或 另外，組合物可包含增強(qiáng)它的功能的作用劑，例如，細(xì)胞毒性劑、細(xì)胞因子、化學(xué)治療劑或生 長抑制劑。這類分子合適以對于意圖目的有效的量組合存在。
[0101] 活性成分也可截留在微膠囊(例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合而制備，分別例 如，羥甲基纖維素或明膠-微膠囊和聚（異丁烯酸甲酯）微膠囊)中、膠質(zhì)藥物遞送系統(tǒng)（例 如，脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納米-顆粒和納米膠囊）中或大乳劑（macroemulsions) 中。
[0102] 用于體內(nèi)給予的制劑必須是無菌的。這通過穿過無菌過濾膜過濾容易地實現(xiàn)。
[0103] 可制備持續(xù)釋放的制劑。持續(xù)釋放的制劑的合適實例包括含抗體的固體疏水聚合 物的半透性基質(zhì)，所述基質(zhì)呈成形制品的形式，例如，薄膜或微膠囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的實例 包括多元酯、水凝膠（例如，聚（2-羥乙基-異丁烯酸酯）或聚（乙烯醇））、聚交酯（美國 專利號3, 773, 919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯乙酸乙烯 酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOT ? (可注射微球體，其由乳酸-乙醇酸 共聚物和乙酸亮丙瑞林組成）和聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然聚合物(例如乙烯乙酸乙烯 酯和乳酸-乙醇酸)使分子的釋放能夠持續(xù)超過100天，但某些水凝膠釋放蛋白持續(xù)較短時 間。
[0104] 可將本發(fā)明的抗體用作在樣品中檢測PD-Ll (或蛋白或其蛋白片段）的存在的作 用劑。優(yōu)選地，抗體含可檢測的標(biāo)記。抗體可為多克隆的或更優(yōu)選為單克隆的?？墒褂猛?整抗體或其片段（例如，F(xiàn)ab、scFv或F(ab)2)。關(guān)于探針或抗體的術(shù)語〃標(biāo)記的〃，意圖包括 通過偶聯(lián)（即，物理連接）可檢測的物質(zhì)至探針或抗體直接標(biāo)記探針或抗體，以及通過與另 一直接標(biāo)記的試劑的反應(yīng)性間接標(biāo)記探針或抗體。間接標(biāo)記的實例包括使用突光標(biāo)記的 第二抗體檢測第一抗體和用生物素末端標(biāo)記DNA探針使得它可用熒光標(biāo)記的鏈霉親和素 檢測。術(shù)語"生物樣品"意圖包括從受試者分離的組織、細(xì)胞和生物流體，以及存在于受試 者中組織、細(xì)胞和流體。因此，血液和血液的流分或組分(其包含血清、血漿或淋巴）包含于 術(shù)語"生物樣品"的使用中。即，本發(fā)明的檢測方法可用于在體外的生物樣品中或在體內(nèi)檢 測分析物mRNA、蛋白或基因組DNA。例如，用于檢測分析物mRNA的體外技術(shù)包括Northern 雜交和原位雜交。用于檢測分析物蛋白的體外技術(shù)包括酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA)、蛋白 質(zhì)印跡、免疫沉淀和免疫熒光。用于檢測分析物基因組DNA的體外技術(shù)包括Southern雜 交。用于指導(dǎo)免疫測定的方法描述于例如"ELISA: Theory and Practice: methods in Molecular Biology (ELISA:理論與實踐：分子生物學(xué)方法）"，Vol. 42，J. R. Crowther (主編）Human Press, Totowa, NJ, I995 ;"Immunoassay (免疫測定），'，E. Diamandis 和T. Christopoulus, Academic Press, Inc. , San Diego, CA, 1996 ;和"Practice and Theory of Enzyme Immunoassay(酶免疫測定的實踐與理論）"，P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985。此外，用于檢測分析物蛋白的體內(nèi)技術(shù)包括向受 試者引入標(biāo)記的抗-分析物蛋白抗體。例如，所述抗體可用放射性標(biāo)記物標(biāo)記，所述放射性 標(biāo)記物在受試者中的存在和位置可通過標(biāo)準(zhǔn)成像技術(shù)檢測。
