫刺激蛋白標記物的積累增多。

簡介

從實施例1，申請人證實了稱為“混合物A”的溶液充當有效的免疫刺激物。申請人探索了含有β-葡聚糖、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪提取物的各種組合的其它免疫刺激組合物增強免疫反應的能力。這些研究的結(jié)果在該實施例中示出。

材料和方法

免疫刺激組合物組分

制備各種免疫刺激組合物，其含有純化的β-葡聚糖制劑、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪提取物的各種組合的混合物。如實施例1所描述的那樣獲得并制備單個組合物組分。來自釀酒酵母的純化的β-葡聚糖是商購獲得的。來自中國人參(Panax ginseng C A Meyer)或西洋參的提取物也是商購獲得的。來自公主松茸(Agaricus blazei Murill)或靈芝的提取物也是商購獲得的。來自黃芪的提取物是商購獲得的。

淋巴細胞增殖試驗

從單個供體獲得血液，通過泛影葡胺密度梯度法離心、然后洗滌來制備外周血單核細胞(PBMCs)。使用Beckman Coulter Vi-細胞XR細胞活力分析儀測定細胞活力和細胞濃度。在完全培養(yǎng)基中將細胞調(diào)節(jié)至2×10⁶/mL濃度，所述完全培養(yǎng)基含有添加有25mM HEPES緩沖液、10％胎牛血清、1X抗生素/抗真菌劑(100μg/mL鏈霉素、100U/mL青霉素G、0.25μg/mL兩性霉素B)和50μM 2-巰基乙醇的RPMI 1640培養(yǎng)基。將PBMCs(100μL/孔)一式三份(復制品)置于96孔微量滴定板中。隨后，將100μL完全培養(yǎng)基、含有1％DMSO的完全培養(yǎng)基(背景對照)和10μg/mL純化的β-葡聚糖組合物或各種免疫刺激組合物加入到恰當?shù)目字?。對于DMSO可溶性化合物和伴隨的背景對照孔，最終DMSO濃度保持恒定為0.5％。

將培養(yǎng)物在37℃、5％CO₂中孵育3天，最后6-16小時在1μCi的氚化胸腺嘧啶核苷(H₃-TdR)存在下施加脈沖，采收并計數(shù)以測定H₃-TdR結(jié)合(增殖讀數(shù))。

細胞因子生成

如上所述制備PBMCs，這些細胞按100μL/孔一式三份置于96孔微量滴定板中。隨后，加入100μL完全培養(yǎng)基、含有1％DMSO的完全培養(yǎng)基(背景對照)和10μg/mL純化的β-葡聚糖組合物或各種免疫刺激組合物(參見上文)。在37℃、5％CO₂中孵育約24小時后，移除培養(yǎng)上清液(SNs)并冷凍。通過Luminex 200系統(tǒng)中多路復用來分析SNs，并測定SNs中的以下細胞因子蛋白：GM-CSF、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12(p70)、IL-13和TNF-α。

結(jié)果

分析了與單獨純化的β-葡聚糖相比，各種免疫刺激組合物(含有β-葡聚糖、人參提取物、蘑菇提取物和黃芪提取物的各種組合)引發(fā)免疫刺激的能力。這些組合物內(nèi)容物的詳細分析示于表2中。

表2-免疫刺激組合物參數(shù)

表2中所述提取物的多糖含量提供在下表3中。

表3-提取物的多糖含量

將10μg/mL純化的β-葡聚糖組合物(SKL-B01b)和各種免疫刺激組合物(也是10μg/mL)分別加入到裝有外周血單核細胞(PBMCs)的微量滴定孔中。孵育一段時間后，測定各種免疫刺激參數(shù)和/或標記物。將結(jié)果與背景對照(含有DMSO)進行比較以說明背景水平。

如圖7A所示，觀察到幾種所測試的免疫刺激組合物(包括SKL-P06、SKL-P07、SKL-P08和SKL-P09)在測試濃度下(10μg/mL)引發(fā)比β-葡聚糖組合物(SKL-B01b)更高的淋巴細胞增殖。淋巴細胞增殖是免疫刺激的標志特征，并且該結(jié)果表明，所測試的幾種組合物是比β-葡聚糖組合物更強的該增殖的刺激物。SKL-P09組合物的結(jié)果特別值得注意，因為該組合物表現(xiàn)出最高的增殖指數(shù)。

還檢測了許多免疫刺激標記物，包括GM-CSF(圖7B)、IFN-γ(圖7C)、IL-10(圖7D)、IL-8(圖8A)、IL-1β(圖8B)、TNF-α(圖8C)、IL-6(圖8D)、IL-4(圖9A)、IL-7(圖9B)、IL-12(圖9C)、IL-5(圖10A)、IL-2(圖10B)和IL-13(圖10C)?？傊?，該數(shù)據(jù)顯示，相對于β-葡聚糖組合物，SKL-P06、SKL-P07、SKL-P08和SKL-P09組合物在誘導免疫刺激標記物增加方面最為有效。在很多情況下，這些組合物中的一種或多種傾向于相對于β-葡聚糖組合物來說誘導增加的免疫刺激標記物水平(參見例如圖7B、圖7C、圖7D、圖8B、圖9A、圖9C、圖10A、圖10B和圖10C)。對于這些組合物，也觀察到淋巴細胞增殖增加的類似趨勢(圖7A)。

有趣的是，含有黃芪提取物的組合物(SKL-P03、SKL-P04和SKL-P05)趨向于相對于β-葡聚糖組合物來說對淋巴細胞增殖和免疫標記物刺激有很小的或沒有影響，或者這些組合物相對于β-葡聚糖組合物來說對這些各種免疫刺激參數(shù)和/或標記物具有負面影響(參見例如圖7B、圖8C、圖9A、圖9C和圖10C)。具體地，SKL-P04和SKL-P05組合物都將GM-CSF和IL-10的水平降低至剛剛高于背景水平，并且遠低于β-葡聚糖組合物所觀察到的水平(參見例如圖7B和圖7D)。總之，該數(shù)據(jù)表明含有黃芪提取物的組合物免疫刺激性不強。

此外，盡管SKL-P10組合物不含有任何黃芪提取物，但該組合物也沒有表現(xiàn)出強的免疫刺激性質(zhì)，并且通常比β-葡聚糖組合物具有更低的免疫刺激性(參見例如圖7B、圖7C、圖7D、圖8B、圖8C、圖9B、圖9C、圖10B和圖10C)。所述SKL-P10組合物含有來自西洋參的提取物和來自靈芝的提取物。總之，該數(shù)據(jù)表明，含有來自西洋參的提取物和來自靈芝的提取物的組合物免疫刺激性不強。

總之，總體結(jié)果將本文所測試的幾種組合物(諸如SKL-P06、SKL-P07、SKL-P08和SKL-P09)定位為有效的免疫刺激物，并且與其它免疫刺激組合物(諸如β-葡聚糖組合物)相比具有引發(fā)增強的免疫反應的能力。