本發(fā)明屬于功能食品
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種降低艾滋病患者病毒載量及提升T淋巴細(xì)胞CD4免疫力的復(fù)合制劑和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合征(AcquiredImmunodeficiencySyndrome，AIDS)，是在人免疫缺陷病毒直接或間接作用下，T細(xì)胞免疫缺陷，同時其他免疫細(xì)胞均不同程度受損，促使各種嚴(yán)重的機(jī)會性感染和腫瘤發(fā)生，導(dǎo)致死亡。艾滋病不僅已成為嚴(yán)重威脅人民健康的公共衛(wèi)生問題，且已影響到經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會穩(wěn)定。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)防治艾滋病采用的是抗病毒、提高機(jī)體免疫、控制和治療各種機(jī)會性感染癥，但藥物作用單一，往往需要多藥并用，藥價昂貴，毒副作用大。中國艾滋病治療用藥主要依靠進(jìn)口，年人均藥品費(fèi)用至少需人民幣3萬-5萬元。同時，國家在艾滋病控制方面的投入也急劇增加。實(shí)驗(yàn)室檢測是診斷艾滋病的主要依據(jù)，外周血病毒載量(viralload，VL)和CD4+T淋巴細(xì)胞(簡稱CD4細(xì)胞)檢測已成為判定AIDS患者病情、預(yù)測臨床進(jìn)展和評價抗病毒治療療效的重要指標(biāo)。CD4+T細(xì)胞是HIV感染的主要靶細(xì)胞，而其本身又是免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞；正常人的CD4+T細(xì)胞約占總的T淋巴細(xì)胞的65％，CD8+T細(xì)胞約占35％。人體感染了HIV后，其病理過程是免疫系統(tǒng)受損，主要表現(xiàn)為CD4+T細(xì)胞丟失、絕對數(shù)量減少、功能減退，同時CD8+T細(xì)胞數(shù)量增加，使CD4+/CD8+的比例失調(diào)。因此CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)作為直接測定免疫細(xì)胞功能的方法，是HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀況最明確的指標(biāo)。病毒載量檢測是通過一種叫聚合酶鏈鎖反應(yīng)(PCR)的技術(shù)完成的，若病毒量在10,000copies/ml以下是“低”，100,000copies/ml以上是“高”。研究發(fā)現(xiàn)，CD4細(xì)胞數(shù)量相同的人，病毒量高者比低者病情惡化更快速。對于尚未服用抗HIV藥的感染者，將病毒載量、CD4數(shù)量以及癥狀結(jié)合起來，可以幫助預(yù)測未來癥狀的發(fā)展，以幫助感染者決定是否開始服藥。目前治療艾滋病尚無安全有效藥物。全球普及使用的核苷類和非核苷類的二十余種抗病毒化學(xué)藥或雞尾酒療法(HAART)，只對HIV復(fù)制酶(HIV：逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶)有一定抑制作用，但對被HIV感染細(xì)胞無作用，即使HIV載量下降，但極易反彈，且其毒性太大及其耐藥性，故療效不佳。由于毒性大，只限于晚期患者使用加上價格昂貴，患者難于接受。因此急需研究出一種天然無毒害、副作用小的藥物，即研究一種既能降低艾滋病患者病毒載量，又能提升T淋巴細(xì)胞CD4免疫力的純天然藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種藥材來源豐富、能夠提高機(jī)體免疫功能、無毒副作用的純天然復(fù)合制劑，所述復(fù)合制劑能夠降低艾滋病患者病毒載量并提升T淋巴細(xì)胞CD4免疫力。