[0105] 定向抗ro-Li蛋白的抗體(或其片段）可用于本領(lǐng)域已知的方法，其涉及ro-Li蛋 白的定位和/或定量（例如，用于測量在合適的生理學(xué)樣品中ro-Li蛋白的水平、用于診斷 方法、用于蛋白成像等）。在給定的實施方案中，對ro-Li蛋白特異的抗體或其衍生物、片 段、類似物或同系物(其含抗體衍生的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域）被利用作為藥理活性化合物（在下 文中被稱為"治療藥?。
[0106] 本發(fā)明的對ro-Li蛋白特異的抗體可用于通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，例如免疫親和、層析或 免疫沉淀分離ro-Li多肽。定向抗ro-Li蛋白的抗體(或其片段）可作為臨床試驗程序的 一部分診斷性地用于監(jiān)測組織中蛋白的水平，例如，確定給定治療方案的功效。檢測可通過 將所述抗體偶聯(lián)（即，物理連接）至可檢測的物質(zhì)而促進(jìn)?？蓹z測的物質(zhì)的實例包括多種 酶、輔基、熒光材料、發(fā)光材料、生物發(fā)光材料和放射性材料。合適的酶的實例包括辣根過氧 化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基復(fù)合物的實例包括鏈霉 親和素/生物素和抗生物素/生物素；合適的熒光材料的實例包括傘形酮、熒光素、異硫氰 酸熒光素、若丹明、二氯三嗪基胺熒光素、氯化丹酰或藻紅素；發(fā)光材料的實例包括魯米諾； 生物發(fā)光材料的實例包括螢光素酶、螢光素和水母素；以及合適的放射性材料的實例包括 125i、131i、35s 或 3η。
[0107] 治療纟目合物 本發(fā)明的抗體或作用劑（本文也稱為"活性化合物"），及其衍生物、片段、類似物和同 系物可被摻入適合于給予的藥物組合物。這類組合物通常包括抗體或作用劑和藥學(xué)上可接 受的載體。本文使用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"意圖包括任何和所有與藥物給予相容 的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。合適的載體描述于最新 版的Remington' s Pharmaceutial Sciences,其為本領(lǐng)域中標(biāo)準(zhǔn)參考文本，其通過引用并 入本文。這類載體或稀釋劑的優(yōu)選實例包括但不限于水、鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和 5%人血清白蛋白。也可使用脂質(zhì)體和非水性媒介(例如固定油)。藥物活性物質(zhì)的這樣的媒 介和作用劑的使用在本領(lǐng)域是周知的。除了任何常規(guī)媒介或作用劑與活性化合物不相容的 情況之外，其在組合物中的使用為預(yù)期的。補(bǔ)充活性化合物也可摻入該組合物。
[0108] 本發(fā)明的藥物組合物被配制為與其意圖的給予途徑相容。給予途徑的實例包括腸 胃外(例如，靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下)、口服（例如，吸入）、透皮（即，表面）、透粘膜和直腸給予。 用于腸胃外、皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液或混懸液可包括以下組分：無菌稀釋劑（例如注射用 水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成的溶劑）；抗細(xì)菌劑(例如苯甲醇 或?qū)αu基苯甲酸甲酯）;抗氧化劑(例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉）;螯合劑(例如乙二胺四乙酸 (EDTA));緩沖液(例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽)，以及用于調(diào)節(jié)張力的作用劑(例如氯化 鈉或葡萄糖)。可用酸或堿(例如鹽酸或氫氧化鈉）調(diào)節(jié)pH。可將腸胃外制劑封裝在安瓿、 一次性注射器或玻璃或塑料制成的多劑量小瓶中。
