專利名稱：一種降血脂減輕動(dòng)脈粥樣硬化的人工生物膜制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種用于調(diào)節(jié)與改善機(jī)體功能的人工生物膜的制備方法。本發(fā)明所用的主要原料為從大豆中提取的磷脂酰膽堿。
從五十年代人們就發(fā)現(xiàn)磷脂具有降血脂、治療動(dòng)脈粥樣硬化、改善動(dòng)脈壁活性、治療脂肪肝、肝硬化貧血等功能，經(jīng)過國(guó)內(nèi)外學(xué)者多年研究，其機(jī)理在于磷脂本身就是構(gòu)成機(jī)體的細(xì)胞成份，大豆磷脂含有機(jī)體內(nèi)所必需的不飽合脂肪酸，能將膽固醇帶出體外。由此，國(guó)內(nèi)國(guó)外有人最先將從大豆中提出的磷脂直接用于口服或不經(jīng)任何處理將磷脂加入水中靜脈注射，取得了減輕動(dòng)脈硬化的作用，在此我們稱這種方法為方法一(見PL and Atherosclerosis Avog aro P.etal New York 1983)。1967年在文獻(xiàn)Path Bact Vol94 P77中又有人提出將大豆磷脂和蛋黃磷脂經(jīng)過超聲處理后靜脈注入機(jī)體(兔子)中，也得出減輕動(dòng)脈粥樣硬化且大豆磷脂效果優(yōu)于蛋黃磷脂的結(jié)論。在此基礎(chǔ)上，國(guó)外學(xué)者還做了大量的機(jī)理研究，結(jié)果表明經(jīng)過振蕩后的磷脂形成了一個(gè)直徑為0.45微米，均勻的球形人工生物膜，此膜進(jìn)入機(jī)體后由于其均勻性和呈球膜狀，能更好的和體內(nèi)的脂蛋白、動(dòng)脈壁相互作用，參于細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)交換更有利于將體內(nèi)的膽固醇帶出體外，且磷脂本身并不在體內(nèi)積蓄。我們稱這種方法為方法二。
從方法一我們可以看出，它是不經(jīng)過處理直接利用磷脂口服或稀釋水中進(jìn)行靜脈注射的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。其靜脈注射共八次，每周兩次，每次為5毫升%，得出的結(jié)論為治療組的主動(dòng)脈瘢塊為2.7級(jí)，對(duì)照組的主動(dòng)脈瘢塊為4.5級(jí)，證實(shí)了磷脂確有很好的降血脂，減輕動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
方法二所作的實(shí)驗(yàn)主要側(cè)重于人工生物膜減輕動(dòng)脈硬化的機(jī)理研究，既使作了實(shí)驗(yàn)，也是零星的、缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比如方法二所做的實(shí)驗(yàn)僅用11只兔子，又分為四組，每組才1-2只，得出的結(jié)論為大豆磷脂做成的人工生物膜效果最好，而蛋黃磷脂做成的人工生物膜效果比不給人工生物膜的對(duì)照組還差的結(jié)論，為選用合適的原料提供了一條新的途徑。方法二雖然采用了較新穎的方法處理磷脂，并提出用人工生物膜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可由于每組才1-2只兔子，其結(jié)論缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尤其實(shí)驗(yàn)缺乏成組的改善心血管狀況的數(shù)據(jù)，無法強(qiáng)有力的證明大豆磷脂人工生物膜的效果。
