本發(fā)明涉及藥物，具體涉及博落回在制備治療瘧疾藥物中的應(yīng)用，尤其涉及博落回及其提取物在制備治療由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

瘧疾(malaria)是嚴(yán)重危害人類身體健康和生命安全、影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要寄生蟲(chóng)病。瘧疾與艾滋病、結(jié)核病一起被世界衛(wèi)生組織列為全球亟需控制的公共衛(wèi)生問(wèn)題，是聯(lián)合國(guó)千年發(fā)展目標(biāo)中重點(diǎn)防控的3種傳染病之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，僅在2015年內(nèi)，全球有438000瘧疾死亡病例，并且絕大部分發(fā)生在撒哈拉以南的非洲的五歲以下兒童。瘧疾由瘧原蟲(chóng)引起，其瘧原蟲(chóng)包括了惡性瘧原蟲(chóng)、間日瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)和卵形瘧原蟲(chóng)，其中以惡性瘧原蟲(chóng)致死率最高。帶有成熟子孢子的雌按蚊叮咬人體后，將瘧原蟲(chóng)注入人體，經(jīng)10～20天會(huì)發(fā)生典型的瘧疾臨床癥狀，可分為四期：前驅(qū)期、發(fā)冷(寒戰(zhàn))期、發(fā)熱期、出汗期和間歇期。瘧疾的反復(fù)發(fā)作后，病人會(huì)出現(xiàn)貧血、肝脾腫大，甚至出現(xiàn)腦型、超高熱型、厥冷型和胃腸型等兇險(xiǎn)癥狀，甚至危及生命。隨著氯喹、哌喹和青蒿素的應(yīng)用，在近幾十年挽救了無(wú)數(shù)人的生命，但是這些藥物出現(xiàn)了不同程度的耐藥性，致使瘧疾的發(fā)病率日益增加，亟待具有新型治療作用的抗瘧藥物的發(fā)現(xiàn)。

中醫(yī)藥作為瘧疾預(yù)防和治療的重要組成部分，具有良好的療效和提高生活質(zhì)量的優(yōu)勢(shì),成為瘧疾治療的重要手段之一。在中國(guó)著名書(shū)籍《本草綱目》和《瘧疾論》記載了如常山、青蒿、鴉膽子、草果和砂仁等是在民間用來(lái)治療瘧疾的中草藥。從中草藥青蒿中發(fā)現(xiàn)的活性化合物青蒿素用于治療瘧疾取得了很好的效果，廣泛用于臨床，因此從中藥中尋找具有抗瘧活性中草藥和有效成分意義重大。本發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)博落回(Macleaya cordata)提取物具有顯著抗瘧作用。

博落回(Macleaya cordata)又名號(hào)筒桿,三錢三,勃勒回，山梧桐等，系罌粟科植物，廣泛分布于我國(guó)各地，并可人工種植。博落回藥用部位為其帶根全草，辛、苦、溫，有驅(qū)風(fēng)解毒、散瘀腫及殺蟲(chóng)驅(qū)蟲(chóng)之功用。民間用其治療癰腫療毒，惡瘡潰瘍，燙傷頑癬，風(fēng)濕痹癥，跌打損傷，疥瘡等體表疾患。臨床上已用于陰道炎、肺炎、皮膚病和肝炎等疾病的治療,并具有抗腫瘤作用,在養(yǎng)殖生產(chǎn)中已作為獸藥和生物農(nóng)藥被廣泛使用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于研究設(shè)計(jì)博落回在制備治療瘧疾藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了博落回提取物在制備治療瘧疾藥物中的應(yīng)用。

體內(nèi)外抗瘧活性測(cè)定結(jié)果顯示，博落回提取物有較好的體內(nèi)外抗瘧原蟲(chóng)活性。因此，可用于制備治療瘧疾的藥物。

本發(fā)明的另一目的是提供以博落回及其提取物為活性成分，用于制備治療瘧疾的中草藥組合物，尤其用于制備治療由瘧原蟲(chóng)引起的瘧疾的藥物組合物。

本發(fā)明所述藥物組合物含有治療有效量的博落回及其提取物為活性成分，以及含有一種或多種中草藥作為輔助藥物或者含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。其中活性成分在藥物組合物中的重量為5-95％。

所述其他可以接受的中草藥，例如：馬鞭草、柴胡、生姜、黃芩、狼牙草、常山、草果、人參、大棗等可以輔助博落回發(fā)揮藥效的中草藥。

所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如：稀釋劑、賦形劑如水等；填充劑如淀粉、蔗糖等；粘合劑如明膠、聚乙烯吡咯烷酮；濕潤(rùn)劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣、碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣、聚乙二醇等、另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。

本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)口服和外敷給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其職稱常規(guī)的固體制劑如片劑、顆粒劑、膠囊等或制成液體制劑如水或油懸浮劑、糖漿等；用于外敷給藥時(shí)，可將其制成軟膏劑和經(jīng)皮給藥的劑型等。

本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使博落回與其他中草藥進(jìn)行提取，然后將其制成所需的劑型。

