專利名稱：含有與水不溶性底物鏈接的活性蛋白質(zhì)的個人護理組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有經(jīng)聚合物鏈與水不溶性底物結(jié)合的活性蛋白質(zhì)的個人護理組合物。所述個人護理組合物的實施方案包括個人護理用擦物和個人護膚用遮蓋劑。本發(fā)明的組合物提供改進的清潔和皮膚調(diào)理作用，這歸因于活性蛋白的活性，同時減小了使用者對活性蛋白產(chǎn)生變應(yīng)性反應(yīng)的危險性。
背景技術(shù)：
越來越多的含活性蛋白的市售產(chǎn)品為人們采用。絕大多數(shù)此類產(chǎn)品使用了酶作為活性蛋白質(zhì)。酶是與化合物或底物反應(yīng)使該化合物分解的蛋白質(zhì)?；谂c其反應(yīng)的底物的種類，酶被分為多種類型。各種酶一般可催化不同化學(xué)鍵的斷裂，產(chǎn)生特異性選擇的活性。已知脂肪酶能夠水解在烴類和多元醇主鏈底物之間生成的(但不限于此)酯鍵。這些底物的實例是甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯聚甘油酯。蛋白酶類的酶能夠水解蛋白。將天然和生物工程的蛋白酶摻混在家用清潔洗滌劑中可用來水解蛋白類灰塵和污漬，混合在個人護理產(chǎn)品中用來除去污物和死皮，混合在口腔清潔產(chǎn)品中用來去除口腔中的牙斑，而且可混合在藥物中用來影響體內(nèi)的有害蛋白質(zhì)。
公認在普通市售清潔產(chǎn)品中摻入蛋白酶可以使產(chǎn)品更加有效。美國專利號4261868(Hora等人)、美國專利號4404115(Tai)、美國專利號4318818(Letton等人)、歐洲專利申請130756(1985.1.9公開)和美國專利5030378(Venegas)都公開了蛋白酶在清潔或洗滌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
然而，人們還認識到，許多包括酶在內(nèi)的活性蛋白是潛在抗原，而抗原在人體中的某些條件下可引起變態(tài)反應(yīng)。人體免疫系統(tǒng)可在暴露于活性蛋白時產(chǎn)生特異性抗體。當(dāng)臨床上獲得有益應(yīng)答時這種產(chǎn)生特異性抗體的過程被稱作“免疫”。但是，當(dāng)這樣的反應(yīng)導(dǎo)致過敏癥時，其被稱作“致敏”。已在人體定期暴露于蛋白的環(huán)境中觀察到對活性蛋白的變態(tài)反應(yīng)。所述環(huán)境包括制造廠，工人可能暴露在未受控制的、含有活性蛋白的塵土或懸浮微粒；或市場，在那里消費者反復(fù)使用含有活性蛋白的產(chǎn)品；有時會引起變態(tài)反應(yīng)。
目前，通過限制那些用于人體的產(chǎn)品中所選擇的蛋白可以減少對活性蛋白的變態(tài)反應(yīng)。雖然這種途徑可以減少變應(yīng)原性問題，但是無法徹底解決該問題，因為常常無法發(fā)現(xiàn)具有預(yù)期活性的活性蛋白。
減少變態(tài)反應(yīng)的另一方法是減小蛋白分子的大小(參見日本專利公開號4112753)。然而，減小蛋白的大小也可能導(dǎo)致生物活性明顯降低。
減小變應(yīng)原性的第三種建議是通過表位作圖并且改變蛋白氨基酸序列，從而釋放出具有低變應(yīng)原性的蛋白。這種方法一般需要花費大量的研制時間和費用。
在醫(yī)藥領(lǐng)域，人們建議通過另一種方法減小蛋白的免疫原性。這種方法包括將非反應(yīng)性聚合物附著在蛋白上。美國專利號4179337(Davis等人)涉及了偶聯(lián)于基本上直鏈的聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG)聚合物部分的酶。雖然發(fā)現(xiàn)PEG/PPG的偶聯(lián)緩和了酶的變應(yīng)原性，但僅僅保留下15％的生理活性。PCT申請WO96/17929(Olsen等人，1996.6.13公開)涉及通過與適當(dāng)聚合物接合的酶的改性。Olsen的專利申請描述了改性酶，證明這些酶與親代酶相比變應(yīng)原性減小了25％至66％，而保留了親代活性的39％至100％。
美國專利申請序號08/903298公開了通過加入雙生(twin)聚乙二醇聚合物部分改性的酶的應(yīng)用，從而減小變應(yīng)原性并且傳遞高的酶活性。其中改性酶與纖維性底物結(jié)合用于擦拭用途。改性酶不附著在底物上。經(jīng)改性的酶減小了變應(yīng)原性。
美國專利申請序列號09/088912公開了在三個特異性表位區(qū)的一個或多個區(qū)中枯草桿菌蛋白酶的聚合物化學(xué)改性，發(fā)現(xiàn)由此可掩蔽該酶的免疫原決定因素。
另一種減小活性蛋白的變應(yīng)原性的途徑是通過制粒、涂層或溶解活性蛋白來避免它們在空中傳播。美國專利4556554(Calvo)公開了含有酶的化妝品組合物，其中通過附著在聚合物載體的顆粒上所述酶得到固定。附著酶的顆粒被分散在化妝品賦形劑中。在將該賦形劑涂敷在皮膚上時，載體釋放出酶并且該酶被再次激活。例如這樣的方法令使用者暴露于空氣傳播的蛋白，然而它們?nèi)匀淮嬖谂c大范圍組織和所釋放酶(這些酶沉積在皮膚上)相接觸有關(guān)的嚴(yán)重危險性。
加拿大專利1229808(1987年12月1日授權(quán))教導(dǎo)了將酶，尤其是β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶固定在纖維素底物上，其中通過吸附在瓊脂糖膠涂層的底物內(nèi)使酶得到固定。
UK專利申請GB2240040(1991.7.24公開)也教導(dǎo)將酶固定在底物上。酶共價結(jié)合在底物上，提供一種含藥敷料。
