可用于治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的鳥苷酸環(huán)化酶的激動(dòng)劑的制作方法【專利摘要】本公開內(nèi)容提供預(yù)防、控制和/或治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的方法，所述方法包括將鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽給予有需要的患者。還公開了包含鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽的組合物、制備方法和治療方法。進(jìn)一步公開了在同一組合物中配制的鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽和阿片樣物質(zhì)?！緦＠f明】可用于治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的鳥苷酸環(huán)化酶的激動(dòng)劑[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2013年10月10日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/889,308的權(quán)益，其通過引用以其整體結(jié)合到本文中用于所有目的。發(fā)明領(lǐng)域[0002]本發(fā)明涉及鳥苷酸環(huán)化酶C(GC-C)激動(dòng)劑治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙，例如阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙、阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的食道功能障礙和阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的呼吸抑制的治療應(yīng)用。該激動(dòng)劑可以單獨(dú)使用或與其它活性劑同時(shí)或序貫使用以預(yù)防、治療或減輕一種或多種阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙。[0003]發(fā)明背景阿片樣物質(zhì)是用于癌癥和非癌癥患者的疼痛管理的有效的和廣泛使用的藥物。然而，阿片樣物質(zhì)的使用常常具有致人虛弱的不良作用，例如阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙，包括呼吸抑制、食道功能障礙、內(nèi)分泌破壞和阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙(0IBD)，這包括阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘、口干、惡心、嘔吐、胃潴留、胃氣脹和腹痛。[0004]需要對(duì)治療和防止阿片樣物質(zhì)的副作用的組合物和方法。[0005]發(fā)明背景本發(fā)明提供通過給予有需要的受試者治療有效量的包括鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽的組合物來防止、治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的病況或減輕其癥狀的方法。組合物可進(jìn)一步包含阿片樣物質(zhì)和/或依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽和阿片樣物質(zhì)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽和阿片樣物質(zhì)被配制在同一膠囊劑或片劑中。在又一個(gè)實(shí)施方案中，阿片樣物質(zhì)選自嗎啡、可待因、羥考酮、氫可酮、二氫可待因、丙氧芬、芬太尼、曲馬多、洛哌丁胺、布托啡諾或其組合。[0006]本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步包含藥用載體、賦形劑或稀釋劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含選自以下的一種或多種靶向物質(zhì):pH依賴性聚合物、可膨脹聚合物和可降解組合物。在又一個(gè)實(shí)施方案中，使組合物制劑優(yōu)化以遞送至十二指腸、空腸、回腸、回腸末端或升結(jié)腸。在又一個(gè)實(shí)施方案中，使組合物制劑優(yōu)化以在整個(gè)結(jié)腸中釋放。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物包含在4.5-5.5的pH范圍下、在5.5-6.5的pH范圍下或在6.5-7.5的pH范圍下降解的一種或多種pH依賴性聚合物。在再一個(gè)實(shí)施方案中，配制組合物以時(shí)間依賴性方式釋放。[0007]本文所述方法可進(jìn)一步包括給予受試者有效劑量的依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑的步驟。例如，依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑是舒林砜(su1indacsu1fone)、扎普司特、莫他匹酮、伐地那非或西地那非。依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑可與GCRA肽或其藥物組合物同時(shí)或序貫給予。[0008]本發(fā)明還提供包括阿片樣物質(zhì)和GCRA肽的組合物。組合物可另包括藥用載體、賦形劑或稀釋劑。[0009]可用于本發(fā)明的任何方法或任何組合物的GCRA肽具有表2-8的任一個(gè)的氨基酸序列。例如，GCRA肽為SEQIDNO:1(SP_3〇4)、SEQIDN0:9(SP_333)、SP373(SEQIDN0:104)、SP364(SEQIDNO:100)、SP366(SEQIDNO:102)或SEQIDNO:250。[0010]附圖簡(jiǎn)述圖1是顯示尿鳥苷肽(uroguanylin)和SP-333的一級(jí)結(jié)構(gòu)的圖示。描述了氨基酸的單字母縮略語。SP-333與UG類似，只是UG的N端3位的天冬氨酸(D)被谷氨酸(E)取代。此外，兩端的氨基酸被其各自的D-立體異構(gòu)體置換。尿鳥苷肽以及SP-333具有4個(gè)半胱氨酸(C)殘基，使得能夠形成2個(gè)分子內(nèi)二硫鍵。SP-333中取代的氨基酸用黑體字表示。[0011]圖2是顯示環(huán)狀CMP和環(huán)狀A(yù)MP緩解阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙(0BD)的作用機(jī)制的方案。[0012]圖3A-B是顯示用SP-333的頂端處理刺激跨T-84細(xì)胞單層和大鼠空腸的I的系列圖。在將T84細(xì)胞(A)和大鼠空腸組織(B)用SP-333治療后檢出氯離子電流的濃度依賴性增加（以IsC的增加測(cè)量）。誘導(dǎo)C1-電流的半最大增加(EC50)的SP-333的濃度在細(xì)胞和組織間相當(dāng)；分別為1.69X10-7Μ和2.99X10-7M。值表示為均值土S.E.M.，n=4。將在Ussing室中固定的T84細(xì)胞和幼稚大鼠空腸在頂室中進(jìn)行不同SP-333濃度的處理，記錄最大he刺激，并作圖。[0013]圖4A-B是顯示用SP-333的頂端處理通過激活PKG-II和CFTR刺激hc的系列圖。在響應(yīng)用指定抑制劑處理時(shí)，T84細(xì)胞(A)和大鼠空腸(B)中SP-333(1μΜ)的調(diào)節(jié)刺激頂端Isc。按實(shí)施例1所述，將Τ84細(xì)胞和大鼠空腸固定在頂側(cè)和底外側(cè)用各自的緩沖液浸浴的Ussing室中。為了評(píng)價(jià)ΡΚΑ和PKG-II所起的作用，并且為了鑒定CFTR和CIC-2對(duì)于激動(dòng)劑介導(dǎo)的ci-離子的釋放的相對(duì)貢獻(xiàn)，在激酶和cr通道抑制劑存在和不存在時(shí)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。所用抑制劑為CdC12(CIC-2抑制劑；Sigma-Aldrich;StLouis，M0)、CFTRinh172(CFTR抑制劑；SantaCruzBiotech;Dallas，Texas)、KT5823(PKG抑制劑；R&DSystems，Minneapolis，MN)、mPKI(ΡΚΑ抑制劑；EMDMillipore;Billerica，MA)。在加入1μΜSP-333之前，Τ84細(xì)胞(η=4個(gè)跨孔(transwell)/條件)和大鼠空腸組織(η=4-6個(gè)制備物/條件）的頂表面用規(guī)定濃度的各抑制劑預(yù)處理5分鐘。記錄在加入SP-333之后達(dá)到的Isc的峰值，以百分比相對(duì)活性土SEM為單位計(jì)算。[0014]圖5A-B是顯示嗎啡不會(huì)不利影響SP-333刺激的Isc的系列圖。T84細(xì)胞(A)和大鼠空腸(B)用5μΜ嗎啡在頂側(cè)預(yù)處理5分鐘。隨后，將1μΜSP-333加入頂室，記錄Isc的刺激。將在阿片樣物質(zhì)不存在時(shí)記錄的電流視為1〇〇%。對(duì)相對(duì)/sc作圖。值表示為均值±3^.，對(duì)于184細(xì)胞11=3，對(duì)于大鼠空腸11=5-13。[0015]圖6A-B是顯示美沙酮不會(huì)不利影響SP-333刺激的I%的系列圖。T84細(xì)胞(A)和大鼠空腸⑶用5μΜ美沙酮在頂側(cè)預(yù)處理5分鐘。隨后，將1μΜSP-333加入頂室中，記錄Isc的刺激。將在阿片樣物質(zhì)不存在時(shí)記錄的電流視為100%。對(duì)相對(duì)I%作圖。對(duì)于各阿片樣物質(zhì)，值表示為均值土S.E.M.，對(duì)于T84細(xì)胞η=3,對(duì)于大鼠空腸η=5-13。[0016]圖7Α-Β是顯示用SP-333的口服治療提高大鼠的GI運(yùn)送的系列圖。左組圖顯示SP-333劑量方案。圖A是顯示在阿片樣物質(zhì)幼稚動(dòng)物中0.05、0.5和5mg/kg的SP-333分別提高GI運(yùn)送達(dá)5.6%、13%和23%的柱狀圖。圖B是顯示每個(gè)個(gè)別動(dòng)物的數(shù)據(jù)的分布圖。[0017]圖8A-B是顯示在嗎啡治療后用SP-333口服治療改善GI運(yùn)送的系列圖。通過IP注射將規(guī)定劑量的嗎啡給予雌性Sprague-Dawley大鼠，并按實(shí)施例1所述評(píng)價(jià)GI運(yùn)送。嗎啡顯著降低大鼠的GI運(yùn)送(A)。與溶媒對(duì)照相比，在0.25、1.0和2.5mg/kg阿片樣物質(zhì)的單一嗎啡劑量后GI運(yùn)送分別減慢52%、56%和56%。通過IP注射給予2.5mg/kg嗎啡，接著通過經(jīng)口管飼給予規(guī)定量的SP-333,并按實(shí)施例1所述評(píng)價(jià)了GI運(yùn)送，檢查了SP-333減少嗎啡誘導(dǎo)的GI運(yùn)行延遲的能力。嗎啡顯著降低GI運(yùn)送(23%對(duì)比溶媒處理中的53%;p〈0.0001)。（B)與僅給予嗎啡組相比，除0.5mg/kg以外的所有劑量下，觀察到在SP-333治療后GI運(yùn)送的劑量依賴性增加:在0·5、2·5、5和50mg/kg下分別為27%、37%、46%和48%(P<0.002)<^和8中描述了61運(yùn)送均值土SEM。[0018]圖9A-B是顯示在美沙酮治療后用SP-333口服治療改善GI運(yùn)送的系列圖。在給予0.25、2.5和5mg/kg美沙酮的大鼠中觀察到GI運(yùn)送的統(tǒng)計(jì)顯著性降低(A)。在2.5mg/kg美沙酮下觀察到的GI運(yùn)送延遲與用相同劑量的嗎啡觀察到的相當(dāng)（對(duì)于美沙酮和嗎啡，相對(duì)于相應(yīng)的溶媒對(duì)照分別為49%和56%)。給予SP-333在美沙酮處理的大鼠產(chǎn)生腸運(yùn)送的劑量依賴性改善：在0.5、2.5、5和50mg/kg下分別為40%、39%、44%和52%(在所有劑量下P彡0·01)。A和B中描述了GI運(yùn)送均值±SEM。[0019]圖10A-B是顯示在美沙酮處理后用SP-333每日一次治療使GI運(yùn)送正常并恢復(fù)糞便排出的系列圖。通過給予2.5、5和7.5mg/kg美沙酮的日劑量7天在大鼠中引起便秘。記錄在光周期期間在給藥后4小時(shí)內(nèi)的平均糞便排出。在美沙酮的所有劑量下觀察到糞便排出的統(tǒng)計(jì)顯著性降低。為了評(píng)價(jià)SP-333緩解美沙酮誘導(dǎo)的便秘的能力，每日一次給予大鼠5mg/kg美沙酮持續(xù)7天。在美沙酮給藥后10分鐘給予SP-333,如上所述監(jiān)測(cè)糞便排出。給予美沙酮處理的動(dòng)物2.5mg/kg的SP-333顯著緩解美沙酮誘導(dǎo)的便秘(B)。每治療組糞粒的平均數(shù)土SEM描述于A和B。[0020]圖11是顯示每日口服給予SP-333緩解因重復(fù)給予美沙酮引起的GI運(yùn)送延遲的圖示。在每日一次給予大鼠5mg/kg美沙酮持續(xù)7天，接著再給予2.5mg/kg持續(xù)一周后，監(jiān)測(cè)重復(fù)給予美沙酮對(duì)GI運(yùn)送的作用。在測(cè)試當(dāng)日，給予大鼠2.5mg/kg美沙酮，接著通過經(jīng)口管飼給予2.5和5mg/kg的SP-333。按實(shí)施例1所述計(jì)算GI運(yùn)送，并以GI運(yùn)送均值土SEM作圖。美沙酮處理導(dǎo)致GI運(yùn)送顯著降低。然而，在給予SP-333的動(dòng)物中觀察到GI運(yùn)送延遲的統(tǒng)計(jì)顯著性改善。[0021]圖12是表明SP-333介導(dǎo)的阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的GI運(yùn)送延遲的減輕的機(jī)制的示意圖。嗎啡和美沙酮在外周激活表達(dá)的阿片樣物質(zhì)受體以引發(fā)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致因抑制影響神經(jīng)遞質(zhì)釋放的腺苷酸環(huán)化酶所致的cAMP水平下降。因此，GI推進(jìn)、蠕動(dòng)和流體分泌受損，連同自腸腔的流體和電解質(zhì)吸收增加，導(dǎo)致0IBD的出現(xiàn)。通過停留在腸細(xì)胞的GC-C受體上，SP-333促進(jìn)胞內(nèi)cGMP的合成和蓄積，這進(jìn)而通過抑制磷酸二酯酶3而直接或間接結(jié)合并激活PKC-IIAKG-II可使CFTR通道磷酸化并將其激活以促進(jìn)C1-離子的流出，接著Na+和水分被動(dòng)流出進(jìn)入腸腔，從而有利大便。雖然美沙酮可抑制CIC-2,但SP-333介導(dǎo)的C1-從T84細(xì)胞和大鼠空腸組織中的分泌卻是通過PKG-II和CFTR。[0022]發(fā)明詳述應(yīng)了解，出于方便整個(gè)本申請(qǐng)中使用單數(shù)形式例如"a"、"an"和"the"，然而，除非文中或明確陳述另有說明，否則單數(shù)形式欲包括復(fù)數(shù)。另外，應(yīng)了解本文提及的每份雜志文章、專利、專利申請(qǐng)、出版物等通過引用以其整體結(jié)合到本文中并用于所有目的。所有數(shù)值范圍應(yīng)理解為包括該數(shù)值范圍內(nèi)每一個(gè)數(shù)值點(diǎn)，并應(yīng)解釋為分別記載每一個(gè)數(shù)值點(diǎn)。涉及相同組分或性質(zhì)的所有范圍的終點(diǎn)也包括在內(nèi)，并且旨在是可獨(dú)立組合的。[0023]"約"包括具有基本相同的作用或提供基本相同的結(jié)果的所有值作為提及值。因此，術(shù)語"約"所包括的范圍將隨其中使用該術(shù)語的上下文而變化，例如提及值與之有關(guān)的參數(shù)。因此，根據(jù)上下文，"約"可意指例如±15%、±10%、±5%、±4%、±3%、±2%、±1%或土小于1%。重要的是，術(shù)語"約"之后的提及值的所有記載還欲為僅對(duì)該提及值的記載。[0024]本發(fā)明基于鳥苷酸環(huán)化酶-C(GC-C)的激動(dòng)劑的開發(fā)。激動(dòng)劑為尿鳥苷肽、鳥苷肽、淋巴鳥苷肽（lymphoguanylin)和大腸桿菌(i?.co^i)ST肽的類似物。[0025]阿片樣物質(zhì)廣泛用于治療慢性疼痛，但其消耗常與各種副作用有關(guān)。阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙包括呼吸抑制、內(nèi)分泌破壞、食道功能障礙和阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙。阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙影響胃腸道，其中在對(duì)標(biāo)準(zhǔn)輕瀉藥不是非常有效的人中常觀察到的嚴(yán)重便秘。這種副作用是由流體分泌減少所致，影響胃腸(GI)蠕動(dòng)和大便(BM)。表1列出阿片樣物質(zhì)的有害作用及其臨床作用的幾個(gè)非限制性實(shí)例。本發(fā)明部分基于使用GC-C激動(dòng)劑治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的發(fā)現(xiàn)。尿鳥苷肽的類似物激活鳥苷酸環(huán)化酶-C/cGMP(GC-C/cGMP)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以提高腸腔的流體分泌以使GI蠕動(dòng)和BM正常，并可用于治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘(0IC)。該治療使由嗎啡或美沙酮引起的GI運(yùn)送延遲完全恢復(fù)。[0026]表1:阿片樣物質(zhì)對(duì)胃腸道的作用因此，本發(fā)明還提供通過給予有需要的受試者治療有效量的GC-C激動(dòng)劑預(yù)防、治療或減輕阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的癥狀的方法。[0027]本發(fā)明的GC-C激動(dòng)劑包括式I-XX所示氨基酸序列以及下表2-8中概括的那些氨基酸序列。本發(fā)明的GC-C激動(dòng)劑在本文統(tǒng)稱為"GCRA肽"。