新型米托蒽醌脂質(zhì)體聯(lián)合化療藥物在抗腫瘤治療中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了新型米托蒽醌脂質(zhì)體聯(lián)合化療藥物在抗腫瘤治療中的應(yīng)用。涉及米 托蒽醌脂質(zhì)體制劑與其他臨床常規(guī)一線化療藥物聯(lián)合治療腫瘤的應(yīng)用，還涉及米托蒽醌脂 質(zhì)體的制備方法及其相關(guān)的表征研究。
【背景技術(shù)】
[0002] 在中國，癌癥的健康負擔(dān)逐年增長，每年超160萬人被診斷為癌癥，120萬人因癌 癥而死亡。值得關(guān)注的是，全球有20 %的新發(fā)癌癥病人在中國，24 %的癌癥死亡病人在中 國。目前中國每死亡5人，即有1人是死于癌癥；而在0~64歲人口中，每死亡4人，即 有1人死于癌癥，癌癥呈現(xiàn)年輕化、發(fā)病率和死亡率"三線"走高的趨勢。世界衛(wèi)生組織 (WHO) 2014年發(fā)表了《全球癌癥報告2014》，稱2012年全球癌癥患者和死亡病例都在令人 不安地增加，新增癌癥病例有近一半出現(xiàn)在亞洲，其中大部分在中國，中國新增癌癥病例高 居第一位。2012年全世界共新增1400萬癌癥病例并有820萬人死亡。其中，中國新增307 萬癌癥患者并造成約220萬人死亡，分別占全球總量的21. 9%和26. 8%。報告預(yù)測全球癌 癥病例將呈現(xiàn)迅猛增長態(tài)勢，由2012年的1400萬人，逐年遞增至2025年的1900萬人，到 2035年將達到2400萬人。
[0003]目前，腫瘤的治療方法仍然是外科手術(shù)治療、放療和化學(xué)療法。對于處于中晚期階 段腫瘤已經(jīng)轉(zhuǎn)移的患者、接受手術(shù)后的腫瘤患者、以及無法進行手術(shù)或放療的腫瘤患者，化 療藥物可以直接殺死腫瘤細胞或控制腫瘤細胞，在腫瘤的治療中占有非常重要的地位。雖 然抗腫瘤的化學(xué)藥物治療取得了巨大進步，但藥物在治療腫瘤的同時所產(chǎn)生的毒副作用嚴 重降低了患者的生命質(zhì)量和依從性。藥物劑型對藥物的釋放、體內(nèi)分布以及藥物療效的發(fā) 揮起著極其重要的作用，選擇合適的藥物載體以改善藥物的釋放及分布從而減少藥物的毒 副作用，最大效應(yīng)地發(fā)揮療效成為人們關(guān)注的焦點。
[0004] 脂質(zhì)體作為藥物載體具有保護藥物在循環(huán)系統(tǒng)中不被降解、使藥物靶向于網(wǎng)狀內(nèi) 皮系統(tǒng)、延長藥效、降低藥物毒性、提高療效、避免藥物耐受性、改變給藥途徑等優(yōu)點，同時 脂質(zhì)體制劑所應(yīng)用的制劑原料具有生物可降解性，不會對機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)及各種毒副作 用，因此是一種良好的藥物載體系統(tǒng)，具有病毒類載體無法比擬的優(yōu)點，因而受到醫(yī)藥界的 廣泛關(guān)注。
[0005] 米托蒽醌（Mitoxantrone Hydrochloride，MTO)(分子式：C22H28N4〇6 .2HC1，分子 量：517. 41)是一種蒽醌類藥物，其結(jié)構(gòu)及抗癌作用與阿霉素相近，因其無氨基糖結(jié)構(gòu)，不 產(chǎn)生自由基，且有抑制脂質(zhì)過氧化作用，故對心臟毒性較低。其主要作用機制為拓撲異構(gòu)酶 II抑制劑，可嵌入DNA和形成交叉鍵鏈，抑制核酸合成而導(dǎo)致細胞死亡，為細胞周期非特異 性藥物。因它可殺滅任何細胞周期的癌細胞，增殖與非增殖細胞均受到抑制。分裂細胞比 休止細胞對本品更敏感，S后期對本品最敏感。臨床上主要用于急性非淋巴細胞白血病和晚 期乳腺癌以及非霍奇金淋巴瘤有很高的抗腫瘤活性，對肺癌等10余種惡性腫瘤也有療效。 在2000年，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA)又批準了 ΜΤ0用于多發(fā)性硬化癥（MS)的治療。 雖然MTO在臨床上具有較好的抗腫瘤效果，但其嚴重的不良反應(yīng)（骨髓抑制、劑量限制性心 臟毒性、胃腸毒性、乏力等）限制了其臨床使用。
