本發(fā)明屬于益生菌生物醫(yī)藥與保健品
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種防治糖尿病并控制體重的復(fù)合益生菌制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：糖尿病是現(xiàn)代疾病中的第二殺手，其對(duì)人體的危害僅次于癌癥。其實(shí)，糖尿病本身并不可怕，可怕的是糖尿病的并發(fā)癥，糖尿病帶來(lái)的危害，幾乎都來(lái)自它的并發(fā)癥。在我國(guó)糖尿病患者中，合并高血壓者多達(dá)1200萬(wàn)，腦卒中者500萬(wàn)，冠心病者600萬(wàn)，雙目失明45萬(wàn)，尿毒癥者50萬(wàn)。糖尿病是一種復(fù)合病因的綜合病癥，是由于體內(nèi)胰島素缺乏或拮抗胰島素的激素增加，或胰島素在靶細(xì)胞內(nèi)不能發(fā)揮正常生理作用而引起的葡萄糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝紊亂的一種綜合病癥/其特征為血循環(huán)中葡萄糖濃度異常升高及悄糖、血糖過(guò)高時(shí)出現(xiàn)典型的“三多一少”癥狀，即多吃、多尿、多食及體重減輕，且伴有疲乏無(wú)力。嚴(yán)重者可發(fā)生酮癥酸中毒、高滲性糖尿病昏迷，且易合并多種感染。隨著病程的延長(zhǎng)，其代謝紊亂可導(dǎo)致眼、腎、神經(jīng)、血管及心臟等組織器官的慢性病變。若得不到及時(shí)、恰當(dāng)?shù)闹委?，則發(fā)生心臟病變，腦血管病變，腎功能衰竭，雙目失明、下肢壞死等情況，成為致殘、致死的主要原因。二甲雙胍是臨床常用的治療糖尿病的雙胍類(lèi)藥物，適用于單用飲食和運(yùn)動(dòng)治不能獲良好控制的2型糖尿病患者?？蓡为?dú)用藥，也可與磺脲類(lèi)或胰島素合用。用于治療肥胖型的糖尿病效果很好，因些臨床應(yīng)用廣泛，二甲雙胍常見(jiàn)的不良反應(yīng)為胃腸道不適，如惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、便秘、腹脹、消化不良、胃灼熱，這種不良反應(yīng)高達(dá)30%，此不良反應(yīng)限制了二甲雙胍的使用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決二甲雙胍胃腸道副作用大限制使用人群的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種二甲雙胍與益生菌，益生元的組合物，通過(guò)與益生菌的配伍，減少二甲雙胍的用量，增強(qiáng)防治糖尿病并控制體重的效果，來(lái)減輕二甲雙肌的不良反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)減毒增效的目的。本發(fā)明中的各種益生菌是從500多種有益微生物中篩選出5種能夠可共生共存，互相促進(jìn)；有明顯控制體重與治療糖尿病的效果；并且與二甲雙胍聯(lián)合使用，大大減少了二甲雙胍導(dǎo)致的腸胃不適反應(yīng)。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種防治糖尿病并控制體重的復(fù)合益生菌制劑，其特征在于：所述復(fù)合益生菌組份及重量份數(shù)配比為：10億CFU/g丁酸梭菌10-20份、10億CFU/g布拉氏酵母菌10-40份、50億CFU/g羅伊氏乳桿菌5-15份、10億CFU/g嬰兒雙歧桿菌10-20份、100億CFU/g地衣芽孢桿菌10-20份、二甲雙胍8-12份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖5-15份，可溶性淀粉10-20份；其制備過(guò)程包括：在無(wú)菌攪拌罐中依次加入10億CFU/g丁酸梭菌10-20份、10億CFU/g布拉氏酵母菌10-40份、50億CFU/g羅伊氏乳桿菌5-15份、10億CFU/g嬰兒雙歧桿菌10-20份、100億CFU/g地衣芽孢桿菌10-20份、可溶性淀粉10-20份攪勻30分鐘；然后再加入二甲雙胍8-12份、阿拉伯糖10-20份、低聚木糖5-15份繼續(xù)攪拌，直到完全混勻后，即可分裝5g/袋；即為防治糖尿病并控制體重的復(fù)合益生菌制劑。其中，布拉氏酵母、羅伊氏乳桿菌、丁酸梭菌、地衣芽孢桿菌、嬰兒雙歧桿菌以下方法培養(yǎng)：布拉氏酵母的制備取出菌種保藏管，用YPD固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種150毫升YPD培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中30℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí)。種子采用5%的接種量，接種至裝有350L酵母菌培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，控溫30℃，開(kāi)攪拌200r/min,前10小時(shí)，通氣量為每分鐘100L，10小進(jìn)后，通氣量為每分鐘300L，培養(yǎng)20-28小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，菌含量超過(guò)20億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)布拉氏酵母菌含量為10億CFU/g，即可。