在一些實(shí)施方案中，GC-C激動(dòng)劑具有SEQIDNO:1(SP-304)、SEQIDNO:9(SP-333)、SP373(SEQIDNO:104)、SP364(SEQIDNO:100)、SP366(SEQIDNO:102)或SEQIDNO:250的序列。[0028]所謂"阿片樣物質(zhì)"意指包括但不限于阿芬太尼、阿尼利定、阿西馬多林、布馬佐辛、丁丙諾啡、布托啡諾、可待因、地佐辛、二乙酰嗎啡(海洛因）、二氫可待因、地芬諾酯、乙基嗎啡、非多托秦、芬太尼、氟曲沙胺、氫可酮、氫嗎啡酮、左洛啡烷、左醋美沙朵、左啡諾、洛哌丁胺、麥啶(哌替啶）、美沙酮、嗎啡、嗎啡-6-葡萄糖醛酸酐、納布啡、烯丙嗎啡、尼可嗎啡、阿片、羥考酮、羥嗎啡酮、阿片全堿、噴他佐辛、丙吡蘭、丙氧芬、瑞芬太尼(remifentanyl)、舒芬太尼、替利定、曲美布汀和曲馬多。[0029]本文所用"阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙"和"阿片樣物質(zhì)使用的副作用"在本文互換使用，包括例如胃腸功能障礙(例腸蠕動(dòng)的抑制、便秘、GI括約肌收縮、惡心、嘔（嘔吐））、膽痙攣、阿片樣物質(zhì)腸功能障礙、絞痛、病理性心境惡劣、瘙癢、尿潴留、呼吸抑制、瞳孔收縮(papillaryconstriction)、心血管作用、胸壁僵硬和咳嗽抑制、應(yīng)激反應(yīng)衰退和與使用麻醉性鎮(zhèn)痛藥有關(guān)的免疫抑制或其組合。因此，從經(jīng)歷使用阿片樣物質(zhì)的受試者的生命質(zhì)量的觀點(diǎn)來看，本發(fā)明的方法可能是有益的，以及有益于減輕產(chǎn)生于慢性便秘的例如痔、食欲抑制、粘膜破壞、膿毒癥、結(jié)腸癌風(fēng)險(xiǎn)和心肌梗死等并發(fā)癥。[0030]在一些實(shí)施方案中，所提供的GC-C激動(dòng)劑可用于給予經(jīng)歷急性阿片樣物質(zhì)使用的受試者。在一些實(shí)施方案中，所提供的制劑可用于給予患有術(shù)后胃腸功能障礙、腸功能障礙或呼吸抑制的患者。[0031]在某些實(shí)施方案中，所提供的制劑還可用于給予經(jīng)歷慢性阿片樣物質(zhì)使用的受試者(例如接受阿片樣物質(zhì)療法的臨終疾病患者，例如AIDS患者、癌癥患者、心血管患者;接受慢性阿片樣物質(zhì)療法用于疼痛管理的受試者;經(jīng)歷阿片樣物質(zhì)療法用于維持阿片樣物質(zhì)戒斷的受試者）。在一些實(shí)施方案中，受試者是使用阿片樣物質(zhì)療法用于慢性疼痛管理的受試者。在某些實(shí)施方案中，疼痛是非惡性疼痛（例如背痛、神經(jīng)性疼痛、與纖維肌痛有關(guān)的疼痛、骨關(guān)節(jié)炎）。在一些實(shí)施方案中，受試者是臨終疾病患者。在其它實(shí)施方案中，受試者是經(jīng)歷阿片樣物質(zhì)戒斷維持療法的人。[0032]在某些實(shí)施方案中，將本文提供的制劑給予經(jīng)選擇用美沙酮或甲基納曲酮治療的受試者。在具體的實(shí)施方案中，受試者根據(jù)有發(fā)生上述一種或多種病況的風(fēng)險(xiǎn)增加的受試者來選擇。在另一個(gè)實(shí)施方案中，受試者根據(jù)用于疼痛管理的阿片樣物質(zhì)療法的使用或根據(jù)具有上述一種或多種病況來選擇。在某些實(shí)施方案中，受試者患便秘或有因阿片樣物質(zhì)療法引起的便秘史。在一個(gè)實(shí)施方案中，患便秘的受試者在前三天沒有大便。在一個(gè)實(shí)施方案中，患便秘的受試者在前一周內(nèi)有不到3次大便。在某些實(shí)施方案中，患便秘的受試者在最近的連續(xù)4周內(nèi)平均每周有不到3次無拯救(rescue-free)大便和有以下的一種或多種：(a)大便硬結(jié)或呈塊狀，（b)大便時(shí)過度用力，和/或(c)大便后感到未完全排空。受試者可能間斷性或習(xí)慣性地使用阿片樣物質(zhì)。[0033]在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者曾按需服食阿片樣物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者曾服食阿片樣物質(zhì)少于一周。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少一周的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少兩周的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少三周的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少四周的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少3個(gè)月的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少6個(gè)月的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少12個(gè)月的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在超過一年的進(jìn)程內(nèi)曾服食阿片樣物質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少兩周的進(jìn)程內(nèi)至少每隔一天服食阿片樣物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少14天內(nèi)接受至少7劑>25mg的口服嗎啡等同物。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者在至少14天內(nèi)接受>50mg口服嗎啡等同物的日劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)選擇的受試者因阿片樣物質(zhì)療法所致患有便秘并接受>50mg口服嗎啡等同物的日劑量至少14天。在某些實(shí)施方案中，受試者接受>50mg口服嗎啡等同物的日劑量至少14天;在至少連續(xù)4周內(nèi)平均每周有與以下一種或多種有關(guān)的少于3次無拯救大便：（a)對(duì)于至少25%的無拯救大便，Bristol大便形狀標(biāo)度(BristolStoolFormScale)1或2型，（b)在至少25%的無拯救大便期間大便用力過度;和/或(c)在至少25%的無拯救大便后感到未完全排空。無拯救大便是指與在大便前24小時(shí)內(nèi)未使用輕瀉藥有關(guān)的大便和/或(c)大便后感到未完全排空。[0034]在某些實(shí)施方案中，所提供的制劑可用于預(yù)防、抑制、減輕、延緩、減少或治療胃腸功能障礙的方法，包括但不限于腸易激綜合征;阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙;結(jié)腸炎;術(shù)后或產(chǎn)后腸梗阻；惡心和/或嘔吐；胃蠕動(dòng)減慢和排空；胃和小和/或大腸推進(jìn)的抑制；非推進(jìn)性節(jié)段性收縮幅度增加;Oddi括約肌收縮;肛門括約肌伸縮性增加;反射松弛受損伴直腸膨脹；胃、膽汁、胰腺或腸分泌減少;來自腸內(nèi)容物的水分吸收增加；胃-食道反流；胃輕癱；絞痛；胃氣脹;腹痛或上腹痛和不適;便秘;特發(fā)性便秘;在腹部手術(shù)(例如結(jié)腸切除術(shù)(例如右半結(jié)腸切除術(shù);左半結(jié)腸切除術(shù);橫半結(jié)腸切除術(shù);結(jié)腸切除術(shù)拆卸（takedown);低前位切除術(shù)）；子宮切除術(shù))之后的術(shù)后胃腸功能障礙和口服給予藥物或營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收延遲。[0035]GCRA肽本發(fā)明的GCRA肽是尿鳥苷肽、鳥苷肽、淋巴鳥苷肽和ST肽的類似物。術(shù)語"肽"未指明具體長(zhǎng)度。在一些實(shí)施方案中，GCRA肽為長(zhǎng)度小于25個(gè)氨基酸，例如長(zhǎng)度小于或等于20、15、14、13、12、11、10或5個(gè)氨基酸。[0036]GCRA肽可以是L-氨基酸、D-氨基酸或兩者的組合的聚合物。例如，在不同的實(shí)施方案中，肽為D逆-倒位肽。術(shù)語"逆-倒位異構(gòu)體"是指其中序列的方向逆轉(zhuǎn)且各氨基酸殘基的手性倒轉(zhuǎn)的線性肽的異構(gòu)體。參見例如Jameson等，TVaiure,368，744-746(1994);Brady等，Nature，368,692-693(1994)。綜合D-對(duì)映異構(gòu)體和逆向合成的凈結(jié)果是各酰胺鍵中羰基和氨基的位置交換，同時(shí)保持各個(gè)α碳上側(cè)鏈基團(tuán)的位置。除非另有明確說明，否則假定可通過合成相應(yīng)的天然L-氨基酸序列的逆轉(zhuǎn)序列，將本發(fā)明的任何指定的L-氨基酸序列制備成D逆-倒位肽。例如GCRA肽包括式Ι-ΧΧ界定的序列和表2-8所列序列。[0037]所謂誘導(dǎo)cGMP產(chǎn)生意指GCRA肽誘導(dǎo)胞內(nèi)cGMP的產(chǎn)生。胞內(nèi)cGMP通過本領(lǐng)域已知方法測(cè)量。例如，與天然存在的GC-C激動(dòng)劑相比，本發(fā)明的GCRA肽刺激5%、10%、20%、30%、40%、50%、75%、90%或更高的胞內(nèi)cGMP。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，GCRA肽刺激細(xì)胞凋亡，例如，程序性細(xì)胞死亡或激活囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)。[0038]本文所用PEG3、3PEG，旨在表示聚乙二醇例如包括氨基乙基氧基-乙基氧基-乙酸(AeeA)〇[0039]本文所用術(shù)語"酰胺"旨在表示末端羧酸被酰胺基置換，即末端C00H被C0NH2置換。[0040]本文所用術(shù)語"pyGlu"是指焦谷氨酸。[0041]如本文所用，（例如在式I-XX中）Xaa為任何天然、非天然的氨基酸或氨基酸類似物;Maa為半胱氨酸(Cys)、青霉胺(Pen)高半胱氨酸或3-巰基脯氨酸。Xaanl旨在表示長(zhǎng)度為1、2或3個(gè)殘基的任何天然、非天然的氨基酸或氨基酸類似物的氨基酸序列;乂&&"2旨在表示長(zhǎng)度為零或一個(gè)殘基的任何天然、非天然氨基酸或氨基酸類似物的氨基酸序列;Xaan3旨在表示長(zhǎng)度為〇、1、2、3、4、5或6個(gè)殘基的任何天然、非天然氨基酸或氨基酸類似物的氨基酸序列。此外，Xaa所示任何氨基酸可以是L-氨基酸、D-氨基酸、甲基化氨基酸、氟化氨基酸或其任何組合。優(yōu)選N端、C端或兩端的氨基酸為D-氨基酸。任選式I-XX所示任何GCRA肽可在N端、C端或兩端含有一個(gè)或多個(gè)聚乙二醇?xì)埢?。示例性聚乙二醇包括氨基乙基氧?乙基氧基-乙酸及其聚合物。[0042]可用于本發(fā)明的方法和制劑的GCC激動(dòng)劑肽的具體實(shí)例包括選自表2-8的肽。[0043]在一些實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑肽包括具有式I的氨基酸序列的肽，其中式I的至少一個(gè)氨基酸是D-氨基酸或甲基化氨基酸和/或16位的氨基酸為絲氨酸。優(yōu)選，式I的16位的氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。例如，式I的16位的氨基酸為d-亮氨酸或d-絲氨酸。任選式I的1-3位的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)為D-氨基酸或甲基化氨基酸或D-氨基酸或甲基化氨基酸的組合。例如，式I的Asn^Asp2或Glu3(或其組合)為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式I的Xaa6位的氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或酪氨酸。[0044]在備選的實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑肽包括具有式II的氨基酸序列的肽，其中式II的至少一個(gè)氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式II的Xaan2所示氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。在一些實(shí)施方案中，式Π的Xaan2所示氨基酸為亮氨酸、d-亮氨酸、絲氨酸或d-絲氨酸。優(yōu)選式Π的Xaani所示的一個(gè)或多個(gè)氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式II的Xaa6位的氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或酪氨酸。[0045]在一些實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑肽包括具有式III的氨基酸序列的肽，其中式III的至少一個(gè)氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸和/或Maa不是半胱氨酸。優(yōu)選式III的Xaan2所示氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。在一些實(shí)施方案中，式III的Xaan2所示氨基酸為亮氨酸、d-亮氨酸、絲氨酸或d-絲氨酸。優(yōu)選式III的Xaani所示的一個(gè)或多個(gè)氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式III的Xaa6位的氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或酪氨酸。[0046]在其它實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑肽包括具有式IV的氨基酸序列的肽，其中式IV的至少一個(gè)氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸，和/或Maa不是半胱氨酸。優(yōu)選式IV的Xaan2為D-氨基酸或甲基化氨基酸。在一些實(shí)施方案中，式IV的Xaan2所示氨基酸為亮氨酸、d-亮氨酸、絲氨酸或d_絲氨酸。優(yōu)選式IV的Xaani所示氨基酸的一個(gè)或多個(gè)為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式IV的Xaa6所示氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或酪氨酸。[0047]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑肽包括具有式V的氨基酸序列的肽，其中式V的至少一個(gè)氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式V的16位的氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。例如，式V的16(即Xaa16)位的氨基酸為d-亮氨酸或d-絲氨酸。任選式V的1-3位的氨基酸的一個(gè)或多個(gè)為D-氨基酸或甲基化氨基酸或D-氨基酸或甲基化氨基酸的組合。例如，式V的Asn1、Asp2或Glu3(或其組合)為D-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式V的Xaa6所示氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或酪氨酸。[0048]在其它實(shí)施方案中，GCRA肽包括具有式￥1，11-&、￥11-13、￥111或^的氨基酸序列的肽。優(yōu)選式￥1，11-&、￥11-13、￥111或^的6位的氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或酪氨酸。在一些方面，式￥1，11-&、￥11-13、￥111或1乂的16位的氨基酸為亮氨酸或絲氨酸。優(yōu)選式￥1、￥11-&、VII-b、VIII或IX的16位的氨基酸為D-氨基酸或甲基化氨基酸。[0049]在其它實(shí)施方案中，GCRA肽包括具有式乂、乂14114111、乂1￥、乂￥、乂￥1或乂￥11的氨基酸序列的肽。任選式乂414114111、乂1￥、乂￥4￥1或乂￥11的一個(gè)或多個(gè)氨基酸為0-氨基酸或甲基化氨基酸。優(yōu)選式乂41411411141￥4￥4￥1或乂￥11的肽的羧基端氨基酸為0-氨基酸或甲基化氨基酸。例如式乂41411411141￥4￥4￥1或乂￥11的肽的羧基端氨基酸為0-酪氨酸。[0050]優(yōu)選式XIV的Xaa6所示氨基酸為酪氨酸、苯丙氨酸或絲氨酸。最優(yōu)選式XIV的Xaa6所示氨基酸為苯丙氨酸或絲氨酸。優(yōu)選式XV、XVI或XVII的Xaa4所示氨基酸為酪氨酸、苯丙氨酸或絲氨酸。最優(yōu)選式XV、XVI或XVII的Xaa4位的氨基酸為苯丙氨酸或絲氨酸。[0051]在一些實(shí)施方案中，GCRA肽包括含有式XVIII的氨基酸序列的肽。優(yōu)選式XVIII的1位的氨基酸為谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺或賴氨酸。優(yōu)選式XVIII的2和3位的氨基酸為谷氨酸或天冬氨酸。優(yōu)選5位的氨基酸為谷氨酸。優(yōu)選式XVIII的6位的氨基酸為異亮氨酸、纈氨酸、絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸。優(yōu)選式XVIII的8位的氨基酸為纈氨酸或異亮氨酸。優(yōu)選式XVIII的9位的氨基酸為天冬酰胺。優(yōu)選式XVIII的10位的氨基酸為纈氨酸或甲硫氨酸。優(yōu)選式XVIII的11位的氨基酸為丙氨酸。優(yōu)選式XVIII的13位的氨基酸為蘇氨酸。優(yōu)選式XVIII的14位的氨基酸為甘氨酸。優(yōu)選式XVIII的16位的氨基酸為亮氨酸、絲氨酸或蘇氨酸。[0052]在備選的實(shí)施方案中，GCRA肽包括含有式XIX的氨基酸序列的肽。優(yōu)選式XIX的1位的氨基酸為絲氨酸或天冬酰胺。優(yōu)選式XIX的2位的氨基酸為組氨酸或天冬氨酸。優(yōu)選式XIX的3位的氨基酸為蘇氨酸或谷氨酸。優(yōu)選式XIX的5位的氨基酸為谷氨酸。優(yōu)選式XIX的6位的氨基酸為異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸或酪氨酸。