專利名稱：抑制血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑1的方法
背景技術(shù)：
溶解血纖維蛋白系統(tǒng)在維持正常止血平衡中起重要作用。該系統(tǒng)中的一個關(guān)鍵的因子是血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑I(PAI-1)，它通過抑制血纖維蛋白溶酶原激活劑如組織型血纖維蛋白溶酶原激活劑(tPA)而減小內(nèi)源除去血纖維蛋白的能力。研究表明深處靜脈血管中血栓形成危險性的增加與PAI-1的升高有關(guān)。而且，發(fā)現(xiàn)在患有心肌梗塞和敗血癥的病人中PAI-1升高。因為增加心血管危險與減少溶解血纖維蛋白能力有關(guān)，降低PAI-1應(yīng)當(dāng)導(dǎo)致心臟保護(hù)作用。事實上，目前在FraminhamOffspring Study中對絕經(jīng)前和后的婦女的PAI-1水平的分析研究表明絕經(jīng)后婦女具有明顯較高的PAI-1水平，用雌激素治療可將其水平減少到絕經(jīng)前的水平。相信減小PAI-1的作用有助于對減少心臟疾病危險進(jìn)行雌激素替代治療的總體效果。
盡管PAI-1可在各種組織中產(chǎn)生，但主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生。血管內(nèi)皮構(gòu)成了起血液凝固調(diào)節(jié)、炎癥調(diào)節(jié)和血管內(nèi)腔和實質(zhì)組織之間的液體和介質(zhì)的交換作用的主要器官。因此，內(nèi)皮的合適功能是體內(nèi)總體平衡的關(guān)鍵。因為PAI-1可因內(nèi)皮細(xì)胞對某些刺激(包括細(xì)胞激活素(cytokines))產(chǎn)生反應(yīng)而增加，所以產(chǎn)生功能障礙，導(dǎo)致凝血缺損、局部和全身血管炎和增加動脈粥樣硬化斑的發(fā)展和破裂。這些作用可進(jìn)一步導(dǎo)致疾病，包括心肌梗塞、深處靜脈血栓形成和彌漫的血管內(nèi)血栓形成。
由于在內(nèi)皮細(xì)胞/血漿界面局部控制PAI-1可在許多疾病過程中起重要作用，因此抑制在內(nèi)皮中表達(dá)PAI-1的試劑可用于治療疾病，如膿毒癥、損傷包括重要組織損傷和創(chuàng)傷、系統(tǒng)炎性反應(yīng)綜合癥、膿毒綜合癥、膿毒性休克和多器官功能障礙綜合癥(包括DIC)以及心肌梗塞、深處靜脈形成血栓、彌漫的血管內(nèi)形成血栓、動脈粥樣硬化斑破裂及其相關(guān)的后遺癥。而且由于血纖維蛋白在腫瘤細(xì)胞生物學(xué)中的關(guān)鍵作用，發(fā)現(xiàn)PAI-1調(diào)節(jié)劑可用作抗轉(zhuǎn)移瘤藥物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供抑制血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑1的方法，該方法包括給予需要進(jìn)行抑制的人有效量的式I化合物及其可藥用鹽和溶劑化物
其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、-CO-(C1-C6烷基)或-CO-Ar，其中Ar是取代或未取代的苯基；R2選自1-吡咯烷基(pyrrolidino)、六亞甲基亞胺基和哌啶子基。
發(fā)明詳細(xì)描述本發(fā)明發(fā)現(xiàn)選擇出的一組2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩(苯并噻吩類)，由式I所示，可用于抑制PAI-1。
本發(fā)明提供的使用方法通過給予需要抑制的人一定劑量的式I化合物或其可藥用鹽或溶劑化物來進(jìn)行，它可有效地抑制PAI-1或與其過量有關(guān)的生理疾病。術(shù)語“抑制”包括其通?？山邮艿囊馑迹ㄗ柚?、防止、制止和減緩、停止或逆轉(zhuǎn)其進(jìn)行、嚴(yán)重性或所導(dǎo)致的癥狀或作用。