其中所述的YPD培養(yǎng)基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL。其中所述的酵母菌培養(yǎng)基：紅糖15g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨5g/L，硫酸銨3g/L，硫酸鎂0.5g/L。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。羅伊氏乳桿菌的制備取出菌種保藏管，用MRS固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃厭氧培養(yǎng)48小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種250毫升MRS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃厭氧培養(yǎng)24小時(shí)。種子采用5%的接種量，接種至裝有450L乳酸菌培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，37℃厭氧培養(yǎng)20-28小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，菌含量超過(guò)100億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)羅伊氏乳桿菌含量為50億CFU/g，即可。其中所述的MRS固體培養(yǎng)基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏10g/L，葡萄糖20g/L，醋酸鈉5g/L，檸檬酸二銨2g/L，吐溫-801ml/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.05g/L，磷酸氫二鉀2g/L，瓊脂20g/L，碳酸鈣20g/L，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%；其中所述的乳酸菌培養(yǎng)基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化鈉0.1%，硫酸錳0.001%，硫酸鎂0.02%，醋酸鈉0.05%，碳酸鈣1%，pH6.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。地衣芽孢桿菌的制備取出菌種保藏管，用LB固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃培養(yǎng)48小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種500毫升LB培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí)。種子采用5%的接種量，接種至裝有350L地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，控溫37℃，開(kāi)攪拌200r/min,前10小時(shí)，通氣量為每分鐘200L，10小進(jìn)后，通氣量為每分鐘400L，培養(yǎng)32-48小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，芽孢含量超過(guò)120億CFU/ml，即可加入碳酸鈣粉，噴霧干燥，調(diào)節(jié)地衣芽孢桿菌含量為100億CFU/g，即可。其中所述LB固體培養(yǎng)基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2，其中所述地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10g/L，豆粕粉30g/L，硫酸鎂0.5g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鈉0.5g/L，氯化鈉2g/L，pH7.2。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。嬰兒雙歧桿菌的制備取出菌種保藏管，用雙歧桿菌固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃厭氧培養(yǎng)72小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種500毫升雙歧桿菌培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃厭氧培養(yǎng)48小時(shí)。種子采用5%的接種量，接種至裝有450L雙歧桿菌培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，37℃厭氧培養(yǎng)40-48小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，菌含量超過(guò)20億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)雙歧桿菌菌體含量為10億CFU/g，即可。