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案是，一種降低艾滋病患者病毒載量并提升T淋巴細(xì)胞CD4免疫力的復(fù)合制劑，由以下重量份的原料組成：當(dāng)歸10-14份、枸杞子12-16份、杏仁6-10份、甘草8-12份、肉蓯蓉7-11份、巴戟天5-9份、洋藿葉13-17份、海參30-40份、鮑魚12-16份、母礪9-13份、海藻20-30份、人參皂甙6-10份、淫羊藿皂甙8-12份。上述復(fù)合制劑中，所述的海參為日本刺參、北海道刺參、關(guān)西參、大連刺參、俄羅斯紅參、烏棗參、白肛海地瓜、黑海參、白腹海參、紅海參或小梅花參。上述復(fù)合制劑中，所述海參包括15-20份母海參，15-20份雄海參，其中母海參提取卵子后主要成分包括酸性黏多糖30-40％、硫酸軟骨素25-35％、蝦青素25-35％、硒元素10-30％；雄海參提取雄性精華細(xì)胞后主要成分包括精氨酸25-35％、膠原蛋白65-75％。上述復(fù)合制劑中，所述當(dāng)歸、枸杞子、杏仁、甘草、肉蓯蓉、巴戟天、洋藿葉作為中藥原料，經(jīng)超臨界萃取得中藥原料粉。上述復(fù)合制劑中，所述鮑魚、牡蠣、海藻分別粉碎過篩制成鮑魚粉、牡蠣粉、海藻粉。上述復(fù)合制劑中，優(yōu)選的，由以下重量份的原料組成：當(dāng)歸12份、枸杞子14份、杏仁8份、甘草10份、肉蓯蓉9份、巴戟天7份、洋藿葉15份、海參36份、鮑魚14份、牡蠣11份、海藻25份、人參皂甙8份、淫羊藿皂甙10份。上述復(fù)合制劑中，優(yōu)選的，由以下重量份的原料組成：當(dāng)歸10份、枸杞子12份、杏仁6份、甘草12份、肉蓯蓉11份、巴戟天5份、洋藿葉13份、海參30份、鮑魚16份、牡蠣13份、海藻20份、人參皂甙6份、淫羊藿皂甙12份。上述復(fù)合制劑中，優(yōu)選的，由以下重量份的原料組成：當(dāng)歸13份、枸杞子16份、杏仁6份、甘草10份、肉蓯蓉10份、巴戟天6份、洋藿葉14份、海參40份、鮑魚12份、牡蠣11份、海藻25份、人參皂甙8份、淫羊藿皂甙10份。上述復(fù)合制劑中，所述的制劑為散劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、軟膠囊、口服液或丸劑。本發(fā)明還提供了一種所述的復(fù)合制劑在制備抗艾滋病的飲品、藥品、保健品和或食品中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的鮑魚、海參、牡蠣、海藻、當(dāng)歸、枸杞子、杏仁、甘草、肉蓯蓉、巴戟天、洋藿葉均為市售產(chǎn)品。其中牡蠣味甘、咸，性平，牡蠣多糖粗品能有效增加正常小鼠的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)、自然殺傷細(xì)胞(NK)活性、抗體形成細(xì)胞活性溶血空斑形成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(PEC)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力、荷瘤小鼠脾細(xì)胞活性均起正向調(diào)節(jié)作用，并增強(qiáng)小鼠紅細(xì)胞超氧化歧化酶(SOD)活性。牡蠣醇提取物可使大黃煎劑導(dǎo)致免疫功能低下，小鼠的外周血T細(xì)胞總數(shù)(ANAE)顯著升高，而水提取物可使外周血淋巴細(xì)胞受絲裂原(PHA)刺激后的轉(zhuǎn)化率顯著升高。海參：甘咸，溫，入心、腎二經(jīng)，補(bǔ)腎益精，養(yǎng)血潤燥，壯陽療痿。治精血虧損，虛弱勞怯，陽痿，夢遺，小便頻數(shù)，腸燥便艱。海參的藥理活性十分廣泛，幾乎涵蓋了當(dāng)前對人類健康構(gòu)成威脅的主要病癥，被稱為“百病之克星”。海參含海參粘多糖(酸性粘多糖)、海參皂苷(海參素)、海參多肽、18種氨基酸、海參膠原蛋白、?；撬岬?，還有大量人體所需的硒、鋅、鈣、錳、磷、鐵等微量和常量有益元素。