專利名稱：活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細胞障礙抑制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細胞障礙抑制劑。
背景技術：
近年來，活性氧，尤其作為使生物體氧化的因素而為人們所知，但是，對生物體的 不良影響正成為一個問題?；钚匝踉谏矬w細胞內能量代謝過程中產(chǎn)生，可以分為過氧化 物(即氧分子的電子還原中產(chǎn)生的過氧化物陰離子· 02-)、雙氧水(H202)、乙烯基自由 基(·0Η)以及純態(tài)氧C02)等。這些活性氧是吞噬細胞的殺菌機構所必須的，在驅除細菌、 癌細胞過程中發(fā)揮重要作用。但是，活性氧的過量生成攻擊構成生物體內膜和組織的生物體內分子，誘發(fā)各種 疾病。由于細胞內所含過氧化物歧化酶(SOD)的催化作用，通常，在生物體內產(chǎn)生并成為其 他活性氧促發(fā)物質的過氧化物逐漸被清除。當過氧化物的產(chǎn)生過?；蛘逽OD的作用降低 時，則過氧化物的清除不充分，過氧化物的濃度增高，將引起類風濕性關節(jié)炎等組織障礙、 心肌梗塞、腦中風、白內障、皺紋、糖尿病、動脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等。尤其是因皮膚直接接受紫外線等環(huán)境因素的刺激，過氧化物容易影響器官，所以， 通過過氧化物濃度的上升，例如分解膠原蛋白等生物體組織、變形、架橋，生成能氧化各種 油脂、障礙細胞的過氧脂質，由活性氧引起的障礙成為皮膚皺紋、皮膚彈性降低等老化的原 因；所以，通過抑制活性氧、生物體內自由基的生成，可以預防、治療或改善皺紋形成、彈性 降低等皮膚老化、類風濕性關節(jié)炎、貝切特氏病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風、白內障、糖 尿病、動脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧參與的各種障礙?；钚匝跄芤鹧装Y、過氧脂質的生成、各種酶失去活性、DNA受損等。這些氧化的 細胞障礙被認為是皮膚粗糙、皺紋形成、皮膚彈性降低等皮膚老化的一個原因。所以，基于安全考慮，試圖將活性氧清除物質、自由基清除物質等從合適的天然物 中獲取，具有該作用的物質有十字花科蕓苔屬植物的提取物(參照專利文獻1)等。另外， 作為抑制因活性氧而產(chǎn)生的氧化的細胞障礙，西洋黑種草、胡黃連、水牛膝草的提取物(參 照專利文獻2)正為人們所知。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的以來自安全性高的天然提取物并具有活性氧清除作用、自由基清 除作用、氧化的細胞障礙抑制作用的物質為中心，提供以該物質為有效成分的活性氧清除 劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑。為達成以上目的，關于本發(fā)明的活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化的細胞障 礙抑制劑，其特征為以獼猴桃采摘果實的提取物為有效成分。在本發(fā)明中，“獼猴桃采摘果實”是指在獼猴桃栽培過程中，為了將獼猴桃采摘果 實的含糖量和大小提高到希望的范圍而隔開距離(修剪)的果實，果實的具體情況是含糖 量為3. 0-7.0%，最佳為4.0-5. 5%;大小(長半徑)為Hcm，最佳為2_3cm。
在本發(fā)明中，“氧化的細胞障礙”是指因活性氧而產(chǎn)生的細胞障礙，尤其是炎癥、 過氧脂質的生成、各種酶失去活性、DNA損傷等氧化障礙，也包括皮膚組織障礙等組織障礙。 另外，作為因活性氧而產(chǎn)生障礙的細胞僅限于因活性氧而產(chǎn)生障礙的生物體細胞，但不屬 于被特別限定的物質。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，以天然物“獼猴桃采摘果實”的提取物為有效成分，可以提供安全性 很高的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑。
具體實施例方式以下對本發(fā)明的一個實施過程進行說明。關于本實施過程的活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化的細胞障礙抑制劑，以 獼猴桃(學名Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))采摘果實的提取物為有 效成分。這里，在本實施過程中，“提取物”中含有以獼猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))采摘果實為提取原料而得到的提取液、該提取液的稀釋液或濃 縮液、將該提取液干燥以后得到的干燥物、或者以上物質的某一種粗/精加工物或精加工 物。