專利名稱：應(yīng)用PPARα或PPARγ拮抗劑治療X綜合征的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的治療方法，尤其涉及治療X綜合征的方法及用于該方法中的一些化合物。
眾所周知，過氧化物酶體增生劑激活的受體(在下文中用PPARγ表示)是核受體超家族中的成員，它包括甾體受體、甲狀腺受體和視黃醛衍生物激素受體(Evans,Science 240,889-895,(1988))。從Chawla等的報道中也可知道PPARγ最初在脂細胞分化過程中被表達(Endocrinology 135,798-800,1994)。
Spiegelman等在細胞學雜志(Vol 83,803-812,1995)中報道調(diào)整PPARγ活性的信號在調(diào)節(jié)能量的體內(nèi)平衡方面起重要作用。他們得出結(jié)論(同上，810頁)“對有效的PPARγ激動劑和拮抗劑的篩選代表了以開發(fā)新的分別治療NIDDM和肥胖癥的治療藥物為目的的一種必然的和可能迅速發(fā)展的趨勢”。
眾所周知，過氧化物酶體增生劑激活的受體(在下文用PPARα表示)的α異構(gòu)體作用是促進在嚙齒動物肝臟中的過氧化物酶體增生，導(dǎo)致增加該器官對脂肪的氧化作用(keller和Wahli:TrenolsEndocrin Metab 1993；4:291-296)。降血脂藥物具有激發(fā)PPARα的能力，其結(jié)果為刺激過氧化物酶體增生及隨后的脂肪酸氧化可以解釋在血漿中脂肪酸的還原作用(Macdonald和Lane:Current Biology Vol5,618-621頁(1995))。
X綜合征是具有以下特征的綜合征初始的胰島素抑制狀態(tài)、引起高胰島素血癥、脂血紊亂和葡萄糖耐受不良，它可以加重非胰島素依賴型糖尿病(Ⅱ型糖尿病)，特征為高血糖和進一步發(fā)展為糖尿病并發(fā)癥。
我們現(xiàn)在認為在PPARγ降高血糖的藥物中包括PPARα作用，由于提高的降血脂作用，將產(chǎn)生對X綜合征具有可能的、增強的治療作用的藥劑。
國際專利申請?zhí)朠CT/EP 95/03038公開了一些式(A)化合物
或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物，其中Ra代表2-苯并噁唑基或2-吡啶基和Rb代表CH2OCH3或CF3。
式(A)的化合物據(jù)報道在以下方面具有潛在的作用高血糖尤其Ⅱ型糖尿病中的高血糖、高血脂、高血壓、心血管疾病，尤其動脈粥樣硬化的治療和/或預(yù)防和腎病的治療和/或預(yù)防，特別是與Ⅱ型糖尿病的發(fā)展有關(guān)的腎疾病，包括糖尿病性腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化癥、腎病綜合征、高血壓性腎硬化和晚期腎病和對微量蛋白尿向蛋白尿進展的預(yù)防、逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或阻滯作用。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式(A)化合物顯示出對PPARα和PPARγ的激動劑活性，除了可以特別有效地治療和/或預(yù)防高血糖外，現(xiàn)在認為式(A)化合物也可以最有效地治療和/或預(yù)防前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征及其導(dǎo)致的并發(fā)癥。因而，認為它們可以用于治療和/或預(yù)防抗胰島素性、糖尿病、脂血紊亂、動脈粥樣硬化、高血壓、心血管疾病和肥胖癥。
因此，首先本發(fā)明提供治療和/或預(yù)防人類或非人類哺乳動物X綜合癥的方法，該方法包括給予需要此治療的人類或非人類哺乳動物有效、非毒性和藥學上有效量的一種PPARα和PPARγ激動劑或其藥學上可接受的衍生物。
這樣，本發(fā)明的一個方面是對X綜合癥的治療。
本發(fā)明的另一個方面是對X綜合癥的預(yù)防。
特別是提供對高血糖的治療和/或預(yù)防的方法。
尤其提供治療前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征及其導(dǎo)致的并發(fā)癥的方法。
前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征包括血胰島素過多癥和葡萄糖耐受不良。
其次，本發(fā)明提供治療和/或預(yù)防人類或非人類哺乳動物X綜合癥，包括高血糖和/或前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征及其導(dǎo)致的并發(fā)癥的方法，該方法包括給予人類或非人類哺乳動物有效、無毒和藥學上有效劑量的PPARα和PPARγ或其藥學上可接受的衍生物；前提為所提供的方法不包括給予(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，以用于治療和/或預(yù)防高血糖尤其Ⅱ型糖尿病中的高血糖、高血脂、高血壓、心血管疾病尤其動脈粥樣硬化及腎病的治療和/或預(yù)防尤其與Ⅱ型糖尿病的發(fā)展有關(guān)的腎疾病包括糖尿病性腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化癥、腎病綜合征、高血壓性腎硬化、晚期腎病和對微量蛋白尿向蛋白尿進展的預(yù)防、逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或阻滯作用。
可以理解，優(yōu)選形式的PPARα和PPARγ激動劑為單一化合物(這個化合物在此稱作“PPARα和PPARγ激動劑”)，但是，以PPARα激動劑化合物與PPARγ激動劑化合物的結(jié)合物(combination)提供的PPARα和PPARγ的激動劑在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
一個結(jié)合的PPARα和PPARγ激動劑是式(Ⅰ)化合物
或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物，其中R0代表2-苯并噁唑基或2-吡啶基和R1代表CH2OCH3或CF3。
優(yōu)選，R0代表2-苯并噁唑基。
R1適合代表CH2OCH3。
優(yōu)選，R1代表CF3。
式(Ⅰ)化合物和其藥學上可接受的鹽可能處于幾個互變異構(gòu)形式之一，無論是以個別的互變異構(gòu)體形式或其混合物形式均包括在本發(fā)明之內(nèi)。
藥學上可接受的衍生物包括藥學上可接受的鹽和溶劑化物。
合適的藥學上可接受的鹽包括羧酸鹽和酸加成的鹽。
合適的藥學上可接受的羧酸鹽包括金屬鹽如鋁鹽，堿金屬鹽如鋰、鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣或鎂和銨或取代的銨鹽，如低級烷基胺化合物像三乙胺、羥基烷基胺如2-羥基乙胺、雙-(2-羥基乙基)胺或三-(2-羥基乙基)胺，環(huán)烷基胺如二環(huán)己基胺的銨鹽，或與普魯卡因、二芐基哌啶、N-芐基-β-苯乙胺、脫氫松香胺、N,N’-雙脫氫松香胺、葡糖胺、N-甲基葡糖胺或吡啶型堿如吡啶、可力丁、奎寧或喹啉的銨鹽。
合適的酸加成的鹽包括藥學上可接受的無機鹽如硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽、鹽酸鹽和氫溴酸鹽以及可能的藥學上可接受的有機酸加成鹽像醋酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、甲磺酸鹽、α-氧代戊二酸鹽和α-甘油磷酸鹽。
合適的藥學上可接受的溶劑化物包括水合物。
按照常規(guī)的方法可以制備和分離藥學上可接受的衍生物，如式(Ⅰ)化合物的鹽和/或溶劑化物，例如用甲醇中的甲醇鈉可以制備鈉鹽。
通過水解式(Ⅱ)化合物，可以制備式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的水合物
其中R0和R1是如式(Ⅰ)所定義的基團及L1代表可水解的基團；及其后若需要，制備式(Ⅰ)化合物的藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物。