通過應(yīng)用酶在儀器表面的位點特異性附著可增強生物儀器如生物傳感器、生物分離器和生物反應(yīng)器中所用酶的活性。參見黃等人，“通過位點特異性附著于表面改進固定枯草桿菌蛋白酶的活性”分析化學(xué)(Analytical Chemistry),69(22),1997.11.15。黃提出枯草桿菌蛋白酶經(jīng)突變的絲氨酸249或絲氨酸145固定于半胱氨酸并且結(jié)合在用氨基官能化的二氧化硅珠上。
人們非常希望開發(fā)出一種可提供高水平蛋白活性而在暴露于活性蛋白時維持低變應(yīng)原性反應(yīng)的組合物。如果能夠?qū)崿F(xiàn)，將可以為使用者提供更加安全的途徑來利用蛋白技術(shù)的益處。
本發(fā)明的一個目的是提供一種釋放活性同時保持免疫系統(tǒng)的低刺激性和所致活性的個人護理組合物。
本發(fā)明的另一個目的是以個人護理擦拭用品或個人護膚遮蓋劑的形式提供這種生物活性，同時，過敏反應(yīng)的風(fēng)險降低。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及含有水不溶性底物、多種活性蛋白和含聚合物鏈的結(jié)合方式的個人護理組合物，各個蛋白永久性固著在底物上，其中該個人護理組合物在底物上含有約0.01μg/cm2至約1000μg/cm2的蛋白。
發(fā)明詳述本發(fā)明的個人護理組合物含有用聚合物鏈永久性結(jié)合在水不溶性底物上的活性蛋白。該組合物能夠非常有效地清潔皮膚上的汗?jié)n、皮脂、死皮細胞、脂肪和油分，同時使皮膚增濕。該組合物提供一種利用酶和其它活性蛋白的特定活性的方便手段?；钚缘鞍着c底物結(jié)合，由此降低了任何變態(tài)反應(yīng)的危險性。通過使活性蛋白經(jīng)聚合物鏈附著在底物上，活性蛋白在底物的表面上更易移動，由此使蛋白更易于進入污漬和死皮細胞。
不受理論的限制，相信通過活性蛋白永久性與底物結(jié)合，可以令多種蛋白與皮膚接觸，使它們在表面起作用。隨后當(dāng)擦物移走時，全部蛋白離開皮膚表面，與使用的擦物一起除去并且棄掉，由此減小煙霧狀散開和長時間皮膚暴露的危險性?；钚缘鞍着c化合物反應(yīng)，在與皮膚接觸的一段時間內(nèi)它具有特異的反應(yīng)性，并且在使用后不會滯留在皮膚上刺激免疫系統(tǒng)并且進而形成引起變態(tài)反應(yīng)的抗體。
在此所用的術(shù)語“氨基酸序列”是指構(gòu)成蛋白的氨基酸的特異構(gòu)型。下面是本文描述氨基酸的縮寫目錄。氧基酸 三字母縮寫單字母代號丙氨酸Ala A精氨酸Arg R天門冬酰胺Asn N天門冬氨酸Asp D半胱氨酸 Cys C谷氨酰胺 Gln Q谷氨酸Glu Q甘氨酸Gly G組氨酸His H異亮氨酸 Ile I亮氨酸Leu L賴氨酸Lys K甲硫氨酸 Met M苯丙氨酸 Phe F脯氨酸 Pro P絲氨酸 Ser S蘇氨酸 Thr T色氨酸 Trp W酪氨酸 Tyr Y纈氨酸 Val V在位置上無氨基酸 Xaa *此處所用的術(shù)語“突變”是指生物的遺傳變異，其改變了生物所產(chǎn)生的酶的氨基酸序列。常常發(fā)現(xiàn)生物的突變改變了酶的性質(zhì)。
此處所用的術(shù)語“野生型”是指由未突變宿主產(chǎn)生的酶。
此處所用的術(shù)語“變種”是指具有不同于野生型酶的氨基酸序列的酶，這歸因于產(chǎn)生此類酶的宿主的遺傳突變。
除非另外說明，此處所用的所有百分比和比例是以重量計，并且所有的測量是在25℃下進行，除非另外指出。本發(fā)明可以含有這里描述的基本組分以及選擇性組分和成分，或由或基本上由基本組分以及選擇性組分和成分組成。
本發(fā)明的個人護理組合物的基本組分以及優(yōu)選和任選成分的非排他性目錄詳述如下。水不溶性底物本發(fā)明的產(chǎn)物含有水不溶性底物。所謂“水不溶性”是指底物浸漬于水中時不溶于水或不容易分裂開。水不溶性底物是將本發(fā)明活性蛋白輸送到待清潔和增濕的皮膚上并且除去皮膚上的基本上所有的蛋白的工具或載體。
許多材料可用作底物。下列非限定特征是理想的(ⅰ)足夠使用的濕強度，(ⅱ)足夠的磨蝕度，(ⅲ)足夠的回彈力和孔隙度，(ⅳ)足夠的厚度，和(ⅴ)適當(dāng)?shù)某叽纭?br> 符合上述標(biāo)準(zhǔn)的適當(dāng)不溶性底物的非限定實例包括無紡底物、紡織底物、水力纏結(jié)(hydroentangled)底物、氣纏結(jié)(air entangled)底物、天然海綿、合成海綿、聚合物網(wǎng)狀篩等。優(yōu)選的實施方案采用無紡底物，因為它們在眾多材料中經(jīng)濟且易于獲得。無紡是指層由纖維構(gòu)成，這些纖維不是紡成織物而是形成薄片、墊或襯層。纖維可以是隨機的(即隨機排列)，或可以將它們梳理(即梳理為基本上在一個方向取向)。此外，無紡底物可以由隨機和梳理纖維層的組合形式構(gòu)成。
無紡底物可以由各種天然和合成的材料構(gòu)成。天然材料是指由植物、動物、昆蟲或植物、動物和昆蟲的副產(chǎn)物獲得的材料。合成材料是指主要由各種人造材料或由已經(jīng)進一步改造的天然材料獲得的材料。常規(guī)的基本原材料一般是纖維網(wǎng)狀物，其中含有任何常見的合成或天然紡織品長度的纖維或其混合物。
適用于本發(fā)明的天然材料的非限定例是絲纖維，角蛋白纖維和纖維素纖維。角蛋白纖維的非限定例包括選自羊毛纖維、駱駝毛纖維等的那些。纖維素纖維的非限定例包括選自木漿纖維、棉纖維、大麻纖維、黃麻纖維、亞麻纖維和它們的混合物的纖維。
