4或甚至5次施用。
[0079] 引發(fā)和加強之間的時間段為任選地1周、2周、4周、6周或8周。更具體地，其為4 周或8周。如果實施超過一次加強，則在在前加強后1周、2周、4周、6周或8周施用后續(xù)加 強。例如，任意兩次加強之間的時間間隔為4周或8周。
[0080] 引發(fā)-加強疫苗接種方案可以是同質(zhì)或異質(zhì)的。在同質(zhì)引發(fā)-加強方案中，引發(fā) 和至少一次加強這兩者使用抗原性蛋白或其抗原性片段的相同施用手段進行，即引發(fā)和加 強使用多肽進行或引發(fā)和加強使用由相同載體包含的核酸構建體進行。在本發(fā)明的背景 中，同質(zhì)引發(fā)-加強疫苗接種方案將包含將本發(fā)明的痘病毒載體用于引發(fā)以及用于加強免 疫應答兩者。異質(zhì)引發(fā)-加強方案涉及將不同手段用于引發(fā)和加強免疫應答。在本發(fā)明的 背景中，異質(zhì)引發(fā)-加強方案將包含將如上文描述的痘病毒載體用于引發(fā)免疫應答，而將 不同的載體或肽疫苗用于加強免疫應答。
[0081] 或者，異質(zhì)引發(fā)-加強方案將包含將不同的載體或肽疫苗用于引發(fā)免疫應答，而 將如上文描述的痘病毒載體用于加強免疫應答。
[0082] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述引發(fā)-加強疫苗接種方案是同質(zhì)的。
[0083] 在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述引發(fā)-加強疫苗接種方案是異質(zhì)的。
[0084] 在一個異質(zhì)引發(fā)-加強方案中，將如上文描述的痘病毒載體用于加強免疫應答， 而將不同的載體或肽疫苗用于引發(fā)免疫應答。在另一個異質(zhì)引發(fā)-加強方案的實施方案 中，將如上文描述的痘病毒載體用于引發(fā)免疫應答，而將不同的載體或肽疫苗用于加強免 疫應答。
[0085] 在另一個實施方案中，異質(zhì)引發(fā)-加強方案將包含將腺病毒載體用于引發(fā)免疫應 答，而將如上文描述的痘病毒載體用于加強免疫應答。
[0086] 在又一個實施方案中，異質(zhì)引發(fā)-加強方案將包含將如上文描述的痘病毒載體用 于引發(fā)免疫應答，而將腺病毒載體用于加強免疫應答。
[0087] 對于所有引發(fā)-加強疫苗接種方案，涵蓋用于加強免疫應答的抗原性蛋白或抗原 性肽與用于引發(fā)免疫應答的抗原性蛋白或其抗原性片段是免疫學相同的。應理解抗原性蛋 白或其抗原性片段可作為多肽（"肽疫苗"）施用或者其可以由施用給所論述個體的核酸分 子編碼。在后一情況中，引發(fā)期望的免疫應答的抗原性蛋白或抗原性多肽在經(jīng)免疫個體的 細胞中表達。
[0088] 如果兩種或更多種抗原性蛋白或其抗原性片段被相同的抗體、T細胞或B細胞識 另IJ，則它們是"免疫學相同的"。兩種或更多種免疫原性多肽被相同的抗體、T細胞或B細胞 識別也稱為所述抗體、T細胞或B細胞的"交叉反應性"。在一個實施方案中，兩種或更多種 免疫學相同的多肽被相同的抗體、T細胞或B細胞識別的原因是相同或相似的表位在所有 多肽中的存在。相似的表位共享足夠的結構和/或電荷特征以被相同抗體的Fab區(qū)或B細 胞受體或被相同T細胞受體的V區(qū)結合。抗體、T細胞受體或B細胞受體的結合特征例如是 由受體對所論述表位的結合親和力限定的。如通過本申請理解，兩種免疫原性多肽在下述 情況下是"免疫學相同的":具有較低親和常數(shù)的多肽的親和常數(shù)是具有較高親和常數(shù)的多 肽的親和力的至少30%，至少40%，至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，至 少90%，至少95%或至少98%。用于測定多肽對受體的結合親和力的方法如平衡透析或 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA)是本領域中公知的。
[0089] 在一個實施方案中，兩種或更多種"免疫學相同的"多肽包含至少一個相同的表 位。如果免疫原性多肽包含相同的表位或者如果它們具有相同的氨基酸序列，則通常可以 獲得最強的疫苗接種效果。
