胞作用每周一次僅被抑制短的時(shí)間段，。
[0075] 本文描述的實(shí)施方式通過以下工作實(shí)施例進(jìn)一步說明，但決不局限于此。 工作實(shí)施例 實(shí)施例1 在小鼠中UV-12和UV-28對INFVA/Texas/36/91(HlNl)激發(fā)的療效 研究概要:本研究測試了亞氨基糖UV-12和UV-28防止小鼠感染致命的流感病毒的能力 (約1LD9Q的A型流感/Texas/36/91 (H1N1)鼻內(nèi)給藥）。在病毒激發(fā)之前30-60分鐘以100或 40mg/kg經(jīng)口（IG)途徑輸送化合物并持續(xù)10天，每天三次。用于測試療效的小鼠為約20克， 6-8周齡雌性BALB/c小鼠，10只為一組(研究組的總結(jié)在圖1中所示）。每天讀取溫度和重量。 終點(diǎn)是感染后14天、死亡或安樂死。對顯示嚴(yán)重疾病(如由>30%的體重減輕、極度嗜睡或癱 瘓所判定的）的動物實(shí)施安樂死。 I.簡介 目的：本研究的目的是確定小分子UV-12和UV-28在體內(nèi)針對致命的A型流感/Texas/ 36/91 (H1N1)感染的功效。
[0076] II.材料和方法
研究設(shè)計(jì)
[0078]本研究測試UV-12和UV-28保護(hù)小鼠免于致死流感感染的能力。所用的小鼠為6-8 周齡的雌性BALB/c小鼠，10只為一組(見以下表5)。小鼠在激發(fā)前約30-60分鐘開始，經(jīng)IG途 徑每日三次（TID)用100mg/kg或40mg/kg治療。小鼠用約1LD90的A型流感/Texas/36/91 (H1N1)鼻內(nèi)（IN)施用來激發(fā)。終點(diǎn)是感染后14天、死亡或安樂死。對顯示嚴(yán)重疾?。ㄈ缬伞?30%的體重減輕、極度嗜睡或癱瘓所判定的）的動物實(shí)施安樂死。每天讀取溫度和重量。 表5:用于研究的小鼠組。列出了初始給藥的時(shí)間點(diǎn)（相對于感染開始治療），給藥方案 和給藥水平/途徑。
標(biāo)準(zhǔn)方案 小鼠鼻內(nèi)感染的標(biāo)準(zhǔn)方案 1. 雌性6-8周齡BALB/c小鼠被安置在5只小鼠的組中。小鼠在研究開始前至少3天在研 究地點(diǎn)(Noble Life Sciences，馬里蘭州蓋瑟斯堡)進(jìn)行隔離。 2. 食品和水任意提供。 3. 用INFV激發(fā)的小鼠組在淺麻醉(異氟烷)下通過鼻內(nèi)（IN)用在PBS中以1:500稀釋的 100μΙ INFV的溶液接種約1 XLD9Q進(jìn)行感染。 4. 感染后，小鼠被放回它們的籠子進(jìn)行觀察和后續(xù)給藥。 用于測試物品輸送的小鼠口服管飼的方案 1. 小鼠用1 〇〇mg/kg或40mg/kg的測試物品在100yL的水中通過IG途徑(參照表5給藥方 案)治療每天三次，持續(xù)十天。 2. 給藥后，小鼠被放回它們的籠子并監(jiān)視有關(guān)給藥的任何痛苦。 小鼠的觀察 1. 觀察小鼠感染后至13天(共14天，感染后0-13天）。 2. 在奧豪斯天平上每天稱重小鼠并記錄重量。 3. 所有的動物在病毒激發(fā)前至少3天都植入監(jiān)測體溫的芯片。每日記錄溫度。 4. 每只小鼠的生存和健康使用評分系統(tǒng)1-7評估，每天一次。 表6.評分系統(tǒng)
III.結(jié)論 存活率 小鼠用約 1XLD9QA 型流感/Texas/36/91(HlNl)感染，并用 100mg/kg 或 40mg/kg 的 υν-12 或UV-28處理每天3次持續(xù)10天。在圖1和表7中示出了每個(gè)感染處理組中的存活率，計(jì)算為 百分比存活率與感染后的天數(shù)的關(guān)系。用l〇〇mg/kg的UV-12和UV-28兩者處理過的受感染的 組顯示100%的存活率。用40mg/kg的UV-12和UV-28處理的受感染的組分別顯示20%和60% 的存活率。未經(jīng)處理的對照組顯示0%的存活率，并且在感染后7天均"發(fā)現(xiàn)死亡"或"安樂 死"。 圖1是呈現(xiàn)通過治療分組的受感染小鼠的存活數(shù)據(jù)的曲線圖。表7呈現(xiàn)了受感染小鼠的 存活分析的結(jié)果。在GraphPad Prism(繪制醫(yī)學(xué)圖表）中使用曼特-考克斯(對數(shù)秩)測試對 圖1中繪制的存活數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
