一種偽狂犬病病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及疫苗助劑領(lǐng)域，具體設(shè)及一種偽狂犬病病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及其 制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 本發(fā)明所設(shè)及重組偽狂犬病毒，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物培養(yǎng)中屯、、保藏號(hào)為： CCTCC-V201408,可用于制備豬偽狂犬病防治用疫苗。
[0003] 目前，在我國(guó)獸用生物制品中，活的凍干疫苗占相當(dāng)大的比例，國(guó)內(nèi)常用的保護(hù)劑 主要為牛奶、薦糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單，保護(hù)功能差。如果在2°C~8°C條件下，保存期只有4 ~6月，多需要在-15°CW下保存。加上國(guó)內(nèi)傳統(tǒng)的獸用生物制品保護(hù)劑的研制相對(duì)滯后，使 成品的長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸受限。所W，耐熱凍干保護(hù)劑的研究是非常急需的，在20世紀(jì)80年 代，發(fā)達(dá)國(guó)家就已開(kāi)始進(jìn)行耐熱凍干保護(hù)劑的研究。我國(guó)在耐熱凍干保護(hù)劑方面的研究起 步較晚，加上中國(guó)市場(chǎng)巨大，國(guó)外生物制品涌入，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加劇。為了本國(guó)生物制品業(yè)的生 存和發(fā)展，新型有效的耐熱凍干保護(hù)劑的研究和應(yīng)用顯得尤為迫切。
[0004] 中國(guó)專利申請(qǐng)201310553466.X公開(kāi)了一種動(dòng)物活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，各成分含 量為：乳糖80-200g/L、水解乳白蛋白10-40g/L、聚乙締化咯燒酬5-20g/L、甘露醇0-2〇g/L、谷氨酸鋼5-20g/L、精氨酸鹽酸鹽5-15g/L、水解蠶絲蛋白10-30g/L，制得的疫苗安 全無(wú)菌、質(zhì)量穩(wěn)定，具有耐熱、保存時(shí)間長(zhǎng)的特點(diǎn)，解決了疫苗在運(yùn)輸過(guò)程中需要低溫冷凍、 膽存不便等問(wèn)題。但該保護(hù)劑在36°C溫度下保存時(shí)間不長(zhǎng)。
[000引因此，有必要提供一種在較高溫度和低溫下保存時(shí)間長(zhǎng)，病毒損失率低，耐老化程 度高的耐熱凍干保護(hù)劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種外觀良好，病毒損失率低，耐老化程度高，保存期長(zhǎng)的 重組偽狂犬病病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，相應(yīng)地，本發(fā)明還提供該耐熱凍干保護(hù)劑的制備 方法。
[0007] 為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：一種偽狂犬病病毒疫苗耐熱凍 干保護(hù)劑，所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:水解明膠2-6%、乳糖0.2-4%、薦糖2-5%、植物多糖0.1-0.5%、山梨醇l-3%、k谷氨酸1-1.5%組氨酸0.1-1 %、維生素C 0.2-0.5%、維生素E 0.1-0.3%、無(wú)水憐酸二氨鐘1-2%、叔下醇0.5-1%和人血清白蛋白0.1-1 %， 余量為注射用水。
[000引優(yōu)選地，所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:水解明膠2%、乳糖0.2%、薦糖 2%、植物多糖0.1%、山梨醇i%a-谷氨酸1 % a-組氨酸0.1 %、維生素C 0.2%、維生素E 0.1%、無(wú)水憐酸二氨鐘1%、叔下醇0.5%和人血清白蛋白0.1 %，余量為注射用水。
[0009]優(yōu)選地，所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分：水解明膠6%、乳糖4%、薦糖 5%、植物多糖0.3%、山梨醇3%a-谷氨酸1.5% a-組氨酸1 %、維生素C 0.5%、維生素E 0.3%、無(wú)水憐酸二氨鐘2%、叔下醇1%和人血清白蛋白I %，余量為注射用水。
[0010] 優(yōu)選地，所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分：水解明膠4%、乳糖2%、薦糖 3.5 %、植物多糖0.5%、山梨醇2%、k谷氨酸1.5 %、k組氨酸0.5 %、維生素C 0.4%、維生素E 0.2%、無(wú)水憐酸二氨鐘1.5%、叔下醇0.8%和人血清白蛋白0.5%，余量為注射用水。
[0011] 優(yōu)選地，所述偽狂犬病病毒為重組偽狂犬病病毒，所述重組偽狂犬病病毒保藏于 中國(guó)典型培養(yǎng)物培養(yǎng)中屯、，保藏號(hào)為:CCTCC-V201408。
[0012] 優(yōu)選地，所述植物多糖由黃巧多糖和香茹多糖按(1-1.5):(0.5-1)的重量比組成。
[0013] 優(yōu)選地，所述保護(hù)劑還包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:天冬氨酸0.5-1%。
[0014] 相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了一種所述偽狂犬病病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備方 法，包括如下步驟： а. 取水解明膠、乳糖、薦糖、植物多糖、山梨醇、無(wú)水憐酸二氨鐘和叔下醇溶于部分注射 用水中，該部分的注射用水占注射用水總量的2/5-4/5,然后在115-125°C的溫度下進(jìn)行滅 菌處理15-25min，得到溶液A; б. 取心谷氨酸組氨酸、維生素C、維生素EW及人血清白蛋溶于剩余部分的注射用水 中，用孔徑為0.15-0.20WI1的濾膜過(guò)濾除菌，得到溶液B; C.將a步驟得到的溶液A與b步驟得到的溶液B按1:1的體積比混合，即得產(chǎn)品。