附圖說(shuō)明

圖1博落回提取物和陽(yáng)性藥物(氯喹)對(duì)3D7蟲(chóng)株生存率影響圖

圖中氯喹組(分別為：0、0.01、0.1、1μg/mL)，博落回組(分別為：0、5、15、50μg/mL)，*P<0.05**P<0.01***P<0.001

圖2博落回提取物和陽(yáng)性藥物(氯喹)在體內(nèi)對(duì)伯氏瘧原蟲(chóng)感染率影響圖

圖中1空白模型組，2 10mg/kg氯喹組，3 0.5g/kg博落回提取物組，4 1g/kg博落回提取物組，5 2g/kg博落回提取物組，*P<0.05**P<0.01***P<0.001

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：博落回提取物的制備

博落回的干燥地上部分50g粉碎后，以500mL 85％乙醇室溫冷浸2次，每次24小時(shí)，合并兩次浸出液并過(guò)濾，60℃以下減壓回收溶劑，得干浸膏，取干浸膏1g，用二甲基亞砜(DMSO)配制為濃度20mg/mL的儲(chǔ)備液。制得的儲(chǔ)備液用于實(shí)施例2。

博落回藥材及浸膏經(jīng)HPLC-UV進(jìn)行指紋圖譜分析，博落回藥材和提取物的與標(biāo)準(zhǔn)藥材指紋圖譜完全一致。

實(shí)施例2：博落回提取物體外抗瘧活性測(cè)定

抗瘧活性可以通過(guò)測(cè)量瘧原蟲(chóng)dsDNA含量來(lái)確定(Corey,V.C.,et al.,A broad analysis of resistance development in the malaria parasite.Nat Commun,2016.7:p.11901.)。在含20μL連續(xù)稀釋測(cè)試樣本和氯喹陽(yáng)性藥物(購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究所)的96孔板的每個(gè)孔中加入感染了3D7蟲(chóng)株P(guān).falciparum的紅細(xì)胞混懸液(100μL，在RPMI 1640培養(yǎng)基(Gibco)中加入5g/L AlbuMAX(Gibco)和50mg/L慶大霉素(Sigma)，使瘧原蟲(chóng)血癥達(dá)到0.5％，紅細(xì)胞壓積達(dá)到2％)，然后置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)。細(xì)胞用裂解液(Tris 2.4g/L,EDTA 1.86g/L,Saponin 0.08g/L,TritonX-1000.8mL/L)進(jìn)行裂解，來(lái)源于Sigma，dsDNA含量用10000X SYBR Green I試劑(Invitrogen)測(cè)定，測(cè)定程序參照文獻(xiàn)(Plouffe,D.,et al.,In silico activity profiling reveals the mechanism of action of antimalarials discovered in a high-throughput screen.Proc Natl Acad Sci USA,2008.105(26):p.9059-64.)。簡(jiǎn)要說(shuō)來(lái)，就是將100μL培育的混合物和按文獻(xiàn)說(shuō)明配制好100μL SYBR Green I試劑混合，在室溫下避光培育30-60分鐘.然后100μL轉(zhuǎn)移至黑色酶標(biāo)板中。將酶標(biāo)板放入EnSpire熒光酶標(biāo)儀(PerkinElmer)中，在485nm和535nm的吸光值下讀取酵標(biāo)板中每孔的熒光信號(hào)值。從劑量-效應(yīng)曲線中計(jì)算出IC₅₀。博落回提取物的對(duì)3D7的IC₅₀值如下表：

結(jié)果顯示，博落回提取物有較好的體外抗瘧原蟲(chóng)活性。

實(shí)施例3：博落回提取物體內(nèi)抗瘧活性測(cè)定

伯氏瘧原蟲(chóng)伯氏株培養(yǎng)，其所用紅細(xì)胞為昆明小鼠紅細(xì)胞，其他培養(yǎng)條件與瘧原蟲(chóng)3D7培養(yǎng)方法一致。本發(fā)明用的動(dòng)物是來(lái)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，品系為昆明種小鼠，所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)和使用根據(jù)NIH標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。對(duì)小鼠進(jìn)行輸血感染，抽取雄性小鼠心臟血液，用5％葡萄糖鹽水將血液稀釋成每0.2mL內(nèi)含1×10⁶個(gè)受感染紅細(xì)胞的懸液，腹腔接種小鼠。接種伯氏瘧原蟲(chóng)3小時(shí)后，進(jìn)行分組給藥，每組8只，組別為：1、空白對(duì)照組(灌胃給予生理鹽水)，2、氯喹陽(yáng)性對(duì)照組(灌胃給予10mg/kg)，3、博落回提取物(灌胃給予0.5g/kg、1g/kg和2g/kg)。每天測(cè)量體重?zé)o明顯差異，在接種感染后第0、2、4、6天尾靜脈取血涂膜檢查減蟲(chóng)率，結(jié)果顯示，博落回提取物有較好的體內(nèi)抗瘧原蟲(chóng)活性。