適用于本發(fā)明的合成材料的非限定例包括選自醋酸纖維、丙烯酸類纖維、纖維素酯纖維、改性聚丙烯腈纖維、聚酰胺纖維、聚酯纖維、聚烯烴纖維、聚乙烯醇纖維、人造絲纖維、聚氨酯泡沫及其混合物的那些。這些合成材料的一些實例包括丙烯酸類，例如阿克利綸、克麗斯綸，和基于丙烯腈的纖維，奧綸；纖維素酯纖維，例如醋酸纖維素、阿尼爾和阿西爾；聚酰胺類如尼龍(如尼龍6、尼龍66、尼龍610等)；聚酯類如福特勒爾，科代爾，和聚對苯二甲酸乙二酯纖維，大可綸；聚烯烴類如聚丙烯，聚乙烯；聚乙酸乙烯酯纖維；聚氨酯泡沫和它們的混合物。這些和其它適用的纖維和由它們制備的無紡材料全面公開在Riedel的“無紡結(jié)合方法和材料”無紡世界(Nonwoven World)(1987)；美國百科全書(The Encyclopedia Americana)第11卷，147-153頁和第26卷，566-581頁(1984)；美國專利號4891227(Thamah等人，1990.1.2授權(quán))；和美國專利號4891228，它們在此全文引入作為參考。
由天然材料制備的無紡底物包括網(wǎng)狀物或薄片，它們最常見是由纖維的液態(tài)懸浮體在細絲篩網(wǎng)上形成。參見C.A.Hampel等人《化學(xué)大全》(The Encyclopedia of Chemistry)第3版，1973,793-795頁(1973)；美國百科全書，第21卷，376-383(1984)；和G.A.Smook，《紙漿和紙張技術(shù)手冊》(Handbook of Pulp and Paper Technologies)，紙漿和造紙工業(yè)技術(shù)協(xié)會(1986)；它們在此全文引入作為參考。
適用于本發(fā)明的由天然材料制備的底物可以由多種市售來源獲得。適用于本發(fā)明的市售紙層的非限定例包括Airtex，一種壓花氣流成網(wǎng)纖維素層，其織物單位重量約為71gsy，購自James River,Green Bay,WI；和Walkisoft，一種壓花氣流成網(wǎng)纖維素層，織物單位重量約為75gsy,購自Walkisoft U.S.A.(Mount Holly,NC)。
制備無紡底物的方法是所屬領(lǐng)域公知的。通常，這些無紡底物可以通過氣流成網(wǎng)法、濕法成網(wǎng)(water-laying)、熔噴法、共成法(coforming)、紡粘法或梳理法制備，其中纖維或長絲首先從長縷切割為預(yù)期長度，通入水或氣流中，隨后沉積在篩網(wǎng)上，負載纖維的空氣或水經(jīng)該篩網(wǎng)流過。無論其制備方法或組成如何，所得的層然后進行數(shù)種粘合操作的至少一種，使單獨的纖維固定在一起形成自持網(wǎng)狀物。在本發(fā)明中，無紡層可以通過許多方法制備，包括水力纏結(jié)法(hydroentanglement)，熱粘合，和這些方法的聯(lián)合形式。此外，本發(fā)明的底物可包括單層或多層。而且，多層底物可以包括薄膜和其它非纖維材料。
適用于本發(fā)明的由合成材料制備的無紡底物也可以由多種市售來源獲得。適用于本發(fā)明的無紡層材料的非限定例包括HEF 40-047，一種有孔水力纏結(jié)材料，它含有約50％人造絲和50％聚酯，并且織物單位重量為約43克/平方碼(gsy)，購自Veratec,Inc.,Walpole,MA；HEF 140-102，一種有孔水力纏結(jié)材料，含有約50％人造絲和50％聚酯，并且織物單位重量約為56gsy，購自Veratec,Inc.(Walpole,MA)；Novonet149-616，一種熱粘網(wǎng)格花紋材料，含有約100％聚丙烯，并且織物單位重量為約50gsy，購自Veratec,Inc.(Walpole,MA)；Novonet149-801，一種熱粘網(wǎng)格花紋材料，含有約69％人造絲、約25％聚丙烯和約6％棉，并且織物單位重量約為75gsy，購自Veratec,Inc.(Walpole,MA)；Novonet149-191，一種熱粘網(wǎng)格花紋材料，含有約69％人造絲、約25％聚丙烯和約6％棉，并且織物單位重量約為100gsy，購自Veratec,Inc.(Walpole,MA)；HEF Nubtex149-801，一種結(jié)節(jié)有孔水力纏結(jié)材料，含有約100％聚酯，并且織物單位重量約為70gsy，購自Veratec,Inc.,Walpole,MA；Keybak951V，一種干法成形的有孔材料，含有約75％人造絲、約25％丙烯酸類纖維，并且織物單位重量約43gsy，購自Chicopee,New Brunswick.NJ；Keybak1368，一種有孔材料，含有約75％人造絲、約25％聚酯，并且織物單位重量約39gsy，購自Chicopee,New Brunswick.NJ；Duralace1236，一種有孔、水力纏結(jié)材料，含有約100％人造絲，并且織物單位重量約40gsy-約115gsy，購自Chicopee,New Brunswick.NJ；Duralace5904，一種有孔、水力纏結(jié)材料，含有約100％聚酯，并且織物單位重量約40gsy-約115gsy，購自Chicopee,New Brunswick.NJ；Sontaro 8868，一種水力纏結(jié)材料，含有約50％纖維素和約50％聚酯，并且織物單位重量約60gsy，購自Dupont Chemical Corp.。
此外，水不溶性底物可以是聚合物網(wǎng)狀海綿，如歐洲專利號EP702550A1(公開于1996年3月27日)所描述的，在此全文引入作為參考。聚合物海綿含有許多擠出管狀結(jié)網(wǎng)的疊層，該擠出管狀結(jié)網(wǎng)是由柔性很強的聚合物制成，例如烯烴單體的加成聚合物和多元羧酸的聚酰胺。雖然這些聚合物海綿被設(shè)計用來與液體清洗劑合用，此類海綿可以在本發(fā)明中作為水不溶性底物使用。