藥理實(shí)驗(yàn)證明，海參能增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能。海藻：性苦、咸，寒。歸肝、胃、腎經(jīng)。軟堅(jiān)散結(jié)，消痰，利水。天然海藻粉富含海藻多糖、甘露醇、氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素和鉀、鐵、鈣、磷、碘、硒、鈷等微量元素。海藻粉多糖可以與HIV(人獲得性免疫缺陷病毒)結(jié)合，使其失活，從而抑制病毒的復(fù)制，防治艾滋病。鮑魚：味甘、咸，性平，肉質(zhì)有彈性。用于肝腎陰虛，骨蒸勞熱，咳嗽；能滋陰清熱，補(bǔ)肝明目等。含有豐富的蛋白質(zhì)，還有較多的鈣、鐵、碘和維生素A等營養(yǎng)元素。能養(yǎng)陰、平肝、固腎，可調(diào)整腎上腺分泌，具有雙向性調(diào)節(jié)血壓的作用。營養(yǎng)價值極高，富含豐富的球蛋白；鮑魚的肉中還含有一種被稱為“鮑素”的成分，能夠破壞癌細(xì)胞必需的代謝物質(zhì)。本發(fā)明具有以下有益效果：(1)藥食同源，藥源豐富。本發(fā)明所用藥材為海參、鮑魚、牡蠣、海藻，是藥食兩用資源，藥用歷史悠久，在沿海地區(qū)多數(shù)可作為新鮮食用；藥材來源豐富，利于推廣。(2)與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述的復(fù)合制劑，提取母海參卵子及雄海參精華細(xì)胞，，并將中國傳統(tǒng)中藥——當(dāng)歸、枸杞子、杏仁、甘草、肉蓯蓉、巴戟天、洋藿葉超臨界提取物加入產(chǎn)品，同時配以使鮑魚粉、牡蠣粉、海藻粉，實(shí)現(xiàn)了海洋生物技術(shù)與生命健康工程的有機(jī)結(jié)合。(3)本發(fā)明所述的復(fù)合制劑含有酸性粘多糖(酸性粘多糖具有修復(fù)胰島細(xì)胞，提高機(jī)體免疫力的功能)、人參皂苷、淫羊藿皂苷等高活性因子，人體可以直接吸收，減少了營養(yǎng)成分的浪費(fèi)。(4)本發(fā)明所述的復(fù)合制劑改變了傳統(tǒng)食用鮑魚、海參營養(yǎng)浪費(fèi)嚴(yán)重的問題。(5)本發(fā)明的原料來源廣泛，配方簡單，制備方法簡單，且產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，利于生產(chǎn)應(yīng)用。(6)配比合理：通過篩選組方中的種類和具體配比，得到活性成分最豐富、作用最強(qiáng)的復(fù)合制劑，各成分相互間起到相輔相成、協(xié)同增效的技術(shù)效果。(7)本發(fā)明經(jīng)毒性試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)毒副作用，在臨床治療艾滋病中初步試用，反映良好，無明顯毒副作用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。實(shí)施例1根據(jù)復(fù)合制劑配方，稱取當(dāng)歸12份、枸杞子14份、杏仁8份、甘草10份、肉蓯蓉9份、巴戟天7份、洋藿葉15份、海參36份、鮑魚14份、牡蠣11份、海藻25份、人參皂甙8份、淫羊藿皂甙10份，其中母海參18份、雄海參18份，分別提取母海參卵子及雄海參雄性精華細(xì)胞，母海參卵子提取物中主要成分包括酸性黏多糖33％、硫酸軟骨素27％、蝦青素26％、硒元素14％；雄海參提取雄性精華細(xì)胞后主要成分包括精氨酸29％、膠原蛋白71％；所述當(dāng)歸、枸杞子、杏仁、甘草、肉蓯蓉、巴戟天、洋藿葉作為中藥原料，經(jīng)超臨界萃取得中藥原料粉；所述鮑魚、牡蠣、海藻分別粉碎過篩制成鮑魚粉、牡蠣粉、海藻粉。將各原料混合，進(jìn)一步制備成復(fù)合液體制劑。實(shí)施例2根據(jù)復(fù)合制劑配方，稱取當(dāng)歸10份、枸杞子12份、杏仁6份、甘草12份、肉蓯蓉11份、巴戟天5份、洋藿葉13份、海參30份、鮑魚16份、牡蠣13份、海藻20份、人參皂甙6份、淫羊藿皂甙12份，其中母海參15份、雄海參15份。