雷洛昔芬是本發(fā)明的一種化合物，是式I化合物的鹽酸鹽，其中R1和R3為氫且R2為1-哌啶基，它是一種核調(diào)節(jié)分子。雷洛昔芬已經(jīng)顯示與雌激素受體結(jié)合且最初認(rèn)為它是一種具有抗雌激素功能和藥理的分子，其中阻斷雌激素激活子宮組織和雌激素依賴的乳房癌。的確，雷洛昔芬在某些細(xì)胞中阻斷雌激素的作用，而在其它細(xì)胞中雷洛昔芬激活與雌激素相同的基因并且顯示相同的藥理作用，如骨質(zhì)疏松、血脂過高。因此，雷洛昔芬已被稱作具有激動和拮抗混合特性的抗雌激素劑?，F(xiàn)在認(rèn)為雷洛昔芬所顯示的不同于雌激素的獨特作用是由于與由雌激素-雌激素受體復(fù)合物激活和/或抑制基因相反的通過雷洛昔芬-雌激素受體復(fù)合物獨特激活和/或抑制各種基因功能。所以，盡管雷洛昔芬和雌激素利用并競爭相同的受體，但由這兩種物質(zhì)調(diào)節(jié)基因所產(chǎn)生的藥理結(jié)果是不容易預(yù)見的而且是各自獨特的。
通常，將所述化合物與常規(guī)的賦形劑、稀釋劑或載體配制并壓制成片劑，或者配制成常規(guī)口服給藥或通過肌內(nèi)或靜脈內(nèi)途徑給藥的酏劑或溶液劑。所述化合物可經(jīng)皮給藥，并且可配制成持續(xù)釋放劑型等。
可按照建立的方法制備本發(fā)明方法中使用的化合物，如美國專利4133814、4418068和4380635所詳細(xì)描述的，這些文獻(xiàn)都引入本文供參考。這些方法通常都以具有6-羥基基團(tuán)和2-(4-羥基苯基)基團(tuán)的苯并[b]噻吩作為起始原料。將起始化合物保護(hù)、?；⒚摫Ｗo(hù)而形成式I化合物。在上文所述的美國專利中提供了制備這些化合物的實例。取代或未取代的苯基包括苯基和由一個或兩個C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基取代的苯基。
本發(fā)明使用的化合物與各種各樣的有機(jī)和無機(jī)酸和堿形成可藥用的酸和堿加成的鹽，包括常用于藥物化學(xué)的生理可接受的鹽。這些鹽也是本發(fā)明的一部分。用于形成這些鹽的典型的無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸和連二磷酸等。也可使用由有機(jī)酸衍生的鹽，如脂族單和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸、芳香酸、脂族和芳族磺酸。因此可藥用鹽包括乙酸鹽、苯基乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯對二甲酸鹽(teraphthalate)、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
可藥用酸加成的鹽典型地是通過式I化合物與等摩爾或過量的酸反應(yīng)來形成。通常將反應(yīng)物在互溶劑如乙醚或苯中合并。該鹽通常在1小時到10天內(nèi)從溶液中沉淀出來并可通過過濾分離或可通過常規(guī)方式除去溶劑。
常用于形成鹽的堿包括氫氧化銨和堿金屬和堿土金屬的氫氧化物、碳酸鹽以及脂族胺和伯胺、仲胺和叔胺、脂族二胺。制備加成鹽的特別有用的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、甲基胺、二乙基胺、乙二胺和環(huán)己胺。
可藥用鹽與衍生它們的化合物相比通常具有增強(qiáng)的溶解性的特點，因此常常更易于配制成液體或乳劑。
可通過本領(lǐng)域已知的方法來制備藥物制劑。例如，可將所述化合物與常規(guī)賦形劑、稀釋劑或載體配制并形成片劑、膠囊、懸浮液、粉劑等。適用于這些制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的例子包括下列物質(zhì)填充劑和增容劑如淀粉、糖、山梨糖醇和硅的衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其它纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；延緩溶解劑如石蠟；再吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑 如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂和固體聚乙二醇類。
