）、2:1CS/PE0、2:1CS/PE0-NP 和HydroferaBlue樣品的皮膚傷口樣品的H&E染色。圖7B示出了在治療1周后舌上皮長(zhǎng) 度。圖7C示出了在治療1周和2周后傷口部位的毛細(xì)血管密度。圖7D示出了在治療1周 和2周后肉芽組織厚度。（*，**p〈0.05)。對(duì)于2:1CS/PE0-NP樣品，觀察到較長(zhǎng)舌上皮（圖 7B)。在一周和兩周，與開放式傷口相比，對(duì)于2: 1CS/PE0-NP觀察到傷口部位顯著最新形成 的毛細(xì)血管（p〈0.01)(圖7C)。在治療2周后，對(duì)于除HydroferaBlue樣品之外的所有樣 品鑒別新上皮細(xì)胞的完全覆蓋。另外，在上皮完全閉合、PEO快速清除和H)GF-BB持續(xù)釋放 的情況下，對(duì)于2:1CS/PE0-NP在第2周的肉芽組織厚度與第1周的厚度和開放式傷口對(duì) 照相比顯著減小（ρ〈〇·〇1)，這表明愈合過程從第I階段（炎癥）過渡到第II階段（增殖） (圖7D)。對(duì)照樣品和HydroferaBlue樣品顯示較厚肉芽層。
[0141] 進(jìn)行馬森氏三色染色，評(píng)估傷口部位的膠原沉積（藍(lán)色）。圖8示出了通過CS/ ΡΕ0-ΝΡ網(wǎng)格和HydroferaBlue傷口敷料治療的傷口的膠原染色圖像和量化。確切地說， 圖8A示出了在治療后2周和4周對(duì)照樣品、2:1CS/PE0、2:1CS/PE0-NP和HydroferaBlue 樣品的馬森氏三色染色。圖8B示出了在治療2周后每個(gè)傷口面積的膠原量化，并且圖8C 示出了治療4周后每個(gè)傷口面積的膠原量化（*p〈0.05)。2:1CS/PE0在治療2周后顯示顯 著（p〈0.05)大量的膠原沉積。與開放式傷口相比，在2: 1CS/PE0-NP樣品中也辨別了傷口 部位較大量的成肌纖維細(xì)胞形成。與開放式傷口對(duì)照和無生長(zhǎng)因子的納米纖維相比，對(duì)于 2:1CS/PE0-NP樣品觀察到更多成熟膠原纖維同時(shí)存在較低炎性細(xì)胞。更多膠原組織可以幫 助重構(gòu)ECM并進(jìn)一步支持皮膚組織生長(zhǎng)。在治療4周后，生長(zhǎng)因子釋放網(wǎng)格在傷口面積內(nèi) 顯示最低膠原含量。不旨在受到理論約束，認(rèn)為該觀察結(jié)果可能是因?yàn)樾纬筛喑墒炷z原 細(xì)胞并且毛囊再生增加。另外，這些形態(tài)可以指示對(duì)于2:1CS/PE0-NP在4周后已經(jīng)到達(dá)重 塑期，而其他樣品仍保持在組織再生期。
[0142] 實(shí)例 2
[0143] 包含網(wǎng)格堆疊的傷口敷料
[0144] 如下制備包含根據(jù)在此所述的一些實(shí)施例的網(wǎng)格堆疊的傷口敷料。首先，通過以 上文所述的一種方法進(jìn)行靜電紡絲來獲得包含聚合物如PLA、PLGA、PCL、膠原、透明質(zhì)酸 (HA)、明膠、聚環(huán)氧乙烷（ΡΕ0)、殼聚糖和羧甲基殼聚糖（CMC)的生物可降解網(wǎng)格。另外，使 用具有不同針大小和密度的微針陣列鉆孔或穿孔個(gè)別靜電紡絲網(wǎng)格，提供通過個(gè)別靜電紡 絲網(wǎng)格的微孔或穿孔。不同大小和密度的小孔或穿孔可以在疏水性網(wǎng)格和親水性網(wǎng)格上形 成圖案。在制造個(gè)別穿孔網(wǎng)格后，由相同或不同材料制成的多個(gè)網(wǎng)格堆疊在一起形成從一 側(cè)到另一側(cè)具有逐漸減小的穿孔大小和/或密度的一個(gè)網(wǎng)格組件。這種結(jié)構(gòu)允許細(xì)胞從網(wǎng) 格組件一側(cè)逐漸滲透到另一側(cè)。每個(gè)堆疊的頂層（在該實(shí)例中是傷口相反側(cè)）由一個(gè)未穿 孔網(wǎng)格形成。因此該頂層形成組織滲透的物理屏障。如在此所述，這些傷口敷料可以用作 用于疝修補(bǔ)應(yīng)用的疝網(wǎng)格。