優(yōu)選式XIX的8、10、11或13位的氨基酸為丙氨酸。優(yōu)選式XIX的9位的氨基酸為天冬酰胺或苯丙氨酸。優(yōu)選式XIX的14位的氨基酸為甘氨酸。[0053]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，GCRA肽包括含有式XX的氨基酸序列的肽。優(yōu)選式XX的1位的氨基酸為谷氨酰胺。優(yōu)選式XX的2或3位的氨基酸為谷氨酸或天冬氨酸。優(yōu)選式XX的5位的氨基酸為谷氨酸。優(yōu)選式XX的6位的氨基酸為蘇氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、異亮氨酸或亮氨酸。優(yōu)選式XX的8位的氨基酸為異亮氨酸或纈氨酸。優(yōu)選式XX的9位的氨基酸為天冬酰胺。優(yōu)選式XX的10位的氨基酸為甲硫氨酸或纈氨酸。優(yōu)選式XX的11位的氨基酸為丙氨酸。優(yōu)選式XX的13位的氨基酸為蘇氨酸。優(yōu)選式XX的1位的氨基酸為甘氨酸。優(yōu)選式XX的15位的氨基酸為酪氨酸。任選式XX的15位的氨基酸的長(zhǎng)度為2個(gè)氨基酸，且為半胱氨酸（Cys)、青霉胺(Pen)高半胱氨酸或3-巰基脯氨酸和絲氨酸、亮氨酸或蘇氨酸。[0054]在某些實(shí)施方案中，GCRA肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸可被非天然存在的氨基酸或天然或非天然存在的氨基酸類似物置換。在標(biāo)準(zhǔn)的20種(Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、把8、116、1^11、1^8、]\^1：、？116、？1'0、361'、1'111'、1'印、171'和\^1)以外還有許多氨基酸。一些是天然存在的，其它則不是。（參見例如Hunt,TheNon-ProteinAminoAcids:InChemistryandBiochemistryoftheAminoAcids,Barrett,ChapmanandHall,1985)。例如，芳族氨基酸可被3，4-二羥基-L-苯丙氨酸、3-碘-L-酪氨酸、三碘甲腺原氨酸、L-甲狀腺素、苯基甘氨酸(Phg)或正酪氨酸(nor-tyrosine，norTyr)置換。Phg和norTyr和包括Phe和Tyr在內(nèi)的其它氨基酸可被例如鹵素、-CH3、-OH、-CH2NH3、-C(0)Η、-CH2CH3、-CN、-CH2CH2CH3、-SH或另一基團(tuán)取代。任何氨基酸可被該氨基酸的D型取代。[0055]至于非天然存在的氨基酸或天然和非天然存在的氨基酸類似物，本文所述多肽和激動(dòng)劑中的多個(gè)取代可能是單獨(dú)的或組合的。[0056]例如，谷氨酰胺殘基可被γ-羥基-Glu或γ-羧基-Glu取代。酪氨酸殘基可被α取代的氨基酸例如L-α-甲基苯丙氨酸或例如以下類似物取代:3-氨基-Tyr、Tyr(CH3)、Tyr(P03(CH3)2)、Tyr(S03H)、β-環(huán)己基-Ala、0-(1-環(huán)戊烯基)-Ala、0-環(huán)戊基-Ala、0-環(huán)丙基-Ala、β-喹啉基-Ala、0-(2-噻唑基）-Ala、0-(三唑-1-基）-Ala、0-(2-吡啶基）-Ala、0-(3-吡啶基)-Ala、氨基-Phe、氟-Phe、環(huán)己基-Gly、tBu-Gly、0_(3-苯并噻吩基)-Ala、0_(2-噻吩基)_Ala、5-甲基-Trp和A-甲基-Trp。脯氨酸殘基可被高脯氨酸(L-哌啶酸）、羥基-Pro、3,4-脫氫-Pro、4_氟-Pro或α-甲基-Pro或具有結(jié)構(gòu):η=0、1、2、3的N(a)-C(a)環(huán)化氨基酸類似物取代。丙氨酸殘基可被取代的或N-甲基化氨基酸(例如a-氨基異丁酸(aib))、L/D-a_乙基丙氨酸(L/D-異纈氨酸）、L/D-甲基纈氨酸或L/D-α-甲基亮氨酸或非天然氨基酸(例如β-氟-Ala)取代。丙氨酸還可被取代:η=0、1、2、3。甘氨酸殘基可被a-氨基異丁酸(aib)或L/D-a-乙基丙氨酸(L/D-異纈氨酸)取代。[0057]非天然氨基酸的更多實(shí)例包括：丙氨酸的非天然類似物（例如L-1-Nal或L-2-Nal);酪氨酸的非天然類似物;谷氨酰胺的非天然類似物;苯丙氨酸的非天然類似物;絲氨酸的非天然類似物;蘇氨酸的非天然類似物;烷基、芳基、?；?、疊氮基、氰基、鹵素、肼、酰肼、羥基、烯基、炔基、醚、硫醇基、磺?；?、硒基、酯、硫代酸、硼酸酯基（borate)、硼酸酯基(boronate)、磷酸基、膦酰基、膦、雜環(huán)基、烯酮、亞胺、醛、羥胺、酮或氨基取代的氨基酸或其任何組合;含光可活化交聯(lián)劑的氨基酸；自旋標(biāo)記的氨基酸；熒光氨基酸;含新官能團(tuán)的氨基酸;與另一分子共價(jià)或非共價(jià)相互作用的氨基酸;金屬結(jié)合氨基酸;在不被天然酰胺化的位點(diǎn)上被酰胺化的氨基酸，含金屬的氨基酸;放射性氨基酸;光束縛的（photocaged)和/或可光異構(gòu)化的氨基酸;含有生物素或生物素-類似物的氨基酸;糖基化或糖修飾的氨基酸；含酮的氨基酸;包含聚乙二醇或聚醚的氨基酸;重原子取代的氨基酸(例如含氘、氚、13c、15n或18〇的氨基酸）；化學(xué)可切割的或光可切割的氨基酸;具有長(zhǎng)側(cè)鏈的氨基酸;含毒素基團(tuán)的氨基酸;糖取代的氨基酸，例如糖取代的絲氨酸等;含有碳連接的糖的氨基酸;有氧化還原活性的氨基酸;含有α_羥基的酸;含有氨基硫代酸的氨基酸;α，α二取代的氨基酸;β-氨基酸;脯氨酸以外的環(huán)狀氨基酸;〇-甲基-L-酪氨酸;L-3_(2-萘基)丙氨酸;3-甲基-苯丙氨酸；P-乙?；?L-苯丙氨酸;0-4-烯丙基-L-酪氨酸;4-丙基-L-酪氨酸;三-0-乙?；?GlcNAcβ-絲氨酸；左旋多巴；氟化苯丙氨酸;異丙基-L-苯丙氨酸;對(duì)疊氮基-L-苯丙氨酸;對(duì)酰基-L-苯丙氨酸;對(duì)苯甲?；?L-苯丙氨酸;L-磷酸絲氨酸;膦酸絲氨酸;膦酸酪氨酸;對(duì)碘-苯丙氨酸;4-氟苯基甘氨酸;對(duì)溴苯丙氨酸;對(duì)氨基-L-苯丙氨酸;異丙基-L-苯丙氨酸;L-3-(2-萘基)丙氨酸;D-3-(2-萘基)丙氨酸(dNal);含有氨基-、異丙基-或0-烯丙基的苯丙氨酸類似物；多巴，0-甲基-L-酪氨酸;糖基化氨基酸;對(duì)(炔丙基氧基)苯丙氨酸;二甲基-賴氨酸;羥基-脯氨酸；巰基丙酸；甲基-賴氨酸；3-硝基-酪氨酸；正亮氨酸；焦谷氨酸；Z(芐氧羰基(Carbobenzoxyl));ε-乙?；?賴氨酸;β-丙氨酸;β-天冬氨酸;β-環(huán)己基丙氨酸;氨基苯甲酰基衍生物;氨基丁酸(Abu);瓜氨酸;氨基己酸(Ahx);氨基異丁酸(AIB);環(huán)己基丙氨酸;d-環(huán)己基丙氨酸;環(huán)己基甘氨酸;羥基脯氨酸;硝基-精氨酸;硝基-苯丙氨酸;硝基-酪氨酸;正纈氨酸;八氫吲哚羧酸酯；鳥氨酸(〇rn);青霉胺(PEN);四氫異喹啉;二氨基丁酸;二氨基庚二酸;焦谷氨酸;高半胱氨酸;高絲氨酸;Ν-ε-二硝基苯基-賴氨酸;Ν-ε-甲基-賴氨酸;Ν-ε-二甲基-賴氨酸;Ν，Ν，Ν-ε-三甲基-賴氨酸；乙酰氨基甲基保護(hù)的氨基酸和聚乙二醇化氨基酸。非天然氨基酸和氨基酸類似物的更多實(shí)例可參見U.S.20030108885、U.S.20030082575、US20060019347(第410-418段）及其中引用的參考文獻(xiàn)。本發(fā)明的多肽可包括更多的修飾，包括描述于US20060019347,第589段的修飾。[0058]本文所用"Nal"是指L-1-萘基丙氨酸（L-1-Nal)和L-2-萘基丙氨酸（L-2-Nal)兩者。[0059]在一些實(shí)施方案中，氨基酸可被天然存在的非必需氨基酸(例如?；撬?置換。[0060]或者，GCRA肽是環(huán)肽。GCRA環(huán)肽通過本領(lǐng)域已知方法制備。例如，常常通過在肽N端和C端之間、在側(cè)鏈和N端或C端之間[例如用pH8.5下的K3Fe(CN)6](Samson等，i?/3c/ocri/3〇2，137:5182-5185(1996))或在兩個(gè)氨基酸側(cè)鏈(例如半胱氨酸)之間形成酰胺鍵來實(shí)現(xiàn)大環(huán)化。參見例如DeGrado，dc/rProiei/?CAe?，劃:51-124(1988)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的GCRA肽是二環(huán)肽。在不同的方面，GCRA肽是[4,12;7，15]二環(huán)。[0061]在一些GCRA肽中，正常形成二硫鍵的一對(duì)或兩對(duì)Cys殘基的一個(gè)或兩個(gè)成員可被高半胱氨酸、青霉胺、3-疏基脯氨酸(Kolodziej等，1996IntJPeptProteinRes48:274);β，β二甲基半胱氨酸(Hunt等，1993IntJPeptProteinRes42:249)或二氨基丙酸(Smith等，1978JMedChem21:117)置換，在正常的二硫鍵位置上形成備選的內(nèi)部交聯(lián)鍵。[0062]另外，一個(gè)或多個(gè)二硫鍵可被例如以下的備選的共價(jià)交聯(lián)鍵置換:酰胺鍵(-CH2CH(0)NHCH2-或-CH2NHCH(0)CH2-)、酯鍵、硫酯鍵、內(nèi)酰胺橋、氨甲?；I、脲鍵、硫脲鍵、磷酸酯鍵、烷基鍵（-CH2CH2CH2CH2-)、烯基鍵（-CH2CH=CHCH2_)、醚鍵（-CH2CH20CH2-或-CH20CH2CH2-)、硫醚鍵（-CH2CH2SCH2-或-CH2SCH2CH2-)、胺鍵（-CH2CH2NHCH2-或-CH2NHCH2CH2-)或硫代酰胺鍵(-CH2CH(S)HNHCH2-或-CH2NHCH(S)CH2-)。例如，Ledu等(ProcNat'lAcad.Sci.100:11263-78，2003)描述了制備內(nèi)酰胺和酰胺交聯(lián)鍵的方法。示例性的包括內(nèi)酰胺橋的GCRA肽包括例如SP-370。[0063]GCRA肽可具有被備選鍵置換的一個(gè)或多個(gè)常規(guī)多肽鍵。這類置換可提高多肽的穩(wěn)定性。例如，殘基氨基端與芳族殘基(例如171'、?116、1'印)間多肽鍵被備選鍵的置換可降低被羧基肽酶切割，并可延長(zhǎng)在消化道中的半壽期?？芍脫Q多肽鍵的鍵包括:逆-倒位鍵(C(0)_NH而非NH-C(0);還原的酰胺鍵(NH-CH2);硫代亞甲基鍵(S-CH2或CH2-S);氧代亞甲基鍵(0-CH2或CH2-0);亞乙基鍵(CH2-CH2);硫代酰胺鍵(C(S)-NH);交叉結(jié)構(gòu)烯烴鍵(CH=CH);氟取代的交叉結(jié)構(gòu)烯烴鍵(CF=CH);酮亞甲基鍵(C(0)-CHR或CHR-C(0)，其中R為Η或CH3;和氟-酮亞甲基鍵(C(0)-CFR或CFR-C(0)，其中R為Η或F或CH3。[0064]GCRA肽可采用標(biāo)準(zhǔn)修飾法修飾。修飾可發(fā)生在氨基(Ν-)、羧基(C-)端、內(nèi)部或任何前述的組合。在本文描述的一個(gè)方面，在多肽上可能有一個(gè)類型以上的修飾。修飾包括但不限于：乙?；Ⅴ０坊?、生物素化、肉桂?；?、法尼基化、甲?；?、肉豆蔻?；?、棕櫚?；?、磷酸化（Ser、Tyr或Thr)、硬脂?；?、琥珀酰化、磺?；铜h(huán)化(通過二硫橋或酰胺環(huán)化）和通過Cys3或Cys5的修飾。本文所述GCRA肽還可被2,4-二硝基苯基(DNP)、DNP-賴氨酸修飾、被7-氨基-4-甲基-香豆素(AMC)、熒光素、NBD(7-硝基苯并-2-氧雜-l，3-二唑）、對(duì)硝基-酰苯胺、羅丹明B、EDANS(5-((2-氨基乙基)氨基)萘-1-磺酸）、(1&13(^1、(1&1^71、丹酰基、德克薩斯紅、FM0C和Tamra(四甲基羅丹明）修飾。本文所述GCRA肽還可與例如以下綴合:聚乙二醇(PEG);烷基(例如Q-C20直鏈或支鏈烷基）；脂肪酸基團(tuán)；PEG、烷基和脂肪酸基團(tuán)的組合(參見美國(guó)專利6,309,633;Soltero等，2001InnovationsinPharmaceuticalTechnology106-110);BSAandKLH(KeyholeLimpetHemocyanin)?？捎糜谛揎棻景l(fā)明多妝的PEG和其它聚合物的添加描述于US2006019347第IX節(jié)。[0065]一方面，本發(fā)明按例如W020140151206(其通過引用以其整體結(jié)合到本文中用于所有目的）的教導(dǎo)，提供Aad-GCRA肽。W020140151206的表1公開了GCRA肽的不同α-氨基己二酸衍生物的實(shí)例。Aad-GCRA肽是類似物尿鳥苷肽、鳥苷肽、淋巴鳥苷肽和ST肽。具體地講，這些類似物含有α_氨基己二酸（Ad)，優(yōu)選在自各肽N端起的第3位或緊接第1個(gè)半胱氨酸("Cys)殘基N端側(cè)的位置。例如Aad-GCRA肽包括可包含α-氨基己二酸的式I、II、III、IV、V、VI、VII、VII、VIII、IX、XVIII或XXI限定的序列。[0066]在一些實(shí)施方案中，Aad-GCRA肽為六8111-厶8口2-厶&(13-〇784-61115-1^116-〇787-￥&18-Asn9-Val10-Alan-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Leu16(SEQIDNO:251；SP-304-Aad)idAsn1-Asp2-Aad3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-dLeu16(SEQIDNO:253；SP-333-Aad)；Pyglu1-Asp2-Aad3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Alau-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-dLeu-AMIDE16(SEQIDNO:254；SP-373-Aad)idAsn^Asp2-Aad3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Alan-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-dSer16(SEQIDNO:255；SP-364-Aad)idAsn^Asp^Aa^-Cys^Glu^Leu^Cys^Va^-Asn^Val^-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15_dTyr16(SEQIDNO:256;SP-366-Aad)SXaani-Cys4-Xaa5_Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaan-Cys12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaan216(SEQIDNO:257)〇[0067]本發(fā)明還包括生物學(xué)上或功能上等同于本文所述肽的肽。術(shù)語"生物學(xué)上等同的"或"功能上等同的"旨在意指本發(fā)明的組合物能夠證實(shí)cGMP產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用的一些或全部。[0068]GCRA肽還可包括GCRA肽的衍生物，其旨在包括其中某些氨基酸已缺失或置換的GCRA肽的雜交形式和修飾形式和例如其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸變成修飾的氨基酸或不常見氨基酸的修飾和例如糖基化的修飾，只要修飾形式保留GCRA肽的生物活性。所謂保留生物活性，意味著GCRA肽誘導(dǎo)cGMP和/或細(xì)胞凋亡，雖然不必在與已鑒定的天然存在的GCRA肽的效能水平相同的效能水平下。[0069]優(yōu)選的變體是具有在一個(gè)或多個(gè)預(yù)測(cè)的非必需氨基酸殘基上進(jìn)行的保守氨基酸取代的變體。"保守氨基酸取代"是其中氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基置換的取代。本領(lǐng)域已定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸）、酸性側(cè)鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸）、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸）、非極性側(cè)鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸）、β_支鏈側(cè)鏈(例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸）和芳族側(cè)鏈(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸）的氨基酸。因此，GCRA多肽中的預(yù)測(cè)的非必需氨基酸殘基被來自同一側(cè)鏈家族的另一個(gè)氨基酸殘基置換?；蛘?，在另一個(gè)實(shí)施方案中，可通過例如飽和誘變，沿GCRA編碼序列的全部或部分隨機(jī)引入突變，可篩選所得突變體以鑒定保留活性的突變體。[0070]術(shù)語"基本由……組成"包括與引述的序列(表2-8的任一個(gè))相同的肽和就結(jié)構(gòu)或功能而言無明顯不同的其它序列。對(duì)于本申請(qǐng)的目的，如果它的結(jié)構(gòu)與表2-8的任一個(gè)的肽相比相差大于3個(gè)氨基酸或如果它的細(xì)胞cGMP產(chǎn)生的活化降低或提高超過50%，則肽明顯不同。優(yōu)選基本相似的肽應(yīng)相差不超過2個(gè)氨基酸之，且對(duì)于激活cGMP產(chǎn)生不相差超過約25%。[0071]基本上同源的含義內(nèi)還包括通過與GCRA肽的抗體交叉反應(yīng)性可分離的任何GCRA肽。[0072]GCRA肽的制備GCRA肽可采用現(xiàn)代克隆技術(shù)容易地制備，或可通過固態(tài)方法或位點(diǎn)定向誘變合成。GCRA肽可包括多肽的顯性陰性形式。[0073]化學(xué)合成通?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)溶液相或固相肽合成技術(shù)進(jìn)行，其中肽鍵通過一個(gè)氨基酸的氨基與另一個(gè)氨基酸的羧基直接縮合除去一個(gè)水分子而產(chǎn)生。通過如上簡(jiǎn)述直接縮合所致的肽鍵合成，需要抑制第一氨基酸的氨基和第二氨基酸的羧基的反應(yīng)性質(zhì)。掩蔽取代基必須允許其易于除去，而不引起不穩(wěn)定肽分子分解。