其中所述的雙歧桿菌培養(yǎng)基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏5.0g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0g/L，醋酸鈉5.0g/L，檸檬酸二銨2.0g/L，吐溫-801.0ml/L，硫酸鎂0.1g/L，硫酸鋅0.25g/L，磷酸氫二鉀2g/L，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%。培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。丁酸梭菌的制備取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有999mLRCM培養(yǎng)基的厭氧瓶中，37℃條件下靜態(tài)厭氧活化64h。將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過(guò)菌的99L丁酸梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基中。37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)64h~126h，芽孢含量超過(guò)15億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)丁酸梭菌芽孢含量10億CFU/g，即可。其中，所述的RCM培養(yǎng)基：胰蛋白陳10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化鈉5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，醋酸鈉3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min，其中，所述的丁酸梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO42g/L硫酸鎂1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽1g/L，NaHCO31g/L，CaCO31g/L，葡萄糖20g/L，PH7.0，121℃滅菌20min。從病理學(xué)上來(lái)講，對(duì)付糖尿病有三個(gè)基本策略(益生菌在其中都發(fā)揮著重要作用)：(1)通過(guò)控制食物或服用藥物減少腸道中葡萄糖的吸收量；(2)減少肝里葡萄糖的合成；3)促進(jìn)代謝過(guò)程對(duì)葡萄糖的使用。葡萄糖在第一和第三個(gè)策略中都十分有用，而在第二個(gè)策略中的作用卻不大，所以我們?cè)谶@里就不討論這一點(diǎn)了。第一個(gè)治療策略一一減少胃腸道對(duì)葡萄糖的吸收——可以通過(guò)含益生菌或益生元的食品來(lái)抑制葡萄糖的吸收。葡萄糖在腸道里可以以不同形式存在。正如前面提到的，葡萄糖可以和其他糖類(lèi)結(jié)合，形成更復(fù)雜的種類(lèi)。然后它們將被身體分解，釋放出葡萄糖，使其能被吸收。例如，身體要把蔗糖分解成最基本的組成部分——葡萄糖和果糖，然后再吸收它們，那么腸道里就一定要有蔗糖。事實(shí)上，身體里的各個(gè)組成部分都喜歡葡萄糖。它是最基本的能量來(lái)源，任何身體組織都能輕易地對(duì)其加以利用。所以，身體組織的代謝系統(tǒng)都把葡萄糖作為主要的能量來(lái)源。既然如此，腸道里的益生菌是怎樣幫助治療糖尿病和控制體重的呢?假設(shè)你攝入了很多糖(為了簡(jiǎn)單起見(jiàn)，假設(shè)這些糖是葡萄糖，但是對(duì)其他糖類(lèi)來(lái)說(shuō)，原理也是一樣的)。如果你吃下了純葡萄糖，會(huì)發(fā)生什么呢?不是發(fā)生糖尿病昏迷，就是葡萄糖被全部吸收。為了達(dá)到這個(gè)目的，葡萄糖必須先進(jìn)入腸道，通過(guò)腸道上皮細(xì)胞中的任何東西(如果有的話)。在健康的胃里，益生菌包圍著這些上皮細(xì)胞(或者說(shuō)層疊其上)；而在一個(gè)不健康的胃里，只有一堆病原細(xì)菌。葡萄糖被這些腸道上皮細(xì)胞吸收，然后進(jìn)入身體其他部分(當(dāng)然，這是建立在假設(shè)所有的葡萄糖都能被上皮細(xì)胞利用的基礎(chǔ)上)?？偠灾?，胃腸道內(nèi)的益生菌提供了第一個(gè)防護(hù)層，以免大量葡萄糖被吸收。這就是說(shuō)，如果你補(bǔ)充大量益生菌，那么已經(jīng)加強(qiáng)了這第一個(gè)防護(hù)層，因?yàn)橐嫔矚g利用葡萄糖。那么，葡萄糖是益生元嗎?不是。根據(jù)定義，益生元是含有某些益生菌而非大腸桿菌等病原有機(jī)體的食物。這也不會(huì)改變益生菌需要葡萄糖的事實(shí)。如果周?chē)写罅科咸烟堑脑挘鼈兩踔炼疾慌銎渌奶穷?lèi)。原因很簡(jiǎn)單，因?yàn)橥淌称咸烟菍?duì)益生菌來(lái)說(shuō)毫不費(fèi)力。所有生物都認(rèn)同成本/收益率。越容易做的事情，生命體就越有可能去做。益生菌體內(nèi)有可以利用葡萄糖的組織，所以它們會(huì)吸收葡萄糖，然后吃掉它?，F(xiàn)在，回到我們攝取糖的例子：如果體內(nèi)有大量益生菌存在，而且它們都在積極消耗有害菌，那么在體內(nèi)輸送的葡萄糖就會(huì)減少。直接結(jié)果就是血液里的葡萄糖減少。