[0145] 圖9示出了上述制造和組裝的步驟。確切地說，在圖9的實(shí)施例中，網(wǎng)格（310、 320、330、340、350)堆疊（300)是通過單獨(dú)地靜電紡絲并穿孔這些網(wǎng)格（310、320、330、340、 350)來形成的。對(duì)于穿孔，使用微圖案穿孔或鉆孔裝置（400)，在三個(gè)網(wǎng)格（310、320、330) 內(nèi)提供穿孔或小孔（311、321、331)。其他兩個(gè)網(wǎng)格（340、350)是未穿孔的。該穿孔或鉆孔 裝置（400)包括針密度和/或針大小可以改變的針陣列（410)。如圖9所示，僅示出頂部網(wǎng) 格（310)的穿孔。另外，在圖9的實(shí)施例中，這些網(wǎng)格（310、320、330、340、350)在z-方向 上形成穿孔梯度，其中穿孔度從頂部網(wǎng)格（310)向底部網(wǎng)格（350)逐漸減小。此外，在圖9 的實(shí)施例中，這些網(wǎng)格（310、320、330、340、350)以一種交替親水性和疏水性方式安排在堆 疊（300)內(nèi)。具體地說，在堆疊（300)中親水性網(wǎng)格（320、340)與疏水性網(wǎng)格（310、330、 350)交替出現(xiàn)。
[0146] 圖10中示出了示例性穿孔網(wǎng)格。確切地說，圖10示出了穿孔靜電紡絲聚已酸內(nèi) 酯（PCL)網(wǎng)格的SEM圖像。圖10A和圖10B是低分辨率圖像。圖10C是穿孔PCL網(wǎng)格的單 個(gè)穿孔的高分辨率圖像。如圖10A-圖10C所示，微針陣列鉆孔輪廓清楚的穿孔，其直徑是 150μπι并且小孔之間的孔距是1mm。這些穿孔可以為組織向內(nèi)生長(zhǎng)提供充足空間，與孔對(duì) 于細(xì)胞/組織滲透太小的一些其他靜電紡絲網(wǎng)格不同。圖10D是包含設(shè)置于兩個(gè)PE0/CMC 網(wǎng)格之間的PCL網(wǎng)格的3層網(wǎng)格堆疊的橫截面圖像。PE0/CMC網(wǎng)格可能易于水合并緊密連 接至夾層PCL網(wǎng)格。
[0147] 通過拉力試驗(yàn)評(píng)價(jià)穿孔和未穿孔網(wǎng)格的機(jī)械性能。確切地說，測(cè)試切成寬度為5mm 且長(zhǎng)度為30mm的長(zhǎng)條的網(wǎng)格樣品。長(zhǎng)條之間的規(guī)格是10mm。十字頭伸長(zhǎng)速度是100mm/min〇 圖11中示出了具有不同穿孔度的PCL網(wǎng)格的一些結(jié)果（*，p〈0. 01)。具有1mm直徑穿孔和 0. 15mm直徑穿孔的網(wǎng)格的穿孔密度分別是36和64個(gè)穿孔/cm2。圖11A示出了網(wǎng)格的峰值 應(yīng)力。圖11B示出了網(wǎng)格的初始模量（楊氏模量）。圖11C示出了網(wǎng)格的斷裂伸長(zhǎng)率。圖 11D示出了每種樣品的代表性應(yīng)力-應(yīng)變曲線。如圖11所示，峰值應(yīng)力和斷裂伸長(zhǎng)率在網(wǎng) 格穿孔后顯著減小。然而，這些穿孔網(wǎng)格也顯示適用于疝修補(bǔ)應(yīng)用。另外，在一些情況下， 在此所述網(wǎng)格的機(jī)械特性可以通過改變材料組成、靜電紡絲條件和/或穿孔度來調(diào)整。
[0148] 本發(fā)明的不同實(shí)施例已被描述來實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的不同目的。應(yīng)認(rèn)識(shí)到這些實(shí)施例僅 說明本發(fā)明的原理。在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，許多修改及其改編對(duì)于本領(lǐng) 域技術(shù)人員將是顯而易見的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種傷口敷料，包含： 由多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)網(wǎng)格； 分散于這些生物可降解聚合物纖維內(nèi)的一種第一活性劑； 設(shè)置于該網(wǎng)格內(nèi)的多個(gè)生物可降解聚合物顆粒；以及 分散于這些生物可降解聚合物顆粒內(nèi)的一種第二活性劑。2. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些顆粒設(shè)置于該網(wǎng)格的這些纖維內(nèi)。3. 