如，VLP包含與痘病毒載體所包含的核酸構建體編碼 的抗原性蛋白或其抗原性片段在免疫學上相同的多肽。
[0118] 在本發(fā)明的某個實施方案中，上文描述的疫苗組合用于引發(fā)-加強疫苗接種方 案。在該引發(fā)-加強疫苗接種方案的第一實施方案中，痘病毒載體用于引發(fā)免疫應答，而病 毒載體或抗原性蛋白或其抗原性片段用于加強該免疫應答。在引發(fā)-加強疫苗接種方案的 另一個實施方案中，病毒載體或抗原性蛋白或其抗原性片段用于引發(fā)免疫應答，而痘病毒 載體用于加強該免疫應答。
[0119] 在本發(fā)明的一個實施方案中，
[0120] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0121] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0122] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0123] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0124] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0125] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0126] 免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強；
[0127] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0128] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0129] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0130] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0131] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0132] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0133] 免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強；
[0134] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0135] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0136] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0137] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0138] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0139] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0140] 免疫應答通過皮下施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強；
[0141] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0142] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0143] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0144] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0145] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0146] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0147] 免疫應答通過皮內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強；
[0148] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0149] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0150] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0151] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0152] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0153] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0154] 免疫應答通過胃內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強；
[0155] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0156] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0157] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0158] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0159] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0160] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0161] 免疫應答通過口服施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強；
[0162] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內施用加強；
[0163] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮下施用加強；
[0164] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次皮內施用加強；
[0165] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次胃內施用加強；
[0166] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次口服施用加強；