鑒于方法一雖有一定的效果，但它所用的原料未經(jīng)過處理，其優(yōu)勢(shì)未發(fā)揮出來(參見本發(fā)明的對(duì)比，已被本發(fā)明所采用的方法證明)。而方法二過去的實(shí)驗(yàn)?zāi)康钠赜跈C(jī)理的探討研究，其超聲后制成的人工生物膜未見有詳盡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，無說服力。更重要的是制備過程中所采用的方法從選料到配方存在有許多的缺陷與不足，即選料成份具有致敏性，振蕩方式易產(chǎn)生雜質(zhì)，投料的參數(shù)過高影響療效及振蕩的合理時(shí)間，均有待于完善提高。
本發(fā)明的任務(wù)在于克服上述已有方法的缺陷。即在方法二的基礎(chǔ)上對(duì)其所用的原料、配料參數(shù)、振蕩時(shí)間與方式上進(jìn)行了新的改進(jìn)，在實(shí)驗(yàn)組數(shù)量大大優(yōu)于方法一方法二的基礎(chǔ)上，得出了具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)論，且其效果又優(yōu)于方法一的新的人工生物膜制備方法。
解決上述任務(wù)的方案是，采用制做人工生物膜的新技術(shù)，完善具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的實(shí)驗(yàn)組。其制備新技術(shù)的實(shí)質(zhì)在于選用了以大豆磷脂酰膽堿為主要成份的原料;采用無接觸超聲;以振蕩結(jié)果控制超聲時(shí)間以及新的投量參數(shù)的人工生物膜制備方法。
本發(fā)明的細(xì)節(jié)、優(yōu)點(diǎn)和特征，用下列附圖
與實(shí)施例來詳盡說明。
1、大豆磷脂主要由磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺兩種成份構(gòu)成，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道磷脂酰乙醇胺具有致敏作用，在使用中有一定的局限性，這也是國(guó)外為什麼一直不將磷脂大量使用臨床的原因，其實(shí)驗(yàn)也多為機(jī)理上的探討。鑒于以上情況，本發(fā)明在選用的磷脂成份上注意了這一方面，以磷脂酰膽堿為主要成份，盡量減少磷脂酰乙醇胺的成份。方法二用的大豆磷脂其磷脂酰膽堿占71.0%，磷脂酰乙醇胺占20.2%，本發(fā)明所用的大豆磷脂所含的磷脂酰膽堿占95-98%，而其磷脂酰乙醇胺含量?jī)H占不到1%，所以以此原料制成的人工生物膜在使用中能有效的克服致敏性，從而提高療效以及便于推廣使用。
2、利用方法二制備生物膜的過程中，是將超聲頭直接放入液體中進(jìn)行振蕩，在振蕩過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)使產(chǎn)品變色發(fā)黑，這是由于探頭上的金屬鈦離子脫落溶于水中所致，另外探頭本身的不潔也容易給產(chǎn)品造成污染，雖然最后還要將產(chǎn)品超速離心剔去鈦碎屑和雜質(zhì)，但這樣既增加了工作量，也還是不能保證產(chǎn)品的純度，因?yàn)樵陔x心中液體仍要同其它物體接觸。為克服原有技術(shù)的這一缺陷，本發(fā)明采用了無接觸超聲，見圖一(1)為超聲發(fā)生器，(2)玻璃容器，(3)超聲發(fā)生器的槽體，(4)調(diào)配好的原料。即直接將配好的液體放入玻璃容器中，然后將玻璃容器置于超聲器的槽內(nèi)，其底部與超聲槽接觸，從而通過超聲槽振蕩傳于玻璃容器達(dá)到制作人工生物膜的目的，避免了直接將超聲探頭置于液體中的弊病。
3、在超聲過程中，原有技術(shù)超聲時(shí)間的參數(shù)為三次，每次10分鐘，總體不超過40分鐘。本發(fā)明不拘于此點(diǎn)、而以隨時(shí)用顯微鏡觀察振蕩中的磷脂人工生物膜的大小、均勻性是否達(dá)到預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)。在觀察到生物膜達(dá)到0.4微米，均勻性趨同的狀況下即停止振蕩，其使用時(shí)間參數(shù)在50-120分鐘。