[0109] 適合于可注射用途的藥物組合物包括無菌水性溶液（在水溶的情況下）或分散 液和用于無菌可注射溶液或分散液的臨時配制的無菌粉末。對于靜脈內(nèi)給予，合適的載體 包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELtm (BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS)。在所有情況下，組合物必須為無菌的且應(yīng)該為流動性的，達(dá)到容易可注射性存在的 程度。它必須在制造和儲存條件下穩(wěn)定并且必須保持抗微生物(例如細(xì)菌和真菌）的污染 活動。載體可為溶劑或分散介質(zhì)，其包含例如，水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇和液體 聚乙二醇等）及其合適的混合物。合適的流動性可例如通過使用包衣(例如卵磷脂)、通過 在分散液的情況下保持所需粒度和通過使用表面活性劑而保持。預(yù)防微生物的活動可通過 多種抗細(xì)菌和抗真菌劑(例如，對羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳萊等）而實 現(xiàn)。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑(例如，糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇、 氯化鈉)?？勺⑸浣M合物的延長吸收可通過將延遲吸收的作用劑(例如，單硬脂酸鋁和明膠） 包含入組合物而發(fā)生。
[0110] 無菌可注射溶液可通過將活性化合物以所需量摻入帶有上面列舉的一種成分或 成分的組合的合適溶劑，根據(jù)需要，隨后過濾滅菌而制備。通常，分散液通過將活性化合物 摻入含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來自上述列舉的那些的所需其它成分的無菌媒介而制備。在用于 制備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，制備的方法為真空干燥和凍干，其產(chǎn)生來自其 先前無菌過濾溶液的活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
[0111] 口服組合物通常包括惰性稀釋劑或可食用載體。它們可以被封裝于明膠膠囊中或 壓制成片劑。為了 口服治療給予的目的，活性化合物可與賦形劑摻合并以片劑、錠劑或膠 囊的形式使用?？诜M合物也可使用流體載體制備以用作漱口劑，其中在流體載體中的化 合物被口腔施用和漱口并吐出或吞下。藥學(xué)上相容的結(jié)合劑和/或佐藥材料可被包括作 為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可含有任何以下成分或類似性質(zhì)的化合物： 粘合劑(例如微晶纖維素、黃芪樹膠或明膠）；賦形劑(例如淀粉或乳糖）；崩解劑(例如藻酸、 Primogel或玉米淀粉）；潤滑劑(例如硬脂酸鎂或Sterotes);助流劑(例如膠質(zhì)二氧化娃）； 甜味劑(例如蔗糖或糖精）；或矯味劑(例如薄荷、水楊酸甲酯或桔子調(diào)味料)。
[0112] 對于通過吸入給予，化合物以來自壓力容器或分配器(其含有合適的推進(jìn)劑，例 如，諸如二氧化碳等氣體）或噴霧器的氣霧劑噴霧的形式遞送。
[0113] 全身給予也可通過透粘膜的或透皮的方式。對于透粘膜的或透皮的給予，適合于 待滲透的屏障的滲透劑被用于制劑。這類滲透劑在本領(lǐng)域中為普遍已知的，并對于透粘膜 給予，包括例如去垢劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。透粘膜的給予可通過使用鼻噴霧或栓劑 完成。對于透皮的給予，活性化合物被配制成如本領(lǐng)域普遍已知的軟膏、油膏、凝膠或乳膏。
[0114] 化合物也可以栓劑（例如，用常規(guī)栓劑基例如可可脂和其它甘油酯）或用于直腸 遞送的滯留型灌腸劑的形式制備。
