2h-1-苯并吡喃-2-酮在制備藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及化合物在制備免疫抑制劑及抗炎、抗癌藥物方面的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫抑制劑是針對免疫系統(tǒng)具有抑制作用的藥物，不同的具體藥物分別作用于免 疫反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)的不同環(huán)節(jié)，在臨床上可用于自身免疫性疾病的治療和防止器官移植手 術(shù)產(chǎn)生的排斥反應(yīng)。免疫抑制劑主要分為以下幾種：（1)化學(xué)制劑類，如烷化劑類的氮芥； ⑵激素類，如糖皮質(zhì)激素；⑶真菌代謝產(chǎn)物，如環(huán)孢素 A(cycl〇Sp〇rinA，CsA) ;(4)中藥 及其有效成分。[參考文南犬：Mann，J. Natural products as immunosuppressive agents. Nat. Prod. Rep. 2001，18,417-430.]
[0003] CD268 (BAFF-R)是B細胞活化因子（BAFF)的特異性受體，BAFF屬于腫瘤壞死因 子（TNF)家族中的成員，研究發(fā)現(xiàn)BAFF在B細胞的成熟和存活、免疫應(yīng)答、自身免疫性疾病 中發(fā)揮重要的作用。BAFF屬于II型跨膜蛋白，以同源三聚體的形式發(fā)揮生物學(xué)作用，BAFF 主要在外周血單個核細胞、淋巴結(jié)、脾臟和胸腺中表達。BAFF可通過激活NF- κ B途徑介導(dǎo) B細胞存活，NF-κ B能誘導(dǎo)Bcl-2的生成，而Bcl-2家族成員能控制細胞凋亡進程，進一步 介導(dǎo)自身反應(yīng)性細胞的生存，產(chǎn)生自身抗體。[參考文獻Mackay F，Browning JL. BAFF :a fundamental survival factor for B cells. Nat Rev Tmmunol. 2002 Jul ；2 (7) :465-75.]
[0004] CD86(B7-2)主要表達于抗原遞呈細胞：如單核巨噬細胞，樹突狀細胞（Dentritic cells，DCs)及B細胞等細胞表面，通過與T細胞表面的⑶28分子結(jié)合，為T細胞的活化提 供第二信號，促進T細胞增殖分化。初始T細胞表面的CD28與APC上的CD86結(jié)合后能夠 為T細胞激活提供共刺激信號，可促進T細胞增殖、阻止T細胞凋亡、產(chǎn)生T細胞趨化因子； 可以上調(diào)IL-2,增強細胞因子分泌；上調(diào)⑶40L表達和CTLA-4的mRNA水平，還可增強T細 胞對超抗原的敏感性，介導(dǎo)CTL對靶細胞的效應(yīng)功能及介導(dǎo)T、B細胞間的粘附，促進體液 免疫應(yīng)答等。[參考文獻：David M. Sansom. What' s the difference between CD80and CD86Trends in Immunology. 2003,24(6) :313-318.]
[0005] 炎癥本身也是一種免疫反應(yīng)，因此，免疫抑制劑多具有抗炎作用。脂多糖 (lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的RAW264. 7小鼠巨噬細胞是常見研究炎癥反應(yīng)的模 型。巨·細胞在脂多糖LPS刺激下，可促使炎癥因子如一氧化氮（nitric oxide，NO)的 分泌。一氧化氮（NO)是細胞之間信息傳遞的調(diào)節(jié)因子，具有介導(dǎo)細胞免疫和炎癥反應(yīng) 的作用。當機體發(fā)生炎癥反應(yīng)，致炎物質(zhì)和炎癥介質(zhì)會增加 NO的合成和釋放。過量的 NO及其穩(wěn)定性衍生物過氧亞硝基陰離子對細胞具有毒性作用。[參考文獻：Gang Chen， Kai-KaiLi Chak-HeiFung. Er-Miao-San，a traditional herbal formula containing Rhizoma Atractylodis and Cortex Phellodendri inhibits inflammatory mediators in LPS-stimulated RAW264. 7macrophages through inhibition of NF-κB pathway and MAPK sactivation. [J]Journal of Ethnopharmacology. 2014?154? 711-718.]