[0015] 優(yōu)選地，在所述b步驟中加入天冬氨酸。
[0016] 優(yōu)選地，所述a步驟中，在115°C的溫度下進(jìn)行滅菌處理15min，所述b步驟中，濾膜 孔徑為0.20皿。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)： (1)本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑能夠使疫苗在2-8°C下保存期由原來(lái)的1年提高到2年， 保存時(shí)間顯著延長(zhǎng)。
[0018] (2)本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑保護(hù)的凍干產(chǎn)品（疫苗），耐熱后病毒含量?jī)H下降約 0.1-0.2個(gè)滴度，現(xiàn)有的耐熱凍干保護(hù)劑下降0.8個(gè)滴度。
[0019] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 本發(fā)明部分組分的廠家和貨號(hào)等信息如下：

實(shí)施例1 一種重組偽狂犬病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑 所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:水解明膠2%、乳糖0.2%、薦糖2%、植物多糖 0.1%、山梨醇l%、k谷氨酸1%組氨酸0.1%、維生素C 0.2%、維生素E 0.1%、無(wú)水憐酸二 氨鐘1%、叔下醇0.5%和人血清白蛋白0.1 %，余量為注射用水，其中，所述植物多糖由黃巧多 糖0.05%和香茹多糖0.05%組成。
[0021 ]制備方法： а. 取水解明膠、乳糖、黃巧多糖、香茹多糖、薦糖、山梨醇、無(wú)水憐酸二氨鐘和叔下醇溶 于部分注射用水中，該部分的注射用水占注射用水總量的2/5,然后在115°C的溫度下進(jìn)行 滅菌處理15min，得到溶液A; б. 取心谷氨酸組氨酸、維生素C、維生素EW及人血清白蛋溶于剩余部分的注射用水 中，用孔徑為0.20WI1的濾膜過(guò)濾除菌，得到溶液B; C.將a步驟得到的溶液A與b步驟得到的溶液B按1:1的體積比混合，即得產(chǎn)品。 實(shí)施例2 -種重組偽狂犬病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑 所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:水解明膠6%、乳糖4%、薦糖5%、植物多糖 0.3%、山梨醇3%a-谷氨酸1.5%a-組氨酸1 %、天冬氨酸0.6%、維生素C 0.5%、維生素 EO.3%、無(wú)水憐酸二氨鐘2%、叔下醇1%和人血清白蛋白1%，余量為注射用水，其中，所述植物 多糖由黃巧多糖0.2%和香茹多糖0.1%組成。
[002引制備方法： а. 取水解明膠、乳糖、黃巧多糖、香茹多糖、薦糖、山梨醇、無(wú)水憐酸二氨鐘和叔下醇溶 于部分注射用水中，該部分的注射用水占注射水總量的3/5,然后在115°C的溫度下進(jìn)行滅 菌處理15min，得到溶液A; б. 取心谷氨酸組氨酸、天冬氨酸、維生素C、維生素EW及人血清白蛋溶于剩余部分 的注射用水中，用孔徑為0.20WI1的濾膜過(guò)濾除菌，得到溶液B; C.將a步驟得到的溶液A與b步驟得到的溶液B按1:1的體積比混合，即得產(chǎn)品。
[0023] 實(shí)施例3-種重組偽狂犬病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑 所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:水解明膠4%、乳糖2%、薦糖3.5%、植物多糖 0.5%、山梨醇2%、1^-谷氨酸1.5 % a-組氨酸0.5 %、天冬氨酸1%、維生素C 0.4%、維生素E 0.2%、無(wú)水憐酸二氨鐘1.5%、叔下醇0.8%和人血清白蛋白0.5 %，余量為注射用水，其中，所 述植物多糖由黃巧多糖0.3%和香茹多糖0.2%組成。
[0024] 制備方法如實(shí)施例2。
[0025] 對(duì)比例1 一種重組偽狂犬病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑 所述植物多糖為黃巧多糖，其余成分如實(shí)施例2。
[0026] 制備方法參考實(shí)施例2。
[0027] 對(duì)比例2-種重組偽狂犬病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑 所述植物多糖由黃巧多糖0.1%和香茹多糖0.2%組成。
[002引制備方法參考實(shí)施例2。
[0029] 對(duì)比例3-種重組偽狂犬病毒疫苗耐熱凍干保護(hù)劑 所述保護(hù)劑包括W下重量百分?jǐn)?shù)的組分:水解明膠6%、乳糖4%、薦糖5%、植物多糖 0.3%、山梨醇3%、k谷氨酸1.5%組氨酸1 %、天冬氨酸0.6%、維生素EO. 3%、無(wú)水憐酸二氨 鐘2%、叔下醇1%、人血清白蛋白1 %，余量為注射用水，其中，所述植物多糖由黃巧多糖0.2% 和香茹多糖0.1%組成。
[0030] 制備方法參考實(shí)施例2。
[0031 ]性能測(cè)試 1.制苗用毒液的制備 1.1材料 1.1.1病毒和細(xì)胞 重組偽狂犬病病毒巧RV-0RF2為發(fā)明人自主構(gòu)建與保存，該重組偽狂犬病病毒保藏在 中國(guó)典型培養(yǎng)物培養(yǎng)中屯、、保藏號(hào)為：CCTCC-V201408 ;該重組偽狂犬病病毒可有效表達(dá) PCV2的0RF2基因，可用于制備PCV2-PRV二聯(lián)基因工程疫苗。ST細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。
[00創(chuàng) 1.1.2血清、培養(yǎng)基和膜蛋白酶類試劑 胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco公司，膜蛋白酶為Sigma公司產(chǎn)品。氯化鋼、氯化鐘、 葡萄糖、Na肥03、抓TA為分析純?cè)噭?br>[003