合適的可水解基團L1為式(a)的基團或其差向異構(gòu)體
合適的可水解基團L1為Evans手性助劑，例如一個式(b)基團或其差向異構(gòu)體
合適的可水解基團L1為C1-6烷氧基。
式(Ⅱ)化合物的水解在合適水解選擇的具體L1基團的條件下進行，例如當L1為式(a)基團或C1-6烷氧基時，該水解反應(yīng)在適合酸性條件下進行，如用稀硫酸，在水/二噁烷混合物如1∶1混合物中，在提供形成所需產(chǎn)物的合適速度的任何溫度下，一般是在較高的溫度如在50℃到120℃范圍內(nèi)，例如90℃方便地進行；或者當L1為式(b)基團時，水解一般用過氧化氫鋰在含水的溶劑如含水的四氫呋喃中，在提供形成所需產(chǎn)物的合適速度的任何溫度下，一般在一較低溫度下如在-10℃到0℃范圍內(nèi)，例如0℃進行。或者，當L1為式(b)基團時，水解可受堿性的影響，如用氫氧化鈉水溶液，在適當?shù)娜軇┤绾臍溥秽?，通常在室溫下進行。
式(Ⅱ)化合物，其中L1為以上定義的式(a)或(b)的一部分，可以由式(Ⅲ)化合物制備
其中R0和R1是如式(Ⅰ)所定義及L2代表離去基團；(ⅰ)對于其中L1為上述式(a)的一部分的式(Ⅱ)化合物而言，通過與(S)-苯基甘氨醇(glycinol)反應(yīng)；或者(ⅱ)對于其中L1為上述式(b)的一部分的式(Ⅱ)化合物而言，通過與(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮反應(yīng)，優(yōu)選其活性形式；其后從產(chǎn)生的非對映異構(gòu)體混合物中分離出所需要的異構(gòu)體。
合適的離去基團L2為鹵原子，例如氯原子。
式(Ⅲ)化合物和(S)-苯基甘氨醇之間的反應(yīng)可以在常規(guī)酰胺化作用條件下進行，例如在惰性溶劑如二氯甲烷中，在提供形成所需產(chǎn)物的合適速度的溫度下，適合在室溫下，優(yōu)選在堿例如三乙胺的存在下進行。
(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮的合適的活化形式為一種鹽的形式，例如一種堿金屬鹽形式，優(yōu)選鋰鹽。
(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮的活化形式可以通過任何適合的常規(guī)方法制備。因此，當該活化形式為鋰鹽時，它可以通過用適合由正-丁基鋰提供的鋰離子源，在堿存在下，在對質(zhì)子惰性的溶劑如四氫呋喃中，通常在低溫下，如在-78℃到0℃范圍內(nèi)處理(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮來制備。
在式(Ⅲ)化合物和(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮的活化形式之間的反應(yīng)可以在對質(zhì)子惰性的溶劑如四氫呋喃中，在提供形成所需產(chǎn)物的合適速度的溫度下，方便地使所述反應(yīng)混合物由-78℃溫熱至0℃而進行。
優(yōu)選制備(S)-4-benxyl噁唑烷-2-酮的活化形式，然后就地與式(Ⅲ)化合物反應(yīng)。
式(Ⅲ)化合物可以通過水解式(Ⅳ)化合物的羧酸酯COOR2制得
其中R0和R1為如式(Ⅰ)定義的基團及R2代表烷基，其后將所形成的羧酸基轉(zhuǎn)變成COL2的一部分。
合適的烷基R2為C1-6烷基，尤其甲基。
羧酸酯的水解可以受使用任何常規(guī)的水解劑如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉的影響。
式(Ⅳ)化合物的水解可以在任何合適的溶劑，如甲醇/水混合物，通常為1∶1的混合物中，在可提供制得所需產(chǎn)物的合適速度的溫度下，適合用較高的溫度并且通常在溶劑的回流溫度下進行。
將羧酸基轉(zhuǎn)變成COL2部分可以使用任何適當?shù)某Ｒ?guī)步驟進行，取決于選擇的L2基團的具體的性質(zhì)，因此當L2為鹵素時，合適的步驟是用草酰鹵處理羧酸，例如當L2為氯時用草酰氯。
羧酸基轉(zhuǎn)變?yōu)镃OL2部分的反應(yīng)條件受L2的特性和所選擇的L2源支配，例如當L2為鹵素時，L2源是草酰氯，然后所述反應(yīng)在惰性溶劑如二氯甲烷或苯中，在提供形成所需產(chǎn)物的合適速度的溫度下，合適在室溫或在高溫例如所述溶劑的回流溫度下進行。
可以理解式(Ⅱ)化合物(其中L1為上述(a)和(b)部分定義的差向異構(gòu)體)的制備和分離及其后水解作用得到式(Ⅰ)化合物可以通過使用上述的式(Ⅱ)化合物(其中L1代表上述(a)或(b)部分)的制備、分離和水解的類似方法實現(xiàn)。
式(Ⅱ)化合物(其中L1為式(b)的一部分)也可以通過式(Ⅴ)化合物的去羥基化作用得到
其中R0和R1為如式(Ⅰ)定義的基團，X為上述定義的式(b)的一部分。
式(Ⅴ)化合物的去羥基化作用可以通過用三烷基硅烷，如三乙基硅烷，優(yōu)選在三氟乙酸存在下和方便地使用三氟乙酸作為溶劑，在提供形成所述產(chǎn)物的合適速度的任何溫度下，例如從0℃到室溫的溫度范圍內(nèi)處理方便地進行。
可以理解，通過式(Ⅴ)化合物(其中立體中心所帶的羥基被差向異構(gòu)化)的去羥基化作用也可以得到式(Ⅱ)化合物(其中L1為式(b)的一部分)。
式(Ⅴ)化合物可以通過式(ⅥA)化合物與式(ⅥB)化合物反應(yīng)制得
其中R0為如式(Ⅰ)定義的基團，所述式(ⅥB)化合物如下
其中R1為如式(Ⅰ)定義的基團；其后，從生成的非對映體混合物中分離出所需的異構(gòu)體。
適宜在以上提及的反應(yīng)中，式(ⅥB)化合物為活化形式，它優(yōu)選通過用三氟甲磺酸烷基硼，如三氟甲磺酸二丁基硼，優(yōu)選在胺堿如三乙胺存在下處理式(ⅥB)化合物而得到。
式(ⅥB)化合物的活化形式可以依據(jù)選擇的活化形式的特性，通過適當?shù)某Ｒ?guī)方法制得，例如使式(ⅥB)化合物與三氟甲磺酸二丁基硼和三乙基胺，在惰性溶劑如二氯甲烷中，在-78℃到0℃溫度范圍內(nèi)進行反應(yīng)。
式(ⅥA)和(ⅥB)化合物之間的反應(yīng)可以在惰性溶劑如二氯甲烷中，在提供形成所需產(chǎn)物的合適速度的溫度下，方便地通過使所述反應(yīng)混合物由-78℃緩慢溫熱至0℃而進行。
優(yōu)選先制得式(ⅥB)化合物的活化形式，然后就地與式(ⅥA)化合物反應(yīng)。
對于其中R0代表2-苯并噁唑基的式(Ⅰ)化合物而言，合適的式(ⅥA)化合物是4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯甲醛。
從非對映體混合物中分離出任何所需的單一異構(gòu)體的適合的方法是色譜法，例如制備型高壓液相色譜法或硅膠柱色譜法。
制備式(Ⅱ)化合物(其中L1為C1-6烷氧基)的一種方便的方法為式(Ⅱ)化合物(其中L1為式(b)中的一部分)的堿性醇解。
一種合適的堿為堿金屬醇鹽，例如當L1為甲氧基時，用甲醇中的甲醇鈉處理式(Ⅱ)化合物(其中L1為(b)中的一部分)。
式(Ⅰ)化合物也可以通過拆分式(Ⅶ)化合物的外消旋化合物制備
其中R0和R1如式(Ⅰ)所定義；并且其后如果需要，可以制備式(Ⅰ)化合物的藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物。
式(Ⅶ)化合物的拆分可以用已知的拆分步驟進行，例如通過使式(Ⅶ)化合物與一種拆分試劑，如一種光學活性的酸或堿反應(yīng)，得到一種非對映體鹽的混合物，該混合物隨后通過分級結(jié)晶分離并且其后式(Ⅰ)化合物可以利用常規(guī)的方法如水解作用從分離的非對映體鹽中再生。
可以理解，式(Ⅶ)化合物包括式(Ⅰ)化合物和其它光學異構(gòu)體的摻合成分。式(Ⅶ)化合物或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物形成本發(fā)明另外的一個方面。除了式(Ⅰ)化合物外，式(Ⅶ)化合物的分離的異構(gòu)體或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物也包括在本發(fā)明之中。