4、本發(fā)明在磷脂與生理鹽水的配比量上，采用了20毫克-50毫克/每毫升鹽水的配比率。此配比率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于方法二300毫克/每毫升鹽水的配比率。其目的在于，按本配比率配制的成品在進(jìn)入機(jī)體內(nèi)后更易起到磷脂的生物學(xué)作用，這是由于制做出的成品不稠，流動(dòng)性好，利于靜脈注射。若按方法二的配比率作出的人工生物膜太密，呈積聚在一起的狀態(tài)，在注射前還要稀釋，終歸有積在一起的可能，這樣在進(jìn)入機(jī)體后，其大小超過0.4微米，不利于參于體內(nèi)細(xì)胞的交換，影響療效。
由本方法生產(chǎn)的磷脂人工生物膜經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與方法一比較，主動(dòng)脈粥樣硬化瘢塊分級(jí)優(yōu)于原方法。見下組對(duì)比國(guó)外給藥組 2.7 對(duì)照組 4.5本組給要組 2.0 對(duì)照組 4.0經(jīng)與方法二比較，除有顯著的療效外，還具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
現(xiàn)將用本發(fā)明制做的人工生物膜，經(jīng)三組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的對(duì)比數(shù)據(jù)列具如下表一 多次注脂質(zhì)體對(duì)進(jìn)食高脂兔血脂的影響mmol/L X±SN TC β-脂蛋白 PL HDL-PL (VLDL+LDL)-PL TG(g/L)(1)正常組7 3.4 4.9 42.9 20.8 22.1 1.0± ± ± ± ± ±1.5 2.7 6.0 1.3 4.7 0.3(2)進(jìn)食高脂 28.5 31.3 66.6 22.8 43.8 1.9對(duì)照組7 ± ± ± ± ± ±2.5＃＃＃ 0.2＃＃＃ 6.4＃＃＃ 1.5＃ 4.9＃＃＃ 0.9＃(3)進(jìn)食高脂 22.9 27.2 57.1 21.1 36.0 1.4給藥組5 ± ± ± ± ± ±4.7※ 5.6 6.3※ 0.9※ 5.4※ 0.4＃＃＃P≤0.001 ＃P≤0.05與(1)比較※※※P≤0.001 ※P≤0.05與(2)比較
表三 主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積占主動(dòng)脈總面積的百分?jǐn)?shù)及分級(jí)N 斑塊占總面積% 分 級(jí)(1)正常組7 0% 0(2)進(jìn)食高脂 43.7% 4對(duì)照組5(3)進(jìn)食高脂 13.0% 2給藥組5各組后面的數(shù)字為實(shí)驗(yàn)兔子的個(gè)數(shù)，結(jié)果為三個(gè)月后的觀察結(jié)果。表一中mmol/L為每立升含多少摩爾，X±S為平均值加減標(biāo)準(zhǔn)差，TC為血中總膽固醇;PL為磷脂;HDL-PL為高密度質(zhì)蛋白所系帶的磷脂;(VLDL+LDL)-PL為極低密度質(zhì)蛋白+低密度質(zhì)蛋白所帶的磷脂;TG為甘油三脂;＃表示有顯著差異(2)與(1)比，※表示有顯著差異(3)與(2)比，P為有顯著差異的參數(shù)，一般小于0.05即表示有顯著差異，其值越小差異性越大。通過TC欄可以看出，(2)與(1)比有顯著差異，說明造成了高血脂模型，(3)與(2)比有顯著差異，反映了用藥后可使血中總膽固醇含量顯著下降。通過β-脂蛋白欄可以看出，(2)于(1)比有顯著差異，說明造成了高血脂模型，(3)與(2)比說明用藥后有降低的傾向。PL，HDL-PL，(VLDL+LDL)-PL三欄說明磷脂在體內(nèi)不積蓄。通過TG欄可以看出，(2)與(1)比有顯著差異，說明造成了高血脂模型，(3)與(1)比說明用藥后與正常組沒有顯著差異，而(2)與(1)比有顯著差異，說明用藥后可使TG下降。從表二中可以看出，四項(xiàng)指標(biāo)在給藥后均有下降，除TK外均有顯著差異，反映了人工生物膜在血液流變中均能起到降低血液粘度，改善紅細(xì)胞硬度的作用。