[0090] 在一個實施方案中，將如上文描述的痘病毒載體用于引發(fā)免疫應答將建立針對病 原體或疾病的保護性免疫或?qū)е录膊〉母巍?br>[0091] 在一個實施方案中，所述痘病毒載體經(jīng)由鼻內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、胃內(nèi)、口服和局 部（topical)路徑施用。
[0092] "鼻內(nèi)施用"是將本發(fā)明的載體施用至包括肺在內(nèi)的全部呼吸道的粘膜。更具體 地，將組合物施用至鼻粘膜。在一個實施方案中，鼻內(nèi)施用通過滴注（instillation)、噴霧 或氣溶膠實現(xiàn)。在另一個實施方案中，所述施用不涉及通過機械手段（如針）對粘膜穿孔。
[0093] 術語"肌內(nèi)施用"指將載體注射到個體的任意肌肉中。例示性的肌內(nèi)注射是施用 到三角肌、股外肌、腹臀?。╲entrogluteal)和背臀?。╠orsogluteal)區(qū)域中。
[0094] 術語"皮下施用"指將載體注射到下皮中。
[0095] 術語"皮內(nèi)施用"指將載體注射到皮膚層間的真皮中。
[0096] 術語"口服施用"指經(jīng)由口將載體施用至胃系統(tǒng)。
[0097] "局部施用"是將載體施用至皮膚的任意部分而不用針或相當?shù)难b置穿透皮膚。載 體還可以局部施用至口、鼻、生殖區(qū)和直腸的粘膜。
[0098] 在另一個方面，本發(fā)明涉及包含以下的疫苗組合：
[0099] (a)包含核酸構建體的痘病毒載體，所述核酸構建體包含：
[0100] (i)編碼至少第一抗原性蛋白質(zhì)或其抗原性片段的核酸序列，所述核酸序列可操 作地連接于
[0101] (ii)編碼至少一種不變鏈的核酸
[0102] 和
[0103] (b)載體，其包含編碼至少第二抗原性蛋白質(zhì)或其抗原性片段的核酸序列
[0104] 或
[0105] 第二抗原性蛋白質(zhì)或其抗原性片段
[0106] 或
[0107] 病毒樣顆粒，
[0108] 其中所述第一抗原性蛋白質(zhì)或其抗原性片段的至少一個表位與所述第二抗原性 蛋白質(zhì)或其片段在免疫學上相同。
[0109] 術語"疫苗"指誘導或改進對特定疾病的免疫的生物制劑。所述制劑可以包含殺 死的或減毒的活病原體。它還可以包含適用于引發(fā)免疫應答的源自病原體的一種或多種化 合物。在一個實施方案中，所述化合物是與所述病原體的多肽基本相同或免疫學相同的多 肽。在另一個實施方案中，疫苗包含編碼與所述病原體的多肽基本相同或免疫學相同的免 疫原性多肽的核酸構建體。在后一情況中，還涵蓋所述多肽在用疫苗治療的個體中表達。 疫苗接種根本性的原理是生成免疫"記憶"。用疫苗激發(fā)個體的免疫系統(tǒng)誘導免疫細胞的形 成和/或增殖，該免疫細胞特異性識別由疫苗包含的化合物。所述免疫細胞的至少一部分 保持存活一段時間，其可以延長至疫苗接種后10, 20或30年。如果個體的免疫系統(tǒng)在前述 時間段內(nèi)遇到衍生能引發(fā)免疫應答的化合物的病原體，那么通過疫苗接種生成的免疫細胞 被再活化，且相比于尚未用疫苗激發(fā)和首次遇到病原體的免疫原性化合物的個體的免疫應 答，增強針對該病原體的免疫應答。
[0110] 如本文中使用的，術語"載體"指能夠?qū)谄渲械亩嗪塑账嵋爰毎闹辽僖?種多核苷酸或至少一種多核苷酸和至少一種蛋白質(zhì)的混合物。而且，術語"載體"還可以指 與脂質(zhì)體或脂質(zhì)納米顆粒的制備物一起配制的至少一種多核苷酸，所述制備物能與至少一 種多核苷酸一起轉(zhuǎn)染細胞，如例如由Geall等，2012, PNAS，109:14604-14609描述的。
[0111] 由載體包含的至少一種多核苷酸組成為（consist of)或包含編碼至少一種免疫 原性蛋白質(zhì)的至少一種核酸構建體。除了組成為或包含本發(fā)明的核酸構建體的多核苷酸以 外，可將另外的多核苷酸和/或多肽引入細胞。如果需要另外的多核苷酸和/或多肽來將 本發(fā)明的核酸構建體引入細胞或如果另外的多核苷酸和/或多肽的引入提高由本發(fā)明的 核酸構建體編碼的免疫原性多肽的表達，則還涵蓋添加所述另外的多核苷酸和/或多肽。
[0112] 在本發(fā)明的背景中，涵蓋由引入的核酸構建體編碼的抗原性蛋白或其抗原性片段 在引入一種或多種載體時在細胞中表達。適宜的載體的例子包括但不限于質(zhì)粒、粘粒、噬菌 體、病毒載體、脂質(zhì)納米顆?；蛉斯と旧w。