用于拆分式(Ⅶ)化合物的合適的酸或堿在“對映體、外消旋體和拆分”(J Jaques等1981年，Wiley Interscience)一書中，尤其在255和256頁作了介紹。影響拆分的合適的方法也被Jaques等公開。
式(Ⅳ)和(ⅥA)化合物，例如4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯甲醛是已知的化合物或者可以利用與制備已知化合物，例如在國際專利申請公開號WO 94/01420中公開的化合物的類似的方法來制備。
式(ⅥB)化合物是已知化合物或者它們可以利用與制備已知化合物，例如在《(有機合成》(68卷，83頁，1990版J.D.White)中公開的化合物的類似的方法或者另外的類似方法，并與制備酰氯的常規(guī)方法相結(jié)合來制備。
可以理解，根據(jù)常規(guī)的化學實踐，在任何上述的反應(yīng)中，可以將作用物中的任何活性基團加以保護。在任何上述的反應(yīng)中的合適的保護基團是那些在本領(lǐng)域中常常用到的。這些保護基團的形成和脫去的方法是適合于所述分子保護的常用方法。
可以理解，上述式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物的制備是一個立體選擇性過程并且式(Ⅰ)化合物是單一的立體異構(gòu)體。有利的是式(Ⅰ)化合物以與低于50％(w/w)的它的外消旋異構(gòu)體混合物的形式存在，即當它大于50％旋光純度時，它適合為80-100％，并且優(yōu)選90-100％純度，如90-95％，最優(yōu)選95-100％，例如95％、96％、97％、98％、99％或99.9％旋光純度。
優(yōu)選式(Ⅰ)化合物或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物是以旋光純的形式存在。
化合物的絕對立體化學可用通常的方法如X衍射結(jié)晶學方法確定。
當PPARα和PPARγ激動劑通過一個PPARα激動劑化合物和一個PPARγ激動劑化合物結(jié)合提供時，合適的PPARγ激動劑化合物選自EP 0306228和WO 94/05659，這些內(nèi)容結(jié)合到本發(fā)明中作為參考。
合適、有利和優(yōu)選的PPARγ激動劑是那些在EP 0306228和WO94/05659中公開的合適、有利和優(yōu)選的化合物。
最優(yōu)選的來自EP 0306228和WO 94/05659的PPARγ激動劑為5-[4-[2-(N-甲基-N-(2-吡啶基)氨基)乙氧基]芐基]噻唑烷-2,4-二酮或其互變異構(gòu)形式和/或其藥學上可接受的鹽，尤其是其馬來酸鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物。
另外的PPARγ激動劑包括在歐洲專利申請中公開的噻唑烷二酮，公開號0008203、0139421、0032128、0428312、0489663、0155845、0257781、0208420、0177353、0319189、0332331、0332332、0528734和0508740；及來自國際專利申請的噻唑烷二酮，公開號92/18501、93/02079、93/22445和來自美國的專利號5104888的噻唑烷二酮；這些公開的內(nèi)容也都包含在這里作為參考。
當PPARα和PPARγ激動劑通過一個PPARα激動劑化合物和一個PPARγ激動劑化合物結(jié)合提供時，合適的PPARα激動劑是苯氧異丁酸酯(fibrates)如氯貝丁酯、環(huán)丙降脂酸、WY 14643和BR-931(Lalwani等，Biochemical and Biophysical Research commun.,Vol.116,388-393,1983)；這些公開的內(nèi)容包含在這里作為參考。所述的苯氧異丁酸酯是用制備已知、類似化合物的已知方法或類似方法制備的已知化合物，例如d’Atri等(J.Med.Chem.,Vol 27,1621-1629,1984)的方法一般用于每一個所述苯氧異丁酸酯的制備。
在包括所述專利申請的上述公開內(nèi)容中所公開的特定實施例也尤其包含在本發(fā)明的方法中。
公開于上述公開的專利說明書，包括其中公開的特定實施例可以按照公開于所述專利說明書中的方法方便地制得例如一個選自EP0306228或WO 94/05659中的PPARγ激動劑可以用在EP 0306228和WO 94/05659中所描述的過程制得。
當用在這里時，“X綜合癥”包括前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥、抗胰島素性、非胰島素依賴性糖尿病、脂血紊亂、高血糖、肥胖癥和與糖尿病有關(guān)的并發(fā)癥；除非專門另加說明外這里提到的方法、治療包括以上所述的方法和治療。
為了避免產(chǎn)生疑慮，本發(fā)明的方法和治療也包括對下列任何一種疾病或其任何合并癥的治療和/或預(yù)防前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征、其導(dǎo)致的并發(fā)癥、抗胰島素性、非胰島素依賴性糖尿病、脂血紊亂、高血糖、肥胖癥和與糖尿病有關(guān)的并發(fā)癥。
與糖尿病有關(guān)的并發(fā)癥包括心血管疾病，尤其是動脈粥樣硬化、視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病和包括糖尿病性腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化癥、腎病綜合征、高血壓性腎硬化和晚期腎病。
當用在這里時，術(shù)語“PPARα激動劑”與過氧化物酶體增生劑激活受體的激動劑有關(guān)，適合于人類受體，與其α-亞型有關(guān)。
當用在這里時，術(shù)語“PPARγ激動劑”與過氧化物酶體增生劑激活受體的激動劑有關(guān)，適合于人類的受體，與其γ-亞型有關(guān)。
PPARα和PPARγ激動劑的活性可以用Lehmann等人在Journal ofBiological Chem.[270,12953-12956(1995)]中公開的方法或相似的方法評定。
在一個方面，PPARα激動劑化合物是這樣的一些化合物，它們激發(fā)由連接合適的報告基因構(gòu)成物如熒光素酶或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)的PPARα配體結(jié)合部位組成的PPARα嵌合受體。這一活性可以用Lehmann等人(出處同上)提出的方法驗證。
在另一個方面，PPARγ激動劑化合物是這樣的一些化合物，它們激發(fā)包含連接合適的報造基因構(gòu)成物如熒光素或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)的PPARγ配體結(jié)合部位的PPARγ嵌合受體。這一活性可以用Lehmann等人在J.Biol.Chem.(出處同上)中的方法驗證。
激動劑可以是蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)。
適宜的激動劑是小分子量、非蛋白質(zhì)的化合物。
檢測具有PPARα和PPARγ激動劑活性化合物的方法也包括在本發(fā)明之內(nèi)。
適宜的檢測方法包括測定(a)PPARα激動劑活性，是通過檢測由連接合適的報告基因構(gòu)成物的PPARα配體結(jié)合部位組成的PPARα嵌合受體的興奮作用進行的；和(b)PPARγ激動劑活性，是通過檢測包含連接合適的報告基因構(gòu)成物例如熒光素或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)的PPARγ配體結(jié)合部位的PPARγ嵌合受體的興奮作用進行的。
適宜的PPARα嵌合受體包括所述配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸，例如融合到gal4酵母轉(zhuǎn)錄因子的第1-147氨基酸(DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域)中的人類PPARα的第281-468氨基酸。