[0074]在溶液相合成中，可使用各種偶聯(lián)方法和保護(hù)基（參見，Gross和Meienhofer，編輯，"ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology,"第1-4卷(AcademicPress,1979);Bodansky和Bodansky,"ThePracticeofPeptideSynthesis，〃第2版(SpringerVerlag,1994))。另外，中間體純化和線性按比例增加是可能的。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，溶液合成要求考慮主鏈和側(cè)鏈保護(hù)基和活化方法。另外，需要仔細(xì)的區(qū)段選擇以使區(qū)段縮合期間的消旋化降到最低。溶解度考量也是一個(gè)因素。固相肽合成在有機(jī)合成期間使用不溶聚合物作為支持體。聚合物支持的肽鏈允許使用簡(jiǎn)單的洗滌和過濾步驟，而不是中間步驟的費(fèi)力純化。一般可按照Merrifield等，J.Am.Chem.Soc·，1963，85:2149的方法進(jìn)行固相肽合成，該方法包括使用被保護(hù)的氨基酸，在樹脂支持體上組裝線性肽鏈。固相肽合成通常應(yīng)用本領(lǐng)域眾所周知的Boc或Fmoc策略。[0075]本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到，在固相合成中，脫保護(hù)和偶聯(lián)反應(yīng)必須進(jìn)行完成，且單鏈封端基團(tuán)在整個(gè)合成中必須是穩(wěn)定的。另外，當(dāng)肽以小規(guī)模制備時(shí)，固相合成一般是最合適的。[0076]可在從樹脂上切割之前，通過使最終的肽與乙酸酐反應(yīng)來完成N端的乙?；?。采用Boc技術(shù)，使用合適的樹脂例如甲基二苯甲基胺樹脂，實(shí)現(xiàn)C-酰胺化。[0077]或者，GCRA肽通過現(xiàn)代克隆技術(shù)產(chǎn)生。例如，在細(xì)菌(包括而不限于大腸桿菌）中或在用于多肽或蛋白質(zhì)產(chǎn)生的其它現(xiàn)有系統(tǒng)(例如枯草芽孢桿菌(J?a使用果蠅Sf9細(xì)胞的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、酵母或絲狀真菌表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)）中產(chǎn)生GCRA肽，或它們可化學(xué)合成。如果GCRA肽或變體肽在細(xì)菌（例如大腸桿菌）中產(chǎn)生，編碼該多肽的核酸分子也可編碼允許成熟多肽從細(xì)胞中分泌的前導(dǎo)序列。因此，編碼該多肽的序列可包括例如天然存在的細(xì)菌ST多肽的前序列和序列原?？蓮呐囵B(yǎng)基中純化分泌的成熟多肽。[0078]可將編碼本文所述GCRA肽的序列插入能夠遞送核酸分子至細(xì)菌細(xì)胞中并將核酸分子保持在細(xì)菌細(xì)胞中的載體中?？蓪NA分子插入自主復(fù)制載體中（合適的載體包括例如PGEM3Z和pcDNA3及其衍生物）。載體核酸可以是細(xì)菌或噬菌體DNA，例如噬菌體λ或M13及其衍生物。含有本文所述核酸的載體的構(gòu)建之后可接著宿主細(xì)胞(例如細(xì)菌）的轉(zhuǎn)化。合適的細(xì)菌宿主包括但不限于大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、假單胞菌屬(Pseudomonas)、沙門氏菌屬(Salmonella)。除編碼核酸分子以外，遺傳構(gòu)建體還包括允許表達(dá)的元件，例如啟動(dòng)子和調(diào)節(jié)序列。表達(dá)載體可含有控制轉(zhuǎn)錄起始的轉(zhuǎn)錄控制序列，例如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、操縱基因和阻抑蛋白序列。[0079]各種轉(zhuǎn)錄控制序列為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知。表達(dá)載體還可包括翻譯調(diào)節(jié)序列（例如非翻譯5'序列、非翻譯3'序列或內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)）。載體能夠自主復(fù)制或它可整合至宿主DNA中以確保多肽產(chǎn)生期間的穩(wěn)定性。[0080]包括本文所述GCRA肽的蛋白質(zhì)編碼序列還可與編碼多肽親和標(biāo)簽的核酸融合以利于純化，所述標(biāo)簽例如谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、麥芽糖E結(jié)合蛋白、蛋白A、FLAG標(biāo)簽、六組氨酸、myc標(biāo)簽或流感HA標(biāo)簽。親和標(biāo)簽或報(bào)道基因融合物使目標(biāo)多肽的讀框與編碼親和標(biāo)簽的基因的讀框連接，使得產(chǎn)生翻譯融合物。融合基因的表達(dá)導(dǎo)致包括目標(biāo)多肽和親和標(biāo)簽兩者的單一多肽的翻譯。在使用親和標(biāo)簽的某些情況下，編碼蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)的DNA序列可在親和標(biāo)簽和目標(biāo)多肽的讀框之間融合。[0081]還可使用適于在細(xì)菌以外且本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生本文所述GCRA肽和變體的不成熟和成熟形式的遺傳構(gòu)建體和方法以在生物系統(tǒng)中產(chǎn)生多肽。[0082]可通過連接賦予肽所需性質(zhì)（例如延長(zhǎng)體內(nèi)的半壽期）的第二分子，來修飾(例如聚乙二醇化)本文公開的肽。所述修飾也落入本文所用術(shù)語"變體"的范圍內(nèi)。[0083]所謂"抑制"或"阻止"或"降低"意指相對(duì)于在沒有GCRA肽時(shí)蛋白質(zhì)的活性和/或產(chǎn)生，GCRA肽降低蛋白質(zhì)的活性和/或產(chǎn)生達(dá)至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%或更高。[0084]所謂"誘導(dǎo)"，意指相對(duì)于沒有GCRA肽時(shí)的蛋白質(zhì)的活性和/或產(chǎn)生，GCRA肽提高蛋白質(zhì)的活性和/或產(chǎn)生達(dá)至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少100%或更高。[0085]術(shù)語"治療"或"醫(yī)治"是指減輕或緩解受試者的癥狀、防止癥狀惡化或發(fā)展和/或預(yù)防不受此影響的受試者的疾病。對(duì)于指定受試者，可通過任何客觀或主觀量度，確定癥狀的改善、惡化、消退或進(jìn)展。治療功效可以發(fā)病率或死亡率的改善(例如選定群體的存活曲線延長(zhǎng))來測(cè)量。因此，有效治療可包括現(xiàn)有疾病的治療、通過減慢或停止其發(fā)展控制疾病、預(yù)防疾病發(fā)生、減少癥狀的數(shù)目或嚴(yán)重性或其組合。可在受控研究中利用一個(gè)或多個(gè)統(tǒng)計(jì)顯著性標(biāo)準(zhǔn)來顯示效果。[0086]與指定疾病或病癥有關(guān)的術(shù)語"預(yù)防"意指:如果無疾病發(fā)生，則防止疾病發(fā)生的開始，防止可能易患病癥或疾病但尚未診斷為患有病癥或疾病的受試者發(fā)生疾病或病癥，和/或如果已存在則防止疾病/病癥進(jìn)一步發(fā)展。[0087]通過暴露，例如使組織(例如胃腸組織、肺組織、食道組織)或細(xì)胞與GCRA激動(dòng)劑接觸，產(chǎn)生胞內(nèi)cGMP。所謂誘導(dǎo)意指與未與GCRA肽或變體接觸的組織或細(xì)胞相比，cGMP產(chǎn)生增加。使組織或細(xì)胞與GCRA肽或變體直接接觸。或者，全身性給予GCRA肽或變體。以足以提高胞內(nèi)cGMP濃度的量給予GCRA肽或變體。通過本領(lǐng)域已知的基于細(xì)胞的測(cè)定法測(cè)量cGMP產(chǎn)生(25)〇[0088]通過將治療有效劑量的GCRA肽給予有需要的受試者（例如哺乳動(dòng)物，例如人），來治療、預(yù)防或減緩病癥。GCRA肽可連同一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑呈單位劑型的藥物組合物。術(shù)語"單位劑型"是指單一藥物遞送實(shí)體，例如片劑、膠囊劑、溶液劑或吸入制劑。當(dāng)給予患者時(shí)，存在的肽的量應(yīng)足以具有積極的治療作用(通常介于10yg和3g之間）。構(gòu)成"積極的治療作用"的方面將取決于待治療的具體病況，并可包括易被本領(lǐng)域技術(shù)人員識(shí)別的任何顯著改善。[0089]GCRA肽可單獨(dú)給予或與阿片樣物質(zhì)組合給予?？捎糜谥雇吹陌⑵瑯游镔|(zhì)是本領(lǐng)域已知的。例如，阿片樣物質(zhì)化合物包括但不限于阿芬太尼、阿尼利定、阿西馬多林、布馬佐辛、丁丙諾啡、布托啡諾、可待因、地佐辛、二乙酰嗎啡(海洛因）、二氫可待因、地芬諾酯、乙基嗎啡、非多托秦、芬太尼、氟曲沙胺、氫可酮、氫嗎啡酮、左洛啡烷、左醋美沙朵、左啡諾、洛哌丁胺、麥啶(哌替啶）、美沙酮、嗎啡、嗎啡-6-葡萄糖醛酸酐、納布啡、烯丙嗎啡、尼可嗎啡、阿片、羥考酮、羥嗎啡酮、阿片全堿、噴他佐辛、丙吡蘭、丙氧芬、瑞芬太尼、舒芬太尼、替利定、曲美布汀和曲馬多。在一些實(shí)施方案中，阿片樣物質(zhì)是選自以下的至少一種阿片樣物質(zhì)：阿芬太尼、丁丙諾啡、布托啡諾、可待因、地佐辛、二氫可待因、芬太尼、氫可酮、氫嗎啡酮、左啡諾、麥啶（哌替啶）、美沙酮、嗎啡、納布啡、尼可嗎啡、羥考酮、羥嗎啡酮、阿片全堿、噴他佐辛、丙吡蘭、丙氧芬、舒芬太尼和/或曲馬多。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，阿片樣物質(zhì)選自嗎啡、可待因、羥考酮、氫可酮、二氫可待因、丙氧芬、芬太尼、曲馬多及其混合物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，阿片樣物質(zhì)是洛哌丁胺。在其它實(shí)施方案中，阿片樣物質(zhì)是混合型激動(dòng)劑，例如布托啡諾。在一些實(shí)施方案中，給予受試者一種以上的阿片樣物質(zhì)，例如嗎啡和海洛因或美沙酮和海洛因。[0090]GCRA肽可單獨(dú)給予或與另一種治療劑(例如治療、預(yù)防或改善阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的癥狀的治療劑)組合給予。示例性治療劑包括但不限于口服輕瀉藥(例如軟化劑或蠕動(dòng)誘導(dǎo)劑）、栓劑、灌腸劑、阿片樣物質(zhì)拮抗劑(例如納洛酮、納美芬、甲基納曲酮）、聚乙二醇、選擇性靶向外周μ-阿片樣物質(zhì)受體的藥物(例如甲基納曲酮、阿維莫泮）、2型氯離子通道激活劑(例如盧比前列酮）、多巴胺受體拮抗劑(例如甲氧氯普胺）、非阿片樣物質(zhì)、5-羥色胺（361'〇1:〇11；[11、5!11')受體配體、安帕金、1'1-甲基-0-天冬氨酸受體抑制劑、410^受體調(diào)節(jié)劑、他噴他多、NKTR-118、TD-1211和/或小神經(jīng)膠質(zhì)抑制劑(例如米諾環(huán)素）。[0091]術(shù)語"組合療法"意指同時(shí)或序貫給予兩種或更多種活性劑。同時(shí)給藥可以其中將兩種或更多種活性劑混合的制劑來實(shí)現(xiàn)，或以同時(shí)給予獨(dú)立配制的兩種或更多種活性劑來實(shí)現(xiàn)。兩種或更多種活性劑的序貫給藥可使用獨(dú)立配制的兩種或更多種活性劑，以依次先給予一種藥劑，接著在給予第一藥劑后幾秒鐘、幾分鐘、幾小時(shí)或幾天給予第二藥劑來實(shí)現(xiàn)。[0092]可通過給予其每一種單獨(dú)配制和給予的兩種或更多種藥劑(例如本文所述GCRA肽或本文所述組合物和另一種化合物），或通過給予單一制劑中的兩種或更多種藥劑，來實(shí)現(xiàn)組合療法。組合療法還包括其它組合。例如，兩種藥劑可配制在一起，并連同含有第三藥劑的獨(dú)立制劑給予。雖然兩種或更多種藥劑在組合療法中可同時(shí)給予，但它們不必如此。例如，第一藥劑(或藥劑的組合）的給予可先于第二藥劑(或藥劑的組合）的給予幾分鐘、幾小時(shí)、幾天或幾周。因此，兩種或更多種藥劑可在彼此的幾分鐘內(nèi)或在彼此的1、2、3、6、9、12、15、18或24小時(shí)內(nèi)或在彼此的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14天內(nèi)或在彼此的2、3、4、5、6、7、8、9或10周內(nèi)給予。在某些情況下，甚至更長(zhǎng)的間隔是可能的。雖然在許多情況下，需要用于組合療法的兩種或更多種藥劑同時(shí)存在于患者體內(nèi)，但不必如此。[0093]本文所述GCRA肽可與例如sulindaesulfone、扎普司特、西地那非、伐地那非或他達(dá)拉非等磷酸二酯酶抑制劑組合以進(jìn)一步提高靶組織或器官中cGMP的水平。[0094]組合療法還可包括兩次或多次給予用于所述組合的藥劑的一種或多種。例如，如果藥劑X和藥劑Y組合使用，則以任何組合一次或多次序貫給予它們，例如以X-Y-X、X-X-Y、Υ-Χ-Υ、Υ-Υ-Χ、χ-χ-γ-γ等的順序給予。[0095]組合療法還可包括通過不同的途徑或位置給予兩種或更多種藥劑。例如，（a)-種藥劑口服給予，另一種藥劑靜脈內(nèi)給予，或(b)-種藥劑口服給予，另一種局部給予。在各種情況下，藥劑可同時(shí)或序貫給予。本文所述的一些組合療法藥劑的大致劑量參見W001/76632第11-17頁表中的"BNF推薦劑量"欄(表中的數(shù)據(jù)出自2000年3月英國(guó)國(guó)家處方集），還可參見其它標(biāo)準(zhǔn)處方集和其它藥物處方指南。對(duì)于某些藥物，適應(yīng)癥的習(xí)慣處方劑量在國(guó)家與國(guó)家間可略有不同。[0096]單獨(dú)或組合的GCRA肽可與任何藥學(xué)上可接受的載體或介質(zhì)組合。因此，它們可與當(dāng)給予患者時(shí)不產(chǎn)生不利的、變應(yīng)性的或另外其它不良反應(yīng)的物質(zhì)組合。所用的載體或介質(zhì)可包括溶劑、分散劑、包衣材料、吸收促進(jìn)劑、控制釋放劑和一種或多種惰性賦形劑(這包括淀粉、多元醇、成粒劑、微晶纖維素(例如celphere、Celpherebeads?)、稀釋劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等)等。如有需要，所公開的組合物的片劑劑量可用標(biāo)準(zhǔn)水法或非水法技術(shù)包衣。[0097]配制本發(fā)明的藥物組合物以與其預(yù)定的給藥途徑相容。給藥途徑的實(shí)例包括胃腸外，例如靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、口服(例如吸入）、經(jīng)皮（局部）、跨粘膜和直腸給藥。用于胃腸外、皮內(nèi)或皮下施用的溶液劑或混懸劑可包括下列組分:無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑;抗細(xì)菌劑，例如芐醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯;抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉;螯合劑，例如乙二胺四乙酸;緩沖液，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽;和張度調(diào)節(jié)劑，例如氯化鈉或葡萄糖?？捎盟峄驂A(例如鹽酸或氫氧化鈉)調(diào)節(jié)pH?？蓪⑽改c外制劑包封在由玻璃或塑料制成的安瓿，一次性注射器或多劑量小瓶中。[0098]適于注射用的藥物組合物包括:無菌水性溶液劑(其中水可溶解的)或分散劑和用于無菌注射溶液劑或分散劑即時(shí)制備的無菌粉劑。對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、CremophorEL?(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸緩沖鹽水(PBS)。在所有情況下，組合物必須是無菌的，且就存在易于注射性而言應(yīng)是流體。在制造和存貯條件下必須是穩(wěn)定的，且必須防止微生物（例如細(xì)菌和真菌）的污染作用。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)及其合適的混合物的溶劑或分散介質(zhì)?？衫缤ㄟ^使用包衣材料(例如卵磷脂）、在分散劑的情況下通過保持所需粒徑和通過使用表面活性劑，來保持合適的流動(dòng)性?？赏ㄟ^各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑，例如對(duì)羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等，實(shí)現(xiàn)微生物作用的防止。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇、氯化鈉?？赏ㄟ^在組合物中包括延遲吸收的作用劑(例如單硬脂酸鋁和明膠），引起可注射組合物的吸收延長(zhǎng)。[0099]可通過在合適的溶劑中以所需的量摻入活性化合物(例如GCRA激動(dòng)劑）與上列成分的一種或組合(按需要），接著過濾除菌，來制備無菌注射溶液劑。通常通過將活性化合物摻入含有堿性分散介質(zhì)和所需的來自上列那些的其它成分的無菌溶媒中來制備分散劑。在用于制備無菌注射溶液劑的無菌粉劑的情況下，制備方法為真空干燥和冷凍干燥，這得到來自其之前除菌過濾的溶液中的活性成分加上任何其它所需成分的粉末。[0100]口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載體。例如甘露糖醇、果寡糖、聚乙二醇和其它賦形劑?？蓪⑺鼈儼庠诿髂z膠囊中或壓制成片劑。出于口服治療性給予的目的，活性化合物可與賦形劑一起摻入，并用于片劑、錠劑或膠囊劑的形式。還可使用流體載體制備口服組合物以用作漱口劑，其中流體載體中的化合物經(jīng)口施用和漱口和吐出或吞下?？砂ㄋ帉W(xué)上相容的粘合劑和/或輔料作為組合物的部分。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等可含有下列成分的任一種或類似性質(zhì)的化合物:粘合劑，例如微晶纖維素、西黃蓍膠或明膠;賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂或Sterotes;助流劑，例如膠態(tài)二氧化硅;甜味劑，例如蔗糖或糖精;或矯味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味料。