如權(quán)利要求2所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物顆?；谶@些纖維加上 這些顆粒的總重量以多至約30重量％的量存在于這些纖維內(nèi)。4. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些顆粒設(shè)置于該網(wǎng)格的這些纖維之間。5. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中該第一活性劑的體內(nèi)或體外釋放曲線不同于該 第二活性劑的體內(nèi)或體外釋放曲線。6. 如權(quán)利要求5所述的傷口敷料，其中該第一活性劑的體內(nèi)或體外釋放曲線和該第二 活性劑的體內(nèi)或體外釋放曲線重疊小于約70%。7. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物纖維包含一種或多種抗 微生物聚合物纖維。8. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物纖維包含殼聚糖、羧甲 基殼聚糖（CMC)以及聚（環(huán)氧乙烷）中的一種或多種。9. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物纖維包含一種或多種含 朽1檬酸部分的聚合物。10. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物纖維具有約50nm與約 lOOOnm之間的平均直徑。11. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中該第一活性劑包括生長(zhǎng)因子。12. 如權(quán)利要求11所述的傷口敷料，其中該第一活性劑包括用于血管生成的生長(zhǎng)因 子。13. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中該網(wǎng)格具有多至約90%的孔隙度。14. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物顆粒包含以下各項(xiàng)中 的一種或多種：聚酯、聚乙酸、聚乙醇酸、聚乳酸-共-乙醇酸、聚已酸內(nèi)酯及其共聚物。15. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中這些生物可降解聚合物顆粒具有約10nm與約 200nm之間的平均大小。16. 如權(quán)利要求1所述的傷口敷料，其中該第二活性劑包括生長(zhǎng)因子。17. 如權(quán)利要求16所述的傷口敷料，其中該第二活性劑包括用于傷口愈合或骨骼生長(zhǎng) 的生長(zhǎng)因子。18. -種傷口敷料，包含： 由第一多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)第一穿孔網(wǎng)格；以及 由第二多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)第二穿孔網(wǎng)格， 其中該第二穿孔網(wǎng)格以堆疊構(gòu)型設(shè)置于該第一穿孔網(wǎng)格上并且該第一穿孔網(wǎng)格具有 比該第二穿孔網(wǎng)格更高的穿孔度。19. 如權(quán)利要求18所述的傷口敷料，進(jìn)一步包含： 由第三多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)第三穿孔網(wǎng)格， 其中該第三穿孔網(wǎng)格以堆疊構(gòu)型設(shè)置于該第二穿孔網(wǎng)格上并且該第三穿孔網(wǎng)格具有 比該第一穿孔網(wǎng)格和該第二穿孔網(wǎng)格更高的穿孔度。20. 如權(quán)利要求19所述的傷口敷料，進(jìn)一步包含： 由第四多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)第四網(wǎng)格， 其中該第四網(wǎng)格以堆疊構(gòu)型設(shè)置于該第三穿孔網(wǎng)格上并且該第四網(wǎng)格是未穿孔的或 者具有比該第三穿孔網(wǎng)格更低的穿孔度。21. 