適宜的PPARγ嵌合受體包括所述配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸，例如融合到gal4酵母轉(zhuǎn)錄因子的第1-147氨基酸(DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域)中的人類PPARγ受體的第173-476氨基酸。
適宜的報告基因構(gòu)成物是熒光素酶或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)。
適宜的熒光素酶報告基因構(gòu)成物包含位于HEK-293細胞中的gal 4DNA結(jié)合元件。
用于所述檢測方法的方法學正如以上所描述的。
本發(fā)明也提供用于X綜合癥的治療和/或預(yù)防的PPARα和PPARγ激動劑。
具體的治療為高血糖的預(yù)防。
具體的治療為前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥的治療。
高血糖和/或前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥的治療和/或預(yù)防也包括在本發(fā)明中；前提為該治療不包括給予(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，以便治療和/或預(yù)防以下疾病高血糖，尤其是在Ⅱ型糖尿病中的高血糖、高脂血、高血壓、心血管疾病，尤其動脈粥樣硬化和腎病的治療和/或預(yù)防，尤其與Ⅱ型糖尿病發(fā)展有關(guān)的腎病包括糖尿病性腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化癥、腎病綜合征、高血壓性腎硬化和晚期腎病及對微蛋白尿向蛋白尿進展的預(yù)防、逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或阻滯作用。
本發(fā)明也提供一種PPARα和PPARγ激動劑，用于制備治療和/或預(yù)防X綜合征，尤其治療和/或預(yù)防高血糖和/或前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥的藥物；前提為該治療方法不包括給予(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，以便治療和/或預(yù)防以下疾病高血糖，尤其是在Ⅱ型糖尿病中的高血糖、高脂血、高血壓、心血管疾病，尤其動脈粥樣硬化和腎病的治療和/或預(yù)防，尤其與Ⅱ型糖尿病發(fā)展有關(guān)的腎病包括糖尿病性腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化癥、腎病綜合征、高血壓性腎硬化和晚期腎病及對微蛋白尿向蛋白尿進展的預(yù)防、逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或阻滯作用。
認為這是在PPARα和PPARγ上均具有激動劑活性化合物的第一個適應(yīng)證。具有這種雙重活性的其它化合物在X綜合征包括高血糖和前驅(qū)糖尿病抗胰島素綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥的治療和/或預(yù)防方面也具有特殊的用途。
因而，在另一方面，本發(fā)明也提供在PPARα和PPARγ上均有激動劑活性的化合物。
適宜的化合物是獨特的，即不知道它們在PPARα和PPARγ上均有激動劑活性或它們本來就是新的化合物。
在一方面，所述在PPARα和PPARγ上均有激動劑活性的化合物不包括(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸。
本發(fā)明也提供一種用作PPARα和PPARγ激動劑的化合物。
本發(fā)明進一步提供在PPARα和PPARγ上均具有激動劑活性、用作活性治療物質(zhì)的化合物；適宜的前提為所述化合物不包括(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸。
在上述的治療中，給予所述活性化合物本身或優(yōu)選給予也包括藥學上可接受的載體的藥用組合物。
因而，本發(fā)明也提供包含PPARα和PPARγ激動劑和藥學上可接受的載體的藥用組合物；適宜的前提為所述激動劑不包括(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸。
另外，提供治療人類或非人類哺乳動物由需要PPARα和PPARγ所引起癥狀的方法，該方法包括給予有效、藥學上可接受、無毒量的一種PPARα和PPARγ激動劑。
當用在這里時，術(shù)語“藥學上可接受的”包括人類和獸用的化合物、組合物和成分例如術(shù)語“藥學上可接受的鹽”包括一種獸醫(yī)學上可接受的鹽。
如果需要，該組合物可以為帶有書寫或印刷的使用說明的包裝形式。
雖然也可以設(shè)想給予本發(fā)明藥用組合物的其它途徑如注射和透皮吸收，但是通常采用口服給藥。
特別適合口服使用的組合物是單位劑量形式如片劑和膠囊。也可以使用其它固定的單位劑量形式，如小囊(sachets)中的粉末。
按照通常的醫(yī)學實踐，所述載體可以包括稀釋劑、填料、崩解劑、潤濕劑、潤滑劑、著色劑、調(diào)味劑或其它常規(guī)的輔助劑。
典型的載體包括例如微晶纖維素、淀粉、淀粉羥乙酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯聚吡咯烷酮、硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉或蔗糖。
最好將所述組合物按單位劑量形式配制。該單位劑量通常包含活性成分的量在0.1到1000mg范圍內(nèi)，優(yōu)選為0.1到500mg，更優(yōu)選為0.1到250mg。
通常，所述活性成分可以以前述藥用組合物的形式給藥，這構(gòu)成本發(fā)明的一個具體方面的內(nèi)容。
在上述治療方法中，所述活性化合物適合以如上述的劑量給患者服用，日服1到6次，其方式為70kg的成年人每天的總劑量一般是在0.1到6000mg范圍內(nèi)，更優(yōu)選約為1到1500mg，一般約為0.5到10mg。即在1.429×10-3到85.714mg/kg/天范圍內(nèi)，更優(yōu)選約1.429×10-2到21.429mg/kg/天，一般約為7.143×10-3到0.1429mg/kg/天。
當一個化合物依照本發(fā)明使用時，預(yù)期沒有不利的毒理學作用。
本發(fā)明化合物的活性可以用下述的方法證實。以下的制備實例闡明了式(Ⅰ)化合物的制備方法。式(Ⅰ)化合物的制備制備1(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸
將[2S,N(1S)]-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧乙氧基)-N-(2-羥基-1-苯乙基)丙酰胺(1.846g)在1M硫酸(45ml)和二噁烷/水(1∶1,150ml)混合物中的溶液在90℃下加熱56小時，之后加入碳酸氫鈉水溶液將反應(yīng)混合物的pH值調(diào)到pH為3。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，有機層萃取物用水、鹽水洗，用MgSO4干燥，蒸發(fā)得到一油狀物。用硅膠色譜法純化，用1-5％梯度的甲醇在二氯甲烷中的溶液作為洗脫劑洗脫得到88％e.e.(HPLC)的泡沫狀物。使上述產(chǎn)物與(S)-α-甲基芐胺在丙酮中反應(yīng)，產(chǎn)生的鹽在溶于水中之前，用乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶幾次，用稀鹽酸酸化后，再用乙酸乙酯萃取，萃取物用MgSO4干燥。蒸發(fā)乙酸乙酯溶液得到富集的標題化合物的對映體；[α]25D-28°(c=0.625,CHCl3)；e.e 94％(通過HPLC)；[實測值M+414.1791。C22H26N2O6計算值M+414.1791]；1HNMR光譜與例5描述的完全相同。制備2(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，通過酰胺的水解制備
