專利名稱：：雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑及制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及蛋白和氨基酸非活體生物制劑及生產(chǎn)方法。雞馬立克氏病(MareksdiseaseVirusofchickens，MD)，是雞的一種傳染性腫瘤病，以淋巴組織的增生和腫瘤形成為物征，是馬立克氏病皰疹病毒所引起的。該病對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害較大，經(jīng)濟(jì)損失巨大。預(yù)防該病發(fā)生的最佳方法是進(jìn)行疫苗接種免疫。目前國(guó)內(nèi)外仍以火雞皰疹病毒(Herpesvirusofturkey，HVT)凍干疫苗預(yù)防MD應(yīng)用最為廣泛。HVT疫苗在該病的免疫中起到了不可估量的作用。但是HVT凍干疫苗在接種稀釋病毒的同時(shí)，由于環(huán)境溫差變化較大，疫苗脆弱，對(duì)溫度的耐受力很差，往往使大量的病毒抗原失去活力。據(jù)我們的研究測(cè)定在HVT凍干疫苗于28-29℃時(shí)稀釋1小時(shí)后病毒抗原丟失53.4％。因此，致使疫苗病毒含量下降。由于抗原量的不足嚴(yán)重影響了HVT疫苗免疫應(yīng)答反應(yīng)，使得HVT的疫苗免疫效果不夠確切?？墒菄?guó)內(nèi)外專利文獻(xiàn)中可見(jiàn)的都是關(guān)于活疫苗的制備如中國(guó)專利CN1006208″制備活的純化的MARK氏病疫苗的方法″、CN1052896″重組火雞皰疹病毒及其衍生物的活載體疫苗″、意大利專利″雞馬立克氏病免疫疫苗″(IT1209492VaaainforImmunisiationofChickensagainstMAREKSDisease)、美國(guó)專利″用于雞免疫馬立克氏病的活病毒疫苗的制備(US4160024Prodn.ofLiveVirusVaccine-ForImmunisingCHickensagainstMAREKSDisease)。國(guó)內(nèi)外關(guān)于免疫增強(qiáng)劑都未見(jiàn)報(bào)道。廣告報(bào)道美國(guó)蘇威公司把乙酰甘露聚糖與馬立克氏病疫苗合用，并獲產(chǎn)品證書。本發(fā)明的目的是為提高疫苗自身免疫抗原含量和增強(qiáng)雞的機(jī)體T、B淋巴細(xì)胞免疫功能，提供一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑及制備工藝。一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑，采用蛋白及氨基酸物質(zhì)，其特征是成分配比為牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨5-10g氯化鈉5g脫脂牛奶500-1000ml蔗糖25-50g犢牛血清500-1000ml左旋咪唑50-100mg一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑的制備方法，是取新鮮去脂牛肉搗碎成肉泥狀，水煮沸后精提得溶液1000ml，放置至室溫；蛋白胨、氯化鈉、脫脂牛奶和蔗糖分別加入待全部溶解后，經(jīng)高壓滅菌處理；犢牛血清和左旋咪唑經(jīng)過(guò)濾除菌處理，按上述各組分的比例配料混勻、分裝每瓶2-3ml，凍干為成品。表1免疫增強(qiáng)劑與SPG對(duì)HVT蝕斑保護(hù)率試驗(yàn)結(jié)果</tables>上表結(jié)果表明，在不同溫度條件下，I、II組加增強(qiáng)劑比不加增強(qiáng)劑的蝕斑保護(hù)率分別提高了31.8％和21.2％，證明免疫增強(qiáng)劑能顯著提高HVT的保護(hù)率，減少了疫苗在稀釋過(guò)程中病毒抗原的丟失，提高了疫苗的使用效果。表2該免疫增強(qiáng)劑安全試驗(yàn)結(jié)果</tables>試驗(yàn)結(jié)果表明，該增強(qiáng)劑注射機(jī)體后無(wú)不良反應(yīng)，安全可靠。雞馬立克氏病免疫增強(qiáng)劑使用效果觀察某大型集約化養(yǎng)雞場(chǎng)在1995-96年間應(yīng)用該免疫增強(qiáng)劑與HVT凍干苗合用(2000PFU/羽)共免疫101,700只；按常規(guī)用苗方法免疫國(guó)產(chǎn)HVT450,000只；國(guó)產(chǎn)進(jìn)口HVT免疫212,000只，雞群免疫后觀察到200日齡，在此期間死雞逐剖檢，按肉眼病變結(jié)合瓊擴(kuò)試驗(yàn)，計(jì)算MD發(fā)病率。表3免疫增強(qiáng)劑+HVT與HVT免疫效果比較</tables>表中結(jié)果證明，單一使用HVT凍干苗，無(wú)論是國(guó)產(chǎn)的還是進(jìn)口的，其MD的發(fā)病率平均在1.35％，而用增強(qiáng)劑+HVT凍干苗使MD的發(fā)病率降至0.07％，說(shuō)明了增強(qiáng)劑確實(shí)顯著提高了HVT苗的免疫效果，降低了MD的發(fā)病率。