包含山蒼粳的油作為有效成分的炎癥性疾病預防及治療用組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及利用山蒼粳（LITSEA JAP0NICA)的炎癥性疾病用組合物，詳細地涉及 包含從山蒼粳的果實或種子獲得的油作為有效成分的炎癥性疾病的預防及治療用組合物 及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 在本發(fā)明中使用的山蒼粳（Litsea japonica)作為常綠葉小喬木，主要垂直分布 于標高為700m以內(nèi)的海邊及山邊。
[0003] 據(jù)報告，在以往研究這種植物的化學結(jié)構(gòu)的過程中，發(fā)現(xiàn)了各種精油（essential oils)、脂肪酸（fatty acids)、內(nèi)酯（lactones)、生物堿（alkaloids)及砲類化合物 (terpenoids)〇
[0004] 分離了作為內(nèi)酯的種類眾所周知的hamabiwalactone A、hamabiwalatone B、 akolactone B、litsealactone A 及 litsealactone B〇
[0005] 并且，據(jù)報告，根據(jù)作為從葉子分離的黃酮類化合物（flavonoids)成分的表兒茶 素（epicatechin)、阿福豆戒（afzelin)、槲皮苷（quercitrin)及山奈酸香豆?；咸堰拎?糖戒（tiliroside)的抗補體活性（anti-complement activity)的調(diào)查結(jié)果，山奈酸香豆 酰基葡萄吡喃糖戒對補體系統(tǒng)（complement system)具有最強有力的抑制作用。
[0006] 分餾山蒼粳葉80% EtOH提取物后，使用分餾物來測定抗氧化（1，1_二苯 基-2-三硝基苯肼（DPPH)、黃噪呤氧化酶（Xanthine Oxidase)、超氧自由基（Superoxide radical)->在分餾物EtOAC層中1，1-二苯基-2-三硝基苯肼和超氧自由基的抑制活性優(yōu) 秀）及 LDH、NO、PGE2 (含鹽）（尹元鐘）等，2010, J，Korean Soc. Appl. Biol. Chem. 53 (1): p27~32)，利用硅膠柱來分離葉子的黃酮種（表兒茶素、阿福豆甙、槲皮苷、山奈酚香豆酰 基葡萄吡喃糖戒、楊梅苷（Myricitrin)、山柰酸（Kaempferol)、槲皮素（Quercetin)、楊梅 素（Myricetin))后，測定了抗補體系統(tǒng)（Anti-complement system)活性（Sun Young Lee 等，2005,植物療法研究（PHYTOTHERAPY RESEARCH)，19 :p. 273-276)，并利用甲醇提取食用 及藥用植物中的山蒼粳葉子后，在測定過氧化脂質(zhì)生成抑制（樸鐘哲）等，1997, J. Korean Soc. Food ScL Nutr. 26(6) :ρ· 1159-1163)的研究中，在山蒼粳的情況下，據(jù)報告，活性度在 濃度為10-lmg/mL的條件下呈現(xiàn)約18%的抑制效果。
[0007] 并且，在山蒼粳（Litsea japonica)的HL-60白血病細胞細胞凋亡（Apoptosis) 誘導效果相關(guān)研究（2009, Elvira Kim等，Ykhak Hoeji，53(1) :ρ· 6-11)中，利用山蒼粳 葉子，并利用80 %乙醇來進行提取，根據(jù)HL-60 (細胞毒性）-MTT的測定結(jié)果，正常細胞不 具有毒性，并呈現(xiàn)HL-60(白血病細胞）細胞增殖抑制效果，通過脫氧核糖核酸片段（DNA fragmentation)分析、蛋白質(zhì)印跡（Western blot)分析減少Bcl-2的表達，并使胱天蛋白 酶（caspase)活性化，從而誘導細胞凋亡（apoptosis)來實現(xiàn)抑制增殖的效果等，像這樣， 對山蒼粳進行了部分研究。
[0008] 專利文獻的現(xiàn)有技術(shù)提供有（KR)韓國公開特許10-2009-0091477(公開日：2009 年08月28日）號的包含山蒼粳提取物作為有效成分的癌疾病的預防及治療用組合物相關(guān) 技術(shù)和（KR)韓國登錄特許10-1243243(登錄日：2012年03月07日）號的包含山蒼粳提 取物或其分餾物作為有效成分的糖尿病并發(fā)癥預防及治療用組合物相關(guān)技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 技術(shù)問題
[0010] 本發(fā)明提供炎癥性疾病預防及治療用組合物及其制備方法，上述炎癥性疾病預防 及治療用組合物包含具有炎癥性疾病的預防及治療效果的山蒼粳的油作為有效成分。
[0011] 即，本申請人為了開發(fā)對炎癥性疾病的預防及治療具有功效的原材料，在從天然 物篩選的過程中，確認到山蒼粳（果實或種子）的油抑制作為炎癥性因子的IL-I β、NO及 TNF- α生成的效果優(yōu)秀，從而提供包含山蒼粳的油作為有效成分的炎癥性疾病預防及治療 用組合物及其制備方法。