如權(quán)利要求18所述的傷口敷料，其中該第一穿孔網(wǎng)格是親水性的并且該第二穿孔 網(wǎng)格是疏水性的。22. 如權(quán)利要求18所述的傷口敷料，其中一種活性劑分散于該第一穿孔網(wǎng)格和/或該 第二穿孔網(wǎng)格的這些生物可降解聚合物纖維內(nèi)。23.如權(quán)利要求22所述的傷口敷料，其中多個(gè)生物可降解聚合物顆粒設(shè)置于該第一穿 孔網(wǎng)格和/或該第二穿孔網(wǎng)格內(nèi)。24.如權(quán)利要求23所述的傷口敷料，其中一種第二活性劑分散于這些生物可降解聚合 物顆粒內(nèi)。25.如權(quán)利要求24所述的傷口敷料，其中該第一活性劑的體內(nèi)或體外釋放曲線不同于 該第二活性劑的體內(nèi)或體外釋放曲線。26.-種治療傷口的方法，包括： 將如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的傷口敷料應(yīng)用于該傷口的表面。27.如權(quán)利要求26所述的方法，進(jìn)一步包括至少部分降解該傷口敷料的這些生物可降 解聚合物纖維以使該第一活性劑釋放到該傷口。28.如權(quán)利要求27所述的方法，進(jìn)一步包括至少部分降解該傷口敷料的這些生物可降 解聚合物顆粒以使該第二活性劑釋放到該傷口。29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中該第二活性劑在該第一活性劑釋放之后釋放。30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中該第一活性劑包括用于血管生成的生長(zhǎng)因子。31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中該第二活性劑包括用于傷口愈合或骨骼生長(zhǎng)的生 長(zhǎng)因子。32.-種治療傷口的方法，包括： 將如權(quán)利要求18-25中任一項(xiàng)所述的傷口敷料應(yīng)用于該傷口的表面。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中該傷口包括疝。
【專利摘要】在一個(gè)方面，在此描述了組合物和傷口敷料。在一些實(shí)施例中，在此所述的一種組合物或傷口敷料包含由多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)網(wǎng)格；分散于這些生物可降解聚合物纖維內(nèi)的一種第一活性劑；設(shè)置于該網(wǎng)格內(nèi)的多個(gè)生物可降解聚合物顆粒；以及分散于這些生物可降解聚合物顆粒內(nèi)的一種第二活性劑。這些顆?？梢栽O(shè)置于該網(wǎng)格的這些纖維內(nèi)部或該網(wǎng)格的這些纖維之間。在另一個(gè)方面，在此所述的一種組合物或傷口敷料包含由第一多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)第一穿孔網(wǎng)格；以及由第二多個(gè)生物可降解聚合物纖維形成的一個(gè)第二穿孔網(wǎng)格，其中該第二穿孔網(wǎng)格以堆疊構(gòu)型設(shè)置于該第一穿孔網(wǎng)格上并且該第一穿孔網(wǎng)格和該第二穿孔網(wǎng)格具有不同的穿孔度。
【IPC分類】A61L31/16, A61L15/28, A61L31/14, A61L15/26, A61L15/42, A61L31/04, A61L15/44, A61L31/06, A61L15/64, A61L31/12
【公開號(hào)】CN105407931
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480041462
【發(fā)明人】楊健, 基泰·T·恩固因, 謝志偉
【申請(qǐng)人】賓州研究基金會(huì), 德克薩斯大學(xué)體系董事會(huì)
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2014年5月21日
【公告號(hào)】CA2912782A1, EP2999491A2, US20160106878, WO2014190038A2, WO2014190038A3