[0115] 在一個實施方案中，活性化合物用保護(hù)化合物以防從體內(nèi)快速消除的載體(例如 控釋制劑，其包括植入物和微囊包封遞送系統(tǒng)）制備?？墒褂蒙锟山到獾摹⑸锵嗳莸木?合物例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制備這類制劑 的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。所述材料也可從Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals, Inc.商購獲得。脂質(zhì)體混懸液（其包括用針對病毒抗原的單克隆抗體革巴 向至被感染的細(xì)胞的脂質(zhì)體）也可用作藥學(xué)上可接受的載體。這些可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員 已知的方法(例如，描述于美國專利號4, 522, 811中的方法）而制備。
[0116] 特別有利的是，以容易給予和劑量均勻的劑量單位形式配制口服或腸胃外組 合物。本文使用的劑量單位形式是指適合作為待治療的受試者的單一劑量（unitary dosages)的生理上分離單位；各單位含有預(yù)定量的活性化合物(其經(jīng)計算以與所需的藥物 載體聯(lián)合產(chǎn)生所需治療效果)。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格受控于并直接取決于活性化 合物的獨(dú)特的特征和待達(dá)到的特定治療效果，以及在配制這類活性化合物用于個體治療的 領(lǐng)域中固有的限制。
[0117] 藥物組合物可與用于給予的使用說明書一起包含于容器、包裝或分配器中。
[0118] 診斷測丨定 本發(fā)明的huro-Li抗體，當(dāng)連接至可檢測的部分時，提供用于檢測"癌性組織"或趨向 于異常的細(xì)胞增殖并由此處于癌風(fēng)險中的組織的方法。除因原位新生物所致而變?yōu)榘┬缘?組織之外，例如，抗體-可檢測部分綴合物還提供檢測存在于遠(yuǎn)端器官和/或組織中的癌 性轉(zhuǎn)移組織的方法。因此這類組織可通過如下檢測：將懷疑為癌性的組織與抗體-可檢測 部分在合適的條件下接觸以引起可檢測部分在癌性組織中被檢測，由此檢測癌性組織的存 在。
[0119] 本發(fā)明的huFO-Ll抗體，當(dāng)連接至可檢測部分時，提供在摧患癌癥或慢性感染的 受試者中檢測T細(xì)胞衰竭的方法。例如，huPD-Ll抗體可用于在受試者中檢測I3D-Ll的水 平，其中與參考水平相比該水平可表明是否受試者正罹患T細(xì)胞衰竭。因此，此方法也可用 于確定是否治療(其使用huro-Ll抗體通過逆轉(zhuǎn)或抑制T細(xì)胞衰竭以提高免疫應(yīng)答)會對受 試者有益。
[0120] 可檢測部分可直接綴合至抗體或片段，或間接地通過使用例如熒光第二抗體而綴 合。直接綴合可通過例如熒光團(tuán)至抗體或抗體片段的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)偶聯(lián)或通過遺傳工程改造完 成。可構(gòu)建嵌合體或融合蛋白，其含有偶聯(lián)至熒光或生物發(fā)光蛋白的抗體或抗體片段。例 如，Casadei等人描述了制備能夠在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)水母素和抗體基因的融合蛋白的 載體構(gòu)建體的方法。
[0121] 本文使用的關(guān)于探針或抗體的術(shù)語"標(biāo)記的"，意圖包括通過將可檢測的物質(zhì)偶 聯(lián)（即，物理連接）至探針或抗體而直接標(biāo)記探針或抗體，以及通過與直接標(biāo)記的另一試劑 的反應(yīng)性而間接標(biāo)記探針或抗體。間接標(biāo)記的實例包括使用熒光標(biāo)記的第二抗體檢測第一 抗體和用生物素末端標(biāo)記DNA探針使得它可用熒光標(biāo)記的鏈霉親和素檢測。術(shù)語〃生物樣 品〃意圖包括從受試者分離的組織、細(xì)胞和生物流體（例如活檢樣品），以及存在于受試者 中的組織、細(xì)胞和流體。即，本發(fā)明的檢測方法可用于在體外的生物樣品中和在體內(nèi)檢測癌 癥、癌細(xì)胞或癌-相關(guān)細(xì)胞（例如與腫瘤或癌細(xì)胞相關(guān)的基質(zhì)細(xì)胞）。例如，用于檢測ro-Li 的體外技術(shù)包括酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA)、蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀和免疫熒光。