[0101]對(duì)于通過吸入的給藥，從含有合適推進(jìn)劑(例如二氧化碳等氣體)的加壓容器或分配器或噴霧器中，以氣溶膠噴霧的形式遞送化合物。[0102]全身性給藥也可通過跨粘膜或經(jīng)皮手段。對(duì)于跨粘膜或經(jīng)皮給藥，在制劑中使用適于待滲透的屏障的滲透劑。這類滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的，例如對(duì)于跨粘膜給藥包括去污劑、膽汁鹽和梭鏈孢酸衍生物?？缯衬そo藥可通過使用鼻噴霧劑或栓劑實(shí)現(xiàn)。對(duì)于經(jīng)皮給藥，將活性化合物配制成如本領(lǐng)域一般已知的軟膏劑、油膏劑、凝膠劑或乳膏劑。[0103]化合物還可以栓劑(例如用常規(guī)栓劑基質(zhì)，例如可可脂和其它甘油酯）或滯留型灌腸劑的形式制備用于直腸遞送。[0104]在一個(gè)實(shí)施方案中，將活性化合物與可防止化合物從機(jī)體快速清除的載體一起制備，例如控釋制劑，包括植入劑和微囊化遞送系統(tǒng)?？墒褂蒙锟山到獾纳锵嗳菪跃酆衔?，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制備這類制劑的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。材料也可市購(gòu)獲自AlzaCorporation和NovaPharmaceuticals，Inc。脂質(zhì)體混懸劑(包括以病毒抗原的單克隆抗體革El向受感染細(xì)胞的脂質(zhì)體)也可用作藥學(xué)上可接受的載體。這些可按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知方法，例如如美國(guó)專利號(hào)4,522,811(通過引用全部結(jié)合到本文中）所述來制備。[0105]特別有優(yōu)勢(shì)的是以劑量單位形式配制口服或胃腸外組合物以易于劑量的給予和一致性。本文所用劑量單位形式是指適宜作為待治療的受試者的單位劑量的物理離散單位;各單位含有經(jīng)計(jì)算產(chǎn)生所需治療作用的預(yù)定量的活性化合物以及所需的藥用載體。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格受制于并直接取決于活性化合物的獨(dú)特性質(zhì)和要實(shí)現(xiàn)的具體治療作用。[0106]藥物組合物可與給藥說明書一起包括在容器、藥包或分配器中。[0107]本發(fā)明的組合物還可任選包括其它治療成分、防結(jié)塊劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、香料劑、干燥劑、增塑劑、染料、助流劑、抗粘劑、抗靜電劑、表面活性劑(潤(rùn)濕劑）、抗氧化劑、薄膜包衣劑等。任何這類任選的成分必須與本文所述化合物相容以確保制劑的穩(wěn)定性。[0108]組合物可按需含有其它添加劑，包括例如乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麥芽糖、棉子糖、麥芽糖醇、松三糖、水蘇糖、乳糖醇、直輝中基性巖(palatinite)、淀粉、木糖醇、甘露糖醇、肌醇等及其水合物和氨基酸，例如丙氨酸、甘氨酸和甜菜堿及多肽和蛋白質(zhì)，例如白蛋白。[0109]用作藥學(xué)上可接受的載體和藥學(xué)上可接受的惰性載體和前述其它成分的賦形劑的實(shí)例包括但不限于粘合劑、填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、抗微生物劑和包衣劑，例如:粘合劑：玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、其它淀粉、明膠、天然和合成樹膠例如阿拉伯樹膠、黃原膠、藻酸鈉、藻酸、其它藻酸鹽、西黃蓍膠粉、瓜爾膠、纖維素及其衍生物(例如乙基纖維素、醋酸纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉）、聚乙烯吡咯烷酮(例如聚維酮、交聯(lián)聚維酮、共聚維酮(copovidone)等）、甲基纖維素、Methocel、預(yù)膠化淀粉(例如Colorcon，Ltd.銷售的STARCH1500?和STARCH1500LM?)、羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素(FMCCorporation,MarcusHook，PA，USA)或其混合物;填充劑:滑石粉、碳酸鈣(例如粒料或粉末）、磷酸氫鈣、磷酸三鈣、硫酸鈣(例如粒料或粉末）、微晶纖維素、纖維素粉、葡萄糖結(jié)合劑、高嶺土、甘露糖醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、預(yù)膠化淀粉、葡萄糖、果糖、蜂蜜、無水乳糖、乳糖一水合物、乳糖和阿司帕坦、乳糖和纖維素、乳糖和微晶纖維素、麥芽糖糊精、麥芽糖、甘露糖醇、微晶纖維素&amp;瓜爾膠、糖蜜、蔗糖或其混合物;崩解劑:瓊脂、藻酸、碳酸鈣、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素納、交聯(lián)聚維酮、聚克立林鉀、羥基乙酸淀粉鈉、馬鈴薯或木薯淀粉、其它淀粉、預(yù)膠化淀粉、粘土、其它藻膠、其它纖維素、樹膠(像吉蘭糖）、低取代的羥丙基纖維素或其混合物;潤(rùn)滑劑:硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、礦物油、輕質(zhì)礦物油、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸鈉、硬脂酰醇富馬酸鈉、植物型脂肪酸潤(rùn)滑劑、滑石粉、氫化植物油(例如花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油）、硬脂酸鋅、油酸乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂、syloid硅膠（AER0SIL200，W.R.GraceCo·,Baltimore,MDUSA)、合成二氧化硅的凝聚型氣溶膠(DeaussaCo.，Piano,TXUSA)，發(fā)熱二氧化硅(0八8_0-SIL，CabotCo.，Boston,MAUSA)或其混合物；防結(jié)塊劑:硅酸鈣、硅酸鎂、二氧化硅、膠態(tài)二氧化硅、滑石粉或其混合物;抗微生物劑:苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲酸、芐醇、對(duì)羥基苯甲酸丁酯、西吡氯銨、甲酚、三氯叔丁醇、脫氫醋酸、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、苯酚、苯乙醇、苯氧乙醇、醋酸苯汞、硝酸苯汞、山梨酸鉀、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸鈉、脫氫醋酸鈉、丙酸鈉、山梨酸、硫柳汞、thymo或其混合物;和包衣劑:羧甲基纖維素鈉、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、乙基纖維素、明膠、藥用釉料、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素）、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、甲基纖維素、聚乙二醇、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、蟲膠、蔗糖、二氧化鈦、巴西棕櫚蠟、微晶蠟、吉蘭糖膠、麥芽糖糊精、甲基丙烯酸酯、微晶纖維素和角叉菜膠或其混合物。[0110]制劑還可包括其它賦形劑及其類別，包括但不限于L-組氨酸、Pluronic?、泊洛沙姆(例如Lutrol?和Poloxamer188)、抗壞血酸、谷胱甘肽、滲透促進(jìn)劑(例如脂質(zhì)、膽酸鈉、?；鈮A、水楊酸酯、混合膽汁鹽、脂肪酸膠束、螯合劑、脂肪酸、表面活性劑、中鏈甘油酯）、蛋白酶抑制劑(例如大豆胰蛋白酶抑制劑、有機(jī)酸）、有效提高生物利用度的pH降低劑和吸收增強(qiáng)劑(包括但不限于描述于US6086918和US5912014中的那些）、乳膏和洗劑(像麥芽糖糊精和角叉菜膠）；用于咀嚼片的材料(像葡萄糖、果糖、乳糖一水合物、乳糖和阿司帕坦、乳糖和纖維素、麥芽糖糊精、麥芽糖、甘露糖醇、微晶纖維素和瓜爾膠、山梨糖醇晶體）；parenterals(像甘露糖醇和聚維酮）；增塑劑(像癸二酸二丁酯、用于包衣的增塑劑、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯）；粉末潤(rùn)滑劑(像山崳酸甘油酯）；軟明膠膠囊劑(像山梨糖醇特種溶液）；用于包衣的球體(像糖球體）；滾圓劑(像山崳酸甘油酯和微晶纖維素）；助懸/膠凝劑(像角叉菜膠、吉蘭糖膠、甘露糖醇、微晶纖維素、聚維酮、羥基乙酸淀粉鈉、黃原膠）；甜味劑(像阿司帕坦、阿司帕坦和乳糖、葡萄糖、果糖、蜂蜜、麥芽糖糊精、麥芽糖、甘露糖醇、糖蜜、山梨糖醇晶體、山梨糖醇特種溶液、蔗糖）；濕法制粒劑(像碳酸鈣、無水乳糖、乳糖一水合物、麥芽糖糊精、甘露糖醇、微晶纖維素、聚維酮、淀粉）、焦糖、羧甲基纖維素鈉、櫻桃奶油香料和櫻桃香料、無水檸檬酸、檸檬酸、糖粉、D&CRedNo.33、D&CYellow#10鋁色淀、依地酸二鈉、乙醇15%、FD&CYellowNo.6鋁色淀、FD&CBlue#1鋁色淀、FD&CBlueNo.1、FD&CBlueNo.2鋁色淀、FD&CGreenNo.3、FD&CRedNo.40、FD&CYellowNo.6鋁色淀、FD&CYellowNo.6、FD&CYellowNo.10、棕櫚酰硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、靛胭月旨、卵磷脂、甘露糖醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯、甘草酸一銨、天然和人工橙味香料、藥用釉料、泊洛沙姆188、聚葡萄糖、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚維酮、預(yù)膠化玉米淀粉、預(yù)膠化淀粉、氧化鐵紅、糖精鈉、羧甲基醚鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、磷酸鈉、草莓香料、合成氧化鐵黑、合成氧化鐵紅、二氧化鈦和白蠟。[0111]固體口服劑型可任選用包衣系統(tǒng)處理（例如Opadry?fx薄膜包衣系統(tǒng)，例如Opadry?藍(lán)（0Y-LS-20921)、0padry?白（YS-2-7063)、0padry?白（YS-1-7040)和黑油墨(S-卜8106)。[0112]呈其游離形式或作為鹽的作用劑可與以下聚合物混合以產(chǎn)生緩釋制劑:例如聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、聚（I)-乳酸-乙醇酸-酒石酸(P(I)LGT)(W001/12233)、聚乙醇酸(U.S.3,773,919)、聚乳酸（1].3.4,767,628)、聚（￡-己內(nèi)酯）和聚（環(huán)氧烷）（1].3·20030068384)。這類制劑可用于在幾天、幾周或幾個(gè)月的時(shí)間內(nèi)釋放多肽或另一種藥劑的植入劑，所述時(shí)間取決于聚合物、聚合物的粒徑和植入劑的大小（參見例如U.S.6，620，422)。使用的其它緩釋制劑和聚合物描述于EP0467389A2、W093/24150、U.S.5,612，052、W097/40085、W003/075887、W001/01964A2、U.S.5,922,356、W094/155587、W002/074247A2、W098/25642、U.S.5,968,895、U.S.6，180,608、U.S.20030171296、U.S.20020176841、U.S.5,672,659、U.S.5,893,985、U.S.5，134，122、U.S.5，192,741、U.S.5，192,741、U.S.4,668,506、U.S.4,713,244、U.S.5,445,832、U.S.4,931，279、U.S.5，980，945、W002/058672、W097/26015、W097/04744和US20020019446。在這類緩釋制劑中，將多肽的微粒(Delie和Blanco-Prieto2005Molecule10:65-80)與聚合物的微粒混合?？蓪⒁环N或多種緩釋植入劑置于大腸、小腸或兩者中。1].3.6,011，011和1094/06452描述了提供聚乙二醇（即PEG300和PEG400)或三醋精的緩釋制劑。W003/053401描述了即可提高生物利用度又可提供藥劑在GI道內(nèi)控釋的制劑。其它控釋制劑描述于W002/38129、EP32615UU.S.5,236,704^W002/30398^W098/13029；U.S.20030064105.S.20030138488A1、U.S.20030216307A1、U.S.6,667,060、W001/49249、W001/49311、W001/49249、W001/49311和U.S.5,877,224。材料可包括描述于恥04041195的材料（包括其中描述的密封包衣和腸包衣），實(shí)現(xiàn)在結(jié)腸中遞送的pH敏感性包衣材料包括描述于US4，910,021和W09001329的那些。US4910021描述了使用pH敏感性材料以包覆膠囊劑。TO9001329描述了在含酸珠粒上使用pH敏感性包衣材料，其中珠粒芯上的酸延長(zhǎng)pH敏感性包衣材料的溶解。美國(guó)專利號(hào)5,175,003公開了用于遞藥系統(tǒng)的由pH敏感性腸衣材料和能夠賦予腸衣材料滲透性的薄膜形成增塑劑組成的雙重機(jī)制聚合物混合物；由充滿藥物和有時(shí)覆蓋藥物中性核(pharmaceuticallyneutralnucleus)的雙重機(jī)制聚合物混合物組成的基質(zhì)小丸(matrixpellet);膜包覆的小丸，其包含用相同或不同組成的雙重機(jī)制聚合物混合物包封包覆的基質(zhì)小丸;和含基質(zhì)小丸的藥物劑型。通過在酸性pH中擴(kuò)散和通過在標(biāo)稱約5.0或更高的pH水平下崩解，基質(zhì)小丸釋放出酸溶性藥物。[0113]在一些實(shí)施方案中，以pH依賴性釋放形式配制本文所述組合物?；蛘?，以在胃腸(GI)道的特定區(qū)域(例如十二指腸、空腸、回腸、回腸末端或升結(jié)腸)釋放肽的形式配制這類組合物。制劑可含有用組合物包覆的惰性載體和在特定pH(例如pH5或pH7)下釋放肽的腸溶包衣材料。十二指腸或空腸釋放的優(yōu)選pH為pH4.5-5.5或pH5.5-6.5?；啬c、回腸末端或升結(jié)腸釋放的優(yōu)選pH為pH5.5-6.5或pH6.5-7.5。優(yōu)選惰性載體選自甘露糖醇、乳糖、微晶纖維素或淀粉。[0114]可在描述于W004052339的pH引發(fā)的靶向控釋系統(tǒng)中配制本文所述的GCRA肽?？砂凑找韵氯我粋€(gè)描述的方法配制本文所述藥劑：W003105812(擠出的能水合的聚合物）；W00243767(酶可切割膜易位蛋白）；W003007913和W003086297(粘膜粘附系統(tǒng)）；TO02072075(包含pH降低劑和吸收增強(qiáng)劑的雙層分層制劑）；W004064769(酰胺化多肽）；W005063156(熔融時(shí)具有假變和/或觸變性質(zhì)的固體脂質(zhì)混懸劑）；W003035029和W003035041(易蝕的胃滯留劑型）；US5007790和US5972389(緩釋劑型）；W004112711(口服延時(shí)釋放組合物）；W005027878、W002072033和W002072034(含天然或合成樹膠的延緩釋放組合物）；W005030182(釋放速率遞增的控釋制劑）；W005048998(微囊化系統(tǒng)）；美國(guó)專利5,952,314(生物聚合物）；1^5，108,758(玻璃化直鏈淀粉基質(zhì)遞送）；1^5,840，860(基于改性淀粉的遞送）；JP10324642(包含脫乙酰殼多糖和例如麥醇溶蛋白或玉米醇溶蛋白等耐胃腐蝕材料的遞送系統(tǒng)）；US5,866,619和US6,368,629(含有聚合物的糖）；US6,531，152(描述了含有水溶性芯的藥物遞送系統(tǒng)(果膠酸鈣或其它水不溶聚合物)和爆裂的外層(例如疏水聚合物-Eudragrit));US6,234,464;US6,403，130(具有含酪蛋白和高甲氧基果膠的聚合物的包衣材料;W00174175(Maillard反應(yīng)產(chǎn)物）；W005063206(溶解度提高制劑）;W004019872(轉(zhuǎn)移融合蛋白）。[0115]控釋制劑在一個(gè)實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑制劑包含提供控制(時(shí)間依賴性)釋放的GCC激動(dòng)劑的靶向物質(zhì)。在這種情況下控釋包括延緩的持續(xù)釋放、延緩的控釋、延緩的緩慢釋放、延緩的延時(shí)釋放、延緩的延長(zhǎng)釋放和突然釋放或"爆發(fā)(burst)"。[0116]優(yōu)選控釋制劑含有包含被靶向物質(zhì)包覆的GCC激動(dòng)劑的緩慢崩解的芯。靶向物質(zhì)優(yōu)選包含至少一種可溶脹聚合物。用于本發(fā)明的控釋制劑的可溶脹聚合物的非限制性實(shí)例包括丙烯酸共聚物，例如EUDRAGITRUEUDRAGITRS或EUDRAGITNE;聚乙烯乙酸酯，例如K0LLI⑶ATSR30D;和纖維素衍生物，例如乙基纖維素或醋酸纖維素，例如SURELEASE和AQUACOATECD。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，靶向物質(zhì)包含EUDRAGITRUEUDRAGITRS或EUDRAGITNE的一種或多種以通過不依賴于pH的溶脹提供GCC激動(dòng)劑的控時(shí)釋放。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，靶向物質(zhì)包含EUDRAGITRL:RS(2:8)和包含EUDRAGITFS的外層包衣材料。[0117]可用于本發(fā)明的緩釋制劑的可溶脹聚合物的其它非限制性實(shí)例包括分子量為30，000-5，000.000的聚羥基烷基甲基丙烯酸酯;κ-角叉菜膠;分子量為10，000-360，000的聚乙烯吡咯烷酮；陰離子和陽離子水凝膠;聚電解質(zhì)復(fù)合物;具有少量乙酸酯、與乙二醛、甲醛或戊二醛交聯(lián)且聚合度為200-30,000的聚乙烯醇;包含甲基纖維素、交聯(lián)的瓊脂和羧甲基纖維素的混合物;通過細(xì)碎的馬來酐與苯乙烯、乙烯、丙烯、丁烯或異丁烯形成分散體而產(chǎn)生的水不溶的水可溶脹共聚物;N-乙烯基內(nèi)酰胺的水可溶脹聚合物；多糖、水可溶脹樹膠、高粘度羥丙基甲基纖維素和/或其混合物。