成得到的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn探針表面電勢和水合粒徑分別為-0. 463mV和863. 6nm，而對照組 材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的表面電勢和水合粒徑分別為+0. 693mV和549. 5nm。從實驗結(jié) 果得出，完全乙?；晒Φ亟档土瞬牧系谋砻骐妱荨?br>[0032] (3)巧弛豫率測量結(jié)果
[0033] Γι弛豫率反映 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn分子影像探針作為MRI造影劑的效 率，為單位摩爾濃度錳的縱向弛豫時間，可通過不同濃度下的T 1弛豫時間的倒數(shù)擬合 計算得到。圖2為本發(fā)明制備的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn分子影像探針和對照組材 料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的1\弛豫時間倒數(shù)與Mn濃度的線性擬合圖，可以看出這兩種 材料的弛豫時間倒數(shù)隨著錳濃度的增加（在〇-〇. 8mM濃度范圍內(nèi)）具有很好的線性關(guān) 系。并且通過計算可得本發(fā)明制備的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn分子影像探針和對照材料 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的Γι弛豫率分別為3. IOmM ?和3. 22ΠΛΓ1 s'因此，本發(fā)明所制備的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和對照材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn均可作為MRI分子影像診斷中的 優(yōu)良T1信號增強(qiáng)造影劑。
[0034] (4) T1加權(quán)MR成像測量結(jié)果
[0035] 圖3是本發(fā)明制備得到的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和對照組材料 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的T1加權(quán)MR成像性能測試，從圖中可以看出隨著錳濃度 (0. 075-1. 2mM)的提高，MRI信號逐漸增強(qiáng)，并且呈良好的梯度關(guān)系。結(jié)果說明制備得到的 兩組材料都具有良好的MRI信號增強(qiáng)造影劑應(yīng)用潛質(zhì)。
[0036] (5)血液相容性
[0037] 由于造影劑的給藥途徑多數(shù)情況下是經(jīng)由靜脈注射方式進(jìn)入人體內(nèi) 的。因此，造影劑勢必會與血液直接接觸。本發(fā)明通過溶血試驗評估了制備得到的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和對照組材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的血液相容性。圖4中顯 示了 G5.NHAc-FI-D0TA-Mn(a)和 G5.NHAc-FI-FA-D0TA-Mn(b)在不同錳濃度（10、25、50、 75、100yg/mL)下經(jīng)過2個小時孵育之后離心觀察溶血結(jié)果，結(jié)果顯示陽性對照組（水） 完全溶血，陰性對照組（PBS緩沖液）、實驗組以及對照組并未出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。此外，還通 過測定上層清液中血紅蛋白在541nm的吸光值來定量分析本發(fā)明制備材料的溶血率。如 圖4中柱狀圖所示，即使在錳濃度達(dá)到100 μ g/mL時，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和對照組 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的溶血率均小于5%，說明制備得到的納米顆粒具有良好的血液相容 性，能夠安全用于生物體內(nèi)MRI成像。
[0038] (6) MTT細(xì)胞存活率測試結(jié)果
[0039] 通過MTT比色法測定Hela細(xì)胞的存活率來檢測本發(fā)明制備得到的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和對照組材料 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn 的細(xì)胞毒性（如圖 5)。Hela 細(xì)胞分別與 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn (錳濃度為 10、25、50、75、 100 μ g/mL)在37°C下共培養(yǎng)24小時。然后，經(jīng)MTT處理后在570nm處測量吸光值，以PBS 緩沖液組的吸收值為基準(zhǔn)，不同濃度的材料處理后的吸收值與之相比計算得到Hela細(xì)胞 的存活率。實驗結(jié)果顯示G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和G5. NHAc-FI-DOTA-Mn在錳濃度10 到75 μ g/mL范圍內(nèi)對Hela細(xì)胞的存活率沒有顯著性差異，細(xì)胞存活率均在85%以上，當(dāng) 濃度增加到100 μ g/mL時細(xì)胞的存活率略微下降，但依然保持在80% (如圖5)。這說明 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn 具有良好的細(xì)胞相容性。
[0040] (7)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果
[0041] 通過流式細(xì)胞術(shù)檢測Hela細(xì)胞對本發(fā)明制備的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 分子影像探針和對照組材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn在不同濃度下處理細(xì)胞后的流式 細(xì)胞分析圖（圖6)平均熒光強(qiáng)度（圖7)來檢測FA的靶向效果。Hela細(xì)胞分別 與 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和對照組材料 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn (Mn 濃度為 0、10、25、 50、75和100 μ g/mL)在37 °C下共培養(yǎng)4小時，并且以PBS緩沖液處理的細(xì)胞作為對 照組。然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度。在圖7中，隨著Mn濃度的提 高，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn處理后細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度顯著增力卩，同時對照組材料 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn處理后細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度也呈遞增的關(guān)系。值得注意的是，在比較 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和對照組材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn在相同錳濃度下處理Hela細(xì) 胞后，尤其是錳濃度在25 μ g/mL以后，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn組表現(xiàn)出更高的熒光強(qiáng)度， 分析其原因可能是葉酸的介導(dǎo)，使得Hela細(xì)胞吞噬更多的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn，從而 出現(xiàn)高熒光值的現(xiàn)象。這一結(jié)果說明修飾FA賦予了 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn對Hela細(xì)胞 的特異革G向能力。