將[2S,N(1S)]-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)丙酰胺(來自步驟3)通過與制備1中描述的類似的步驟水解。通過硅膠色譜法純化，用一梯度為0-5％的甲醇在二氯甲烷中的溶液作洗脫劑洗脫，與乙醚-己烷研磨后得到標題化合物，mp 116-7℃；[α]D25-24.6°(c=0.24,CHCl3)；e.e.95％(by HPLC).[實測值C,57.9；H,4.7；N,6.8％；M+438.1403.C21H21F3N2O5計算值C,57.5；H,4.8；N,6.4％；M+438.1403]；δH(DMSO-d6)2.96(2H,m),3.22(3H,s),3.88(2H,m),3.95-4.18(2H,m),4.27(3H,m),6.8-7.37(8H,m)and 12.9(1H,brs，用D2O交換)。制備3(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，通過酰亞胺直接水解制備
將氫氧化鈉水溶液(2.5M,65ml,0.1 63mol,2.3eq)加入攪拌下的[3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酰基]-4-芐基噁唑烷-2-酮(來自步驟10)(42.5g,0.071mol)于HTF(500ml)和水(125ml)溶液中。將該混合物攪拌20分鐘，用水(1L)稀釋該反應(yīng)物并用二氯甲烷(3×700ml)萃取。蒸發(fā)二氯甲烷溶液，殘留物用硅膠色譜法純化，用5％甲醇在二氯甲烷中的溶液作為洗脫劑洗脫得到(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮。原水溶液用稀鹽酸酸化到pH為3.5，之后用二氯甲烷(3×700ml)重新萃取。用MgSO4干燥上述來自酸萃取的二氯甲烷溶液，然后蒸發(fā)得到一固體。將該固體從二氯甲烷-乙醚中重結(jié)晶得到標題化合物，mp 119.5-120.5℃。[α]D25=-31°(c=2.50,CHCl3)；e.e.99.6％(by HPLC)；[實測值C,57.7；H,4.7；N,6.25％；M+(EI)438.1412.C21H21F3N2O5計算值C,57.5；H,4.8；N,6.4％；M+438.1403]；δH(CDCl3)3.05(1H,dd),3.13(1H,dd),3.31(3H,s),3.72(1H,m),3.89(2H,m),4.04-4.14(3H,m),4.21(1H,dd),6.78(2H,d),7.03-7.40(6H,m)and 11.20(1H,br，用D2O交換)；δF(DMSO-d6)=-72.7(3F,t,3JHF9.3 Hz,CF3).制備4(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，通過甲酯的水解制備
將(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸甲酯(1.256g,2.8×10-3mol)、鹽酸水溶液(2.0M,50ml)和二噁烷(50ml)的混合物加熱回流7個小時，冷卻然后真空濃縮。殘留物懸浮于200ml鹽水中并且用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。將合并的乙酸乙酯溶液用MgSO4干燥，然后蒸餾得到一蠟狀固體。將該固體用己烷研磨，過濾然后在65℃真空干燥得到所需的產(chǎn)物，mp 113-5℃。D25=-32°(c=1.02,CHCl3)；e.e.99.4％(by HPLC)；[實測值C,57.25；H,4.8；N,6.3％.C21H21F3N2O5計算值C,57.5；H,4.8；N,6.4％].該產(chǎn)物的1HNMR光譜與例3中所產(chǎn)生的化合物完全一樣。制備5(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酸
將(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酸甲酯以類似于實施例4中所描述的方式水解。將粗的反應(yīng)混合物用硅膠色譜法純化，以5％甲醇在二氯甲烷中的溶液作洗脫劑洗脫得到標題化合物，一膠狀物。D25=-27°(c=0.73,CHCl3)；e.e.99.8％(by HPLC)；[實測值M+(EI)414.1779.C22H26N2O6計算值M+414.1791]；δH(CDCl3)2.90(1H,dd),3.15(1H,dd),3.33(3H,s),3.37(3H,s),3.40-3.70(4H.m),3.93(2H,t),4.05(1H,dd),4.21(2H,t),6.81(2H,d)和6.95-7.40(6H,m).制備6(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酸
將3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酸甲酯(1.08g,Int.Patent Appl.,公開號WO 9401420)和氫氧化鈉(253mg)在甲醇∶水(1∶1,10ml)中的混合物在回流狀態(tài)下加熱2小時。在真空中蒸餾上述反應(yīng)混合物后，殘留物用水稀釋，用2M鹽酸酸化到pH5，然后用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取物用水洗和用MgSO4干燥，然后蒸餾得到一種油狀物的標題化合物，將該化合物用乙醚/己烷研磨結(jié)晶。[實測值C,63.8；H,6.5；N,7.0％M+414.1791.C22H26N2O6計算值C,63.8；H,6.3；N,6.8％；M+414.1791]；δH(CDCl3)2.91(1H,dd),3.15(1H,dd),3.34(3H,s),3.38(3H,s),3.41-3.69(4H,m),3.93(2H,t),4.05(1H,dd),4.21(2H,t),6.80(2H,d)和6.83-7.38(6H m).步驟2制備7(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酰氯
將乙二酰氯(92mg)加入(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酸(100mg)在2ml二氯甲烷溶液中。將上述混合物在室溫下攪拌16小時，然后蒸發(fā)至干得到未進一步純化就可以使用的膠狀標題化合物。制備8[2S,N(1S)]-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)丙酰胺
將(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酰氯溶解在二氯甲烷(2ml)中并加入(S)-2-苯基甘氨醇(33mg)和干燥的三乙胺(37mg)在二氯甲烷(1ml)形成的混合物中。攪拌5分鐘后，加入水，然后用二氯甲烷萃取反應(yīng)混合物。將有機萃取層用水、鹽水洗，MgSO4干燥，然后蒸餾。將殘留物用硅膠色譜法純化，用一梯度為10-50％丙酮在己烷中的溶液作為洗脫劑洗脫，首先得到[2R,N(1S)]-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)丙酰胺，然后得到為泡沫狀的所需要的[2S,N(1S)]-丙酰胺標題化合物。[α]D25-33°(c=1.1,CHCl3)；92.6％d.e.(by HPLC)；[實測值M+533.2526.C30H35N3O5計算值M+533.2526]；δH(CDCl3)2.81(1H,dd),3.07(1H,dd),3.35(3H,s),3.36(3H,s),3.48-3.58(2H,m),3.52-3.62(2H,m),3.71(1H,dd),3.82(1H,dd),3.94(1H,dd),3.93(2H,t),4.22(3H,t),5.05(1H,dt),6.75-7.35(13H,complex),7.54(1H,br，用D2O交換).步驟4制備9(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸
將3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸甲酯(Int.Patent Appl.，公開號WO 9401420)通過與制備5中描述的類似步驟水解得到為固體的標題化合物，mp 116-117℃；[實測值C,57.4；H,4.9；N,6.4％.C21H21F3N2O5計算值C,57.5；H,4.8；N,6.4％]；δH(CDCl3)3.03-3.17(2H,m),3.29(3H,s),3.73-3.83(1H,m),3.85(2H,m),4.02(2H,m),4.04-4.30(2H,m)和6.74-7.40(8H m).步驟5制備10(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酰氯
將乙二酰氯(1.1ml)加入(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸(1.72g)在無水苯(30ml)的溶液中。將上述混合物在回流狀態(tài)下加熱2小時，冷卻，然后蒸干得到一種膠狀的標題化合物，未經(jīng)進一步純化用于下一步反應(yīng)。步驟6制備11[2S,N(1S)]-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)丙酰胺
按照在步驟3中描述的類似步驟，使(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酰氯與(S)-2-苯基甘氨醇反應(yīng)。通過硅膠色譜法用梯度為10-70％乙酸乙酯在已烷中的溶液洗脫，首先得到[2R,N(1S)]-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)丙酰胺，接著得到所需的一種泡沫狀的[2S,N(1S)]-丙酰胺標題化合物；[α]D25+14°(c=0.5,MeOH)；99％d.e.(by HPLC)；[實測值M+557.2136.C29H30F3N3O5計算值M+557.2138]；δH(CDCl3)2.35(1H,br，用D2O交換)，2.91(1H,dd),3.13(1H,dd),3.36(3H,s),3.70-3.87(2H,m),3.84(2H,d),3.95(2H,t),4.12(1H,dd),4.22(2H,t),5.01(1H,m),6.75(2H,d),6.97(1H,br s，用D2O交換)和7.01-7.36(11H，復(fù)雜多峰).制備12(2,2,2-三氟乙氧基)乙酰氯
將溶于無水二氯甲烷(50ml)中的乙二酰氯(20ml,0.23mol,1.15eq)溶液在室溫和攪拌下滴加到(2,2,2-三氟乙氧基)乙酸(Int.Patent Appl.,公開號WO 87/07270,31.6g,0.2mol)和N,N-二甲基甲酰胺(5滴)溶于無水二氯甲烷(400ml)的溶液中。將該混合物再攪拌1小時，然后在回流狀態(tài)下加熱2小時，冷卻并且將大量溶劑蒸餾出(bp40-45℃/760mmHg)。將殘留物轉(zhuǎn)移到克萊森燒瓶中，然后將剩余溶劑和乙二酰氯通過蒸餾除去(bp 45-60℃/760mmHg)。將殘留物減壓蒸餾得到所需的產(chǎn)物，bp 50-55℃/25-32mmHg。δH(CDCl3)4.00(2H,q,3JHF8.3)和4.57(2H,S)。步驟8制備13(4S)-4-芐基-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙?；鵠噁唑烷-2-酮
在氬氣保護下，將(4S)-4-芐基噁唑烷-2-酮(5.21g,0.029mol)溶解于無水THF(60ml)中，然后冷卻到-70℃。將正丁基鋰(18.4ml,1.6M己烷溶液，1.1eq)用10分鐘以上時間加到上述溶液中，將產(chǎn)生的混合物在-70℃攪拌20分鐘。將(2,2,2-三氟乙氧基)乙酰氯(5.19g,1eq)于無水THF(60ml)中的溶液用多于10分鐘時間加入上述反應(yīng)液中，將反應(yīng)混合物在-70℃再攪拌30分鐘，然后升溫到室溫過夜。加入鹽水(20ml)終止反應(yīng)然后在真空下濃縮。將殘留物用鹽水(300ml)稀釋，然后用乙酸乙酯(3×300ml)萃取。將合并的有機物萃取物用MgSO4干燥，蒸餾，然后將殘留物用硅膠色譜法純化，以二氯甲烷作洗脫劑得到一種油狀標題化合物。D25=+48°(c=2.55,CHCl3)；e.e.100％(by HPLC)；[實測值(Cl，氨)MH+318.0934.C14H14NO4F3計算值MH+318.0953]；δH(CDCl3)2.82(1H,dd),3.34(1H,dd),4.02(2H,q,3JHF8.6),4.30(2H,m),4.69(1H,m),4.84(2H,s)and 7.15-7.40(5H,m)；δF(CDCl3)=-74.8(3F,t,3JHF8.6,CF3).步驟9制備1 4[3(2S,3R),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-3-羥基-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮
將(4S)-4-芐基-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)乙酰基]噁唑烷-2-酮(31.7g,0.1mol)在氬氣保護下溶于無水二氯甲烷(300ml)中，然后冷卻到-78℃(溶液內(nèi)部溫度)，用液態(tài)氮/丙酮作冷卻介質(zhì)。將三乙胺(16.72ml,1.2eq)加入上述溶液中，接著用近10分鐘時間慢慢加入三氟甲磺酸二-正丁基硼(Aldrich化學公司，1.0M于二氯甲烷中的溶液，110ml，1.1eq)，以使反應(yīng)溫度保持在低于-70℃。將上述混合物在-78℃下攪拌50分鐘，然后用冰浴代替以前的冷卻浴，在重新冷卻到-78℃之前將反應(yīng)混合物在0℃再攪拌50分鐘。將溶在無水二氯甲烷(220ml)中的4-[2-[N-[(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯甲醛(29.6g,1.0eq)溶液(預(yù)先冷卻到-50℃)用大約12分鐘時間加入到上述反應(yīng)液中，以使反應(yīng)溫度保持在-70℃以下。將產(chǎn)生的混合物在-78℃下攪拌30分鐘，然后沿著線性梯度用多于60分鐘時間將溫度從-78℃升到0℃(升溫速率為～1.3℃分鐘-1)，接著在0℃下進一步攪拌75分鐘。將反應(yīng)混合物倒入由甲醇(500ml)、pH為7的磷酸鹽緩沖液(250ml)和過氧化氫(27.5％(w/v),110ml)組成的一種終止溶液中，然后劇烈攪拌30分鐘。加入4L水，分層，水層用二氯甲烷(3×1L)萃取。將該二氯甲烷溶液與原來自反應(yīng)混合物的二氯甲烷層合并，然后用水(2L)和鹽水(2L)洗滌該有機溶液，用MgSO4干燥，蒸餾得到一泡沫狀物。這個粗反應(yīng)混合物的1HNMR證明是所需的3-羥基丁醛產(chǎn)物(3個非對映體，包含95％的主要非對映體)和開始的原料。將該粗的混合物用硅膠色譜法分離，先用包含15％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液(直至所需的產(chǎn)物開始被洗脫出)，然后提高到50％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液梯度洗脫液，完成所需產(chǎn)物的洗脫。沒有反應(yīng)的亞酰胺和醛從較早的組分中出現(xiàn)，接著是大量的不純產(chǎn)物，然后是標題化合物(包含2種非對映體，然后通過NMR測定比例為97.8:2.2)。[α]D25=+45°(c=2.82,CHCl3).[實測值(EI)M+613.2042.C31H30F3N3O7計算值M+613.2036]；δH(CDCl3，僅記錄主要的非對映體)2.75(1H,dd),2.90(1H,d，用D2O交換)，3.25(1H,dd),3.34(3H,s),3.80-4.00(5H,m),4.07(1H,dd),4.24(2H,t),4.45(1H,m),4.99(1H，明顯的t)，5.48(1H,d),6.85(2H,d)and 6.95-7.40(11H,m)；δF(CDCl3)=-74.7(3F,t,3JHF8.5,CF3).在純化過的產(chǎn)物中，主要的非對映體證明是[3(2S,3S),4S]-非對映體。步驟10制備15[3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-[(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮，通過去羥基化作用制備