實(shí)施例3根據(jù)復(fù)合制劑配方，稱取當(dāng)歸13份、枸杞子16份、杏仁6份、甘草10份、肉蓯蓉10份、巴戟天6份、洋藿葉14份、海參40份、鮑魚12份、牡蠣11份、海藻25份、人參皂甙8份、淫羊藿皂甙10份，其中母海參20份、雄海參20份。對比例1根據(jù)復(fù)合制劑配方，稱取海參56份、鮑魚24份、牡蠣21份、海藻35份、人參皂甙18份、淫羊藿皂甙20份，其中母海參28份、雄海參28份，分別提取母海參卵子及雄海參雄性精華細(xì)胞，母海參卵子提取物中主要成分包括酸性黏多糖33％、硫酸軟骨素27％、蝦青素26％、硒元素14％；雄海參提取雄性精華細(xì)胞后主要成分包括精氨酸29％、膠原蛋白71％；所述鮑魚、牡蠣、海藻分別粉碎過篩制成鮑魚粉、牡蠣粉、海藻粉。將各原料混合，進(jìn)一步制備成復(fù)合液體制劑。對比例2根據(jù)復(fù)合制劑配方，稱取當(dāng)歸12份、枸杞子14份、杏仁8份、甘草10份、肉蓯蓉9份、巴戟天7份、洋藿葉15份、鮑魚34份、牡蠣21份、海藻35份、人參皂甙8份、淫羊藿皂甙10份，所述當(dāng)歸、枸杞子、杏仁、甘草、肉蓯蓉、巴戟天、洋藿葉作為中藥原料，經(jīng)超臨界萃取得中藥原料粉；所述鮑魚、牡蠣、海藻分別粉碎過篩制成鮑魚粉、牡蠣粉、海藻粉。將各原料混合，進(jìn)一步制備成復(fù)合液體制劑。試驗(yàn)例1急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)將實(shí)施例1中復(fù)合制劑以20000mg/kgBW劑量的樣品給予動物灌胃后，未見動物有中毒癥狀，無動物死亡，試驗(yàn)結(jié)束解剖動物，大體觀察未見異常；對小鼠的急性經(jīng)口毒性劑量大于20000mg/kgBW，急性經(jīng)口毒性屬無毒。遺傳毒性試驗(yàn)：三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)(Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn))結(jié)果均為陰性。90天喂養(yǎng)試驗(yàn)：以6000、3000、1500mg/kgBW(分別相當(dāng)于人體推薦用量200、100、50倍)3個劑量的樣品連續(xù)給大鼠灌胃90天，實(shí)驗(yàn)期間動物的生長發(fā)育良好，各劑量組的動物體重、增重量、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)指標(biāo)、血生化指標(biāo)、臟器重量及臟器/體重比值與對照組比較，均無顯著性差異(P>0.05)；大體解剖觀察和組織病理學(xué)檢查未見與樣品有關(guān)的異常改變。在受試劑量范圍內(nèi)未見該樣品對大鼠各項(xiàng)觀察指標(biāo)產(chǎn)生毒副作用。試驗(yàn)例2臨床試驗(yàn)資料研究對象：2002年1月-2006年1月確診并首次并發(fā)機(jī)會感染的60例HIV-1型AIDS患者進(jìn)行CD4+T淋巴細(xì)胞檢測。其中，男39例(65％)，女21例(35％)；年齡21～57歲，平均(35.2±9.2)歲。所有患者經(jīng)檢測確認(rèn)為抗HIV-1陽性，且均未接受過抗病毒治療，HIV-1型AIDA患者診斷依據(jù)《艾滋病診斷標(biāo)準(zhǔn)》。標(biāo)本采集：用EDTAK2抗凝血負(fù)壓真空采血管采集研究對象的外周靜脈血5～10ml，采血時間均為上午8∶00～10∶00，24h內(nèi)完成檢測。檢測儀器及試劑儀器：采用FACSCOUNT流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，Truecount計(jì)數(shù)管，F(xiàn)ACS溶血進(jìn)行CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)。