[0006] Toll樣受體做為一種重要的模式識別受體，在生物體免疫反應(yīng)中，是先天免疫和 后天免疫的紐帶。Toll樣受體參與生物體的先天性免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，并且在組織修 復(fù)方面發(fā)揮著重要作用。目前研究發(fā)現(xiàn)，TLR4在生物體中具有多種功能。TLR4在體內(nèi)能 識別外源性或內(nèi)源性等多種病原相關(guān)分子模式，如脂多糖（LPS)，熱休克蛋白（heat-shock proteins，HSP)，紫杉醇，肽聚糖等。同時針對不同的病原相關(guān)分子模式激活下游不同的免 疫效應(yīng)。早期研究認為TLRs特異性參與免疫反應(yīng)，但最新研究表明，在多種腫瘤組織和腫 瘤細胞系中TLR4表達不一致。Kell等研究發(fā)現(xiàn)TLR4激活后可以促進腫瘤細胞分泌多種炎 癥因子，避免CTL和NK細胞的免疫攻擊，造成腫瘤細胞的免疫逃避，促進腫瘤細胞生長；抑 制TLR4的激活則會延緩腫瘤生長[參考文獻：KelIy MG，Alvero AB，Chen R，Silasi DA， Abrahams VM，Chan S，et al. TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer[J] · Cancer research，2006,66 :3859-3868. ]〇
[0007] 香豆素是一類重要的雜環(huán)化合物，主要存在于天然產(chǎn)物及微生物的代謝產(chǎn)物中。 香豆素衍生物具有良好的活性，廣泛的應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、分析、染料及光學(xué)領(lǐng)域。實驗研究 發(fā)現(xiàn)香豆素類化合物具有抗HIV、抗癌、降壓、抗心律失常、抗骨質(zhì)疏松、鎮(zhèn)痛、平喘及抗菌等 多種生物活性，具有潛在的藥用價值。其中，濱蒿內(nèi)酯是香豆素的一種，其具有平喘止咳、利 膽、消炎鎮(zhèn)痛、降血壓、調(diào)血脂等多種生物活性。本發(fā)明所述化合物為濱蒿內(nèi)酯的衍生物，具 有免疫抑制，抗炎，抗癌的生物活性。[參考文獻：郝光，王振國，付文艷.香豆素類化合物 抗腫瘤作用研究進展[J]中國中藥雜志.2008,18,2016-2019.]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供2H-1-苯并吡喃-2-酮（ADMC)在制備藥物中的應(yīng)用，具體是 在制備免疫抑制劑及抗炎、抗癌藥物方面的應(yīng)用，還包括在制備抑制T、B淋巴細胞增殖的 藥物中的應(yīng)用、在制備促進T、B淋巴細胞凋亡的藥物中的應(yīng)用、在制備抑制T、B淋巴細胞活 化的藥物中的應(yīng)用、在制備抑制TLR4受體表達的藥物中的應(yīng)用、在制備抑制炎性因子N0、 TNF-α分泌的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明所研究的2Η-1-苯并吡喃-2-酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下，可通過全合成或半合成 制備得到。合成路線如下：
[0011]分子式：C13H12O5分子量：248
[0012] 本發(fā)明通過刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)小鼠 T淋巴細胞增殖實驗及脂多糖（LPS)誘導(dǎo) 小鼠 B淋巴細胞增殖實驗，首次發(fā)現(xiàn)2H-1-苯并吡喃-2-酮對T、B淋巴細胞增殖具有抑制 作用；通過PI染色后流式分析，確定其能劑量依賴性的增加 T、B細胞的凋亡，并能降低LPS 誘導(dǎo)的B淋巴細胞表面B細胞活化因子受體（BAFF-R) CD268的表達及髓來源DC細胞和LPS 誘導(dǎo)的原代DC細胞表面共刺激分子CD86的表達，從而抑制T、B細胞活化，能用于未來制備 免疫抑制劑。本發(fā)明通過脂多糖（LPS)誘導(dǎo)的巨噬細胞毒性實驗，首次發(fā)現(xiàn)2H-1-苯并吡 喃-2-酮能通過抑制TLR4的激活對抗脂多糖（LPS)誘導(dǎo)的巨噬細胞損傷，并劑量依賴性的 減少N0、TNF-a的分泌，能用于制備抗炎藥物。本發(fā)明通過MTT實驗，首次發(fā)現(xiàn)2H-1-苯并 吡喃-2-酮能抑制胰腺癌細胞系BXPC-3,肝癌細胞系H印G2,宮頸癌細胞系Hela的細胞增 殖，能用于制備抗癌藥物，還能用于制備抑制T、B淋巴細胞增殖的藥物、用于制備促進T、B 淋巴細胞凋亡的藥物、用于制備抑制T、B淋巴細胞活化的藥物、用于制備抑制TLR4受體表 達的藥物以及用于制備抑制炎性因子NO、TNF- α分泌的藥物等。
【附圖說明】
[0013] 圖I :ADMC樣品的HPLC圖譜，由圖可知，ADMC的出峰時間為7. 7min，且含量最高。 根據(jù)各種物質(zhì)的峰面積求得ADMC的純度為83. 26 %。
[0014] 圖2 :ADMC的1H-NMR圖譜，即為化合物ADMC的核磁共振氫譜，由圖譜分析各質(zhì)子 信號的化學(xué)位移如下圖所示：
[0015]
[0016] 圖3 :細胞存活率折線圖，為環(huán)孢素（CsA)、霉酚酸酯（MMF)、2H-1-苯并吡喃-2-酮 (ADMC)對T、B淋巴細胞生存率的影響，ADMC對