稱猴桃(學名Actinidiachinensis Planch. (Actinidiaceae))是屬于稱猴桃 科獼猴桃屬的落葉攀緣灌木，在日本各地都有栽培，其果實很容易從栽培地區(qū)獲得。作為提 取原料而被利用的獼猴桃的部位是采摘果實。另外，在本發(fā)明中，作為提取原料而被利用的 獼猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))的栽培品種沒有特別的限定，但 是，憬紅色、蘋果獼猴桃、紅心、金王、小林39、Viewer Country、始皇帝、淚珠、紅鮮、葡萄獼 猴桃、贊岐黃金、豐蜜等是使用的最佳品種。對于作為提取原料而被使用的獼猴桃的采摘果實，其含糖量為3. 0-7.0%，大小 (長半徑)為l-4cm，最佳糖量為4. 0-5. 5 %，大小(長半徑)為2_3cm。關于獼猴桃采摘果實的提取物，將提取原料用粉碎機器，通過提取的溶劑進行提 取，最后得到提取物。作為提取的溶劑，使用極性溶劑比較好，例如水、親水性有機溶劑等，單獨或混合 兩種以上，在常溫或溶劑沸點以下使用比較好。作為提取的溶劑而使用的水除了純凈水、自來水、井水、礦泉水、溫泉水、淡水、酸 性或堿性離子水、海洋深層水等以外，也包括對它們處理后的水。對水的處理包括精制、加 熱、殺菌、過濾、離子交換、滲透壓調整、緩沖化等。因此，在本發(fā)明中，作為提取的溶劑而使 用的水，也包括精制水、熱水、離子交換水、生理食鹽水、磷酸緩沖液、磷酸緩沖生理食鹽水寸。作為提取的溶劑而使用的親水性有機溶劑有甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等碳原子 數(shù)在1-5的低級脂肪族乙醇；丙酮、丁酮等低級脂肪族酮；1，3_丁二醇、丙二醇、丙三醇等碳 原子數(shù)在2-5的多價乙醇等。將兩種以上極性溶劑的混合液作為提取溶劑進行使用時，其混合比例可以適當?shù)?進行調整。例如在使用水和低級脂肪族乙醇的混合液時，對于1體積的水，最好混合1-100
4體積的低級脂肪族乙醇；在使用水和低級脂肪族酮的混合液時，對于1體積的水，最好混合 1-100體積的低級脂肪族酮；在使用水和多價乙醇的混合液時，對于1體積的水，最好混合 1-100體積的多價乙醇。在提取處理中，將提取的原料中所含的可溶性成分在提取溶劑中溶解，無特殊限 定，可以采用常用的方法。例如在相當于提取原料5-15倍(比重)的提取溶劑中，浸入提 取原料，在常溫或回流加熱下，提取可溶性成分；然后，通過過濾并清除殘渣而獲得提取液。 對于獲得的提取液，為了得到該提取液的稀釋液或濃縮液、該提取液的干燥物、粗/精制物 或精制物，根據(jù)常用方法，進行稀釋、濃縮、干燥、精制等處理。在精制中，可以通過活性炭處理、吸附樹脂處理、離子交換樹脂處理等進行實施。 獲得的提取液可以直接作為活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑的有效 成分進行使用，但是，如果作為濃縮液或干燥物，則比較容易使用。獼猴桃采摘果實的提取物具有特有的氣味，所以，在不降低其生理活性的情況下， 可以實施以退色、除臭等為目的的精制，但在用于皮膚化妝品等方面時，不能大量使用。因 此，即使未精制也可以使用。如上所述，從獼猴桃采摘果實獲得的提取物具有活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的細胞障礙抑制作用，所以，可以利用其各個作用，將其作為活性氧清除劑、自由基 清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑的有效成分進行使用。另外，從下述的實施事例可以看出，獼猴桃采摘果實從獲得的提取物具有表皮角 化細胞增殖促進作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進作用、紫外線照射引起的細胞障礙抑制作 用，因此，利用其各自的作用，可以將該提取物作為抗老化劑、表皮角化細胞增殖促進劑、絲 聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進劑、紫外線照射引起的細胞障礙抑制劑的有效成分。關于上述各種藥劑的成分，可以只是獼猴桃采摘果實的提取物，也可以是獼猴桃 采摘果實的提取物的制劑。在獼猴桃采摘果實的提取物中，使用糊精、環(huán)糊精等藥物學上允許的物質及其他 任何助劑，根據(jù)通常的方法，可以制成粉末狀、顆粒狀、藥丸狀、液狀等任意形式。此時，可以 使用助劑，例如賦形齊 、結合劑、崩潰劑、潤滑齊 、穩(wěn)定齊 、除臭劑等。另外，獼猴桃采摘果實 的提取物可以與其他成分(皮膚化妝品等)一起使用。另外，對于本實施過程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑， 如果需要，可以與具有活性氧清除作用、自由基清除作用、氧化的細胞障礙抑制作用的其他 天然提取物等一起作為有效成分進行使用。