也可將化合物配制成便于口服給藥的酏劑或溶液劑或適于非胃腸道給藥例如肌內(nèi)、皮下或靜脈途徑給藥的溶液。另外，該化合物非常適于配制成持續(xù)釋放劑型等?？蓪⒅苿┲瞥稍诤侠淼臅r間內(nèi)僅釋放活性成分的或優(yōu)選在腸道特定部位。例如可由聚合物或蠟制備包衣、包封物和保護(hù)材料。
本發(fā)明抑制PAI-1或本文公開的其它任何用途所需的式I化合物的具體劑量將取決于疾病的嚴(yán)重性、給藥途徑和由臨床醫(yī)師所確定的相關(guān)因素。通常每日可接受的并且有效的劑量約為0.1-1000毫克/天，且更常用的是約50-200毫克/天。此劑量每天一次到約三次給予需要進(jìn)行治療的個體，或者按需要更頻繁給予來有效地抑制PAI-1或本文所公開的任何其它用途。
通常優(yōu)選以酸加成的鹽的形式給予式I化合物，因為所給予的藥物中通常攜帶有堿性基團(tuán)，如哌啶子基環(huán)。通過口服途徑給予本發(fā)明化合物也是有利的。為了此目的，可制備下列口服劑型。
制劑在下列制劑中，“活性成分”意指式I化合物。
制劑1明膠膠囊用下列成分制備硬明膠膠囊組分 量(毫克/膠囊)活性成分0.1-1000淀粉，NF0-650可流動的粉狀淀粉0-650350厘沲聚硅氧烷流體 0-15將組分混合、過45目美國篩并填充到硬明膠膠囊中。下文顯示了已經(jīng)制備的雷洛昔芬具體膠囊制劑的實例制劑2雷洛昔芬膠囊組分 量(毫克/膠囊)雷洛昔芬1淀粉，NF 112可流動的粉狀淀粉225.3350厘沲聚硅氧烷流體 1.7制劑3雷洛昔芬膠囊組分 量(毫克/膠囊)雷洛昔芬5淀粉，NF 108可流動的粉狀淀粉225.3350厘沲聚硅氧烷流體 1.7制劑4雷洛昔芬膠囊組分 量(毫克/膠囊)雷洛昔芬 10淀粉，NF 103可流動的粉狀淀粉 225.3350厘沲聚硅氧烷流體 1.7制劑5雷洛昔芬膠囊組分 量(毫克/膠囊)雷洛昔芬 50淀粉，NF 150可流動的粉狀淀粉 397350厘沲聚硅氧烷流體 3.0上述具體制劑可隨各種合理因素的變化而改變。使用下列組分來制備片劑制劑6片劑組分量(毫克/片)活性組分 0.1-1000微晶纖維素 0-650二氧化硅，烘制的 0-650硬脂酸 0-15將組分混合并壓制成片。另外，如下制得含有0.1-1000毫克活性成分的片劑制劑7片劑組分 量(毫克/片)活性成分 0.1-1000淀粉 45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(10％的水 4溶液)羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1將活性成分、淀粉和纖維素過45目美國篩并徹底混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，然后過14目美國篩。在50-60℃溫度下干燥所制得的顆粒并過18目美國篩。然后將預(yù)先過60目美國篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石加到顆粒中，混合后在壓片機(jī)上壓制成片。
如下制備每5毫升劑量含有0.1-1000毫克藥物的懸浮液制劑8懸浮液組分 量(毫克/5毫升)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液 0.10ml香料 適量色素 適量純水到5ml將藥物過45目美國篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成均勻的糊劑。用一些水稀釋苯甲酸溶液、香料和色素并在攪拌下加入糊劑中。然后加入足量的水以達(dá)到所需體積。