[0006] 目前，米托蒽醌脂質(zhì)納米粒等劑型在國內(nèi)外均有研究，但效果均不理想。國內(nèi)在此 領(lǐng)域研究還處于剛剛起步階段，應(yīng)用含心磷脂的脂質(zhì)體包封米托蒽醌的脂質(zhì)體制劑除本課 題組相關(guān)成果外還未見其他報道，且尚未有米托蒽醌脂質(zhì)體與其他化療藥物聯(lián)合應(yīng)用的相 關(guān)報道。
[0007] 本項目研究的目的旨在解決米托蒽醌在臨床應(yīng)用過程中的局限性，即利用脂質(zhì)體 這一藥物載體，在國際上首次應(yīng)用含心磷脂的脂質(zhì)體對米托蒽醌進行包裹，制備出一種新 型的米托蒽醌脂質(zhì)體制劑，從降低藥物在體內(nèi)的清除速率，改變藥物的代謝途徑，降低藥物 對機體的毒副作用，并提高其抗腫瘤療效。
[0008] 臨床上，與單一用藥相比，聯(lián)合化療有明顯的優(yōu)越性。聯(lián)合使用不同作用機制的化 療藥物，旨在殺滅腫瘤細胞方面產(chǎn)生協(xié)同作用或增效作用，從而提高抗腫瘤療效。同時，通 過使用數(shù)種藥物，避免了單獨使用一種藥物劑量過大、時間過長所導(dǎo)致的該藥物毒副作用 明顯增加的可能性；長期、反復(fù)使用同一種藥物還是導(dǎo)致腫瘤耐藥的因素之一。聯(lián)合化療可 以去除耐藥因素，從而減少了癌細胞產(chǎn)生耐藥的可能性；大多數(shù)化療藥物不能或者極少進 入腦內(nèi)，因而無法起到預(yù)防或者治療腦轉(zhuǎn)移的作用，聯(lián)合使用一種能進入腦內(nèi)的化療藥物， 則可彌補許多藥物在該方面的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明公開了一種高包封率、高穩(wěn)定性的新型米托蒽醌脂質(zhì)體納米制劑。該制劑 應(yīng)符合包封率高、穩(wěn)定性好、粒徑均一、臨床給藥操作簡單、可重復(fù)放大生產(chǎn)等要求。
[0010] 上述米托蒽醌脂質(zhì)體制劑可以進一步降低米托蒽醌的藥物毒性，提高藥物治療指 數(shù)。
[0011] 本發(fā)明不僅可以解決米托蒽醌在臨床應(yīng)用過程中的局限性，同時提供了聯(lián)合其他 化療藥物達到更好的抗腫瘤療效的新用途。
[0012] 上述米托蒽醌脂質(zhì)體可聯(lián)合的化療藥物包括烷化劑，如尼莫司汀、卡莫司汀、洛莫 司汀、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、甘磷酰芥等；抗代謝藥，如去氧氟鳥苷、多西氟鳥啶、5-氟尿 嘧啶、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、氟鳥苷、替加氟、吉西他濱、卡莫氟、羥基脲、甲氨蝶呤、優(yōu)福定、安 西他濱等；抗腫瘤抗生素，如放線菌素 D、多柔比星、柔紅霉素、表柔比星、絲裂霉素、培洛霉 素、平陽霉素、吡柔比星等；植物類抗癌藥，如伊立替康、三尖杉酯堿、羥基喜樹堿、長春瑞 賓、紫杉醇、多西紫杉醇、拓撲替康、長春新堿、長春地辛、長春酰胺、長春堿、替尼泊苷、依托 泊苷、欖香烯等；激素及內(nèi)分泌類藥物，如阿他美坦、阿那曲挫、氨魯米特、他莫昔芬、福美坦 等；雜類，如門冬酰胺酶、順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、奧沙利鉑、樂沙定、丙卡巴肼等；生物反應(yīng) 調(diào)節(jié)劑，如干擾素、香菇多糖、胸腺肽等。