將三乙基硅烷(120ml,0.75mol)用5分鐘以上時間加入攪拌下、冰冷的[3(2S,3R),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-3-羥基-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮(46.23g,7.5×10-2mol)在三氟醋酸(650ml)的溶液中。將該混合物在0℃下攪拌1小時，然后在室溫下再攪拌60小時。大量的溶劑和剩余的三乙基硅烷通過旋轉(zhuǎn)蒸餾法蒸出，首先在40mmHg真空度下蒸餾，最后在～5mmHg真空度下蒸餾。將殘留物溶解在二氯甲烷(800ml)和水(800ml)中，再小心加入碳酸氫鈉(～29g)(注意起泡沫！)，期間劇烈攪拌直到水層的pH值為7。分層，水層用二氯甲烷(800ml)萃取。合并的二氯甲烷層用水(600ml)洗滌，用MgSO4干燥，蒸餾。殘留物用熱己烷研磨并過濾收集產(chǎn)生的固體。從乙醚-己烷中重結(jié)晶得到標題化合物，mp 107-109℃，通過1HNMR光譜分析為單一的非對映體。[α]25D=+38°。(c=1.51,CHCl3)；[實測值C,62.1；H,4.9；N,7.2％；M+(EI)597.2089.C31H30N3O6F3計算值C,62.3；H,5.1；N,7.0％；M+597.2087]；δH(CDCl3)2.82(1H,dd),2.96(1H,dd),3.04(1H,dd),3.32(1H,dd),3.34(3H,s),3.70(1H,m),3.88(1H,m),3.94(2H,t),4.12(1H,m),4.18(1H,m),4.25(2H,t),4.57(1H,m),5.34(1H,dd),6.82(2H,d)and 7.00-7.35(11H,m)；δF(CDCl3)=-74.8(3F,t,3JHF8.6,CF3).步驟11制備16[3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮，經(jīng)非對映體的分離制備
在氬氣保護下，將(S)-4-芐基噁唑烷-2-酮(0.291g,1.64×10-3mol)溶于無水THF(10ml)中，然后將形成的溶液冷卻到-70℃。加入n-丁基鋰(1.6M在己烷中，1.03ml,1.64×10-3mol)，在加入(±)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酰氯(通過以上步驟5從0.36g酸制得)在無水THF(15ml)中的溶液以前，將該混合物在-70℃下攪拌10分鐘。在用水(200ml)稀釋和用乙酸乙酯(2×200ml)萃取以前，將反應(yīng)物攪拌并溫熱至室溫過夜。將合并的乙酸乙酯萃取層用水(200ml)和鹽水(200ml)洗滌，用MgSO4干燥，蒸餾得到褐色膠狀物。將該膠狀物用硅膠色譜法分離，用梯度從35％到50％乙酸乙酯在己烷中的溶液做洗脫劑洗脫，首先得到(R,S)-非對映體，隨后得到標題化合物，一種泡沫狀物。該物質(zhì)光譜學證實與通過3-羥基丁醛途徑(步驟10)制得的化合物一致。步驟12制備17(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸甲酯
將甲醇鈉[用氫化鈉(60％于礦物油中的分散液，138mg,3.41×10-3mol)溶于無水甲醇(3.5ml)中制得]溶液加到冰冷及攪拌的[3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-[(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮(1.879g,3.1×10-3mol)的無水甲醇(100ml)的懸浮液中。將上述反應(yīng)混合物在0℃下攪拌共20分鐘，然后通過加入稀鹽酸(2.0M,1.75ml)終止反應(yīng)，并在真空下濃縮。將殘留物懸浮于水(100ml)中，用乙酸乙酯(3×200ml)萃取并用鹽水(500ml)洗合并的乙酸乙酯溶液，用MgSO4干燥，蒸餾。將產(chǎn)生的膠狀物用硅膠色譜法分離，用在二氯甲烷中的4％的乙酸乙酯作為洗脫劑洗脫得到澄清的膠狀產(chǎn)物。D25=-17°(c=1.24，CHCl3)；[實測值(EI)M+452.1561.C22H23N2O5F3計算值M+452.1559]；e.e.100％(by HPLC)；δH(CDCl3)3.02(2H,m),3.34(3H,s),3.65(1H,m),3.72(3H,s),3.94(2H,t),4.00(1H,m),4.13(1H,dd),4.24(2H,t),6.80(2H,d)and 6.96-7.40(6H,m).步驟13制備18(4S)-4-芐基-3-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰基]噁唑烷-2-酮
標題化合物是通過步驟8中描述的類似方法，從2-(2-甲氧基乙氧基)乙酰氯制得。通過硅膠色譜法分離，用梯度為70-80％在己烷中的乙醚溶液作為洗脫劑洗脫得到一膠狀產(chǎn)物。D25=+54°(c=2.70,CHCl3)；[實測值(EI)M+293.1263.C15H19NO5計算值M+293.1264]；δH(CDCl3)2.81(1H,dd),3.33(1H,dd),3.41(3H,s),3.63(2H,t),3.78(2H,t),4.25(2H,m),4.70(1H,m),4.74(1H,d),4.76(1H,d)and 7.10-7.40(5H,m).步驟14制備19[3(2S,3R),4S]-3-[3-[4-[2-[N-[(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-3-羥基-2-(2-甲氧基乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮
標題化合物是通過在步驟9中描述的類似的方法，從(4S)-4-芐基-3-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙?；鵠噁唑烷-2-酮制備的。反應(yīng)混合物粗品通過硅膠色譜法分離，用梯度為15-40％在二氯甲烷中的乙酸乙酯溶液作洗脫劑洗脫得到一種膠狀產(chǎn)物(包括2種非對映體，通過1HNMR分析比例＞99∶1)。[α]D25=+49°(c=1.14,CHCl3).[實測值(FAB,NOBA/Na)MH+590.2472.C32H35N3O8計算值MH+590.2502]；δH(CDCl3，僅主要的非對映體記錄下來)2.71(1H,dd),3.25(1H,dd),3.31(3H,s),3.35(3H,s),3.56(2H,m),3.72(2H,m),3.78(1H,d，用D2O交換)，3.85-4.00(4H,m),4.22(2H,t),4.31(1H,m),4.89(1H,dd),5.42(1H,d),6.83(2H,d)and 6.95-7.40(11H,m)；在純化產(chǎn)物中的主要的非對映體鑒定為[3(2S,3S),4S]-非對映體。步驟15制備20[3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-[(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮
用與步驟10中描述的類似的方法使[3(2S,3R),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-3-羥基-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酰基]-4-芐基噁唑烷-2-酮(0.561 g)與三乙基硅烷反應(yīng)6.25小時。將上述反應(yīng)混合物用水(200ml)和二氯甲烷(200ml)稀釋，然后將固體碳酸氫鈉小心地加入直到水層的pH為6.5為止。分層，水層用二氯甲烷(2×300ml)萃取，然后將合并的二氯甲烷溶液用鹽水(400ml)洗滌，用MgSO4干燥，最后蒸餾。其殘留物通過硅膠色譜法分離，用溶于二氯甲烷的35％乙酸乙酯作洗脫劑洗脫得到一膠狀的標題化合物，通過1HNMR分析為單一的非對映體。D25=+45°(c=1.39,CHCl3)；[實測值M+(EI)573.2473.C32H35N3O7計算值M+573.2475]；δH(CDCl3)2.76(1H,dd),2.94(2H,m),3.30(3H,s),3.33(4H,m),3.40-3.70(4H,m),3.93(2H,t),4.00(1H,dd),4.12(1H,dd),4.22(2H,t),4.52(1H,m),5.31(1H,dd),6.79(2H,d)and 6.90-7.40(11H,m).步驟16制備21(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙酸甲酯
以在步驟12中所描述的類似方式使[3(2S),4S]-3-[3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基乙氧基)丙?；鵠-4-芐基噁唑烷-2-酮與甲醇鈉反應(yīng)。將粗反應(yīng)混合物用硅膠色譜法分離，用在乙醚中的20％異己烷作洗脫劑洗脫得到標題化合物，為一膠狀物。D25=-12°(c=1.26,CHCl3)；[實測值(EI)M+428.1974.C23H28N2O6計算值M+428.1948]；e.e.＞99.8％(by HPLC)；δH(CDCl3)2.95(2H,m),3.29(3H,s),3.34(3H,s),3.35(3H,m),3.69(4H,m),3.93(2H,t),4.05(1H,dd),4.23(2H,t)and 6.75-7.40(8H,m).化合物功效的驗證1)h PPARα和PPARγ的激動劑活性的測定化合物激動劑在人體PPARα和PPARγ中的作用是利用反式激活報告基因檢測法評定的，該試驗以Lehman等人描述的方法為基礎(chǔ)。[(1995)J Biol Chem 270,12953-12956]。
結(jié)果(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲基氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸在h PPARα和PPARγ中的功效
激發(fā)人體PPARα的EC50為2500nM激發(fā)人體PPARγ的EC50為70nM2)化合物對于C57 Bl/Ks J db/db小鼠體中血糖和血脂功效的測定遺傳性糖尿病C57 Bl/Ks J db/db小鼠顯示嚴重的非胰島素依賴性糖尿病形式，其特征在于大約8周齡的小鼠發(fā)展成嚴重的高血糖，隨代償性增加水攝取，平行出現(xiàn)糖尿和尿頻。循環(huán)血清甘油三酯和游離脂肪酸也提高了。
通過與食物混合(粉狀的RM3食物)給予化合物14天，在實驗期間，以適當?shù)拈g隔時間從有意識、非禁食小鼠的尾靜脈抽取血樣測定血糖變化。經(jīng)過14天處理之后，將小鼠通過頸部扭斷法處死并且從切斷的頸靜脈中采取血樣。甘油三酯和非酯化的脂肪酸通過經(jīng)離心后獲得的血清樣來測定。(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸對于糖尿病小鼠血糖的功效
結(jié)果均值±SD(每組n=9-10)。**P＜0.01,***P＜0.001(與對照組相比)。(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸在遺傳性糖尿病小鼠體內(nèi)對血清脂質(zhì)的作用。<
治療14天(以與食物的混合物)以后，取血樣測定參數(shù)。數(shù)值為均值±SD(n=9)。***P＜0.001(與對照組相比)。
權(quán)利要求
1．用于治療和/或預(yù)防人類或非人類哺乳動物X綜合征的一種方法，該方法包括給予需要此治療的人類或非人類哺乳動物有效、非毒性和藥學上有效量的PPARα和PPARγ激動劑或其藥學上可接受的衍生物。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述PPARα和PPARγ激動劑是同一化合物。
3．根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，用于高血糖的治療和/或預(yù)防。
4．根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的方法，用于前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥的治療。
5．用于治療和/或預(yù)防人類或非人類哺乳動物的高血糖和/或前驅(qū)糖尿病抗胰島素性綜合征和其導(dǎo)致的并發(fā)癥的方法，該方法包括給予需要此治療的人類或非人類哺乳動物有效、無毒性和藥學上有效量的PPARα和PPARγ激動劑或其藥學上可接受的衍生物，前提為該方法不包括給予(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2-甲氧基-乙氧基)丙酸或(S)-3-[4-[2-[N-(2-苯并噁唑基)-N-甲氨基]乙氧基]苯基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)丙酸，以用于治療和/預(yù)防高血糖尤其Ⅱ型糖尿病中的高血糖、高血脂、高血壓、心血管疾病尤其動脈粥樣硬化及腎病的治療和/或預(yù)防，尤其與Ⅱ型糖尿病的發(fā)展有關(guān)的腎病包括糖尿病性腎病、腎小球性腎炎、腎小球硬化癥、腎病綜合征、高血壓性腎硬化、晚期腎病和用于對微量蛋白尿向蛋白尿進展的預(yù)防、逆轉(zhuǎn)、穩(wěn)定或阻滯。
6．根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的方法，其中所述PPARα和PPARγ激動劑為式(Ⅰ)化合物
或其藥學上可接受的鹽和/或其藥學上可接受的溶劑化物，其中R0代表2-苯并噁唑基或2-吡啶基和R1代表CH2OCH3或CF3。
7．根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中R0代表2-苯并噁唑基R1代表CH2OCH3或CF3。
8．一種PPARα和PPARγ激動劑，用于X綜合征的治療和/或預(yù)防。
9．一種PPARα和PPARγ激動劑，用于制備治療和/或預(yù)防X綜合征的藥物。
10．在PPARα和PPARγ上具有激動劑活性的一種化合物。
11．在PPARα和PPARγ上具有激動劑活性的化合物用作活性治療物質(zhì)。
12．包含PPARα和PPARγ激動劑和藥學上可接受的載體的藥用組合物。
13．用于檢測具有PPARα和PPARγ激動劑活性的化合物的一種方法，該方法包括測定(a)PPARα激動劑活性，是通過檢測由連接合適的報告基因構(gòu)成物的PPARα配體結(jié)合部位組成的PPARα嵌合受體的興奮作用進行的；和(b)PPARγ激動劑活性，是通過檢測包含連接合適的報告基因構(gòu)成物的PPARγ配體結(jié)合部位的PPARγ嵌合受體的興奮作用進行的。
全文摘要
一種用于治療和/或預(yù)防人類或非人類哺乳動物X綜合征的方法,該方法包括給予需要此治療的人類或非人類哺乳動物有效、非毒性和藥學上有效量的PPARα和PPARγ激動劑或其藥學上可接受的衍生物,以及用于該方法中的某些化合物。
文檔編號A61P3/00GK1212622SQ97192711
公開日1999年3月31日 申請日期1997年1月7日 優(yōu)先權(quán)日1996年1月9日
發(fā)明者S·A·史密斯 申請人:史密絲克萊恩比徹姆有限公司