此外，用于 檢測ro-Ll的體內(nèi)技術(shù)包括向受試者引入標(biāo)記的抗-PD-Ll抗體。例如，抗體可用放射性標(biāo) 記物標(biāo)記，所述放射性標(biāo)記物在受試者中的存在和位置可通過標(biāo)準(zhǔn)成像技術(shù)檢測。在實施 方案中，本發(fā)明提供在受試者中檢測腫瘤或癌細(xì)胞的非侵入式方法。受試者被給予本發(fā)明 的抗體或scFv抗體，在將所述抗體連接至可檢測部分（即，任何能夠通過例如，熒光、化學(xué)、 化學(xué)發(fā)光、放射性或本領(lǐng)域已知的其它方法檢測的部分）時，抗體被允許定位于腫瘤，隨后 通過觀察可檢測部分而檢測。
[0122] 在"靶向的"綴合物，即，含有靶向部分(設(shè)計用以在受試者或動物中在一個或多個 特定位點位點上定位綴合物的分子或特征）的綴合物的情況下，定位是指當(dāng)在受試者內(nèi)結(jié) 合的"定位的"實體和未結(jié)合的"自由"實體之間的平衡已經(jīng)基本上達(dá)到時的狀態(tài)。這類平 衡達(dá)到的速率取決于給予途徑。例如，通過靜脈內(nèi)注射給予以定位血栓的綴合物在注射幾 分鐘內(nèi)可實現(xiàn)定位或累積于血栓。另一方面，口服給予以定位腸內(nèi)的感染的綴合物可花費(fèi) 數(shù)小時以實現(xiàn)定位。備選地，定位可僅僅指在給予實體之后在選定的時間期限中該實體在 受試者或動物中的位置。通過另一實例的方式，當(dāng)部分在給予之后變得分散時實現(xiàn)定位。
[0123] 在所有以上情況下，對實現(xiàn)定位的時間的合理估計可由本領(lǐng)域技術(shù)人員作出。此 外，作為時間函數(shù)的定位狀態(tài)可根據(jù)本發(fā)明的方法(例如用光檢測設(shè)備）通過對可檢測部分 (例如，光-發(fā)射綴合物）成像而追蹤（follow)。使用的"光檢測設(shè)備"應(yīng)該具有足夠高的 靈敏性以能夠在合理數(shù)量的時間內(nèi)對來自哺乳動物內(nèi)的微弱的光成像，并且使用來自這類 設(shè)備的信號構(gòu)建圖像。
[0124] 在其中有可能使用特別亮的光-產(chǎn)生部分和/或檢測定位在被成像的受試者或 動物的表面附近的光-產(chǎn)生融合蛋白的情況下，可使用一副"夜視"護(hù)目鏡或標(biāo)準(zhǔn)高靈敏 性視頻照相機(jī)，例如Silicon Intensified Tube (SIT)照相機(jī)（例如，來自Hammamatsu Photonic Systems, Bridgewater, N.J·)。然而，更通常，需要更靈敏的光檢測方法。
[0125] 在極低的光水平下，每單位面積的光子通量變得低，以至于成像得到的景物不再 表現(xiàn)為連續(xù)的。替代地，它表示為時間上和空間上都相距很遠(yuǎn)的單獨(dú)的光子。在顯示器上 觀看，這類圖像看起來和閃爍的光點一樣，各自代表單個檢測出的光子。通過這些檢測出的 光子隨時間推移在數(shù)字圖像處理器中被積累，可獲得和構(gòu)建圖像。與其中每一個像點的信 號都被賦予了強(qiáng)度值的傳統(tǒng)相機(jī)相反，在光子計數(shù)成像中信號的振幅不帶有任何意義。目 標(biāo)在于僅檢測信號(光子）的存在并計數(shù)隨時間推移關(guān)于它的位置的信號的出現(xiàn)。
[0126] 至少兩種類型的光檢測設(shè)備（下面描述）可檢測單獨(dú)的光子并產(chǎn)生可由圖像處理 器分析的信號。降噪光子檢測設(shè)備通過降低光子檢測器中的背景噪聲，而不是放大光子信 號實現(xiàn)靈敏性。噪音主要通過冷卻檢測器陣列而降低。設(shè)備包括電荷耦合設(shè)備（CXD)照相 機(jī)，其被稱為"后薄化的"、冷卻的CCD照相機(jī)。在更靈敏的裝置中，冷卻使用例如，液氮(其 將CCD陣列的溫度帶到約-120°C)而實現(xiàn)。"后薄化的"是指超薄的后板，其縮短了路徑長 度(光子沿其前進(jìn)而被檢測)，由此增強(qiáng)量子效率。特別靈敏的后薄化的低溫CCD照相機(jī)為 "TECH 512"，從 Photometries, Ltd. (Tucson, Ariz.)可得的系列 200 照相機(jī)。