在某些實(shí)施方案中，可溶脹聚合物選自果膠酸鈣、交聯(lián)多糖、水不溶性淀粉、微晶纖維素、水不溶性交聯(lián)肽、水不溶性交聯(lián)蛋白質(zhì)、水不溶性交聯(lián)明膠、水不溶性交聯(lián)水解明膠、水不溶性交聯(lián)膠原、改性纖維素和交聯(lián)聚丙烯酸。交聯(lián)多糖的非限制性實(shí)例包括藻酸鹽的不溶性金屬鹽或交聯(lián)衍生物、果膠、黃原膠、瓜爾膠、西黃蓍膠和刺槐豆膠、角叉菜膠、其金屬鹽及其共價(jià)交聯(lián)衍生物。改性纖維素的非限制性實(shí)例包括羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素的金屬鹽和羥丙基纖維素的交聯(lián)衍生物。[0118]在某些實(shí)施方案中，可溶脹芯還包含芯吸劑(wickingagent)，例如二氧化娃。芯吸劑還可選自崩解劑(例如微晶纖維素）以提高吸水速度。其它合適的芯吸劑包括但不限于高嶺土、二氧化鈦、氣相二氧化硅、氧化鋁、煙酰胺、十二烷基硫酸鈉、低分子量聚乙烯吡咯烷酮、m-pyrol、膨潤(rùn)土、硅酸鎂鋁、聚酯、聚乙烯及其混合物。[0119]在某些實(shí)施方案中，可包含部分芯和/或形成包覆芯的一層或多層的靶向物質(zhì)任選另包含以下的至少一種:潤(rùn)滑劑、促流動(dòng)劑、增塑劑、抗粘劑、表面活性劑、潤(rùn)濕劑、助懸劑和分散劑。[0120]在某些實(shí)施方案中，靶向物質(zhì)包含水不溶性聚合物和成孔劑。成孔劑的非限制性實(shí)例包括蔗糖、氯化鈉、氯化鉀、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙二醇、水溶性有機(jī)酸、糖和糖醇。在某些實(shí)施方案中，成孔劑形成外層或包衣的部分。在其它實(shí)施方案中，成孔劑均勻分布在全部水不溶性聚合物中。[0121]在一個(gè)實(shí)施方案中，靶向物質(zhì)包含壓制包衣材料?？捎米鲏褐瓢虏牧系牟牧系姆窍拗菩詫?shí)例包括選自以下的樹膠:黃原膠、刺槐豆膠、半乳聚糖、甘露聚糖、藻酸鹽、刺梧桐樹膠、果膠、瓊脂、西黃蓍膠、阿拉伯樹膠、角叉菜膠、西黃蓍膠、脫乙酰殼多糖、瓊脂、藻酸、水膠體兒茶、salaiguggal、indianbodellum、苦配巴香脂膠、阿魏膠、cambi樹膠、象耳豆（Enterolobiumcyclocarpum)、黃連木樹膠、安息香膠、山達(dá)脂膠、黑兒茶膠、buteafrondosa(FlameofForestGum)、沒藥、魔芋甘露聚糖、瓜爾膠、welan樹膠、吉蘭糖膠、他拉膠(taragum)、刺槐豆膠、角叉菜膠、葡甘露聚糖、半乳聚糖樹膠、藻酸鈉、西黃蓍膠、脫乙酰殼多糖、黃原膠、脫乙酰基黃原膠、果膠、聚果膠酸鈉、谷蛋白、刺梧桐樹膠、羅望子膠、印度樹膠、Accaroid/Yacca/Red樹膠、達(dá)瑪樹膠、杜松樹膠、酯樹膠、銀合歡種籽膠、gumtalha(acaciaseyal)和栽培植物細(xì)胞膠，包括以下屬的植物的細(xì)胞膠:金合歡屬(acacia)、獼猴桃屬(actinidia)、露草屬(aptenia)、劍葉花屬(carbobrotus)、菊苣屬(chickorium)、黃瓜屬（cucumis)、大豆屬（glycine)、木槿屬（hibiscus)、大麥屬（hordeum)、letuca、番前屬(1}^(^6^；[(3011)、蘋果屬(1]1&1118)、苜蓿屬(1116(1；^&8〇)、松葉菊屬(1116861111^5^111：1161]111111)、稻屬(oryza)、泰屬（panicum)、藹草屬（phalaris)、梯牧草屬（phleum)、polyanthus、polycarbophil、sida、前屬（solanum)、三葉草屬（trifolium)、古月盧巴屬（trigonella);非洲緬前木(Afzeliaafricana)種軒膠、Treculiaafricana樹膠、detarium樹膠、cassia樹膠、角豆樹膠、Prosopisafricana樹膠、Colocassiaesulenta樹膠、Hakeagibbosa樹膠、卡歐屬樹膠、小核菌聚糖和玉蜀黍?qū)?zea)以及任何前述的混合物。[0122]在一些實(shí)施方案中，靶向物質(zhì)另包含增塑劑、硬化劑、潤(rùn)濕劑、助懸劑或分散劑或其組合。增塑劑的非限制性實(shí)例包括癸二酸二丁酯、聚乙二醇和聚丙二醇、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、乙?；视蛦熙ァ⒁阴；鶛幟仕崛□?、三醋精、鄰苯二甲酸二甲酯、苯甲酸芐酯、脂肪酸的丁基酯和/或二醇酯、精練礦物油、油酸、蓖麻油、玉米油、樟腦、甘油和山梨糖醇或其組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，硬化劑包含鯨蠟醇。潤(rùn)濕劑的非限制性實(shí)例包括泊洛沙姆、聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧亞甲基硬脂酸酯、十二烷基硫酸鈉、山梨糖醇酐脂肪酸酯、苯扎氯銨、聚乙氧基化蓖麻油和多庫酯鈉。助懸劑的非限制性實(shí)例包括藻酸、膨潤(rùn)土、卡波姆、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、微晶纖維素、膠態(tài)二氧化硅、糊精、明膠、瓜爾膠、黃原膠、高嶺土、硅酸鎂鋁、麥芽糖醇、中鏈甘油三酯、甲基纖維素、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、丙二醇藻酸鹽、藻酸鈉、山梨糖醇酐脂肪酸酯和西黃蓍膠。分散劑的非限制性實(shí)例包括泊洛沙姆、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯和山梨糖醇酐脂肪酸酯。[0123]在某些實(shí)施方案中，靶向釋放制劑在靶向釋放材料上另包含外層腸溶包衣材料。優(yōu)選腸溶包衣材料選自醋酸鄰苯二甲酸纖維素、醋酸羥基丙基甲基纖維素琥珀酸酯、EUDRAGITL100和EUDRAGITL30D-55。[0124]爆發(fā)制劑在一個(gè)實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑制劑是經(jīng)設(shè)計(jì)在結(jié)腸或小腸中以快速爆發(fā)釋放GCC激動(dòng)劑的延時(shí)制劑（"爆發(fā)制劑(burstformulation)"）。制劑包含芯和外層。芯包含至少一種GCC激動(dòng)劑和至少一種爆發(fā)控制劑。在某些實(shí)施方案中，芯另包含選自以下的至少一種崩解劑:交聯(lián)羧甲基纖維素納、交聯(lián)聚維酮(交聯(lián)PVP)、羧甲基淀粉鈉(羥基乙酸淀粉鈉）、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(交聯(lián)羧甲纖維素）、預(yù)膠化淀粉(STARCH1500)、微晶淀粉、水不溶性淀粉、羧甲基纖維素鈣和硅酸鎂鋁或其組合。在其它實(shí)施方案中，芯另包含以下的至少一種:吸收增強(qiáng)劑、粘合劑、硬度增強(qiáng)劑、緩沖劑、填充劑、流動(dòng)調(diào)節(jié)劑、潤(rùn)滑劑、增效劑、螯合劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。任選芯還包含一種或多種其它賦形劑。[0125]芯中的爆發(fā)控制劑優(yōu)選包含用于控制水滲入芯的速率和提高芯內(nèi)的內(nèi)部壓力(滲透壓力）的水不溶性聚合物。這類爆發(fā)控制劑優(yōu)選能夠在與液體接觸時(shí)溶脹。合適的水不溶性聚合物的非限制性實(shí)例包括交聯(lián)多糖、水不溶性淀粉、微晶纖維素、水不溶性交聯(lián)肽、水不溶性交聯(lián)蛋白質(zhì)、水不溶性交聯(lián)明膠、水不溶性交聯(lián)水解明膠、水不溶性交聯(lián)膠原、改性纖維素和交聯(lián)聚丙烯酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，水不溶性聚合物為選自以下的交聯(lián)多糖:藻酸鹽的不溶金屬鹽或交聯(lián)衍生物、果膠、黃原膠、瓜爾膠、西黃蓍膠和刺槐豆膠、角叉菜膠、其金屬鹽及其共價(jià)交聯(lián)衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，水不溶性聚合物為選自以下的改性纖維素:羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素的金屬鹽和羥丙基纖維素的交聯(lián)衍生物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，水不溶性聚合物選自果膠酸鈣、微晶纖維素或其組合。[0126]外層包含水不溶性疏水載體和由水不溶性親水微粒物質(zhì)組成的成孔劑。成孔劑為允許液體進(jìn)入芯的透水劑。任選外層另包含潤(rùn)濕劑、助懸劑、分散劑、硬化劑和增塑劑的至少一種。[0127]在某些實(shí)施方案中，水不溶性疏水載體選自丙烯酸二甲氨基乙酯/甲基丙烯酸乙酯共聚物，該共聚物基于具有低含量的季銨基團(tuán)的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯，其中銨基與其余的中性（甲基)丙烯酸酯的摩爾比率約為1:20,該聚合物相當(dāng)于USP/NF"銨基甲基丙烯酸酯共聚物A型"；甲基丙烯酸乙酯/氯三甲基銨乙基甲基丙烯酸酯共聚物，該共聚物基于具有低含量的季銨基團(tuán)的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯，其中銨基與其余的中性（甲基)丙烯酸酯的摩爾比率為1:40,該聚合物相當(dāng)于USP/NF"銨基甲基丙烯酸酯共聚物B型"；甲基丙烯酸二甲氨基乙酯/甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸丁酯共聚物，該共聚物基于中性甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯，其中聚合物在酸存在下為陽離子;丙烯酸乙酯和丙烯酸甲酯/甲基丙烯酸乙酯和甲基丙烯酸甲酯共聚物，該共聚物是基于中性甲基丙烯酸和丙烯酸酯的中性共聚物;乙基纖維素;蟲膠;玉米醇溶蛋白和蠟。[0128]在某些實(shí)施方案中，水不溶性微粒物質(zhì)是親水卻是水不溶性的聚合物，優(yōu)選選自水不溶性交聯(lián)多糖、水不溶性交聯(lián)蛋白質(zhì)、水不溶性交聯(lián)肽、水不溶性交聯(lián)明膠、水不溶性交聯(lián)水解明膠、水不溶性交聯(lián)膠原、水不溶性交聯(lián)聚丙烯酸、水不溶性交聯(lián)纖維素衍生物、水不溶性交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、不溶性淀粉、微晶淀粉和其組合。最優(yōu)選水不溶性微粒物質(zhì)是微晶纖維素。[0129]在某些實(shí)施方案中，爆發(fā)制劑在外層另包含腸溶包衣材料。腸溶包衣材料優(yōu)選選自醋酸鄰苯二甲酸纖維素、醋酸羥基丙基甲基纖維素琥珀酸酯和EUDRAGIT聚合物，例如EUDRAGITL100或EUDRAGITL30D-55。[0130]生物可降解制劑在一個(gè)實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑制劑包含易被至少一種結(jié)腸細(xì)菌酶降解的天然或合成聚合物。優(yōu)選GCC激動(dòng)劑嵌入聚合物基質(zhì)中。這類聚合物的非限制性實(shí)例包括多糖的聚合物，例如直鏈淀粉、脫乙酰殼多糖、硫酸軟骨素、環(huán)糊精、葡聚糖、瓜爾膠、果膠和木聚糖。優(yōu)選天然或合成聚合物被膠凝或與陽離子(例如來自硫酸鋅、氯化鋅或乙酸鋅的鋅陽離子)交聯(lián)。制劑優(yōu)選為離子交聯(lián)珠粒的形式，所述珠粒隨后用腸溶包衣材料進(jìn)行包衣。腸溶包衣材料可包含任何合適的腸溶包衣材料，例如羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、醋酸羥基丙基甲基纖維素琥珀酸酯、藻酸和藻酸鈉或EUDRAGIT聚合物。[0131]在另一個(gè)實(shí)施方案中，GCC激動(dòng)劑制劑包含與載體分子共價(jià)綴合的GCC激動(dòng)劑，使得GCC激動(dòng)劑和載體間的共價(jià)鍵在胃和小腸中是穩(wěn)定的，但在下胃腸道(尤其在結(jié)腸）中是不穩(wěn)定的。與載體分子共價(jià)連接的GCC激動(dòng)劑稱為"GCC前藥"。在某些實(shí)施方案中，GCC前藥包含通過偶氮鍵或糖苷鍵與載體分子共價(jià)綴合的GCC激動(dòng)劑。在其它實(shí)施方案中，GCC前藥包含葡糖苷酸、環(huán)糊精、葡聚糖酯或極性氨基酸。在某些實(shí)施方案中，GCC前藥為聚合前藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，聚合前藥包含含有偶氮基的聚酰胺。[0132]劑量本文所述GCRA肽可采用胃腸滯留型系統(tǒng)技術(shù)(GIRES;MerrionPharmaceuticals)配制。GIRES包含可充氣小袋內(nèi)的控釋劑型，所述袋被置于藥物膠囊中用于口服給藥。在膠囊溶解時(shí)，產(chǎn)氣系統(tǒng)使小袋在胃中充氣，在胃中保留16-24小時(shí)，一直釋放本文所述藥劑。[0133]可在滲透裝置(包括在公開于US4，503，030、US5，609，590和US5，358，502的滲透裝置中）配制本文所述GCRA肽。US4，503，030公開了用于將藥物分配到胃腸道的某些pH區(qū)的滲透裝置。更具體地講，該發(fā)明涉及包含由半滲透性pH敏感組合物形成的壁和穿過壁的通道的滲透裝置，該壁包圍含有藥物的室，該通道連接裝置外部與室。該裝置在pH小于3.5的胃腸道的區(qū)域以受控速率遞送藥物，而在大于3.5的pH的胃腸道區(qū)域，該裝置自毀并釋放其所有藥物，從而提供用于藥物吸收的總可用性。美國(guó)專利號(hào)5,609,590和5,358,502公開了用于將有益作用劑分配到水性環(huán)境的滲透爆發(fā)裝置。該裝置包含至少部分被半滲透膜包圍的有益作用劑和滲透劑(osmagent)。有益作用劑也可用作滲透劑。半滲透膜是可透水的，但基本透不過有益作用劑和滲透劑。使引發(fā)工具(triggermeans)與半滲透膜連接(例如連接兩個(gè)半膠囊節(jié)）。引發(fā)工具被pH3-9激活，引發(fā)有益作用劑最終的但是突然的遞送。這些裝置通過滲透爆發(fā)，使得能夠進(jìn)行pH引發(fā)的有益作用劑芯作為快速注射釋放。[0134]藥物組合物中活性成分的劑量水平也可改變，使得在受試者(尤其在炎癥部位或疾病區(qū)中和附近）中達(dá)到化合物的瞬時(shí)或持續(xù)的濃度，并產(chǎn)生所需反應(yīng)。盡在本領(lǐng)域技能中的是以低于達(dá)到所需作用所需要的水平開始化合物的劑量，逐漸增加劑量直到達(dá)到所需作用。應(yīng)了解的是，用于任何特定受試者的具體劑量水平可取決于各種因素，包括體重、一般健康狀況、飲食、疾病自然史、給藥途徑和給藥方案、與一種或多種其它藥物的組合和疾病的嚴(yán)重程度。[0135]組合物的有效劑量通?？山橛诩s1yg和約10mg/千克體重之間，優(yōu)選介于約10μg與5mg化合物/千克體重之間。劑量調(diào)整可采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法進(jìn)行，并可基于正使用的特定組合物和臨床考量。[0136]可口服、全身或局部給予用于上述方法的鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑。劑型包括吸入或注射的制劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、片劑、膠囊劑、局部油膏劑和洗劑、經(jīng)皮組合物、其它已知的肽制劑和聚乙二醇化肽類似物。激動(dòng)劑可作為唯一的活性劑或與其它藥物(例如依賴cGMP的磷酸二酯酶的抑制劑和抗炎藥)組合給予。在所有情況下，應(yīng)采用現(xiàn)有技術(shù)作為指導(dǎo)以治療有效的劑量給予其它藥物。藥物可以單一組合物給予或序貫給予。[0137]用于本發(fā)明方法的GCR激動(dòng)劑的劑量水平通常為每日約0.001mg-約10,000mg，優(yōu)選每日約0.005mg-約1，000mg。例如，用于本發(fā)明方法的GCRA肽的有效劑量為每天約0.1、約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.5、約2.0、約2.5、約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.5、約6.0、約6.5、約7.0、約7.5、約8.0、約8.5、約9.0、約9.5、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19或約20mg，或任選一天兩次。優(yōu)選GCRA肽餐后給予（即30分鐘）。在一些實(shí)施方案中，給予可用于治療脂質(zhì)代謝障礙、膽囊病癥、心血管病、肥胖病或內(nèi)分泌障礙的第二藥劑。本文描述了合適的第二藥劑。在一些方面，以小于用于治療特定病癥的標(biāo)準(zhǔn)劑量給予第二藥劑，因?yàn)镚CRA肽與第二藥劑協(xié)同作用。例如，一天兩次在餐后（即30分鐘）給予約2.5、約5、約7.5或約10mgLiptor。在或以單劑量或以分劑量給予的mg/kg每日劑量的基礎(chǔ)上，劑量范圍通常為約0.001/75mg/kg-約10,000/75mg/kg、優(yōu)選約0.005/75mg/kg-約1,000/75mg/kg。[0138]各抑制劑的總?cè)談┝靠梢詥蝿┝炕蛞远鄠€(gè)分劑量給予患者。通常，分劑量可每天給予2-6次，優(yōu)選每天2-4次，甚至更優(yōu)選每天2-3次。劑量可呈充分有效獲得對(duì)醫(yī)學(xué)病況的所需控制的即釋形式或緩釋形式。[0139]根據(jù)各種因素，選擇用本發(fā)明的組合和組合物預(yù)防、治療、免除或改善醫(yī)學(xué)病況或病癥或以別的方式防止或治療醫(yī)學(xué)病況的劑量方案。這些因素包括但不限于受試者的類型、年齡、體重、性別、飲食和醫(yī)學(xué)病況、疾病的嚴(yán)重程度、給藥途徑、例如所用特定抑制劑的活性、功效、藥代動(dòng)力學(xué)和毒理學(xué)特征等藥理學(xué)考量、是否使用藥物遞送系統(tǒng)和抑制劑是否與其它活性成分一起給予。因此，實(shí)際采用的劑量方案可在很大程度上變化，因此偏離上文給出的優(yōu)選的劑量方案。