內(nèi)皮細(xì)胞PAI-1測定用每孔5×104人內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)制備96孔組織培養(yǎng)板，所述細(xì)胞存在于補(bǔ)充有2％FBS的Clonetics’內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基(EGM)中。在37℃溫度下培養(yǎng)過夜后，用有或沒有化合物I(其中R1和R2為羥基且R2為1-吡咯烷基)和有或沒有1nMIL-1-β的無血清培養(yǎng)基(DMEM/F-12介質(zhì)，20mM-HEPES，pH7.5，50μg/ml慶大霉素，1μg/ml人鐵傳遞蛋白和1μg/ml牛胰島素)代替所述培養(yǎng)基。在37℃溫度下培養(yǎng)過夜后，使用Imubind Plasma PAI-1 ELISA(AmericanDiagnostic Inc.#822/1S)測定培養(yǎng)基樣品分泌的PAI-1。結(jié)果用化合物1處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，同時用IL-1誘導(dǎo)PAI-1。在用從商業(yè)供應(yīng)商(Clonetics)獲得的某些批細(xì)胞進(jìn)行的初期實驗中，我們發(fā)現(xiàn)不是所有批的細(xì)胞都對17-β雌二醇有反應(yīng)，因此不能用于化合物1對PAI-1分泌影響的測定實驗中。如表1所示，使用雌激素-反應(yīng)曲線，我們觀察到化合物1明顯降低0.5nM濃度的IL-1對PAI-1的誘導(dǎo)作用。如表2所示，使用不同批的雌激素反應(yīng)細(xì)胞，化合物1以濃度依賴性方式抑制IL-1誘導(dǎo)的分泌作用。這些數(shù)據(jù)表明化合物1是自激活的內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)PAI-1的非常強(qiáng)的抑制劑并且因增強(qiáng)溶解血纖維蛋白的能力而會產(chǎn)生心臟保護(hù)作用，即減少心血管疾病的發(fā)生。而且化合物1減少PAI-1的積極效果可在與濃度升高有關(guān)的疾病中作為急救藥來使用。
表1 化合物1對人內(nèi)皮細(xì)胞分泌PAI-1的作用處理方式PAI-1濃度(ng/ml)平均值+/-SE，n＝4無IL-1的對照 328+/-46IL-1 735+/-11IL-1和0.5nM化合物1521+/-52表2 化合物1對人內(nèi)皮細(xì)胞分泌PAI-1作用的濃度反應(yīng)處理方式(M) PAI-1濃度(％抑制率)5×10-9M化合物182+/-175×10-10M化合物1 65+/-85×10-11M化合物1 48+/-115×10-12M化合物1 22+/-45×10-13M化合物1 -1+/-75×10-14M化合物1 0
權(quán)利要求
1.一種抑制血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑1的方法，該方法包括給予需要進(jìn)行抑制的人有效量的式I化合物或其可藥用鹽或溶劑化物
其中R1和R3獨立地為氫、-CH3、-CO-(C1-C6烷基)或-CO-Ar，其中Ar是取代或未取代的苯基；R2選自1-吡咯烷基、六亞甲基亞胺基和哌啶子基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物為其鹽酸鹽。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物為
或其鹽酸鹽。
全文摘要
抑制血纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑1的方法,該方法包括給予需要進(jìn)行抑制的人有效量的式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或溶劑化物,其中R
文檔編號A61K31/55GK1199337SQ96197511
公開日1998年11月18日 申請日期1996年10月7日 優(yōu)先權(quán)日1995年10月10日
發(fā)明者D·T·貝爾克, B·W·格林內(nèi)爾, M·A·里查德森 申請人:伊萊利利公司