[0127] "光子放大設(shè)備"在光子撞擊檢測屏之前放大光子。這類包括帶有增強(qiáng)儀的CCD照 相機(jī)，例如微通道增強(qiáng)儀。微通道增強(qiáng)儀通常含有與照相機(jī)檢測屏垂直的和同延的金屬通 道陣列。將微通道陣列放在待成像的樣品、受試者或動物與照相機(jī)之間。進(jìn)入該陣列的通 道的大多數(shù)光子在離開之前接觸通道的一側(cè)。橫跨陣列施用的電壓導(dǎo)致來自光子碰撞的許 多電子的釋放。來自這類碰撞的電子以"散彈槍"的方式離開它們起點的通道，并通過照相 機(jī)檢測。
[0128] 甚至更強(qiáng)的靈敏性可通過如下實現(xiàn)：增強(qiáng)型微通道陣列串聯(lián)放置，使得在第一階 段產(chǎn)生的電子依次在第二階段中導(dǎo)致電子的放大信號。然而，靈敏性的增強(qiáng)以空間解析度 (其隨著每一級額外放大而降低)為代價實現(xiàn)。范例性的基于微通道增強(qiáng)器的單光子檢測設(shè) 備為從Hamamatsu可得的C2400系列。
[0129] 圖像處理器處理由光檢測設(shè)備產(chǎn)生的信號，所述光檢測設(shè)備計數(shù)光子以構(gòu)建圖 像(其可例如在顯示器上展示或在圖像打印機(jī)上打印）。這類圖像處理器通常作為系統(tǒng)(其 包括上面描述的靈敏光子計數(shù)照相機(jī)）的一部分出售，并因此從相同來源可得。所述圖像 處理器通常連接至個人電腦（例如IBM-兼容PC或Apple Macintosh (Apple Computer, Cupertino，Calif.))，其可以或可以不被包括作為購買的成像系統(tǒng)的一部分。一旦圖像呈 數(shù)字文件的形式，它們就可通過多種圖像處理程序操作（例如"ADOBE PHOTOSHOP"，Adobe Systems, Adobe Systems, Mt. View, Calif.)和打印。
[0130] 在一個實施方案中，生物樣品含有來自測試受試者的蛋白分子。一種優(yōu)選的生物 樣品是外周血白細(xì)胞樣品，其通過常規(guī)方法從受試者分離。
[0131] 本發(fā)明還包括用于在生物樣品中檢測ro-Li或ro-Li-表達(dá)的細(xì)胞的存在的試劑 盒。例如，試劑盒可包括：能夠在生物樣品中檢測癌或腫瘤細(xì)胞的標(biāo)記的化合物或作用劑 (例如，抗-PD-Ll scFv或單克隆抗體）、用于在樣品中檢測H)-L1的量的工具和用于將樣 品中F1D-Ll的量與標(biāo)準(zhǔn)作比較的方法。在一些實施方案中，所述標(biāo)準(zhǔn)是非癌細(xì)胞或其細(xì)胞 提取物?；衔锘蜃饔脛┛砂b在合適的容器中。試劑盒可進(jìn)一步包括使用試劑盒以在樣 品中檢測癌癥的說明書。
[0132] 雙特異件抗體 雙特異性抗體（bsAb)是抗體，其包含兩個可變結(jié)構(gòu)域或scFv單位使得所得抗體識別 兩種不同抗原。本發(fā)明提供識別ro-Li和第二抗原的雙特異性抗體。范例性的第二抗原包 括腫瘤相關(guān)抗原、細(xì)胞因子和細(xì)胞表面受體。在一些實施方案中，所述第二抗原可以是CAIX (碳酸酐酶IX或G250)、IL-10或CCR4。在一些實施方案中，所述第二抗原可以是細(xì)胞表面 受體，其中所述細(xì)胞表面受體是CCR4、IL21R、BTLA、HVEM或??Μ3。
[0133] 本發(fā)明的雙特異性抗體包括本文公開的huro-Ll抗體的重鏈和輕鏈組合或scFv。
[0134] 雙特異性抗體的構(gòu)建 本發(fā)明的雙特異性抗體可使用本領(lǐng)域已知方法構(gòu)建。在一些實施方案中，所述雙特異 性抗體是單個多肽，其中兩個scFv片段通過長接頭多肽(其長度足以允許兩個scFv單位之 間的分子內(nèi)締合)連接以形成抗體。在其它實施方案中，雙特異性抗體是通過共價或非共價 鍵連接的一個以上的多肽。
[0135] 在另一實施方案中，雙特異性抗體使用"結(jié)進(jìn)孔"法（Ridgway等人，Protein Eng 7:617-621 (1996))構(gòu)建。在此方法中，將兩個不同可變結(jié)構(gòu)域的Ig重鏈還原以選擇性地 破壞重鏈配對同時保留重鏈-輕鏈配對。將識別兩個不同抗原的兩個重鏈-輕鏈雜二聚體 混合以促進(jìn)雜連接配對，所述雜連接配對通過CH3結(jié)構(gòu)域的工程改造的"結(jié)進(jìn)孔"介導(dǎo)（如 在圖5