如果血液里葡萄糖含量減少，被肝用來(lái)制造肝糖(或進(jìn)行其他活動(dòng))的葡萄糖就減少了，而身體就是通過(guò)把葡萄糖轉(zhuǎn)化成肝糖來(lái)對(duì)其進(jìn)行儲(chǔ)存的。最后，如果制造的肝糖減少了，一段時(shí)間之后，身體能夠轉(zhuǎn)化為葡萄糖的肝糖就減少了。記住，只需要提供大量益生菌，就能讓這些變化發(fā)生。而且，所有這些利益都能通過(guò)益生菌來(lái)獲得，那我們?yōu)槭裁催€要冒險(xiǎn)呢?這又把我們帶回到控制體重和糖尿病的關(guān)系這個(gè)主題上來(lái)了。葡萄糖是一種非常好的能量來(lái)源，隨時(shí)貢獻(xiàn)自我以便生成其他物質(zhì)。如果體內(nèi)以葡萄糖形式存在的能量過(guò)多，超過(guò)了可以使用的量，那么身體會(huì)怎么做呢?它會(huì)以脂肪的形式儲(chǔ)存起來(lái)，而那些肥肉很可能會(huì)陪伴你一生。公式很簡(jiǎn)單：過(guò)多能量(即葡萄糖)=體重上升。如果你攝入的卡路里比消耗的要多，你的體重就會(huì)上升。在前面，我們談到有三種主要的策略可以用來(lái)治療糖尿病，第三種就是加速葡萄糖的代謝。有幾種方法可以使你體內(nèi)的細(xì)胞更多地使用葡萄糖，食用益生菌是最有效的手段之一；它能夠很大限度地影響腸道里的活動(dòng)。事實(shí)上，發(fā)生在腸道里的活動(dòng)比發(fā)生在身體里的活動(dòng)更加重要。為了證明這一點(diǎn)，可以把你的腸和它外部的身體想象成是相對(duì)的?？茖W(xué)家們就是這么干的。他們認(rèn)為腸道是一個(gè)中空的管道，從口腔到肛門(mén)，身體就包裹在其外。"管道"是個(gè)很形象的比喻，因?yàn)橥ㄟ^(guò)腸道的任何東西都不直接和身體產(chǎn)生聯(lián)系。換句話說(shuō)，你咽下的一切東西從管道的一頭進(jìn)去，又從另一頭出來(lái)——在此期間一直停留在管道里。不僅食物如此，益生菌也一樣。它們?cè)谀c道自成一體的環(huán)境中運(yùn)行良好。正如前面提到的，人體內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量比細(xì)胞還多。這也就意味著，益生菌這種有益細(xì)菌能在整個(gè)代謝過(guò)程中起很大作用。如果在進(jìn)餐時(shí)補(bǔ)充大量益生菌，它們對(duì)食物的消耗將遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)你的身體對(duì)食物的利用。你吞下的食物很少會(huì)被真正吸收。本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑中含有大量的地衣芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌是具有耐酸、耐熱特性的有益菌,在胃酸下四小時(shí)存活率為100%,同時(shí)具有強(qiáng)力的病原菌抑制能力，是各種益菌當(dāng)中，對(duì)環(huán)境耐受力最好可以直達(dá)小腸的菌種之一，口服后可改變?nèi)梭w腸道菌群生態(tài)，幫助消化道機(jī)能正?；允古疟沩槙?，維持體內(nèi)生理環(huán)保。能調(diào)節(jié)腸道菌群，增強(qiáng)動(dòng)物細(xì)胞免疫放應(yīng)。地衣芽孢桿菌為兼性厭氧菌，在腸道中可以起到整腸作用，能有效防治腹瀉，便秘，可以快速吸收利用腸道中的葡萄糖，從而減少腸道對(duì)葡萄糖的吸收，降低血糖。本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑中含有大量的活性的羅伊氏乳桿菌與嬰兒雙歧桿菌，乳桿菌與雙歧桿菌能促進(jìn)蛋白質(zhì)、單糖及鈣、鎂等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，產(chǎn)生維生素B族等大量有益物質(zhì)；使腸道菌群的構(gòu)成發(fā)生有益變化，改善人體胃腸道功能，恢復(fù)人體腸道內(nèi)菌群平衡，形成抗菌生物屏障，維護(hù)人體健康；抑制腐敗菌的繁殖，消解腐敗菌產(chǎn)生的毒素，清除腸道垃圾；抑制膽固醇吸收，降血脂、降血壓作用；可提高SOD酶活力，消除人體自由基，具抗衰老、延年益壽作用；有效預(yù)防女性泌尿生殖系統(tǒng)細(xì)菌感染；控制人體內(nèi)毒素水平，保護(hù)肝臟并增強(qiáng)肝臟的解毒、排毒功能。乳桿菌與雙歧桿菌可治療腹瀉。通過(guò)用乳桿菌與雙歧桿菌對(duì)腹瀉患者臨床觀察研究表明，在服藥兩周以后，患者大便次數(shù)、形狀異常，臨床癥狀消失，對(duì)總有效率為90.3%，復(fù)發(fā)率低。許多國(guó)內(nèi)醫(yī)院已將乳桿菌與雙歧桿菌制劑作為治療腹瀉的首選藥物。抗生素相關(guān)性腸炎實(shí)際上是抗生素的使用，使原來(lái)過(guò)路菌或外籍菌（如腸桿菌）成為優(yōu)勢(shì)種群，它們大量增殖或分泌相關(guān)毒素與腸粘膜上皮細(xì)胞受體結(jié)合后使CAMP酶活性升高，大量水鹽電解質(zhì)丟失，而造成腹瀉癥狀。增殖乳桿菌與雙歧桿菌，扶植了腸道中的原籍菌，使機(jī)體定植抗力升高，有利于拮抗致病菌和條件致病菌的定植。乳桿菌與雙歧桿菌可治療因大量使用抗生素而導(dǎo)致的偽膜性腸炎。