[0113] 在本發(fā)明的一個實施方案中，病毒載體選自下組：腺病毒載體、腺伴隨病毒（AAV) 載體（例如，5型AAV和2型AAV)、alpha病毒載體（例如，委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒（VEE)、辛 德畢斯（sindbis)病毒（SIN)、森林腦炎病毒（semliki forest virus，SFV)和 VEE-SIN 嵌 合體）、皰疹病毒載體（例如，源自巨細胞病毒例如恒河猴巨細胞病毒（RhCMV)的載體）、沙 粒病毒（arena virus)載體（例如，淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV)載體）、麻疹病 毒載體、痘病毒載體、副粘病毒（paramixovirus，paramyxovirus)載體、桿狀病毒載體、水 泡性口炎（vesicular stomatitis)病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、病毒樣顆粒和細菌孢子 (bacterial spores)〇
[0114] 在一個進一步的實施方案中，載體是腺病毒載體，特別是源自人或非人大型猿 (great ape)的腺病毒載體。衍生腺病毒的例示性大型猿是黑猩猩（Chimpanzee) (Pan)、 大渥渥（Gorilla)和 orangutans (Pongo)，例如倭黑渥渥（Bonobo) (Pan paniscus)和普通 (common)黑猩猩（Pan troglodytes)。典型地，天然存在的非人類大型猿腺病毒分離自相應 的大型猿的糞樣品。具體地，載體是基于hAd5, hAdll，hAd26, hAd35, hAd49, ChAd3, ChAd4， ChAd5, ChAd6, ChAd7, ChAd8, ChAd9, ChAdlO, ChAdll， ChAdl6, ChAdl7, ChAdl9, ChAd20， ChAd22, ChAd24, ChAd26, ChAd30, ChAd31，ChAd37, ChAd38, ChAd44, ChAd55, ChAd63, ChAd 73，ChAd82，ChAd83，ChAdl46，ChAdl47，PanAdl，PanAd2 和 PanAd3 載體的非復制性腺病毒載 體或能復制的 Ad4 和 Ad7 載體。人腺病毒 hAd4, hAd5, hAd7, hAdll，hAd26, hAd35 和 hAd49 是本領域中公知的?；谔烊淮嬖诘腃hAd3, ChAd4, ChAd5, ChAd6, ChAd7, ChAd8, ChAd9， ChAdlO, ChAdll，ChAdl6, ChAdl7, ChAdl9, ChAd20, ChAd22, ChAd24, ChAd26, ChAd30, ChAd31， ChAd37，ChAd38，ChAd44，ChAd63和 ChAd82 的載體在WO 2005/071093 中詳細描述，其公開為 US 20110217332且通過提述將其中描述的腺病毒載體并入本文?；谔烊淮嬖诘腜anAdl， ?&仏(12，？&1^(13,0^(155,0^(173,0^(183,0^(1146和0^(1147的載體在冊 2010/086189 中 更詳細描述，其公開為US20120027788且通過提述將其中描述的腺病毒載體并入本文。
[0115] 在另一個實施方案中，所述第二抗原性蛋白或其抗原性片段與痘病毒載體所包含 的核酸構建體編碼的抗原性蛋白或其抗原性片段在免疫學上相同。
[0116] 在本發(fā)明的另一個實施方案中，載體以裸DNA存在。術語"裸DNA"指任何核酸分 子、DNA或RNA，其不編碼病毒載體的蛋白質(zhì)但編碼至少一種抗原性蛋白或其片段。涵蓋裸 DNA不與任何多肽，特別是不與具有病毒起源的多肽聯(lián)合。例如，裸DNA以質(zhì)粒、粘?；蛉斯?染色體存在。在另一個實施方案中，裸DNA編碼與痘病毒載體所包含的核酸構建體編碼的 抗原性蛋白或其抗原性片段在免疫學上相同的多肽。
[0117] 術語"病毒樣顆粒"（VLP)指包含病毒蛋白但不包含核酸的裝配物。VLP可通過在 適宜的生產(chǎn)者細胞系中表達病毒表面蛋白產(chǎn)生。缺少核酸和由此的遺傳信息使得VLP是非 感染性的，由此創(chuàng)建了安全的疫苗。例