底物可以制成多種形狀和形式，包括扁平墊，厚墊，薄片，球形工具，不規(guī)則形狀工具，并且其大小從表面積約一平方英寸至約數(shù)百平方英寸。精確尺寸取決于預(yù)期的用途和產(chǎn)品特性。特別方便的是正方形、圓形、矩形或橢圓形墊子，其表面積是約1平方英寸至約144平方英寸，優(yōu)選約10平方英寸至約120平方英寸，更優(yōu)選約30平方英寸至約80平方英寸；并且厚度是約1密耳(mil)至約500密耳，優(yōu)選約5密耳至約250密耳，更優(yōu)選約10密耳至約100密耳。
本發(fā)明的水不溶性底物可以包含兩個或多個層，各層具有不同的質(zhì)地和磨蝕性，不同的質(zhì)地可能是由于采用不同材料的組合形式或采用不同的制造方法或它們的結(jié)合造成的?？梢灾圃祀p質(zhì)地底物來提供較粗糙側(cè)用于剝落和較柔軟吸收側(cè)用于溫和清潔的效果。此外，底物的各層可以制成具有不同的顏色，由此有助于使用者進一步區(qū)分表面?；钚缘鞍妆景l(fā)明的基本成分是多種活性蛋白。所述活性蛋白在水不溶性底物表面上是以約0.01μg/cm2至約1000μg/cm2，優(yōu)選約0.05μg/cm2至約100μg/cm2，首選0.1μg/cm2至約10μg/cm2的濃度存在。
活性蛋白是任何基于氨基酸的化合物，該化合物能夠在人體暴露于該化合物時引起人體免疫反應(yīng)?；钚缘鞍讘?yīng)具有生物功能、催化活性或化妝效用或它們的任何組合?；钚缘鞍椎姆窍薅ɡ强贵w；抗體片段；動物和植物蛋白，如膠原，和大豆、乳清或小麥蛋白；改性動植物蛋白，如Crotein Q(硬脂基三甲基銨(trimonium)羥乙基水解膠原)；和酶。
任何活性蛋白可以用在本發(fā)明的個人護理用擦拭組合物中。優(yōu)選的活性蛋白是酶。適用于本發(fā)明個人護理擦物中的酶可以具有任何已知用于護膚的活性。這些酶包括但不限于氧化還原酶，如漆酶和超氧化物歧化酶；水解酶，包括蛋白酶和脂肪酶；轉(zhuǎn)移酶，如轉(zhuǎn)谷酰胺酶；和異構(gòu)酶，如蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶。優(yōu)選的酶選自脂肪酶和蛋白酶，和它們的混合物。
根據(jù)國際生物化學(xué)和分子生物學(xué)聯(lián)合會(IUBMB)的推薦(1992)，脂肪酶被分類為酶分類號E.C.3.1.1(羧酸酯水解酶)。脂肪酶的實例包括由下列微生物產(chǎn)生的脂肪酶。指出的專利公開文獻在此引入作為參考腐質(zhì)霉屬(美國專利4810414)假單胞菌屬(Pseudonomas)(WO89/04361,U.S.4950417,EP218272,WO88/09367,U.S.5389536)鐮刀菌屬(EP130064,WO90/09446)毛霉屬(EP238023)色桿菌屬曲霉屬假絲酵母屬(WO88/02775,WO94/01541,WO89/02916)
地霉屬(Geotricum)青霉屬根霉屬芽孢桿菌屬(WO91/16422)市售脂肪酶的具體實例包括Lipolase,LipolaseTMUltra,Lipozyme,Palatase,Novozym435,Lecitase(均購自Novo NordiskA/S)；LumafastTM和Lipomax(購自Genencor Int.,Inc.)。
根據(jù)國際生物化學(xué)和分子生物學(xué)聯(lián)合會(IUBMB)的推薦(1992)，蛋白酶被分類為酶分類號E.C.3.4.(羧酸酯水解酶)。有關(guān)蛋白酶還公開在PCT專利公開WO95/30010，由Procter&Gamble公司在1995.11.9公開；WO95/30011，由Procter&Gamble公司在1995.11.9公開；WO95/29979，由Procter&Gamble公司在1995.11.9公開。適用于本發(fā)明個人護理用擦物中的優(yōu)選蛋白酶是枯草桿菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶型蛋白酶。
本發(fā)明尤其優(yōu)選的是枯草桿菌蛋白酶型蛋白酶?？莶輻U菌蛋白酶由微生物嗜堿芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、解糖芽孢桿菌(Sacillusamylosaccharicus)、地衣形芽孢桿菌、緩慢芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌天然產(chǎn)生。
特別優(yōu)選的枯草桿菌蛋白酶型酶是細菌絲氨酸蛋白酶和其變種，得自解淀粉芽孢桿菌、地衣形芽孢桿菌和/或枯草芽孢桿菌，包括NovoIndsutries A/S的Alcalase,Esperase,Savinase(哥本哈根，丹麥)，Gist-brocades的Maxatase、Maxacal和Maxapem 15(經(jīng)蛋白加工的Maxacal)(Delft，荷蘭)，和枯草桿菌蛋白酶BPN和BPN’，它們都可以購得。
尤其優(yōu)選得自解淀粉芽孢桿菌的蛋白酶及其變種。一種已知的酶是BPN’。由解淀粉芽孢桿菌產(chǎn)生的野生型BPN’的氨基酸序列特征是
10 20Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu His Ser Gln Gly30 40Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro50 60Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp70 80Asn Asn Ser His Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly90 100Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala Asp Gly110 120Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp130 140Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp150 160Lys Ala Val Ala Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly170 180Scr Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala Val Gly Ala Val190 200Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala210 220Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr230 240Ser Met Ala Ser Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn250 260Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys Leu Gly Asp Ser270 275Phe Tyr Tyr Gly Lys Lys Gly Leu Ile Asn Asn Val Gln Ala Ala Ala GlnBPN’的變種也適用于本發(fā)明的個人護理用擦物。下文均稱作“蛋白酶A”的若干相關(guān)變種公開在美國專利5030378(1991.7.9授權(quán)于Venegas)中，其特征在于所述BPN’氨基酸序列具有下列突變a)Gly 166位的Gly被Ash,Ser,Lys,Arg,His,Gln,Ala或Glu代替；Gly 169位的Gly被Ser代替；Met 222位的Met被Gln,Phe,Cys,His,Asn,Glu,Ala或Thr代替；或b)Gly 166位的Gly被Lys代替并且Met 222位的Met被Cys代替；或c)Gly 160位的Gly被Ala代替并且Met 222位的Met被Ala代替。
下文稱作“蛋白酶B”的BPN’的其它變種公開在GenencorInternational,Inc.(San Francisco,California)的歐洲專利EP-B-251446(1994.12.28授權(quán)并且公開在1988.1.7)，其特征在于野生型BPN’氨基酸在一個或多個下列氨基酸中具有突變Tyr21,Thr22,Ser24,Asp36,Ala45,Ala48,Ser49,Met50,His67,Ser87,Lys94,Val95,Gly97,Ser101,Gly102,Gly103,Ile107,Gly110,Met124,Gly127,Gly128,Pro129,Leu135,Lys170,Tyr171.Pro172,Asp197,Met199,Ser204,Lys213,Tyr214,Gly215，和Ser221或突變不發(fā)生在Asp32,Ser33,Tyr104,Ala152,Asn155,Glu156,Gly166,Gly169,Phe189,Tyr217和Met222氨基酸上的兩種或多種上述氨基酸和Asp32,Ser33,Tyr104,Ala152,Asn155,Glu156,Gly166,Gly169,Phe189,Tyr217和Met222。
另一種此后稱作“蛋白酶D”的優(yōu)選BPN’變種蛋白酶公開在WO95/10615中(Genencor International，公開于1995.4.20)，其特征在于野生型BPN’氨基酸在Asn76位具有突變，同時在一個或多個選自下列的其它氨基酸位點具有突變Asp99,Ser101,Gln103,Tyr104,Ser105,Ile107,Asn109,Asn123,Leu126,Gly127,Gly128,Leu135,Glu156,Gly166,Glu195,Asp197,Ser204,Gln206,Pro210,Ala216,Tyr217,Asn218,Met222,Ser260,Lys265，和/或Ala274.
另一種此后稱作“蛋白酶F”的優(yōu)選BPN’變種蛋白酶公開在美國專利號4760025(1988.7.26授權(quán)給Estell等人)，其特征在于野生型BPN’氨基酸在一個或多個選自下列的氨基酸位點具有突變Asp32,Ser33,Tyr104,Asn155,Glu156,Gly166,Gly169,Phe189,Tyr217和Met222。
因此，優(yōu)選的蛋白水解酶選自Alcalase,BPN’，蛋白酶A，蛋白酶B，蛋白酶D，蛋白酶F，和它們的混合物。
另一類活性蛋白是“單一取代蛋白”，這些蛋白中親代氨基酸序列在一個氨基酸殘基處被取代氨基酸取代，所述的取代氨基酸在親代氨基酸的其它位置不存在。單一取代蛋白還包括那些氨基酸序列中插入一種在親代氨基酸中不存在的氨基酸的蛋白。取代或插入的氨基酸在蛋白中的特定位置提供了適合附著于本發(fā)明底物的部分。
上述取代或插入優(yōu)選發(fā)生在表位區(qū)中的位置，該位置為遠離該蛋白活性位點的蛋白中的點。這些單一取代蛋白的一個實施方案(此后稱作蛋白酶G)是改性的枯草桿菌蛋白酶BPN’及其衍生物?？莶輻U菌蛋白酶BPN’類酶的活性位點是由Asn32,His64和Ser221的空間三聯(lián)體確定。在蛋白酶G酶中，半胱氨酸取代或插入在遠離三聯(lián)體的位點。優(yōu)選的用于取代的表位區(qū)是Asp140-Val150和Ala230-Leu250區(qū)。可能的半胱氨酸取代的非限定例是在Ser145,Asn240或Ser249位置上。半胱氨酸對于所需表位區(qū)的取代而言是首選的取代氨基酸，因為它不存在于野生型枯草桿菌蛋白酶BPN’或其衍生物中。結(jié)合手段活性蛋白通過任何適當(dāng)?shù)暮芯酆衔镦?tether)的結(jié)合方式和水不溶性底物結(jié)合。