有人采用乳桿菌與雙歧桿菌制劑治療偽膜性腸炎380例，臨床總治愈率無(wú)明顯差異，但臨床副作用和復(fù)發(fā)率均明顯降低。雙歧桿菌可以治療便秘。便秘是指排便次數(shù)減少或糞便干燥難解（一般兩天以上無(wú)排便）而言，根據(jù)病因其大致上可分為器質(zhì)性便秘和功能性便秘兩大類(lèi)。乳桿菌與雙歧桿菌主要用于功能性便秘這一類(lèi)癥狀。引起功能性便秘一般來(lái)說(shuō)與腸道菌失調(diào)密切相關(guān)，多半互為因果。成其是腸道外籍菌（或過(guò)路菌）等腐敗菌增加，其產(chǎn)生相應(yīng)有毒代謝產(chǎn)物如胺、酚、吲哚類(lèi)等物質(zhì)。通過(guò)調(diào)整腸道正常菌群，恢復(fù)腸道正常菌群平衡，使腐敗菌數(shù)量大大減少，而其有毒代謝產(chǎn)物吸收減少，從而使便秘癥狀得以緩解。尤其補(bǔ)充雙歧桿菌等原籍菌，其產(chǎn)生乙酸和乳酸pH值為2.8~3.1,使腸道呈酸性，其結(jié)果能控制由有害菌引起的異常發(fā)酵，并且刺激腸蠕動(dòng)，從而減少水分的過(guò)度吸收而緩解便秘癥狀，還可以復(fù)活機(jī)體免疫功能，有利于調(diào)整內(nèi)分泌—免疫功能恢復(fù)，恢復(fù)腸道蠕動(dòng)功能從而緩解便秘等癥狀。本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑中含有布拉氏酵母菌，布拉氏酵母菌是一種非致病性，目前為止唯一在臨床使用的真菌類(lèi)微生態(tài)制劑,其具有獨(dú)特的藥理作用,通過(guò)抑制致病微生物的生長(zhǎng)繁殖，減少致病微生物對(duì)粘膜上皮細(xì)胞的粘附和侵襲，釋放短肽蛋白中和、鈍化和降解細(xì)菌毒素，從而發(fā)揮抗致病微生物的作用，另一方面，在腸道內(nèi)布拉氏酵母菌通過(guò)代謝釋放多胺類(lèi)物質(zhì)(亞精胺和精胺)發(fā)揮許多生理功能，如提高小腸絨毛膜二糖酶水平，提高堿性磷酸酶，刺激腸道釋放分泌型IgA，提高腸道局部抗感染能力，尤其最近研究發(fā)現(xiàn)，布拉氏酵母菌通過(guò)抑制炎癥信號(hào)途徑中NF-κB的易位而抑制炎癥信號(hào)途徑，發(fā)揮抗炎癥作用。以上研究表明使用布拉氏酵母菌可加快病情恢復(fù)，縮短住院時(shí)間。對(duì)于小兒腹瀉的治療和預(yù)防都有很顯著的作用，并且具有較好的療效及安全性。本發(fā)明中的復(fù)合益生菌制劑中含量有丁酸梭菌，丁酸梭菌能促進(jìn)有益的雙歧桿菌、乳酸菌、擬桿菌的增殖和有效的抑制引起疾病的葡萄球菌、念珠菌、克雷伯菌、彎曲桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌和傷寒沙門(mén)菌以及腐敗菌的繁殖，從而減少了胺類(lèi)、吲哚類(lèi)和硫化氫等有害物質(zhì)。丁酸梭菌的主要代謝產(chǎn)物為丁酸，而丁酸是腸道上皮組織細(xì)胞的再生和修復(fù)的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。因此，對(duì)腸道上皮組織的再生和修復(fù)有很重要的意義。用丁酸梭菌或與雙歧桿菌、益生元等合用，對(duì)于因菌群失調(diào)而引起的急慢性腹瀉、腸易激綜合癥、抗生素相關(guān)性腸炎、便秘等癥狀有良好的療效，對(duì)于腸炎、肝硬化和放療、化療造成的免疫功能下降也能起到輔助的治療作用。不少資料還說(shuō)明，該菌還能促進(jìn)維生素E的吸收，降解膽酸和提高抗氧能力。本發(fā)明中含有二甲雙胍，二甲雙胍的降糖機(jī)制和磺脲類(lèi)不同，它不通過(guò)刺激胰島素分泌，其降糖作用主要是增加周?chē)M織糖的無(wú)氧酵解，增加糖的利用，這一作用的主要部位在小腸，動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)本品可增加小腸的無(wú)氧酵解，使空腸對(duì)糖的利用增加20％。②抑制肝糖元異生，由于減少糖元異生引起繼發(fā)基礎(chǔ)血糖減低而降低基礎(chǔ)肝糖輸出。③通過(guò)增加胰島素與胰島素受體的結(jié)合，增加胰島素對(duì)血糖的清除作用，由于胰島素抵抗是NIDDM的特點(diǎn)，二甲雙胍通過(guò)增加胰島素受體數(shù)量減少者的受體結(jié)合點(diǎn)和增加低親和性的結(jié)合點(diǎn)的數(shù)量從而改善NIDDM病人對(duì)胰島素的敏感性。動(dòng)物試驗(yàn)證明二甲雙胍還有受體后作用，使胰島素刺激的糖元生成增加，胰島素受體磷酸化作用增加和使酪氨酸激酶活性增加。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明將丁酸梭菌，布拉氏酵母菌，羅伊氏乳桿菌，嬰兒雙歧桿菌，地衣芽孢桿菌等有益菌；以及阿拉伯糖，低聚木糖等益生元與二甲雙肌結(jié)合起來(lái)，以避免二甲雙胍而引起的惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、便秘、腹脹、消化不良、胃灼熱、腸易激綜合癥等癥狀有良好的療效，對(duì)于腸炎、肝硬化和放療、化療造成的免疫功能下降也能起到輔助的治療作用，并通過(guò)直接吸收利用葡萄糖，加速葡萄糖代謝，提高對(duì)控制體重與糖尿病的治療效果。