[0167] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次局部施用加強；
[0168] 免疫應答通過局部施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻內施用加強。
[0169] 在一個實施方案中，免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌內 施用加強。
[0170] 在再一個實施方案中，免疫應答通過鼻內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次鼻 內施用加強。
[0171] 在又一個實施方案中，免疫應答通過肌內施用引發(fā)且該免疫應答通過至少一次肌 內施用加強。
[0172] 在另一個方面，本發(fā)明涉及包含如上文描述的用于引發(fā)免疫應答的痘病毒載體 的疫苗組合物或包含痘病毒載體和選自下組的藥劑的疫苗組合：（i)包含編碼至少第二抗 原性蛋白質或其抗原性片段的核酸序列的載體；（ii)第二抗原性蛋白或其抗原性片段，和 (iii)病毒樣顆粒。
[0173] 術語"組合物"指一種組合，其包含抗原性蛋白或其片段或包含核酸構建體的病毒 樣顆?；蜉d體，以及至少一種選自下組的另外的化合物：藥學可接受的載體、藥學賦形劑和 佐劑。
[0174] "藥學可接受的"意指經聯(lián)邦政府或州政府的管控機構批準或者列于美國藥典或 其它一般認可的用于動物、更特別地用于人的藥典中。
[0175] 本文所使用的術語"載體"指在藥理上無活性的物質，例如但不限于與治療活性成 分一起施用的稀釋劑、賦形劑或媒介物。這樣的藥物載體可以是液體或固體。液體載體包 括但不限于無菌液體，例如鹽水溶液和油，包括石油、動物、植物或合成來源的那些，例如花 生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。還可以將鹽水溶液和水性右旋糖以及甘油溶液用作液體 載體，特別是用于注射用溶液。當靜脈內或利用霧化器鼻內施用藥物組合物時，優(yōu)選的載體 是鹽水溶液。
[0176] 合適的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米（rice)、面粉、白 呈、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、干脫脂乳、甘油、丙稀、二醇、7K、乙醇 等。
[0177] 合適的藥物載體的實例描述于E. W. Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences'，中。
[0178] 術語"佐劑"指在細胞水平或體液水平增加、刺激、活化、加強或調節(jié)針對組合物之 活性成分的免疫應答的試劑，例如，免疫佐劑刺激免疫系統(tǒng)針對實際抗原的應答但其本身 沒有免疫效應。這樣的佐劑的實例包括但不限于無機佐劑（例如，無機金屬鹽例如磷酸鋁 或氫氧化鋁）、有機佐劑（例如，皂角苷或鯊烯）、油基佐劑（如弗氏完全佐劑和弗氏不完 全佐劑）、細胞因子（如 IL-1 β、IL-2、IL-7、IL-12、IL-18、GM-CFS 和 INF- γ )、顆粒狀佐 劑（例如，免疫刺激性復合物（ISC0MS)、脂質體或可生物降解的微球）、病毒顆粒、細菌佐劑 (例如單磷酰脂質Α或胞壁肽）、合成佐劑（例如，非離子型嵌段共聚物、胞壁肽類似物或合 成脂質A)或合成多核苷酸佐劑（例如，多聚精氨酸或多聚賴氨酸）。
[0179] 附圖簡述
[0180] 圖1:編碼不變鏈（li)-NS抗原的MVA在小鼠中誘導更強的T細胞應答。將兩組 小鼠用2xl(T5噬斑形成單位（pfu)的包含NS抗原的MVA免疫（左圖）和用包含連接不變 鏈的NS的MVA免疫（右圖）。通過IFN γ ELISpot測量對NS抗原的總T細胞應答且y軸上 的數(shù)目代表點形成細胞（SFC)/百萬脾細胞。
[0181] 圖2:編碼不變鏈（li)-NS抗原的MVA比相應腺病毒在小鼠中誘導更強的T細胞應 答。將兩組小鼠用編碼NS(MVA wt)或連接于人不變鏈的NS(MVAli)的MVA免疫。將兩個 另外的小鼠組用可比劑量的編碼NS(ChAd3wt)或連接于人不變鏈的NS(ChAd31i)的ChAd3 免疫。通過IFN 丫 ELISpot測量對NS抗原的總T細胞應答且y軸上的數(shù)目代表點形成細胞 (SFC)/百萬脾細胞。
[0182] 圖3:用包含連接于不變鏈的NS的MVA加強增加獼猴（macaque)中HCV-NS特異 性T細胞的生成。
[0183] 將4只獼猴的兩組用ChAd3I iNS引發(fā)，且在50周后用MVA-NS (灰色條）或用 MVA-IiNS(黑色條）加強。圖A顯示加強后1周（峰加強）或3個月（記憶）的通過 IFNyELISpot測得的應答。y軸上的數(shù)目代表點形成細胞（SFC)/百萬PBMC。B圖顯示使 用MVAIiNS (黑色條）加強后1周的通過IFN γ ICS測得的更高的⑶8頻率。Y軸上的數(shù)目 代表產生IFN γ的抗原特異性⑶8Τ細胞的％。
[0184] 圖4:顯示人不變鏈的4種同等型（?33、？35、？41、？43、同等型〇)和鼠不變鏈的2 種同等型（ρ31、ρ41)的示意圖。在人ρ35和ρ43中由于備選的翻譯啟動，Ν末端存在額外 的16個殘基。在人p41和ρ43同等型和鼠 p41同等型中，由于可變剪接存在額外的域。人 c同等型相對于人p33和p35缺少兩個外顯子（相對于人p41和p43為3個外顯子），導致 移碼。 實施例
[0185] 實施例1 :用包含連接于不變鏈的NS的MVA(MVA-hli NS)引發(fā)增加了小鼠中 HCV-NS特異性T細胞的生成。
[0186] 將兩組Balb/c小鼠用2xl(T5pfu (噬斑形成單位）的編碼NS的MVA或相同劑量 的包含連接于人不變鏈的NS的MVA肌內免疫。NS區(qū)涵蓋HCV基因組的約2/3且編碼5種 不同的蛋白質（NS3, NS4A，NS4B，NS5A和NS5B)，所述蛋白質來源于通過編碼的NS3蛋白酶對 HCV多蛋白的蛋白水解性切割。在免疫后10天，收集脾細胞，并通過IFNyELIspot使用跨 越NS的肽的合并物（pool)評估HCV-NS特異性T細胞應答。通過對針對6種個別的肽合 并物的反應性求和并減去背景（在無肽的對照孔中計數(shù)的點）來評估應答。靶向NS的特 異性T細胞的水平在用基于li的MVA疫苗引發(fā)的小鼠中更高（圖1)。
[0187] 實施例2 :用包含連接于不變鏈的NS的MVA(MVA_hli NS)引發(fā)比相應的腺病毒載 體在小鼠中誘導更強的T細胞應答。
[0188] 將兩組Balb/c小鼠用2xl(T5pfu的編碼NS的MVA或相同劑量的包含連接于人不 變鏈的NS的MVA肌內免疫。將兩個另外的小鼠組用2xl(T5iu(感染單位）的編碼NS的 ChAd3或相同劑量的包含連接于人不變鏈的NS的ChAd3免疫。在以MVA和ChAd3為載體的 疫苗免疫后分別為10天和