結(jié)合方式包括任何永久地將活性蛋白與底物結(jié)合的化學(xué)方法。與底物上的聚合物凝膠涂層鏈接的蛋白蛋白可以通過聚合物鏈和底物結(jié)合，該聚合物鏈結(jié)合在位于底物上的聚合物涂層上。蛋白和聚合物鏈結(jié)合，該聚合物鏈共價連接到聚合物涂層上。一種實施方案是采用聚乙二醇(PEG)-N-羥基琥珀酰亞胺作為結(jié)合在聚丙烯酸2-羥乙酯涂層上的聚合物鏈。 聚合物鏈的另一個實施方案是聚乙二醇(PEG)-馬來酰亞胺，由Shearwater Polymers,Inc.出售。PEG-馬來酰亞胺必須與半胱氨酸氨基酸合用，因此它可以在活性蛋白是蛋白酶G時使用。PEG-馬來酰亞胺也可以和聚丙烯酸2-羥乙酯涂層合用。一種優(yōu)選的丙烯酸酯-PEG-馬來酰亞胺鏈的一般結(jié)構(gòu)可由下式表示 鏈接在擦拭底物上的聚合物涂層的含半胱氨酸蛋白的另一個實施方案包括通過N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)共價結(jié)合在聚乙烯亞胺涂層上的PEG-馬來酰亞胺，如下式所示 包括鏈接蛋白的結(jié)合方式優(yōu)選是物理包埋并且直接共價附著，因為鏈接蛋白更易移動并且被聚合物涂層覆蓋較少，兩者都可使蛋白具有更高的活性。通過聚合物鏈共價連接于活化工具表面的蛋白將活性蛋白和本發(fā)明個人護理用擦物的底物相結(jié)合的另一種方式是與底物表面的活化位點共價結(jié)合的聚合物鏈。優(yōu)選的鏈?zhǔn)且叶?聚乙二醇-馬來酰亞胺。直接結(jié)合的乙二胺/PEG-馬來酰亞胺鏈的一般結(jié)構(gòu)可以由下式表示 選擇性組分本發(fā)明的擦拭組合物可以含有多種選擇性組分。CTFA國際化妝品組分詞典(第6版，1995)在此全文引入作為參考，其中公開了多種護膚工業(yè)中常用的非限定化妝品和藥物組分，它們也適用于本發(fā)明的組合物。這些功能類組分的非限定例公開在該參考文獻的第537頁。這些功能類別的實例包括磨料，抗痤瘡劑，防結(jié)塊劑，抗微生物劑，抗氧劑，粘合劑，生物添加劑，填充劑，螯合劑，化學(xué)添加劑，著色劑，化妝用收斂劑，化妝用殺蟲劑，變性劑，藥物收斂劑，乳化劑，外用鎮(zhèn)痛劑，成膜劑，香料成分，增濕劑，溫和促進劑(mildness enhancer)(陽離子和非離子聚合物，輔助表面活性劑，脂質(zhì)濕潤劑，烴油，硅油，蠟)，遮光劑，增塑劑，防腐劑，推進劑，還原劑，皮膚漂白劑，皮膚調(diào)理劑(潤膚劑，增濕劑，混雜型和堵塞型(miscellaneous and occlusive))，皮膚防護劑，溶劑，泡沫促進劑，水溶助長劑，加溶劑，穩(wěn)定劑，懸浮劑，防曬劑，表面活性劑(陰離子、陽離子、兩性、兩性離子)，紫外吸收劑，和增粘劑(含水和非水)。其它適用于本發(fā)明的功能類材料的實例是所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的，包括加溶劑、多價螯合劑和溶角蛋白劑等。
使用方法本發(fā)明的個人護理組合物適用于個人清潔、皮膚美容處理和/或皮膚調(diào)理。本發(fā)明可采用個人護理擦物或個人護膚遮蓋劑的形式。通常，用擦物使被清潔區(qū)域在較短時間內(nèi)暴露于活性酶下。使用時，擦物接觸或擦拭需處理的皮膚并且隨后除去。本發(fā)明擦物的典型清潔用量是約1至約4擦(wipe)/次使用，優(yōu)選約1至約2擦/次使用。皮膚遮蓋劑是用來使被處理區(qū)域暴露較長的時間。本發(fā)明皮膚遮蓋劑的典型清潔用量是約1至約2面層(mask)/次使用，優(yōu)選1面層/次使用。
實施例和制備方法下列實施例進一步描述和證明本發(fā)明范圍內(nèi)的實施方案。在下列實施例中，所有組分均以有效含量列出。實施例的目的僅僅是舉例說明，對本發(fā)明不構(gòu)成限定，在不脫離本發(fā)明的實質(zhì)和范圍下可以有多種改變。組分名稱為化學(xué)名稱或CTFA名稱。
下列是本發(fā)明的帶有結(jié)合活性蛋白的擦物的非限定實施例。實施例1-與聚合物涂層鏈接的蛋白酶F將蛋白酶F提純并且在10mM KH2PO4緩沖液(pH5.5)中濃縮至約2.5mg/mL。以15∶1摩爾過量加入丙烯酸酯-PEG3400-N-羥基琥珀酰亞胺(Shearwater Polymers,Inc.)。用稀氫氧化鈉(NaOH)使該溶液pH升高至7。室溫下令蛋白酶F和丙烯酸酯-PEG-N-羥基琥珀酰亞胺反應(yīng)1-2小時。用稀磷酸(H3PO4)使溶液pH降低至5.5。向蛋白酶F-PEG-N-羥基琥珀酰亞胺溶液中加入丙烯酸2-羥乙酯(HEA)獲得1.3M的最終摩爾濃度。向蛋白酶F-PEG/HEA溶液加入50mM H2O2溶液使H2O2的最終摩爾濃度為2.5mM。將該溶液噴涂在人造絲/PET薄片上直至薄片變飽和。單獨將50mM七水合硫酸亞鐵(Ⅱ)(FeSO4·7H2O)溶液噴涂在薄片上，使整個表面均勻噴涂。靜置該薄片5分鐘。隨后經(jīng)過0.01M KH2PO4浴連續(xù)漂洗直至除去全部游離蛋白酶F。干燥該薄片。實施例2-鏈接于聚合物涂層的蛋白酶G將蛋白酶G提純并且在10mM KH2PO4緩沖液(pH5.5)中濃縮至約2.5mg/mL。以15∶1摩爾過量加入丙烯酸酯-PEG3400-馬來酰亞胺(ShearwaterPolymers,Inc.)。用稀氫氧化鈉(NaOH)將溶液pH升高至7。室溫下令蛋白酶G和丙烯酸酯-PEG-馬來酰亞胺反應(yīng)1-2小時。用稀磷酸(H3PO4)使溶液pH降低至5.5。向蛋白酶G-PEG-馬來酰亞胺溶液中加入丙烯酸2-羥乙酯(HEA)獲得1.3M的最終摩爾濃度。向蛋白酶G-PEG/HEA溶液加入50mM H2O2溶液使H2O2的最終摩爾濃度為2.5mM。將該溶液噴涂在人造絲/PET薄片上直至薄片變飽和。