[0042] (8)體外細(xì)胞MR成像結(jié)果
[0043] 在進(jìn)行體內(nèi)實驗之前，評價了本發(fā)明制備的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和G5. NHAc-FI-DOTA-Mn的細(xì)胞MR成像效果（如圖8所示）。Hela細(xì)胞分別與 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn (Mn 濃度為 0· 1、0· 2、0· 4、0· 8 和 ImM) 在37°C下共培養(yǎng)4小時，并且以PBS緩沖液處理的細(xì)胞作為對照組。如圖8所示，隨著 Mn濃度的提高，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn和G5. NHAc-FI-DOTA-Mn處理后的細(xì)胞均表現(xiàn) 出MR信號增強(qiáng)的趨勢，說明隨著Mn濃度的增加，細(xì)胞對探針材料的吞噬量也增加。需 要指出的是，在相同的Mn濃度下，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn處理后的細(xì)胞比對照材料 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn處理后細(xì)胞的MR信號增強(qiáng)更明顯，說明靶向分子FA的存在使得細(xì)胞 對G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn的吞噬量要大大高于非靶向材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn。圖9是 細(xì)胞經(jīng)過不同濃度的分子影像探針處理后的MR成像信號值，從圖中明顯看出，隨著Mn濃度 的提高，細(xì)胞的MR信號值均逐漸增加，而且在相同的Mn濃度下，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 處理后細(xì)胞的MR信號值要明顯高于對照材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn處理后的細(xì)胞。這些 結(jié)果不僅說明制備的分子影像探針具有很好的細(xì)胞MR成像效果，而且證明了 FA介導(dǎo)的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn分子影像探針對Hela細(xì)胞的特異靶向性。
[0044] (9)體外細(xì)胞SPECT成像結(jié)果
[0045] 在進(jìn)行體內(nèi)SPECT成像之前，研宄了制備得到的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn-99niTc 和G5. NHAc-FI-DOTA-Mn-99niTc探針材料在細(xì)胞水平的成像能力（圖10)。Hela細(xì) 胞分另Ij 與 99niTc 活度為 0、10、50、100、200、500 μ Ci 的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn-99niTc 和G5. NHAc-FI-DOTA-Mn-99niTc共培養(yǎng)2小時。如圖10所示，隨著99niTc活度的提 高，G5.NHAc-FI-FA-D0TA-Mn」 9D1Tc 和 G5.NHAc-FI-D0TA-Mn」9D1Tc 處理后的細(xì)胞 均表現(xiàn)出SPECT信號增強(qiáng)的趨勢，說明隨著99nTc活度的增加，更多的探針材料進(jìn) 入Hela細(xì)胞使得 99mTc活度增加，因此SPECT信號增強(qiáng)。需要指出的是，在相同 的99mTc活度下，G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn-99mTc分子影像探針處理后的細(xì)胞比對 照材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn-99niTc處理后細(xì)胞的SPECT信號增強(qiáng)更明顯，說明靶 向分子FA的存在使得細(xì)胞對G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn-99mTc的吞噬量要大大高于 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn-99mTc。體外細(xì)胞水平的SPECT結(jié)果說明制備得到的探針不僅僅能在 細(xì)胞水平實現(xiàn)成像目的，同時FA的介導(dǎo)使得G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn-99niTc探針對于Hela 細(xì)胞具有靶向SPECT顯影能力，為后續(xù)的體內(nèi)動物SPECT成像提供了理論指導(dǎo)依據(jù)。
[0046] (10)體內(nèi)腫瘤MR成像結(jié)果和組織分布
[0047] 通過尾靜脈注射本發(fā)明制備的 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn 來評價腫瘤部位的MR成像效果（如圖11)。與注射前的對照組相比較，在注射后30分鐘到 4小時內(nèi)，注射對照材料G5. NHAc-FI-DOTA-Mn (Mn :500 μ g，200 μ L PBS)的裸鼠腫瘤部位明 暗程度變化并不明顯，而注射G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn (Mn :500 μ g，200 μ L PBS)的裸鼠腫 瘤明顯變亮，展示出FA修飾的分子影像探針具有明顯的MRI腫瘤診斷效果。圖12是相應(yīng) 注射時間點的腫瘤MR信號值變化，在注射后30分鐘到4小時，注射G5. NHAc-FI-DOTA-Mn 的裸鼠腫瘤MR信號值變化不明顯，而注射G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn的裸鼠腫瘤MRI信號值 明顯，這與圖11的結(jié)果一致。以上結(jié)果說明本發(fā)明制備的G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn分子探 針具有很好的腫瘤靶向能力，能成功應(yīng)用于體內(nèi)靶向MR腫瘤成像診斷。
[0048] 在注射 G5. NHAc-FI-FA-DOTA-Mn 和 G5. NHAc-FI-DOTA-Mn 分子影像探針 12 小時 后，處死荷瘤裸鼠，解剖取出心、肝、脾、肺、腎和腫瘤并稱重，然后用王水消化48小時以上， 取消化液用于ICP-AES分析金屬元素錳的含量，從而確定在注射G5. NHAc-FI-FA-DOTA-M