從表三中可以看出用藥后瘢塊面積低于不用藥組，(2)與(3)做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后有以下結(jié)論(2)的X±S＝0.435±0.15，(3)的X±S＝0.13±0.136，兩組相比P≤0.01，有顯著差異。以上實(shí)驗(yàn)為靜脈注射，每周兩次，每次每公斤80毫克磷脂人工生物膜溶于10毫升的鹽水。在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，還應(yīng)用本發(fā)明所制成的人工生物膜給兔子口服，取得的效果十分令人振奮，這是國(guó)外所沒做過的，由于不屬于本發(fā)明所述的范圍，在此從略。
本發(fā)明制備過程用下例實(shí)施例說明將大豆磷脂(含磷脂酰膽堿95-98%)放入盛著鹽水的玻璃容器中，其投入量為每毫升鹽水20-50毫克，所用鹽水為0.9%的氯化鈉生理鹽水。將容器置于超聲發(fā)生器的槽內(nèi)，啟動(dòng)機(jī)器進(jìn)行振蕩，在50-120分鐘的振蕩過程中，隨時(shí)觀察人工生物膜的生成狀況，當(dāng)膜呈均勻狀態(tài)且為0.4微米時(shí)即停止振蕩。然后用0.45微米的濾膜過濾振蕩后的液體，再將過濾后的液體用100℃的流通蒸汽經(jīng)30分鐘的滅菌，即可投用使用。若靜脈點(diǎn)滴還需調(diào)整液體的PH值，使其達(dá)到PH＝7.2即可。
權(quán)利要求
1.一種降血脂減輕動(dòng)脈粥樣硬化的人工生物膜的制備方法。它包括生產(chǎn)人工生物膜制備中必要的方法。本發(fā)明的特征是，選用大豆磷脂酰膽堿為主要成份的原料；采用無接觸超聲振蕩的方式，給出了停止振蕩的依據(jù)及超聲時(shí)間參數(shù)；給出新的投料配比參數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，所述的原料為從大豆中提取的磷脂，其成份為磷脂酰膽堿占95-98%，磷脂酰乙醇胺含量小于1%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1，所述的振蕩方式為無探頭接觸超聲法。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，停止振蕩的依據(jù)是用顯微鏡隨時(shí)觀察人工生物膜，當(dāng)其達(dá)到0.4微米且大小均勻時(shí)停止振蕩。
5.根據(jù)權(quán)利要求1，本方法給出的新的配比量參數(shù)為20-50毫克/每毫升鹽水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1，3，本發(fā)明采用直接將容器置于超聲器所帶的槽體內(nèi)進(jìn)行振蕩。
7.根據(jù)權(quán)利要求1，4，本發(fā)明所振蕩的時(shí)間參數(shù)為50-120分鐘。
全文摘要
一種以大豆磷脂為主要原料的人工生物膜的制備方法。其成品應(yīng)用于保健食品與新的藥物底基，參于調(diào)節(jié)與改善機(jī)體的功能。其特征在于制備過程中選用了以磷脂酰膽堿為主要成分的原料，采用了無接觸超聲振蕩方式并給出了振蕩時(shí)間的參數(shù)，以及制做人工生物膜用的新的配比參數(shù)。用本方法制備的人工生物膜具有降血脂，減輕動(dòng)脈粥樣硬化等多方面的功能，效果顯著。其方法本身具有簡(jiǎn)單、實(shí)用、投資少見效快的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/66GK1053745SQ9110187
公開日1991年8月14日 申請(qǐng)日期1991年3月28日 優(yōu)先權(quán)日1991年3月28日
發(fā)明者徐寧生, 劉曉勤, 趙春玉, 孟慶玲 申請(qǐng)人:北京醫(yī)科大學(xué)