單獨將50mM七水合硫酸亞鐵(Ⅱ)(FeSO4·7H2O)溶液噴涂在薄片上，使整個表面均勻噴涂。靜置該薄片5分鐘。隨后經(jīng)過0.01M KH2PO4浴連續(xù)漂洗直至除去全部游離蛋白酶G。干燥該薄片。實施例3-經(jīng)聚合物鏈共價連接于活化工具表面(activated implementSurface)的蛋白酶G利用1mL溶液/1cm2薄片，將人造絲/PET薄片浸泡在10％(w/v)NaOH的水溶液中10-15分鐘，同時在自動振蕩器上振搖。在抽吸下用去離子水將薄片洗滌3次(～1ml/cm2/洗滌)。在抽吸下用丙酮洗滌薄片5次。在兩次洗滌之間將薄片在丙酮中浸泡1分鐘。令薄片在10％(w/v)對甲苯磺酰氯的丙酮溶液中反應(yīng)25-30分鐘，同時振搖(～1ml/cm2)。在抽吸下用丙酮漂洗薄片3次，除去過量的對甲苯磺酰氯。令薄片在2.2M乙二胺的丙酮溶液中(pH13-14)反應(yīng)2小時，同時振搖。在抽吸下用丙酮漂洗薄片3次，除去過量的EDA。在抽吸下用0.2M硼酸鈉緩沖液(pH8.5)漂洗薄片5次。在兩次漂洗之間令薄片在緩沖液中浸泡1分鐘。令薄片在0.2M硼酸鈉緩沖液(pH8.5)中的3-5％(w/v)馬來酰亞胺-PEG3400-NHS(Shearwater Polymers,Inc.)中反應(yīng)1-2小時(～1ml/cm2)，同時振搖。用10mM KH2PO4緩沖液(pH7)在抽吸下漂洗薄片5次，除去過量的PEG。令薄片在存在于10mM KH2PO4緩沖液(pH7)(～1ml/cm2)中的3mg/ml蛋白酶G中反應(yīng)約1-2小時。用0.01M KH2PO4緩沖液(pH5.5)漂洗薄片3次。干燥薄片。實施例4-經(jīng)聚合物鏈共價連接于活化工具表面的蛋白酶A利用1mL溶液/1cm2薄片，將人造絲/PET薄片浸泡在10％(w/v)NaOH的水溶液中10-15分鐘，同時在自動振蕩器上振搖。在抽吸下用去離子水將薄片洗滌3次(～1ml/cm2/洗滌)。在抽吸下用丙酮漂洗薄片5次。在兩次洗滌之間將薄片在丙酮中浸泡1分鐘。在振搖的同時，令薄片在10％(w/v)對甲苯磺酰氯的丙酮溶液中反應(yīng)25-30分鐘(～1ml/cm2)。在抽吸下用丙酮漂洗薄片3次，除去過量的對甲苯磺酰氯。振搖的同時令薄片在2.2M乙二胺的丙酮溶液中(pH13-14)反應(yīng)2小時。在抽吸下用丙酮漂洗薄片3次，除去過量的EDA。在抽吸下用0.2M硼酸鈉緩沖液(pH8.5)漂洗薄片5次。在兩次漂洗之間令薄片在緩沖液中浸泡1分鐘。振搖的同時令薄片在存在于于0.2M硼酸鈉緩沖液(pH8.5)中的3-5％(w/v)N-羥基琥珀酰亞胺-PEG3400-NHS(Shearwater Polymers,Inc.)中反應(yīng)1-2小時。用10mM KH2PO4緩沖液(pH7)在抽吸下漂洗薄片5次，除去過量的PEG。令薄片在存在于10mM KH2PO4緩沖液(pH7)中的3mg/ml蛋白酶G中反應(yīng)約1-2小時(～1ml/cm2)。用0.01M KH2PO4緩沖液(pH5.5)漂洗薄片3次。干燥薄片。實施例5-經(jīng)聚合物鏈共價連接于涂敷工具表面的蛋白酶G室溫下，振搖的同時將人造絲/PET薄片在500ppm聚乙烯亞胺浴中浸泡1小時(～1-2ml/cm2薄片)。將人造絲/PET薄片在2個連續(xù)的0.2M硼酸鈉緩沖液(pH12)浴(～5-10ml/cm2)中漂洗。將薄片在2個連續(xù)的0.2M硼酸鈉緩沖液(pH8.5)浴中漂洗。室溫下，振搖的同時令薄片在存在于0.2M硼酸鈉緩沖液(pH8.5)中的5mg/ml NHS-PEG3400-馬來酰亞胺中反應(yīng)1小時。經(jīng)4個去離子水浴漂洗該薄片(～5-10ml/cm2)。用2個0.01M KH2PO4緩沖液(pH7-7.5)浴漂洗該薄片。單獨地將蛋白酶G提純并且在0.01M KH2PO4緩沖液(pH7-7.5)中濃縮至約1-2mg/mL。室溫下振搖的同時令“PEG化”薄片在蛋白酶G溶液(pH7-7.5)中反應(yīng)1小時。用5個連續(xù)的0.01M KH2PO4緩沖液(pH5.5)浴漂洗薄片，除去未反應(yīng)、未結(jié)合的蛋白酶G。干燥薄片。
在適當(dāng)容器中，室溫下將相A的組分混合形成一個分散體并且攪拌下加熱至65℃。將相B的組分在另一個適當(dāng)容器中混合并且加熱至65℃。一旦達到相同的溫度，將相B的組分混合在含有相A組分的容器中并且隨后冷卻至45℃。室溫下將相C的組分在一個單獨容器中混合在一起。隨后，室溫下將相C混合物加入含有相A和相B的混合物的容器中。將1.5g所得溶液噴涂在各個底物上。另外，底物可以浸漬在所得溶液中。處理的底物在烘箱中干燥至重量恒定?；蛘?，經(jīng)處理的底物在45℃的對流烘箱中干燥至重量恒定。
在其它實施方案中，其它底物例如是紡織底物、水力纏結(jié)底物、天然海綿、合成海綿或聚合物網(wǎng)。其它實施方案可以是個人護膚遮蓋劑的形式。
在適當(dāng)容器中，室溫下將相A的組分混合形成一個分散體并且攪拌下加熱至65℃。將相B的組分在另一個適當(dāng)容器中混合并且加熱至65℃。一旦達到相同的溫度，將相B的組分混合在含有相A組分的容器中并且隨后冷卻至45℃。隨后，室溫下將相C的混合物加入含有相A和相B的混合物的容器中。將1.5g所得溶液噴涂在各個底物上。另外，底物可以浸漬在所得溶液中。處理的底物在烘箱中干燥至重量恒定?；蛘?，經(jīng)處理的底物在45℃的對流烘箱中干燥至重量恒定。
在其它實施方案中，其它底物例如是紡織底物、水力纏結(jié)底物、天然海綿、合成海綿或聚合物網(wǎng)。其它實施方案可以是個人護膚遮蓋劑的形式。
在其它實施方案中，其它底物例如是紡織底物、水力纏結(jié)底物、天然海綿、合成海綿或聚合物網(wǎng)。其它實施方案可以是個人護膚遮蓋劑的形式。