CD4+T淋巴細(xì)胞檢測方法：參照《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》和《CD4+T淋巴細(xì)胞檢測質(zhì)量保證指南》儀器操作規(guī)程的要求進(jìn)行。Immuno-Trol質(zhì)控血同檢測標(biāo)本一同進(jìn)行操作，在流式細(xì)胞檢測的試管中加20μlCD4熒光標(biāo)記抗體，然后加入混勻的抗凝血50μl，室溫避光孵育15min。在標(biāo)本中加入溶血素，室溫避光孵育15min后上機(jī)檢測，上機(jī)前應(yīng)用CaliBRITETM磁珠及FACSCompTM軟件校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀，將制備好的樣本上機(jī)，使用MultiSETTM軟件獲取及自動分析檢測結(jié)果。外周血病毒載量測定方法：取EDTA-K2抗凝全血，2000r/min離心10min分離血漿，置入-76℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆茫龢?biāo)本收集完全后，取1100μl血漿，采用Real-timePCR在OBASAmpliPrep/COBASTaqMan全自動病毒載量儀上定量檢測血漿中HIVRNA，擴(kuò)增的靶核酸位置是HIVgag區(qū)，可擴(kuò)增HIV-1M組的A-H亞型。病毒載量和CD4+T細(xì)胞水平測定結(jié)果：對60份標(biāo)本中病毒載量進(jìn)行檢測(分別采用實(shí)施例1、對比例1、對比例2中復(fù)合制劑分別施用于20例病例-對患者保密)，其結(jié)果見表1。表1楊屯鄉(xiāng)張宇村HIV感染者、AIDS病人CD4檢測結(jié)果(部分示例)性別前CD4后CD4張某女57289高某女256415齊某某女183670吳某某女169474李某某男58220王某某男37206劉某某男145251宋某某女2991078王某某女167579王某女150367張某男132596張某某男156488其中表1中為對HIV感染者、AIDS病人CD4檢測效果有改善的部分受試者數(shù)據(jù)，其服用的藥物為實(shí)施例1中的復(fù)合制劑；對比例1、對比例2復(fù)合制劑的治療效果沒有明顯改善，因此未在數(shù)據(jù)中列出。上述結(jié)果說明實(shí)施例1中的復(fù)合制劑具有明顯優(yōu)于對比例1、對比例2復(fù)合制劑的效果。下面以幾個典型病例進(jìn)行說明：齊某某，女，40歲，晚期病人，治療前乏力、消瘦、腹瀉、低熱，CD480-125cell/ul，HIV載量3200cp/ml，服藥2個月癥狀減輕，服藥1年后復(fù)查CD4600-680cells/ul，HIV載量100cp/ml，病毒載量明顯減低，CD4T淋巴細(xì)胞明顯提升，癥狀也有明顯改善。吳某某，女，46歲，中期病人，倦怠乏力、多汗、或皰疹、口腔黏膜潰瘍不易愈合、皮膚瘙癢、心神不寧，CD4150-210cell/ul，HIV載量2300cp/ml，服藥1個月癥狀減輕，服藥1年后復(fù)查CD4400-500cells/ul，HIV載量300cp/ml，病毒載量明顯減低，CD4T淋巴細(xì)胞明顯提升，癥狀也有明顯改善。臨床結(jié)論：使用本發(fā)明的復(fù)合制劑后，患者原本表現(xiàn)的倦怠乏力、多汗、或皰疹、口腔黏膜潰瘍不易愈合、皮膚瘙癢、消瘦、腹瀉、心神不寧、煩躁失眠等氣虛陰傷癥狀體征都有明顯的改善。盡管發(fā)明人已經(jīng)對本發(fā)明的技術(shù)方案做了較為詳細(xì)的闡述和列舉，應(yīng)當(dāng)理解，對于本領(lǐng)域一個熟練的技術(shù)人員來說，對上述實(shí)施例做出修改或者采用等同的替代方案，這對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3