生物統(tǒng)計(jì)分析 在本研究的過程中，針對每個(gè)組每天監(jiān)測個(gè)體重量、健康評分和溫度。每組小鼠的平均 體重示于圖2。用芯片標(biāo)記每個(gè)動物以使用BMDS掃描儀取得每天溫度讀數(shù);平均溫度示于圖 3。健康評分示于圖4。 結(jié)論 感染流感的小鼠經(jīng)口管飼用1 〇〇mg/kg或40mg/kg的υν-12或UV-28治療每日三次持續(xù)10 天。用100mg/kg治療的兩個(gè)組顯示出100 %的存活率，而用40mg/kg的UV-28和UV-12治療的 組分別顯示出60%和20%的存活率。盡管在40mg/kg的UV-28顯示出較好的效力，但顯示出 比UV-12(圖4)更強(qiáng)的毒性。而用100mg/kg的UV-12治療的小鼠從感染完全恢復(fù)并返回成正 常，用100mg/kg的UV-28治療的小鼠不能恢復(fù)它們的健康評分并在整個(gè)研究過程中保持"起 皺"。結(jié)合較高的說明發(fā)病率的健康評分，用UV-28治療的小鼠也沒有恢復(fù)它們的體重，而用 UV-12處理的小鼠幾乎完全恢復(fù)。只用載體治療的小鼠在感染后第7天均死于感染，顯示為 〇 %的存活率。 實(shí)施例2 在A129ADE模型中的UV-12存活率分析 目的：本研究確定UV-12促進(jìn)用登革病毒激發(fā)的小鼠的存活率的功效。通過口服途徑 (每天3次經(jīng)口管飼胃內(nèi)-IG)給予化合物，在給藥開始后持續(xù)7天的總數(shù)。實(shí)驗(yàn)使用感染的 A129ADE模型。（Prestwood TR，Morar MM，Zellweger RM，Mille R，May MM，Yauch LE，Lada SM，Shresta S.在IFN-α/β受體缺陷小鼠中γ干擾素（IFN-γ )受體限制系統(tǒng)性登革病毒復(fù) 制并防止癱瘓，J Virol. 2012年12月；86(23) :12561-70)。在第0天動物接受病毒激發(fā)劑量 約1LD9Q。在病毒激發(fā)前0.5-1小時(shí)給予第一次給藥。測定存活率直到感染后30天為止。 亞氨基糖候選者:UV-12。 用于研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)： 對照組，H20+DENV(S221) [ 10 只小鼠] UV-12，（ 100mg/kg/劑量)+DENV(S221) [ 10 只小鼠] 小鼠：性別匹配的5-6周齡A129(129/SV IFN-α,-β受體+) 給藥途徑： 亞氨基糖：口服每天3次，每8小時(shí)(管飼(IG)) 抗體:IP 病毒:IV 在30分鐘內(nèi)同時(shí)給予抗體和亞氨基糖化合物，然后病毒 病毒激發(fā)： 抗體：100yg來自ATCC的2H2(IgG2a抗-DENVl-4prM)，0天和 1 天以40yL 病毒：DENV2品系S221(V512) (Zellweger RM，Prestwood TR，Shresta S.在抗體誘導(dǎo)嚴(yán) 重登革熱病的小鼠模型中增強(qiáng)的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的感染（Enhance infection of liver sinusoidal endothelial cells in a mouse model of antibody-induced severe (^即脫（^86&86)〇611!1〇8七]\^(^(*6.2010年2月18日；7(2):128-39) 劑量:每動物1E11GE(基因組當(dāng)量） 讀?。?