在適當(dāng)容器中，室溫下將相A的組分混合形成一個分散體并且攪拌下加熱至65℃。將相B的組分在另一個適當(dāng)容器中混合并且加熱至65℃。一旦達到相同的溫度，將相B的組分混合在含有相A組分的容器中并且隨后冷卻至45℃。隨后，室溫下將相C的混合物加入含有相A和相B的混合物的容器中。將1.5g所得溶液噴涂在各個底物上。另外，底物可以浸漬在所得溶液中。處理的底物在烘箱中干燥至重量恒定。或者，經(jīng)處理的底物在45℃的對流烘箱中干燥至重量恒定。
在其它實施方案中，其它底物例如是紡織底物、水力纏結(jié)底物、天然海綿、合成海綿或聚合物網(wǎng)。其它實施方案可以是個人護膚遮蓋劑的形式。
權(quán)利要求
1．一種個人護理擦拭組合物，其特征在于它含有a)水不溶性底物，b)多種活性蛋白，和c)永久性使各個酶附著在底物上的結(jié)合方式，包括聚合物鏈；其中該個人護理擦拭組合物在底物上含有0.01μg/cm2至1000μg/cm2的所述酶。
2．一種個人護膚遮蓋組合物，其特征在于它含有a)水不溶性底物，b)多種活性蛋白，和c)永久性使各個酶附著在底物上的結(jié)合方式，包括聚合物鏈；其中該個人護理擦拭組合物在底物上含有0.01μg/cm2至1000μg/cm2的所述酶。
3．按照權(quán)利要求1或2所述的個人護理組合物，其中所述水不溶性底物包括一種或多種選自下列的材料絲類、角蛋白類物質(zhì)、纖維素類物質(zhì)、醋酸酯類物質(zhì)、丙烯酸(酯)類物質(zhì)、纖維素酯類物質(zhì)、改性聚丙烯腈類物質(zhì)、聚酰胺類物質(zhì)、聚酯類物質(zhì)、聚烯烴類物質(zhì)、聚乙烯醇類物質(zhì)、木(紙)漿、棉、大麻、黃麻、亞麻、丙烯酸(酯)類物質(zhì)、尼龍、聚酯類物質(zhì)、聚丙烯類物質(zhì)、聚乙烯類物質(zhì)、聚乙酸乙烯酯類物質(zhì)、聚氨酯類物質(zhì)、人造絲，和它們的混合物。
4．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述水不溶性底物包括選自人造絲纖維、纖維素纖維、聚酯纖維及其混合物的纖維的無紡層。
5．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述水不溶性底物包括兩層或多層分別具有不同質(zhì)地的纖維。
6．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述活性蛋白是選自蛋白酶、脂肪酶及其混合物的酶。
7．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述酶選自枯草桿菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶型酶及其混合物。
8．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述酶選自Alcalase、BPN’、蛋白酶A、蛋白酶B、蛋白酶D、蛋白酶F和它們的混合物。
9．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述酶是單一取代的蛋白。
10．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述單一取代蛋白在空間上遠離蛋白的活性位點的位置發(fā)生取代。
11．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述單一取代蛋白是蛋白酶G。
12．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述聚合物鏈含有聚乙二醇-馬來酰亞胺。
13．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述聚合物鏈含有聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺。
14．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述結(jié)合方式包括聚合物鏈和聚合物涂層。
15．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述聚合物鏈含有聚乙二醇-馬來酰亞胺并且所述聚合物涂層含有聚丙烯酸2-羥乙酯。
16．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述聚合物鏈含有聚乙二醇-馬來酰亞胺并且所述聚合物涂層含有聚乙烯亞胺。
17．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述聚合物鏈含有聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺并且所述聚合物涂層含有聚丙烯酸2-羥乙酯。
18．上述權(quán)利要求任一項所述的個人護理擦拭組合物，其中所述聚合物鏈含有聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺并且所述聚合物涂層含有聚乙烯亞胺。
19．一種改善皮膚狀況的方法，包括令上述任一權(quán)利要求的個人護理擦拭組合物與需此處理的皮膚接觸。
全文摘要
本發(fā)明涉及個人護理組合物,其中含有水不溶性底物、多種活性蛋白以及包括聚合物鏈的永久性將各個酶固著在底物上的結(jié)合方式,其中該個人護理組合物在底物上含有約0.01μg/cm
文檔編號A61K8/00GK1319000SQ99811238
公開日2001年10月24日 申請日期1999年9月14日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月22日
發(fā)明者D·J·維斯戈博, A·C·奧爾考克 申請人:寶潔公司