[0013] 上述米托蒽醌脂質(zhì)體可聯(lián)合的化療藥物為以上化療藥物的一種或多種。
[0014] 上述米托蒽醌脂質(zhì)體的制備方法可以選擇常用的脂質(zhì)體制備方法，任意方法均 可，只要所涉及的制備方法不影響脂質(zhì)體對米托蒽醌藥物的包封率及相關(guān)表征，本發(fā)明主 要采用薄膜水化法及硫酸銨梯度法制備米托蒽醌脂質(zhì)體，并通過凍干法進行中試放大研 究。
[0015] 上述薄膜水化法，即將磷脂和膽固醇按照一定比例混合，溶解于氯仿-乙醇溶液 中，將混合物利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在真空條件下干燥，形成脂質(zhì)薄膜后再繼續(xù)干燥l〇min。其次 將一定濃度的米托蒽醌鹽溶液加入到脂質(zhì)膜上使脂質(zhì)膜水化1~3h，之后進行渦旋振蕩至 混懸液處于均質(zhì)狀態(tài)，再對樣品進行超聲處理以獲得脂質(zhì)體包裹的米托蒽醌，即米托蒽醌 脂質(zhì)體制劑。
[0016] 上述硫酸銨梯度法，即將磷脂和膽固醇按照一定比例溶解于有機溶劑中，在氮氣 流的作用下形成薄膜，除去有機溶劑。利用硫酸銨溶液對脂質(zhì)膜進行水化1~3h。對混合 物超聲即可得到空白脂質(zhì)體。其次，將空白脂質(zhì)體裝于透析袋內(nèi)，置于盛有生理鹽水的錐形 瓶中透析，以建立硫酸銨梯度。最后，在透析后脂質(zhì)體中加入米托蒽醌氯化鈉溶液進行藥物 裝載，用生理鹽水調(diào)節(jié)米托蒽醌濃度。
[0017] 上述凍干法是指采用低溫干燥技術(shù)，通過反復(fù)包封、凍干和重新融合來實現(xiàn)較高 的包封率。凍干法工藝穩(wěn)定、適合于工業(yè)化生產(chǎn)，質(zhì)量易于控制和產(chǎn)品穩(wěn)定性好。即將磷脂 與膽固醇以一定比例溶于氯仿，通氮氣旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干后加入含2%聚乙烯吡咯酮，pH7. 4的 磷酸鹽緩沖液浸泡2h。渦旋混合器下震蕩lOmin使之完全混溶后分裝入小瓶，在凍干機中 程序冷凍干燥24h后取出小瓶，密封保存于常溫或4°C冰箱中。制備米托蒽醌脂質(zhì)體時，將 lmg/ml的米托蒽醌鹽溶液，與凍干的脂質(zhì)混合，藥脂摩爾比控制在1:15?；旌衔镌谑覝叵?水化2h，之后超聲處理10分鐘即得米托蒽醌脂質(zhì)體制劑。
[0018] 上述制備米托蒽醌脂質(zhì)體所用磷脂材料包括天然的、人工合成的、及半合成的生 物相容性材料。材料可以是親水性的或疏水性的?？蛇x用帶有正電荷或帶有負電荷及電中 性的材料作為脂質(zhì)體的制備材料。合適的脂質(zhì)體制備材料包括：磷脂類、脂肪酸類、留醇類 等。若對脂質(zhì)體進一步優(yōu)化，可選用心磷脂、磷脂酰膽堿、膽固醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌 醇，生育酚等，更優(yōu)選為帶負電磷脂如心磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇等。
[0019] 上述脂質(zhì)體的選擇配方可包括卵磷脂、膽固醇、心磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨 酸、硬脂胺等。更為優(yōu)化的脂質(zhì)體制備方案的材料選擇可包括心磷脂、卵磷脂、膽固醇。<