動物存活率。對顯示出嚴(yán)重疾病(如由20%的重量減輕、極度嗜睡、皮毛起皺，或癱瘓） 的動物實(shí)施安樂死。 資源： 由Sujan Shresta，La Jolla Institute for Allergy and Immunology供應(yīng)的A129小 鼠，2H2抗體和S221病毒 由Unither Virology供應(yīng):UV-12 圖5呈現(xiàn)了本研究的結(jié)果。小鼠用50yL的在水中稀釋的UV-12 口服治療，每天三次，持續(xù) 共7天。在病毒靜脈激發(fā)的1小時(shí)之前開始治療。UV-12治療的A129小鼠顯示相比于每天三次 僅口服給藥50yL的水的對照組動物增大了存活率。 實(shí)施例3 選擇的亞氨基糖在小鼠體中的療效;A型流感/Texas/36/91 (H1N1)激發(fā) 研究概述:本研究分析了在H1N1流感感染期間UV-8、UV-9、UV-10、UV-11和UV-12在小鼠 中的毒性和療效。此前，以l〇〇mg每日三次(TID) 口服輸送UV-4B進(jìn)行的研究導(dǎo)致對抗H1NI的 功效，并沒有表現(xiàn)出毒性的任何可辨別跡象。在目前的研究中，我們檢查通過口服途徑(經(jīng) 口管飼或IG)每日三次輸送的100mg/kg的UV-4B、UV-8、UV-9、UV-10、UV-11和UV-12的輸送劑 量。被包括以檢查總毒性的小組(n = 3)接受100mg/kg的亞氨基糖，而沒有病毒激發(fā)。在用約 1LD9Q 的 A 型流感/Texas/36/91 (H1N1)鼻內(nèi)感染之前（IN) 1 小時(shí)開始將 UV-4B、UV-8、UV-9、UV-10、UV-11或UV-12輸送到動物。然后治療動物，每天三次持續(xù)共10天(感染后第0-9天）。效力 通過與受感染的未治療的對照組比較存活率、溫度變化和體重增加/減輕進(jìn)行評估。用1^_ 8、UV-9、UV-10或UV-11給藥的小鼠在存活率方面沒有顯示出超過未治療對照組的任何改 善，但用UV-12給藥的小鼠和用UV-4B給藥的陽性對照組兩者都顯示出存活率顯著增大。 I. 簡介 該研究的目的是確定群-8、群-9、1^-10、1^-11和1^-12當(dāng)以10011^/1^1'10口服給藥時(shí) 對抗在BALB/c小鼠模型中用A型流感/Texas/36/91 (H1N1)致命鼻內(nèi)感染的功效。除了療效 分支(arm)，在不存在病毒感染的情況下用相同的治療方案（100mg/kg，經(jīng)口管飼，TID)在動 物的小組中測試每種亞氨基糖，以監(jiān)測每個(gè)類似物的總毒性(一般健康狀況，體重，溫度和 死亡率的評價(jià)）。 II. 材料和方法

研究設(shè)計(jì) 假定約20g的小鼠給予0. lml的化合物，對于100mg/kg的輸送劑量，以20mg/ml在H2O中 制備群-8、群-9、群-10、群-11、群-12和群-48。用約1〇)9()的1陬￥厶八6138/36/91(!1謂1)鼻內(nèi) 感染之前一小時(shí)(_lh)治療BALB/c小鼠組，然后每日三次給藥化合物持續(xù)共10天(參見研究 設(shè)計(jì)總結(jié)表12)。重量、溫度和存活率被監(jiān)測并用于每個(gè)模擬的保護(hù)效力和毒性的評估。 表12:用于研究的鼠組。列出了初始給藥的時(shí)間點(diǎn)（相對于感染開始治療），給藥方案和 給藥水平/途徑。小鼠給藥每天一次或兩次持續(xù)共1 〇天。
標(biāo)準(zhǔn)方案 用于鼻內(nèi)感染小鼠的標(biāo)準(zhǔn)方案 1. 雌性4-6周齡BALB/c小鼠被安置在3-5只小鼠的組中。小鼠在研究開始前至少3天在 研究地點(diǎn)(Noble Life Sciences，馬里蘭州蓋瑟斯堡)進(jìn)行隔離。 2