0185]有機(jī)相配制:將SlOO:CHOL:DSPE_PEG_2k為75:20:10加入有機(jī)相中，將藍(lán)萼甲素藥物(0.1%)分散于有機(jī)相中；
[0186]有機(jī)相超聲混勾，加入250ml圓底燒瓶通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓旋蒸5min，旋蒸溫度為400C，使形成均勻分散的薄膜。
[0187]水相配制;將5ml0.9%氯化鈉溶液預(yù)熱到55°(:;
[0188]將預(yù)熱好的0.9%的氯化鈉溶液加入圓底燒瓶，旋蒸50min制成初乳，旋蒸溫度為55。。。
[0189]將初乳在冰浴條件下進(jìn)行探頭超聲，超聲功率為200w，超聲時(shí)間為30min得納米脂質(zhì)體。
[0190]將納米脂質(zhì)體通過(guò)0.22μπι碳酸脂膜過(guò)濾。
[0191]該納米脂質(zhì)體混懸液用馬爾文粒度測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定，其平均粒徑為81.30±
0.440nm，其穩(wěn)定性 >48h。
[0192]實(shí)施例19
[0193]有機(jī)相配制:將SlOO:CHOL:DSPE_PEG_2k為85:10:10加入有機(jī)相中，將藍(lán)萼甲素藥物(0.3%)分散于有機(jī)相中；
[0194]有機(jī)相超聲混勾，加入250ml圓底燒瓶通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓旋蒸5min，旋蒸溫度為400C，使形成均勻分散的薄膜。
[0195]水相配制;將5ml0.9%氯化鈉溶液預(yù)熱到55°C ;
[0196]將預(yù)熱好的0.9%的氯化鈉溶液加入圓底燒瓶，旋蒸30min制成初乳，旋蒸溫度為55。。。
[0197]將初乳在冰浴條件下進(jìn)行探頭超聲，超聲功率為300w，超聲時(shí)間為Smin得納米脂質(zhì)體。
[0198]將納米脂質(zhì)體通過(guò)0.22μπι碳酸脂膜過(guò)濾。
[0199]該納米脂質(zhì)體混懸液用馬爾文粒度測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定，其平均粒徑為93.95±0.59nm，其穩(wěn)定性>48h。
[0200]實(shí)施例20載藥納米脂質(zhì)體的制備與表征
[0201]采用薄膜分散水化法，制備載藍(lán)萼甲素藥物的納米脂質(zhì)體。簡(jiǎn)要步驟如下:將S100:CH0L:DSPE-PEG-2k按摩爾比為85:10:10的比例精密稱取，并精密稱取0.3%的藍(lán)萼甲素藥物充分溶解于三氯甲烷溶液中并轉(zhuǎn)移至250ml圓底燒瓶中，40°C條件下真空旋蒸5min，使成均勻薄膜；將預(yù)熱好的0.9 %氯化鈉溶液倒入圓底燒瓶中在5 5 °C溫度下繼續(xù)旋蒸30min，得到藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體溶液;將該溶液在冰浴條件下探頭超聲8min(300w)，通過(guò)
0.22μπι聚碳酸酯膜得到藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體。采用馬爾文粒徑儀檢測(cè)藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體的粒徑分布和電位分布(圖1Α，Β)，用超純水將納米脂質(zhì)體按1:10稀釋，取Iml置于樣品池中進(jìn)行檢測(cè)其粒徑分布和電位分布。采用透射電鏡觀察藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體的形態(tài)(圖2)，其結(jié)果與馬爾文粒徑儀結(jié)果相符。
[0202]考察藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體在PBS溶液(pH為5.0和7.4)中的釋放行為(圖3)。簡(jiǎn)要步驟如下，分別取Iml藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體置于截留分子量為3-5kDa的透析管中，加入25ml的釋放介質(zhì)，置于37 °C、10rpm的搖床中。于規(guī)定時(shí)間點(diǎn)各取2ml釋放介質(zhì)，并補(bǔ)充2ml新鮮釋放介質(zhì)。經(jīng)真空干燥后，用甲醇:水(1:1)重新溶解，進(jìn)樣分析。
[0203]采用薄膜分散法，我們成功制備載藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體并對(duì)其進(jìn)行表征，所得納米脂質(zhì)體組分布均勾、粒徑在90nm附近、Ze ta電位在-1 ImV附近;且在48h內(nèi)表現(xiàn)出一定程度的緩釋效果。
[0204]實(shí)施例21載藥納米脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性
[0205]采用cck-8檢測(cè)方法考察在不同給藥劑型、給藥時(shí)間和給藥濃度處理情況下乳腺癌細(xì)胞及乳腺癌干細(xì)胞的細(xì)胞存活率，來(lái)評(píng)價(jià)藍(lán)萼甲素脂質(zhì)體對(duì)乳腺癌細(xì)胞suml49PT(購(gòu)自南京科佰生物有限公司)及乳腺癌干細(xì)胞suml49PT-TS的細(xì)胞毒性。
[0206]步驟如下，suml49PT和suml49PT-TS消化為單細(xì)胞，計(jì)數(shù)5000/孔接種于96孔板，孵育12h，將培養(yǎng)基棄掉，加入含有不同濃度藥物的新鮮培養(yǎng)基，分別孵育24h、48h和72h。棄掉含藥培養(yǎng)基，PBS輕洗一次后，每孔加入含10 %DMS0的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育2-6h。用酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處OD值計(jì)算細(xì)胞存活率(細(xì)胞存活率(% )=(實(shí)驗(yàn)組OD值-陰性對(duì)照組OD值)/(空白對(duì)照組OD值-陰性對(duì)照組OD值)X 100% ))。利用擬合曲線計(jì)算不同給藥時(shí)間及給藥方式處理后的I c50值。上述IC50值的比較由t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