本發(fā)明中的各種益生菌是從500多種有益微生物中篩選出5種能夠可共生共存，互相促進(jìn)；有明顯控制體重與治療糖尿病的效果；并且與二甲雙胍聯(lián)合使用，大大減少了二甲雙胍導(dǎo)致的腸胃不適反應(yīng)。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明：口服本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑的患者，初步判定在血糖達(dá)標(biāo)時(shí)間、改善糖耐量、改善胰島素及c膚釋放方面要優(yōu)于單純應(yīng)用基二甲雙胍者。另外，本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑在改善二甲雙胍藥物胃腸道不良反應(yīng)方面比單純應(yīng)用二甲雙肌者效果顯著。說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑在改善胰島素抵抗、保護(hù)胰島細(xì)胞功能方面確有療效，并且無(wú)副作用。實(shí)施例1一種防治糖尿病并控制體重的復(fù)合益生菌制劑，其特征在于：所述復(fù)合益生菌組份及重量份數(shù)配比為：10億CFU/g丁酸梭菌15份、10億CFU/g布拉氏酵母菌20份、50億CFU/g羅伊氏乳桿菌10份、10億CFU/g嬰兒雙歧桿菌15份、100億CFU/g地衣芽孢桿菌15份、二甲雙胍10份、阿拉伯糖15份、低聚木糖10份，可溶性淀粉15份；其制備過(guò)程包括：在無(wú)菌攪拌罐中依次加入10億CFU/g丁酸梭菌15份、10億CFU/g布拉氏酵母菌20份、50億CFU/g羅伊氏乳桿菌10份、10億CFU/g嬰兒雙歧桿菌15份、100億CFU/g地衣芽孢桿菌15份、可溶性淀粉15份攪勻30分鐘；然后再加入二甲雙胍10份、阿拉伯糖15份、低聚木糖10份繼續(xù)攪拌，直到完全混勻后，即可分裝5g/袋；即為防治糖尿病并控制體重的復(fù)合益生菌制劑。其中，所述的布拉氏酵母、羅伊氏乳桿菌、丁酸梭菌、地衣芽孢桿菌、嬰兒雙歧桿菌按以下方法培養(yǎng)：布拉氏酵母的制備取出菌種保藏管，用YPD固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種150毫升YPD培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中30℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí)，種子采用5%的接種量，接種至裝有350L酵母菌培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，控溫30℃，開(kāi)攪拌200r/min,前10小時(shí)，通氣量為每分鐘100L，10小進(jìn)后，通氣量為每分鐘300L，培養(yǎng)20-28小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，菌含量超過(guò)20億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)布拉氏酵母菌含量為10億CFU/g，即可；其中所述的YPD培養(yǎng)基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL。其中所述的酵母菌培養(yǎng)基：紅糖15g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨5g/L，硫酸銨3g/L，硫酸鎂0.5g/L，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；羅伊氏乳桿菌的制備取出菌種保藏管，用MRS固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃厭氧培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種250毫升MRS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃厭氧培養(yǎng)24小時(shí)，種子采用5%的接種量，接種至裝有450L乳酸菌培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，37℃厭氧培養(yǎng)20-28小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，菌含量超過(guò)100億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)羅伊氏乳桿菌含量為50億CFU/g，即可；其中所述的MRS固體培養(yǎng)基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏10g/L，葡萄糖20g/L，醋酸鈉5g/L，檸檬酸二銨2g/L，吐溫-801ml/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.05g/L，磷酸氫二鉀2g/L，瓊脂20g/L，碳酸鈣20g/L；其中所述的乳酸菌培養(yǎng)基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化鈉0.1%，硫酸錳0.001%，硫酸鎂0.02%，醋酸鈉0.05%，碳酸鈣1%，pH6.0。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。