該疫苗增強(qiáng)劑的顯著優(yōu)點(diǎn)是1、本免疫增強(qiáng)劑與HVT疫苗聯(lián)合使用，在22-29℃以上條件下稀釋1小時(shí)后病毒抗原含量減少損失為30％以上，超到顯著提高對(duì)HV的保護(hù)率和HVT的活動(dòng)作用。2、免疫增強(qiáng)劑與HVT疫苗聯(lián)合使用，能使雞或家禽的機(jī)體T、B淋巴細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)，有效地控制MD的發(fā)生。3、將本增強(qiáng)劑分別與新城疫活毒疫苗、法氏囊活疫苗、雞傳染性支氣管炎活毒疫苗等家禽活毒疫苗配合使用，其效果與同HVT疫苗聯(lián)合使用的效果相同。本發(fā)明解決和彌補(bǔ)了目前HVT疫苗免疫效果欠佳的不足，為養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展提供高效低耗的保障，創(chuàng)造了良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。實(shí)施例一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑，采用蛋白及氨基酸物質(zhì)，其特征是成分配比為配方1牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨10g氯化鈉5g脫脂牛奶1000ml蔗糖25g犢牛血清500ml左旋咪唑50mg配方2牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨5g氯化鈉5g脫脂牛奶500ml蔗糖50g犢牛血清500ml左旋咪唑60mg配方3牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨8g氯化鈉5g脫脂牛奶800ml蔗糖50g犢牛血清1000ml左旋咪唑80mg配方4牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨10g氯化鈉5g脫脂奶粉100g蔗糖25-50g0.1％的牛血清白蛋白1000ml左旋咪唑50-100mg一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征是取新鮮去脂牛肉搗碎成肉泥狀，水煮沸后精提得溶液1000ml，放置至室溫；將蛋白胨、氯化鈉、脫脂牛奶和蔗糖分別經(jīng)高壓滅菌處理；犢牛血清和左旋咪唑經(jīng)過(guò)濾除菌處理，按上述各組分的比例配料混勻、分裝每瓶2-3ml，凍干為成品。使用方法用本品增強(qiáng)劑一瓶，2-3ml，每瓶500羽份，與雞馬立克氏病疫苗500-1000羽份配用。將增強(qiáng)劑啟瓶后，在室溫或在22-29℃條件下，放入在4℃保存的SPG稀釋液中混勻，再加入疫苗，混勻，按規(guī)定羽份注射。所配制的藥劑應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)用完。權(quán)利要求1.一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑，采用蛋白及氨基酸物質(zhì)，其特征是成分配比為牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨5-10g氯化鈉5g脫脂牛奶500-1000ml蔗糖25-50g犢牛血清500-1000ml左旋咪唑50-100mg2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑，其特征是成分配比還可以為牛肉精提物溶液1000ml蛋白胨10g氯化鈉5g脫脂奶粉100g蔗糖25-50g0.1％的牛血清白蛋白1000ml左旋咪唑50-100mg3.一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑的制備工藝，其特征是取新鮮去脂牛肉搗碎成肉泥狀，水煮沸后精提得溶液1000ml，放置至室溫；將蛋白胨、氯化鈉、脫脂牛奶和蔗糖分別加入后待全部溶解，經(jīng)高壓滅菌處理；犢牛血清和左旋咪唑經(jīng)過(guò)濾除菌處理，按上述各組分的比例配料混勻、分裝每瓶2-3ml，凍干為成品。全文摘要一種雞馬立克氏病疫苗免疫增強(qiáng)劑及制備方法,屬于生物制劑,其特征是增強(qiáng)劑由牛肉精提液、牛犢血清、牛奶等蛋白和氨基酸類物質(zhì),加左旋咪唑按比例配;制備方法:取鮮去脂牛肉搗碎,水煮沸后得精提液;將蛋白胨、氯化鈉、脫脂牛奶和蔗糖分別加入待全部溶解后經(jīng)高壓滅菌處理犢牛血清和左旋咪唑經(jīng)過(guò)濾除菌處理,按比例配料混勻、分裝每瓶2—3ml,凍干為成品。本品既是疫苗的載體又能為其提供充足營(yíng)養(yǎng),使之提高接種溫差變化時(shí)的病毒抗原含量達(dá)30%以上,創(chuàng)造了顯著的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。文檔編號(hào)A61K47/42GK1176139SQ9711137公開日1998年3月18日申請(qǐng)日期1997年6月10日優(yōu)先權(quán)日1997年6月10日發(fā)明者衛(wèi)廣森,張萬(wàn)林申請(qǐng)人:衛(wèi)廣森,張萬(wàn)林