[0207]體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示，空白納米脂質(zhì)體對(duì)suml49PT和suml49PT-TS細(xì)胞均無(wú)明顯細(xì)胞毒性(圖4A，B);游離藍(lán)萼甲素及載藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體對(duì)對(duì)suml49PT和suml49PT-TS細(xì)胞均表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，作用效果增強(qiáng)(圖5: A 24h，B 48h，C72h；D 24h，E 48h，F(xiàn) 72h);在不同給藥時(shí)間情況下，載藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體對(duì)suml49PT和suml49PT-TS細(xì)胞的殺傷效果均優(yōu)于游離藍(lán)萼甲素，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖6A，B)。
[0208]以上已對(duì)本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實(shí)施例進(jìn)行了具體說(shuō)明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實(shí)施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可作出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請(qǐng)權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體，其特征在于，包含藍(lán)萼甲素藥物，藥學(xué)上可接受的生物學(xué)載體和配體，以及有機(jī)相和水相介質(zhì);所述的載體為卵磷脂和膽固醇，所述的配體為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000;所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體中藍(lán)萼甲素藥物為有機(jī)相的0.1 %-0.3% w/v，所述的載體與配體的摩爾比為19:1-19:3，所述的載體中卵磷脂與膽固醇的摩爾比為85:10-1:1。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體，其特征在于，所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體的平均粒徑小于200nm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體，其特征在于，所述的有機(jī)相為氯仿或甲醇。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體，其特征在于，所述的水相介質(zhì)為0.9%w/v的氯化鈉溶液，去離子水或pH為7.4的PBS。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體，其特征在于，所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體載體中的卵磷脂為氫化大豆卵磷脂，大豆卵磷脂，蛋黃卵磷脂其中的一種或兩種以上。6.—種如權(quán)利要求1所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，采用薄膜分散法，包括以下步驟: A.有機(jī)相配制:將載體和配體以及藍(lán)萼甲素藥物分散于有機(jī)相中； B.水相配制:將水相介質(zhì)預(yù)熱； C.然后將有機(jī)相超聲混勻后放入圓底燒瓶中，通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)使形成均勻薄膜;將水相介質(zhì)倒入圓底燒瓶中加熱進(jìn)行水化;將水化好的液體進(jìn)行冰浴超聲得到藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述的步驟C中水化溫度為50-60 °C，水化時(shí)間為30-50min。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，所述的步驟C中超聲的功率為200-400w，超聲時(shí)間為8-30min。9.一種如權(quán)利要求1-5任一所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體靶向乳腺癌細(xì)胞或乳腺癌干細(xì)胞。
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥制劑領(lǐng)域，具體是一種載藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體，其制備方法以及在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的載藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體利用納米脂質(zhì)體緩釋，靶向等性質(zhì)可改善藍(lán)萼甲素水溶性差，體內(nèi)代謝快，給藥困難等不足，本發(fā)明的藍(lán)萼甲素納米脂質(zhì)體在藥物的增溶、緩釋及靶向等方面均表現(xiàn)出非常好的應(yīng)用前景。
【IPC分類】A61K31/122, A61P9/10, A61K9/127
【公開(kāi)號(hào)】CN105663044
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610120541
【發(fā)明人】鐘延強(qiáng), 孫篤新, 王強(qiáng), 遲晴晴, 張翮, 張國(guó)慶
【申請(qǐng)人】上海泰申醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年6月15日
【申請(qǐng)日】2016年3月3日