實(shí)施例[0140]實(shí)施例1:大鼠中用尿鳥苷肽的類似物SP-333口服治療通過鳥苷酸環(huán)化酶-C和囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子的活化緩解嗎啡和美沙酮誘導(dǎo)的便秘阿片樣物質(zhì)廣泛用于治療慢性疼痛，但其消耗常常與標(biāo)準(zhǔn)輕瀉藥對(duì)其不是非常有效的人的嚴(yán)重便秘有關(guān)。這種副作用被認(rèn)為是由于流體分泌減少，影響了胃腸(GI)蠕動(dòng)和大便(BM)所致。發(fā)生阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙的機(jī)制見圖2。因此，需要能夠緩解多種阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘的安全的可口服給藥的藥理學(xué)作用劑。[0141]SP-333，一種尿鳥苷肽的類似物，激活GC-C以刺激環(huán)狀GMP的產(chǎn)生，其進(jìn)而激活囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)這種負(fù)責(zé)氯離子從內(nèi)襯胃腸(GI)道的腸細(xì)胞中流出的頂端氯離子通道，導(dǎo)致水分凈流出進(jìn)入腸腔以利于大便和GI蠕動(dòng)（Shailubhai，2002;Forte，2004;Basu等，2010;Steinbrecher，2014)〇[0142]該研究表明SP-333作為用于治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘(0IC)的口服藥物療法的可能性。甚至在嗎啡或美沙酮的存在下，用SP-333治療也引起短路電流(Isc)跨越T84細(xì)胞單層和大鼠空腸組織的濃度依賴性增加。I%的這種增加似乎通過激活蛋白質(zhì)激酶G-II和囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子的GC-C/cGMP機(jī)制而介導(dǎo)。在大鼠研究中，每日腹膜內(nèi)給予美沙酮持續(xù)7天在GI運(yùn)送中產(chǎn)生明顯延遲，導(dǎo)致每日排便大大減少?？诜o予的SP-333完全恢復(fù)由嗎啡或美沙酮引起的GI運(yùn)送延遲。用SP-333口服治療（2.5和5mg/kg/天)不僅僅使GI運(yùn)送正常，而且還部分恢復(fù)排便。[0143]材料與方法細(xì)胞培養(yǎng):T84,人癌細(xì)胞系，購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)(]\&1仙8838，￥4，1^4)。按所述(51^丨111^^丨等，2000)，將細(xì)胞培養(yǎng)在含有10%胎牛血清（AtlantaBiologicals，F(xiàn)loweryBranch，GA)、l%青霉素/鏈霉素(Invitrogen，Car1sbad，CA)和1%glutamax(Invitrogen，Car1sbad，CA)的DMEM/F-12培養(yǎng)基(FisherScientific，Pittsburgh，PA)中。對(duì)于Ussing室實(shí)驗(yàn)，以~150，000個(gè)細(xì)胞/插入皿的接種密度使細(xì)胞在12mm可滲透聚酯膜(孔徑0.4μπι)Snapwell插入皿（CLS3801，Sigma，SaintLouis，M0)上生長(zhǎng)，并在5%C02的潮濕環(huán)境于37°C溫育。[0144]動(dòng)物：根據(jù)MBResearchLabs(Spinnerstown，PA)或LampireBiologicalLaboratories(Pipersvilie，PA)的公共機(jī)構(gòu)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)（InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)批準(zhǔn)的研究概要進(jìn)行所有研究程序。7-8周齡雌性Sprague-Dawley大鼠[Crl:CD(SD)]，體重為~180-210克，獲自CharlesRiverLaboratories，并允許適應(yīng)一周。使動(dòng)物保持在12小時(shí)光-暗周期下。對(duì)于腸組織收集和GI運(yùn)送評(píng)價(jià)，在實(shí)驗(yàn)前使大鼠禁食至少18小時(shí)，但自由飲水。[0145]大鼠組織收獲:通過⑶2吸入使大鼠安樂死。進(jìn)行中線剖腹術(shù)。確定特賴茨氏韌帶遠(yuǎn)端Ι-cm的空腸近端5-cm區(qū)，切下，并轉(zhuǎn)移到冰冷的含有吲哚美辛（10μΜ)的RPMI培養(yǎng)基中。10分鐘后，將組織轉(zhuǎn)移到無吲哚美辛的新鮮的冰冷RPMI培養(yǎng)基中。如下所述，將組織釘在解剖墊上，沿腸系膜邊緣切割，頂面面朝上，固定在Ussing室滑板上。[0146]短路電流測(cè)量：I5C測(cè)量在具有VCCMC8多通道電流電壓（I-V)鉗（PhysiologicInstruments，SanDiego，CA)的EasyMountUssing室系統(tǒng)（4室）中進(jìn)行。使用EV0M上皮伏特歐姆計(jì)(EMDMillipore，MA)，定期監(jiān)測(cè)跨培養(yǎng)在透性膜上的細(xì)胞單層的跨上皮電阻(TER)。使用TER>1000ohm.cm2的匯合的T84細(xì)胞。將細(xì)胞和組織固定在由PhysiologicInstruments提供的特定滑板（1.12cm2狹縫面積用于細(xì)胞，0.5cm2用于組織)上，并固定在Ussing室中。將各室連續(xù)用KrebsRinger緩沖溶液沖洗?；淄庠∫汉幸詍M計(jì)）115NaCl、25NaHC03、3.3KH2P〇4、0.8K2HP〇4、1.12MgCh、1.2CaCl2和10ifepes(Cuppoletti等，2004)。為了檢查SP-333或特定抑制劑對(duì)頂端膜上的氯離子通道的作用，通過用相等濃度的葡糖酸鈉替換與頂端膜接觸的緩沖液中的NaCl，強(qiáng)制施加基底外到頂端氯離子梯度。由于葡糖酸鹽螯合Ca2+離子，因此CaCl2濃度提高到-MdBijvelds等，2009)。將緩沖液溶液用碳合氣(95%02和5%C02的混合物)連續(xù)充氣，用加熱器使溫度在37°C下保持恒定。使鉗與Acquire&Analyze軟件(PhysiologicInstruments)連接用于所有4個(gè)室的自動(dòng)數(shù)據(jù)收集。使用Ag/AgCl參比電極用于測(cè)量跨上皮電壓和通過電流。[0147]為了評(píng)價(jià)跨越T84細(xì)胞單層(n=4個(gè)跨孔/濃度)和大鼠空腸組織(n=4個(gè)制備物/濃度）的SP-333I%，在基線穩(wěn)定后將規(guī)定量的激動(dòng)劑加入頂端緩沖溶液中，記錄峰值活性，并以iWyA/cn^)土SEM作圖。通過用阿片樣物質(zhì)預(yù)處理頂側(cè)的細(xì)胞(n=3個(gè)跨孔/阿片樣物質(zhì)濃度)和大鼠空腸(n=4-15個(gè)制備物/阿片樣物質(zhì)濃度）5分鐘，來測(cè)定嗎啡或美沙酮對(duì)SP-333刺激的1%的作用（Cuppoletti等，2013)。隨后，將ΙμΜSP-333加入頂側(cè)的緩沖液中，測(cè)量經(jīng)刺激的電流的峰值活性，表示為氯離子電流(1%)(相對(duì)于溶媒對(duì)照）±SEM。為了評(píng)價(jià)ΡΚΑ和PKG-II所起的作用，并鑒定CFTR和CIC-2對(duì)激動(dòng)劑介導(dǎo)的C1-離子的釋放的相對(duì)貢獻(xiàn)，在激酶和CT通道抑制劑存在和不存在時(shí)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。所用抑制劑為CdC12(CIC-2抑制劑；Sigma-Aldrich;StLouis，M0)、CFTRinh172(CFTR抑制劑；SantaCruzBiotech;Dallas，Texas)、KT5823(PKG抑制劑；R&DSystems，Minneapolis，MN)、mPKI(PKA抑制劑;EMDMillipore;Billerica，MA)。在加入1mMSP-333之前，將T84細(xì)胞(n=4個(gè)跨孔/條件)和空腸組織(n=4-6個(gè)制備物/條件）用規(guī)定濃度的各抑制劑預(yù)處理5分鐘。記錄在加入SP-333后達(dá)到的峰值電流，以百分比相對(duì)活性土SEM為單位計(jì)算。[0148]SP-333對(duì)大鼠中阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的GI運(yùn)送延遲的作用：通過經(jīng)IP注射給予0(溶媒）、0.25、1和2.511^/1^嗎啡或0(溶媒）、0.25、2.5和51^/1^美沙酮（1.51111/1^劑量體積），測(cè)試阿片樣物質(zhì)延遲大鼠的GI運(yùn)送的能力。水用作溶媒對(duì)照。10分鐘后，通過經(jīng)口管飼給予2mL由水中的10%活性炭(Sigma-Aldrich,St.Louis,M0)和10%阿拉伯樹膠(Sigma-Aldrich,St.Louis,M0)組成的活性炭餐。在活性炭餐后10分鐘通過IP注射150mg/kgBeuthanasia-D溶液(戊巴比妥鈉，390mg/mL)使大鼠安樂死。取出小腸，記錄從幽門括約肌到回盲連接的總長(zhǎng)度，以及由活性碳的前沿移動(dòng)的距離。通過計(jì)算幽門括約肌和活性碳前沿之間的距離與幽門括約肌和回盲連接間的距離的比率(表示為百分比）測(cè)定腸運(yùn)送。[0149]為了評(píng)價(jià)SP-333逆轉(zhuǎn)嗎啡誘導(dǎo)的延緩GI運(yùn)送的能力，在0(溶媒）、0·5、2·5、5和50mg/kgSP-333(1.5ml/kg劑量體積）的經(jīng)口管飼之后，立即通過IP注射給予動(dòng)物2.5mg/kg嗎啡。水用作溶媒對(duì)照。如上所述10分鐘后給予活性碳餐，在活性碳餐后10分鐘，使動(dòng)物安樂死，并計(jì)算腸運(yùn)送。[0150]為了評(píng)價(jià)SP-333逆轉(zhuǎn)美沙酮誘導(dǎo)的延緩GI運(yùn)送的能力，通過IP注射給予動(dòng)物2.5mg/kg美沙酮。10分鐘后，在2mL活性碳餐的經(jīng)口管飼后，立即經(jīng)口管飼給予0(溶媒）、0.1、0.5、2.5、5和50mg/kgSP-333(1.5ml/kg劑量體積）。在活性碳餐后10分鐘，如上所述使動(dòng)物安樂死，并計(jì)算腸運(yùn)送。[0151]還以類似方式，評(píng)價(jià)了SP-333減輕通過重復(fù)給予美沙酮誘導(dǎo)的GI運(yùn)送延遲的能力。雌性Sprague-DawleyCD大鼠7-8周齡(n=7/組)接受通過IP注射的16劑的美沙酮(每日一次;5mg/kg7劑，2.5mg/kg9劑）。在各美沙酮?jiǎng)┝亢?0分鐘，各組接受經(jīng)口管飼的溶媒、2.5和5mg/kgSP-333。在給藥方案結(jié)束時(shí)，使動(dòng)物禁食過夜，如上所述評(píng)價(jià)GI運(yùn)送。[0152]SP-333對(duì)大鼠的美沙酮誘導(dǎo)的便秘的作用：為了鑒定引起大鼠便秘的美沙酮?jiǎng)┝浚ㄟ^IP注射一天一次給予7-8周齡雌性Sprague-Dawley⑶大鼠（n=6/組）0(溶媒）、2.5、5和7.5mg/kg美沙酮（1.5ml/kg劑量體積)持續(xù)5天。在研究進(jìn)程期間，在美沙酮的每日劑量給予后，在光周期期間以4小時(shí)間隔收集糞粒，并記錄各組糞粒的平均數(shù)。[0153]為了評(píng)價(jià)SP-333緩解美沙酮誘導(dǎo)的便秘的能力，通過IP注射每天給予7-8周齡雌性Sprague-Dawley⑶大鼠（n=7/組）5mg/kg美沙酮(或溶媒)達(dá)7天以誘導(dǎo)便秘。在每天IP劑量后10分鐘，經(jīng)口管飼給予2.5和5mg/kgSP-333或溶媒(緩沖液）。在研究進(jìn)程中在每日給予溶媒、美沙酮或美沙酮和SP-333的組合后，在光周期期間以4小時(shí)間隔收集糞粒，并記錄各組糞粒的平均數(shù)。[0154]統(tǒng)計(jì)分析:應(yīng)用GraphPadPrism(6.01版)計(jì)算匯總統(tǒng)計(jì)和推理檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)表示為均值土SEM和通過雙尾斯氏?檢驗(yàn)評(píng)價(jià)對(duì)照組和治療組間的差異的顯著性。[0155]結(jié)果Τ84細(xì)胞和大鼠空腸中通過SP-333的C1-電流的PKG-II和CFTR通道依賴性刺激:SP-333刺激T84細(xì)胞和大鼠空腸中的Cr電流(表示為升高）。結(jié)果見圖3。在與T84細(xì)胞（圖3A)或大鼠空腸（圖3Β)的粘膜表面接觸的緩沖溶液中加入SP-333(0.01-10μΜ)導(dǎo)致I%的濃度依賴性提高，在兩種情況下在10μΜ下接近飽和。空腸組織的總體Isc比T84細(xì)胞所觀察到的高得多。然而，誘導(dǎo)跨越T84細(xì)胞單層(EC5Q=1.69X10-7M)或空腸組織(EC5Q=2.99X10-7Μ)的I%的50%提高的SP-333濃度相當(dāng)。[0156]在T84細(xì)胞中，與僅1μΜSP-333所觀察到的相比，在10μΜCFTRinh172存在下觀察到SP-333刺激的I%的80%抑制（圖4A)。在PKG-II抑制劑(4μΜ)存在時(shí)相對(duì)I%也被抑制達(dá)約35%(圖4Α)。在CIC-2抑制劑、CdCl2(300μΜ)和3.2μΜ蛋白質(zhì)激酶A(mPKI-)抑制劑存在時(shí)，未觀察到刺激的I%的可觀降低（圖4A)。用大鼠空腸觀察到類似模式，雖然與在T84細(xì)胞中檢測(cè)的相比，用等量的CFTRinhl72的抑制幅度較?。▓D4B)?？傊?，結(jié)果表明在模型細(xì)胞系統(tǒng)以及在大鼠組織中，對(duì)于SP-333介導(dǎo)的I%提高需要激活的PKG-II和CFTR通道。[0157]嗎啡和美沙酮對(duì)SP-333刺激的C1-電流的作用：在T84細(xì)胞和大鼠空腸中，評(píng)價(jià)了嗎啡和美沙酮的選定濃度對(duì)SP-333刺激的I%的作用。結(jié)果見圖5(嗎啡）和圖6(美沙酮)。[0158]頂端膜用5μΜ嗎啡預(yù)處理對(duì)來自T84細(xì)胞和大鼠空腸組織的1μΜSP-333刺激的Isc的作用可忽略（圖5)。同樣用5μΜ美沙酮預(yù)處理的T84細(xì)胞和大鼠空腸對(duì)SP-333介導(dǎo)的電流無作用（圖6A和B)。[0159]口服給予SP-333對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的大鼠GI運(yùn)送延遲的作用：觀察到與溶媒對(duì)照相比，在SP-333的單一經(jīng)口管飼劑量后小腸運(yùn)送劑量依賴性增強(qiáng)(在0.05mg/kg、0.5mg/kg和5mg/kg下分別為5.6%、13%、23%-參見圖7)，表明在阿片樣物質(zhì)幼稚動(dòng)物中，僅SP-333治療引起GI運(yùn)送增強(qiáng)(Joshi等，2014)。腹膜內(nèi)（IP)給予嗎啡顯著降低大鼠的GI運(yùn)送（圖8A)。與溶媒對(duì)照相比，在0.25、1.0和2.5mg/kg的阿片樣物質(zhì)下，在單一嗎啡劑量后GI運(yùn)送分別減慢52%、56%和56%。[0160]為了評(píng)價(jià)SP-333緩解嗎啡誘導(dǎo)的延緩的GI運(yùn)送的能力，通過IP注射給予動(dòng)物2.5mg/kg嗎啡，接著立即通過經(jīng)口管飼給予0(溶媒）、0.5、2.5、5和5〇11^/1^3?-333。10分鐘后使動(dòng)物安樂死，按在材料與方法下所述計(jì)算GI運(yùn)送。嗎啡顯著降低GI運(yùn)送(23%與溶媒處理的53%;p〈0.0001)(圖8B)。在嗎啡治療的大鼠中，SP-333產(chǎn)生腸運(yùn)送的劑量依賴性改善：在0·5、2·5、5和50mg/kg下分別為27%、37%、46%和48%(與僅嗎啡相比，在所有劑量下P彡0·0001，0·5mg/kg除外）。結(jié)果表明5mg/kg的SP-333劑量足以緩解嗎啡對(duì)GI運(yùn)送的作用。GI運(yùn)送均值土SEM見圖8B。[0161]口服給予SP-333對(duì)美沙酮誘導(dǎo)的大鼠GI運(yùn)送延遲的作用:腹膜內(nèi)給予美沙酮顯著降低大鼠的GI運(yùn)送。2.5mg/kg的美沙酮?jiǎng)┝孔阋燥@著降低GI運(yùn)送。此外，結(jié)果與用2.5mg/kg嗎啡觀察到的相當(dāng)（相對(duì)于相應(yīng)的溶媒對(duì)照，美沙酮和嗎啡分別為49%和56%)。61運(yùn)送均值土SEM見圖9A。[0162]為了評(píng)價(jià)SP-333緩解美沙酮誘導(dǎo)的GI運(yùn)送延緩的能力，通過IP注射給予動(dòng)物2.5mg/kg美沙酮。10分鐘后，經(jīng)口管飼給予0(溶媒）、0.5、2.5、5和5011^/1^3?-333。10分鐘后使動(dòng)物安樂死，按在材料與方法下所述計(jì)算GI運(yùn)送。美沙酮顯著降低GI運(yùn)送(28%相對(duì)于溶媒處理中的55%;P〈0.0001)。如圖9B所示，在美沙酮處理的大鼠中給予SP-333產(chǎn)生腸運(yùn)送的劑量依賴性改善:在〇.5、2.5、5和50mg/kg下分別為40%、39%、44%和52%(P〈0.01，在所有劑量下）。這些數(shù)據(jù)表明5mg/kg的SP-333劑量足以緩解美沙酮對(duì)GI運(yùn)送的作用。GI運(yùn)送均值土SEM見圖9B。[0163]口服給予SP-333對(duì)大鼠中因重復(fù)給予美沙酮誘導(dǎo)的便秘的作用：大鼠中通過IP每日一次給予2.5、5和7.5mg/kg美沙酮達(dá)5天的時(shí)間誘導(dǎo)便秘。與溶媒組相比，在光周期期間在4小時(shí)時(shí)間內(nèi)收集的糞粒的平均數(shù)在美沙酮給藥動(dòng)物組中顯著較低;在2.5、5和7.5mg/1^下分別低29%、77%和54%(?〈0.01，在所有劑量下）（圖1(^)。在511^/1^劑量下觀察到美沙酮對(duì)排便的最顯著的作用。為了評(píng)價(jià)SP-333緩解美沙酮誘導(dǎo)的便秘的能力，通過IP注射每日一次給予動(dòng)物5.0mg/kg美沙酮達(dá)7天的時(shí)間。在給予阿片樣物質(zhì)后10分鐘，每天經(jīng)口管飼給予〇(溶媒）、2.5和5mg/kgSP-333，在光周期期間在4小時(shí)期限內(nèi)監(jiān)測(cè)排便。