[0012] 解決問題的手段
[0013] 想要達成如上所述的目的的本發(fā)明提供包含山蒼粳的油作為有效成分的炎癥性 疾病預防及治療用組合物，上述炎癥性疾病預防及治療用組合物的特征在于，利用正己烷 (n-hexane)來從山蒼粳的果實（種子除外）或種子獲得。
[0014] 可單獨或混合使用上述山蒼粳果實（種子除外）的油和山蒼粳種子的油。
[0015] 上述山蒼粳的油有多種提取方法，在本發(fā)明中，區(qū)分為山蒼粳的果實（種子除外） 和種子，針對上述果實（種子除外）或種子，投入重量為9~11倍數(shù)的作為溶劑的正己烷 (n-hexane)，在常溫條件下攪拌24小時來進行提取，并去除己烷層來獲得山蒼粳的油。
[0016] 發(fā)明的效果
[0017] 本發(fā)明的山蒼粳的油包含β -蓽澄前油?。˙eta-cubebene) (22. 96% )、β -序 子?。˙eta-selinene) (11.23% )、γ-欖香?。℅amma-Elemene) (10.21% )、β-石竹稀 (Beta-Caryophyllene) (7. 37% )，根據(jù)實驗結(jié)果，呈現(xiàn)IL-I β生成抑制能力、NO生成抑制 能力和TNF-α生成抑制能力，因而可有用地使用為炎癥性疾病預防及治療用組合物的有 效成分。
【附圖說明】
[0018] 圖1為表示本發(fā)明實施例的山蒼粳果實的油和種子的油的IL-I β生成抑制能力 的圖表。
[0019] 圖2為表示本發(fā)明實施例的山蒼粳果實的油和種子的油的NO生成抑制能力的圖 表。
[0020] 圖3為表示本發(fā)明實施例的山蒼粳果實的油和種子的油的TNF-α生成抑制能力 的圖表。
[0021] 圖4為本發(fā)明實施例的山蒼粳果實的油的色譜圖。
【具體實施方式】
[0022] 本發(fā)明提供包含山蒼粳的油作為有效成分的炎癥性疾病預防或治療中使用的炎 癥性疾病預防及治療用組合物及制備方法。
[0023] 作為本發(fā)明組合物的有效成分的山蒼粳油分離為果實（除種子之外的部分）或種 子（果實里面的種子），由此獲得油，并通過以下方法制備。
[0024] 但是，還可叢未分離山蒼粳的果實和種子的，即包含種子的果實（混合果實和種 子的狀態(tài)）獲得油。
[0025] 在本發(fā)明的實施例中，只是為了摸索醫(yī)藥品、食品等的多種組合物的應用而分離 果實和種子并由此獲得油，可從包含種子的果實獲得油，這也在本發(fā)明的發(fā)明要求保護范 圍內(nèi)。
[0026] 作為從山蒼粳的果實（除種子之外的部分）或種子（果實里面的種子）或包含種 子的果實提取油的方法，除了作為本發(fā)明實施例的利用正己烷（n-hexane)的提取法之外， 還有超臨界提取法、蒸餾法、壓榨法等提取方法，利用這些方法可獲得油。但是，在利用蒸餾 法和壓榨法的情況下，存在提取的油量少于作為實施例的利用正己烷（n-hexane)的提取 法的缺點。
[0027] 在山蒼粳果實（種子除外）的油、干燥的山蒼粳果實（種子除外）中，投入重量為 9~11倍數(shù)（優(yōu)選為10倍數(shù)）的作為溶劑的正己烷（n-hexane)之后，在常溫（15~25°C ) 條件下攪拌24小時來進行提取，之后，去除己烷（hexane)層來獲取山蒼粳果實油。
[0028] 在山蒼粳種子的油、干燥的山蒼粳（Litsea japonica)種子中，投入重量為9~11 倍數(shù)（優(yōu)選為10倍數(shù)）的作為溶劑的正己烷（n-hexane)，并在常溫（15~25°C )條件下 攪拌24小時來進行提取后，去除己烷（hexane)層來獲得（獲?。┥缴n粳種子油。
[0029] 可分別單獨使用上述山蒼粳果實油和種子油，還能夠以規(guī)定比率混合使用。
[0030] 本發(fā)明的山蒼粳果實（種子除外）和種子的油在抑制眾所周知為炎癥性因子的 TNF-a、IL-I β、N0的生成的功效低的濃度中非常優(yōu)秀。因此，本發(fā)明的山蒼粳果實（種子 除外）和種子的油還可使用于對炎癥性疾病的預防或治療有用的醫(yī)藥品及保健食品的組 合物（原料）。
[0031] 本發(fā)明的組合物可與山蒼粳果實（種子除外）和種子的油一同包含一種以上的具 有炎癥性疾病的預防或治療效果的公知的有效成分。
[0032] 本發(fā)明的組合物除了上述記載的有效成分之外，還可通過包含一種以上的藥學上 可接受的載體來制備，以便進行給藥。
[0033] 藥學上可接受的載體可混合使用食鹽水、滅菌水、林格氏液、緩沖食鹽水、葡萄糖 溶液、麥芽糊精溶液、甘油、乙醇及這些成分中的一種成分以上。
[0034] 本發(fā)明的組合物還可單獨或與手術(shù)、激素治療法、藥物治療法及使用生物學反應 調(diào)節(jié)劑的多種方法并用，以便預防或治療炎癥性疾病。
[0035] 本發(fā)明的組合物還能夠以改善炎癥性疾病為目的添加至保健食品而使用。
[0036] 在使用本發(fā)明的山蒼粳果實（種子除外）或種子的油作