地衣芽孢桿菌的制備取出菌種保藏管，用LB固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種500毫升LB培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃震蕩培養(yǎng)24小時(shí)。種子采用5%的接種量，接種至裝有350L地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，控溫37℃，開(kāi)攪拌200r/min,前10小時(shí)，通氣量為每分鐘200L，10小進(jìn)后，通氣量為每分鐘400L，培養(yǎng)32-48小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，芽孢含量超過(guò)120億CFU/ml，即可加入碳酸鈣粉，噴霧干燥，調(diào)節(jié)地衣芽孢桿菌含量為100億CFU/g，即可，其中所述LB固體培養(yǎng)基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2，其中所述地衣芽孢桿菌液體培養(yǎng)基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10g/L，豆粕粉30g/L，硫酸鎂0.5g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鈉0.5g/L，氯化鈉2g/L，pH7.2，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；嬰兒雙歧桿菌的制備取出菌種保藏管，用雙歧桿菌固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37℃厭氧培養(yǎng)72小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種500毫升雙歧桿菌培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37℃厭氧培養(yǎng)48小時(shí)，種子采用5%的接種量，接種至裝有450L雙歧桿菌培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，37℃厭氧培養(yǎng)40-48小時(shí)，檢測(cè)其菌液濃度，菌含量超過(guò)20億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)雙歧桿菌菌體含量為10億CFU/g，即可。其中所述的雙歧桿菌培養(yǎng)基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5g/L，牛肉膏5.0g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0g/L，醋酸鈉5.0g/L，檸檬酸二銨2.0g/L，吐溫-801.0ml/L，硫酸鎂0.1g/L，硫酸鋅0.25g/L，磷酸氫二鉀2g/L，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%；培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。丁酸梭菌的制備取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有999mLRCM培養(yǎng)基的厭氧瓶中，37℃條件下靜態(tài)厭氧活化64h，將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過(guò)菌的99L丁酸梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)64h~126h，芽孢含量超過(guò)15億CFU/ml，即可加入脫脂奶粉，真空冷凍干燥，調(diào)節(jié)丁酸梭菌芽孢含量10億CFU/g，即可；其中，所述的RCM培養(yǎng)基：胰蛋白陳10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化鈉5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，醋酸鈉3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min；其中，所述的丁酸梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO42g/L硫酸鎂1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽1g/L，NaHCO31g/L，CaCO31g/L，葡萄糖20g/L，PH7.0，121℃滅菌20min。實(shí)施例2在120例2型肥胖型糖尿病患者進(jìn)行試驗(yàn)，均符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)，且符合以下條件：初次確診或確診不超過(guò)半年未治療且空腹血糖≥11.1mmol/L；無(wú)嚴(yán)重急慢性并發(fā)癥。治療方法將符合條件的120例患者按肥胖程度與糖尿病嚴(yán)重程度分為兩組。