如圖10B所示，在僅用美沙酮給藥的動(dòng)物中觀察到糞粒的平均數(shù)顯著減少(相對(duì)于溶媒對(duì)照少82%)。與美沙酮給藥組相比，在SP-333的所有劑量下糞粒的平均數(shù)均較高。與不接受任何SP-333的美沙酮給藥組所觀察到的相比，在2.5mg/kg的SP-333下觀察到糞粒計(jì)數(shù)的3倍增加，表明SP-333緩解在重復(fù)給予美沙酮后大鼠的便秘。另外，給予SP-333減輕因重復(fù)給予美沙酮引起的GI運(yùn)送延遲(圖11)。[0164]討論用T84細(xì)胞和大鼠空腸進(jìn)行的Ussing室實(shí)驗(yàn)表明SP-333介導(dǎo)的短路電流的刺激依賴于功能性PKG-II和CFTR通道。體內(nèi)動(dòng)物模型研究進(jìn)一步證實(shí)，口服給予的SP-333能夠減輕在大鼠中通過單次或重復(fù)給予阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的GI運(yùn)送延遲，以及緩解通過重復(fù)給予美沙酮誘導(dǎo)的便秘。[0165]圖12提供了GC-C激動(dòng)劑籍以緩解阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的GI運(yùn)送延遲和便秘的機(jī)制。外周表達(dá)的阿片樣物質(zhì)受體被嗎啡和美沙酮激活引發(fā)下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，這導(dǎo)致cAMP合成酶、腺苷酸環(huán)化酶的抑制和例如乙酰膽堿、物質(zhì)P和血管活性腸肽的神經(jīng)遞質(zhì)的釋放(Sobczak等，2013)。因此，胃排空受抑制，GI運(yùn)送和蠕動(dòng)受損，分泌減少伴以腸腔流體和電解質(zhì)的吸收同時(shí)增加，導(dǎo)致了OIBD的出現(xiàn)（Holzer，2009;M?ller-Lissner，2010;Sobczak等，2013)。由SP-333引起的頂端表達(dá)的腸上皮細(xì)胞GC-C受體的參與促進(jìn)胞內(nèi)CGMP的合成和蓄積(Zhang等，2012)^這種第二信使具有影響細(xì)胞內(nèi)的多個(gè)效應(yīng)物的潛力；它可結(jié)合并激活PKG-II、直接或通過抑制磷酸二酯酶3間接激活蛋白質(zhì)激酶A(PKA)，這使cAMP水解成為AMPWKG-II和PKA可使CFTR通道磷酸化，并激活CFTR通道以促進(jìn)C1-離子流出，接著Na+和水被動(dòng)流出進(jìn)入腸腔，因此有助于大便。電生理數(shù)據(jù)表明，跨越T84細(xì)胞單層和大鼠空腸組織的I%的SP-333介導(dǎo)的提高是通過PKG-II和CFTR進(jìn)行的。PKA抑制劑(mPKI)和CIC-2抑制劑(CdCl2)的存在對(duì)來自細(xì)胞和組織的SP-333刺激的Isc具有最小作用。[0166]本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到或只是采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)便能夠確定本文所述具體實(shí)施方案的許多等同內(nèi)容。所述等同內(nèi)容欲包括在本文提供的權(quán)利要求書中。[0167]通過引用的結(jié)合本申請(qǐng)通過引用本文公開的所有出版物或參考文獻(xiàn)以其整體予以結(jié)合用于所有目的。[0168]參考文獻(xiàn)BarrettKE和KeelySJ(2000)Chloridesecretionbytheintestinalepithelium:molecularbasisandregulatoryaspects(腸上皮的氯離子分泌：分子基礎(chǔ)和調(diào)節(jié)方面）.AnnuRevPhysiol62:535-572。[0169]BasuN，ArshadN和VisweswariahSS(2010)ReceptorguanylylcyclaseC(GC-C):regulationandsignaltransduction(受體鳥苷酰環(huán)化酶C(GC-C):調(diào)節(jié)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）·MolCellBiochem334:67-80。[0170]BellTJ，Panch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銨類似物的相當(dāng)?shù)穆樽硇赞卓箘┬再|(zhì)）.LifeSci31:1271-127^[0193]MinerPB,SurowitzR,FogelR,Koltunff,DrossmanDA,CamilleriM,MangelA，BarrowL，JacobG和ShailubhaiK(2013)Plecanatide,anovelguanylatecyclase-C(GC-C)receptoragonist,isefficaciousandsafeinpatientswithchronicidiopathicconstipation(CIC):resultsfroma951patient，12week，multi-centertrial(新的鳥苷酸環(huán)化酶_C(GC-C)受體激動(dòng)劑Plecanatide在患有慢性特發(fā)性便秘(CIC)的患者中是安全和有效的:來自12周多中心試驗(yàn)的951名患者的結(jié)果）·Gastroenterology144:S-263(文摘925g)〇[0194]Muller-LissnerS(2010)Opioid-inducedConstipation-Meehanisms,RelevanceandManagement(阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘一機(jī)制、關(guān)聯(lián)性和管理）.EurGastroenterolHepatolRev6:54-57〇[0195]NighotPK，MoeserAJ，RyanKA，GhashghaeiT和BlikslagerAT(2009)C1C-2isrequiredforrapidrestorationofepithelialtightjunctionsinischemic-injuredmurinejejunum(缺血性損傷的鼠空腸中上皮緊密連接處快速恢復(fù)需要C1C-2).ExpCellRes315:110-118。[0196]PappagalloΜ(2001)Incidence,prevalence,andmanagementofopioidboweldysfunction(阿片樣物質(zhì)腸功能障礙的發(fā)生率、流行性和管理）.AmJSurg182:llS-18S〇[0197]Pena-MunzenmayerG，CatalanM，CornejoI，F(xiàn)igueroaCD，MelvinJE，NiemeyerMI,CidLP和SepulvedaFV(2005)BasolaterallocalizationofnativeC1C-2chloridechannelsinabsorptiveintestinalepithelialcellsandbasolateralsortingencodedbyaCBS-2domaindi-leucinemotif(吸收性腸上皮細(xì)胞中的天然C1C-2氯離子通道的基底外定位和由CBS-2結(jié)構(gòu)域二亮氨酸基序編碼的基底外分選）·JCellSci118:4243-4252。[0198]Penning-vanBeestFJ，vandenHaakP，KlokRM，PrevooYF，vanderPeetDL和HeringsRM(2010)Qualityoflifeinrelationtoconstipationamongopioidusers(阿片樣物質(zhì)使用者中與便秘有關(guān)的生命質(zhì)量）.Journalofmedicaleconomics13:129-135〇[0199]QuigleyC(2005)Theroleofopioidsincancerpain(阿片樣物質(zhì)在癌癥疼痛中的作用）.BMJ331:825-829。[0200]RauckRL(2013)TreatmentofOpioid-InducedConstipation:FocusonthePeripheralmu-OpioidReceptorAntagonistMethylnaltrexone(阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘的治療:集中于外周μ-阿片樣物質(zhì)受體拮抗劑甲基納曲酮）.Drugs73:1297-1306。[0201]ShailubhaiK(2002)Therapeuticapplicationsofguanylatecyclase-Creceptoragonists(鳥苷酸環(huán)化酶_C受體激動(dòng)劑的治療應(yīng)用）·CurrOpinDrugDiscovDevel5:261-268〇[0202]ShailubhaiK，ComiskeyS，F(xiàn)ossJA，F(xiàn)engR，BarrowL，ComerGM和JacobGS(2013)Plecanatide，anoralguanylatecyclaseCagonistactinglocallyinthegastrointestinaltract,issafeandwell-toleratedinsingledoses(單劑量的胃腸道中局部起作用的口服鳥苷酸環(huán)化酶C激動(dòng)劑Plecanatide是安全和耐受性良好的）·DigDisSci58:2580-2586。[0203]ShailubhaiK,YuHH,KarunanandaaK,WangJY,EberSL,WangY,JooNS，KimHD，MiedemaBW，AbbasSZ，BoddupalliSS，CurrieMG和ForteLR(2000)UroguanylintreatmentsuppressespolypformationintheApc(Min/+)mouseandinducesapoptosisinhumancolonadenocarcinomacellsviacyclicGMP(尿鳥昔肽治療抑制Apc(Min/+)小鼠中的息肉形成并通過環(huán)狀GMP誘導(dǎo)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞的凋亡）.CancerRes60:5151-5157.SobczakM，SalagaM，StorrM和FichnaJ(2013)Physiology,signaling,andpharmacologyofopioidreceptorsandtheirligandsinthegastrointestinaltract:currentconceptsandfutureperspectives(胃腸道中阿片樣物質(zhì)受體及其配體的生理學(xué)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和藥理學(xué)：當(dāng)前概念和未來遠(yuǎn)景）.JGastroenterol。[0204]SteinbrecherKA(2014)ThemultiplerolesofguanylatecyclaseC，aheatstableenterotoxinreceptor(熱穩(wěn)定性腸毒素受體鳥苷酸環(huán)化酶C的多重作用）.Currentopinioningastroenterology30:1_6〇[0205]SteinbrecherKA和CohenMB(2011)Transmembraneguanylatecyclaseinintestinalpathophysiology(腸病理生理學(xué)中的跨膜鳥苷酸環(huán)化酶）.Currentopinioningastroenterology27:139_145〇[0206]SunX,WangX,WangGD,XiaY,LiuS,QuM,NeedlemanBJ,MikamiDJ,MelvinWS，BohnLM，UenoR和WoodJD(2011)Lubiprostonereversestheinhibitoryactionofmorphineonmucosalsecretioninhumansmallintestine(盧比前列酮逆轉(zhuǎn)嗎啡對(duì)人小腸中的粘膜分泌的抑制作用）.DigDisSci56:330-338。[0207]SykesNP(1998)Therelationshipbetweenopioiduseandlaxativeuseinterminallyillcancerpatients(臨終疾病癌癥患者中阿片樣物質(zhì)使用和輕瀉藥使用之間的關(guān)系）.PalliatMed12:375-382。[0208]ThiagarajahJR，BroadbentT，HsiehE和VerkmanAS(2004)Preventionoftoxin-inducedintestinalionandfluidsecretionbyasmall-moleculeCFTRinhibitor(通過小分子CFTR抑制劑防止毒素誘導(dǎo)的腸離子和流體分泌）.Gastroenterology126:511_519〇[0209]WangG-D，WangX，QuM-H，XiaY和WoodJD(2014)414ReversalofOpioid-InducedConstipationbyLubiprostone(Amitiza?)inGuineaPigIleum(豚鼠回腸中通過盧比前列酮（Amitiza?)逆轉(zhuǎn)阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的便秘）.Gastroenterology146:S_89〇[0210]WongBS和CamilleriΜ(2011)Lubiprostoneforthetreatmentofopioid-inducedboweldysfunction(用于治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能障礙的盧比前列酮）.ExpertOpinPharmacother12:983-990〇[0211]ZhangG，ArjunanKP，F(xiàn)ossJ，ComiskeyS和ShailubhaiK(2012)SP-333，aProteolysis-resistantAgonistofGuanylateCyclase-C,InhibitsActivationofNF-kappaBandSuppressesProductionofInflammatoryCytokinestoAmeliorateDSS-inducedColitisinMice(鳥苷酸環(huán)化酶_C的耐蛋白酶解的激動(dòng)劑SP-333抑制NF-κΒ的活化并抑制炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生以改善小鼠的DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎）.AmJGastroenterol107:S626-S626〇【主權(quán)項(xiàng)】1.一種預(yù)防、治療阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的病況或緩解阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的功能障礙的癥狀的方法，所述方法包括給予有需要的受試者治療有效量的包含基本上由表2-8的任一個(gè)的氨基酸序列組成的鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽的組合物。2.權(quán)利要求1中任一項(xiàng)的方法，所述方法進(jìn)一步包括給予有效劑量的依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑選自舒林砜、扎普司特、莫他匹酮、伐地那非和西地那非。4.權(quán)利要求2的方法，其中所述依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑與所述GCRA肽或其藥物組合物同時(shí)或序貫給予。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述GCRA肽為SEQIDNO:1(SP-304)、SEQIDNO:9(SP-333)、SP373(SEQIDNO:104)、SP364(SEQIDNO:100)、SP366(SEQIDNO:102)或SEQIDNO:250。6.-種組合物，其包含基本上由表2-8的任一個(gè)的氨基酸序列組成的鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽。7.權(quán)利要求6的組合物，其進(jìn)一步包含有效劑量的依賴cGMP的磷酸二酯酶抑制劑。8.-種組合物，其包含阿片樣物質(zhì)和基本上由表2-8的任一個(gè)的序列組成的鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽。9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述阿片樣物質(zhì)和鳥苷酸環(huán)化酶受體激動(dòng)劑(GCRA)肽以一個(gè)片劑或膠囊劑給予。10.權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)的組合物，其進(jìn)一步包含選自以下的一種或多種靶向物質(zhì)：pH依賴性聚合物、可膨脹聚合物和可降解組合物。11.權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)的組合物，其進(jìn)一步包含藥用載體、賦形劑或稀釋劑。12.權(quán)利要求10的組合物，其中使所述制劑優(yōu)化以遞送至十二指腸、空腸、回腸、回腸末端或升結(jié)腸。13.權(quán)利要求10的組合物，其中使所述制劑優(yōu)化以在整個(gè)結(jié)腸中釋放。14.權(quán)利要求10的組合物，其中所述制劑包含一種或多種在4.5-5.5的pH范圍下、在5.5-6.5的pH范圍下或在6.5-7.5的pH范圍下降解的pH依賴性聚合物。15.權(quán)利要求10的組合物，其中所述組合物的釋放是時(shí)間依賴性的。16.權(quán)利要求8的組合物，其中所述阿片樣物質(zhì)選嗎啡、可待因、羥考酮、氫可酮、二氫可待因、丙氧芬、芬太尼、曲馬多、洛哌丁胺、布托啡諾或其組合?！疚臋n編號(hào)】A61K38/10GK106061494SQ201480067381【公開日】2016年10月26日【申請(qǐng)日】2014年10月10日【發(fā)明人】K.謝盧布海,V.佩爾瓦拉【申請(qǐng)人】辛納吉制藥公司