對(duì)照組：在對(duì)患者進(jìn)行糖尿病健康知識(shí)教育和飲食治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用二甲雙胍，二甲雙胍每次0.5g，每日2次。試驗(yàn)組：在對(duì)患者進(jìn)行糖尿病健康知識(shí)教育和飲食治療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用復(fù)合益生菌制劑，每次一包，每日2包。兩組患者在性別，年齡、體重指數(shù)、糖化血紅蛋白，空腹血糖、大致發(fā)病時(shí)間分布上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察指標(biāo)安全性指標(biāo)：如血常規(guī)，大便常規(guī)，肝功能、腎功能檢查、心電圖等；療效性指標(biāo)：治療前后體重指數(shù)，血糖達(dá)標(biāo)時(shí)間；實(shí)驗(yàn)室檢查：治療后糖化血紅蛋白，糖耐量實(shí)驗(yàn)、胰島素及C肽釋放試驗(yàn)。胃腸道不良反應(yīng)指標(biāo)：如惡心、嘔吐、腹脹、腹痛等。2結(jié)果只經(jīng)過(guò)一個(gè)月的試驗(yàn)，試驗(yàn)組對(duì)減輕肥胖程度有明顯的效果，體重指數(shù)治療前后變化見(jiàn)表1；后來(lái)在試驗(yàn)組的基礎(chǔ)上，繼續(xù)服用本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑一天一次，總共三個(gè)月后，試驗(yàn)組有14人BMI達(dá)到正常指標(biāo)（小于24），偏胖（BMI24-27.9）人數(shù)為29人，肥胖（BMI27.9-29）10人，肥胖（BMI29-30）6人，重度肥胖（BMI30-35）1人表1體重指數(shù)變化肥胖程度BMI對(duì)照組治療前對(duì)照組治療后試驗(yàn)組治療前試驗(yàn)組治療后偏胖24-27.91415141827.9-292424232529-3016151713重度肥胖30-356664血糖達(dá)標(biāo)時(shí)間試驗(yàn)組明顯少于對(duì)照組，見(jiàn)表2表2血糖達(dá)標(biāo)時(shí)間治療后的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果糖化血紅蛋白試驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組。.糖耐量試驗(yàn)：餐后3小時(shí)兩組無(wú)顯著差異，余時(shí)間試驗(yàn)組比對(duì)照組明顯降低。C肽釋放試驗(yàn)：試驗(yàn)組較對(duì)照組在空腹及餐后1小時(shí)釋放明顯增多，餐后2小時(shí)，3小時(shí)也差異明顯。胰島素釋放試驗(yàn)：試驗(yàn)組1小時(shí)較對(duì)照組胰島素釋放明顯增多，見(jiàn)表3-6。表3兩組患者治療前后HbAlc(%)結(jié)果比較組別治療前治療后試驗(yàn)組9.7±2.25.4±1.1對(duì)照組9.6±2.36.6±1.6表4兩組患者治療前后糖耐量試驗(yàn)（mmol/L）結(jié)果表5兩組患者治療前后C肽釋放試驗(yàn)（ng/ml）結(jié)果表6兩組患者治療前后胰島素釋放試驗(yàn)結(jié)果（Uu/ml）安全性觀察結(jié)果本發(fā)明中的試驗(yàn)組受試者于治療前后分別進(jìn)行安全性指標(biāo)檢測(cè)，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)明顯異常改變，說(shuō)明本發(fā)明的復(fù)合益生菌制劑使用安全，無(wú)明顯不良反應(yīng)。胃腸道不良反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)表7表7胃腸道不良反應(yīng)結(jié)果組別胃腸道反應(yīng)人數(shù)試驗(yàn)組0對(duì)照組24曲型病例：毛某：男，55歲，患糖尿病12年，打胰島素4年，肥胖BMI系數(shù)為30.12，未服用本發(fā)明的復(fù)合微生物制劑前，控制飲食，體質(zhì)虛弱，最高血糖18.6mmol/L、甘油三脂7.8mmol/L、總膽固醇9.6mmol/L。服用本發(fā)明復(fù)合微生物制劑5克/次，一天兩次，15天后，即停止打胰島素，30天后，改為一天服用本發(fā)明復(fù)合微生物制劑一天一次，每次半包2.5克，兩個(gè)月后，檢查，血糖5.6mmol/L、甘油三脂2.2mmol/L、總膽固醇4.4mmol/L、BMI系為28.2，體質(zhì)全面恢復(fù)正常。賀某：男，65歲，患糖尿病15年，打胰島素11年，肥胖BMI系數(shù)為29.82，未服用本發(fā)明的復(fù)合微生物制劑前，控制飲食，最高血糖17.6mmol/L、甘油三脂7.6mmol/L、總膽固醇9.4mmol/L。服用本發(fā)明復(fù)合微生物制劑5克/次，一天兩次，15天后，即停止打胰島素，30天后，改為一天服用本發(fā)明復(fù)合微生物制劑一天一次，每次半包2.5克，45天后，檢查，血糖5.8mmol/L、甘油三脂2.4mmol/L、總膽固醇4.6mmol/L、BMI系為28.4，體質(zhì)全面恢復(fù)正常。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3