關于本實施過程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑的使用 方法，通常，有經(jīng)皮實施等，但是，最好靈活采取符合預防、治療等的方法(經(jīng)皮實施、經(jīng)黏 膜實施)。關于本實施過程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑的使用 量，也要根據(jù)疾病種類、重癥程度、患者的個人差另I」、使用方法、使用期間等，進行合理增減。關于本實施過程的活性氧清除劑，通過獼猴桃采摘果實的提取物所擁有的活性氧 清除作用，可以預防、治療或改善皺紋形成、彈性降低等皮膚老化、類風濕性關節(jié)炎、貝切特 氏病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風、白內障、糖尿病、動脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性 氧參與的各種障礙。然而，關于本實施過程的活性氧清除劑，也可以用于以上用途以外能發(fā)揮活性氧清除作用的所有用途。關于本實施過程的自由基清除劑，通過獼猴桃采摘果實的提取物所擁有的自由 基清除作用，可以預防或改善皺紋形成、彈性降低等皮膚老化、類風濕性關節(jié)炎、貝切特氏 病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風、白內障、糖尿病、動脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧 (自由基)參與的各種障礙。然而，關于本實施過程的自由基清除劑，也可以用于以上用途 以外能發(fā)揮自由基清除作用的所有用途。關于本實施過程的氧化的細胞障礙抑制劑，通過獼猴桃采摘果實的提取物所擁有 的氧化的細胞障礙抑制作用，可以抑制因活性氧引起的細胞障礙，結果是可以預防或改善 皮膚粗糙、皺紋形成、皮膚彈性降低等皮膚老化等。然而，關于本實施過程的細胞障礙抑制 劑，也可以用于以上用途以外能發(fā)揮細胞障礙抑制作用的所有用途。獼猴桃采摘果實的提取物具有活性氧清除作用、自由基清除作用、氧化的細胞障 礙抑制作用，在用于皮膚時，使用效果和安全性俱佳，所以，若配合皮膚化妝品使用，則效果 更佳。此時，對于皮膚化妝品，可以直接與獼猴桃采摘果實的提取物一起使用，也可以與 獼猴桃采摘果實的提取物制成的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑一 起使用。通過同時使用獼猴桃采摘果實的提取物或者由該提取物制成的活性氧清除劑、自 由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑，能對皮膚化妝品提供活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的細胞障礙抑制作用。對于與獼猴桃采摘果實的提取物一起使用的皮膚化妝品，其種類不固定，例如軟 膏、霜、乳液、洗劑、面膜、底妝等。將獼猴桃采摘果實的提取物等與皮膚化妝品一起使用時，根據(jù)皮膚化妝品的種 類，可以適當調整提取物的用量。但是，合適的比例為0.0005-0. 45%重量(固體時)，最佳 比例為0. 005-0. 05%重量(固體時)。另外，由下文的實施事例可以看出，與獼猴桃熟透果 實的提取物相比，在更低濃度下，獼猴桃采摘果實的提取物具有活性氧清除作用、自由基清 除作用、氧化的細胞障礙抑制作用、紫外線照射引起的細胞障礙抑制作用、表皮角化細胞增 殖促進作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進作用。所以，即使獼猴桃采摘果實的提取物與皮膚 化妝品的比例很低-0. 0005-0. 001%重量(固體時)，也能使皮膚化妝品產(chǎn)生理想的作用。上述皮膚化妝品不影響獼猴桃采摘果實的提取物所具有的活性氧清除作用、自由 基清除作用、氧化的細胞障礙抑制作用、紫外線照射引起的細胞障礙抑制作用、表皮角化細 胞增殖促進作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進作用，可以與普通皮膚化妝品生產(chǎn)中使用的主 要藥劑、助劑或其他成分(例如收斂劑、殺菌/抗菌劑、紫外線吸收劑、保濕劑、細胞刺激 劑、消炎/抗過敏劑、抗氧化/活性氧清除劑、油脂類、油性物質、碳氫類、脂肪酸類、乙醇類、 酯類、表面活性劑、香料等)同時使用。這樣，通過同時使用，使其成為大眾商品，以與上述 成分發(fā)生增效作用，并產(chǎn)生極佳的使用效果。上述皮膚化妝品具有很高的安全性，而且，在由活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的細胞障礙抑制作用、紫外線照射引起的細胞障礙抑制作用、表皮角化細胞增殖促 進作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進作用組成的群里選擇1種或2種以上的作用，可以預防、 治療或改善皺紋形成、彈性降低等皮膚老化、類風濕性關節(jié)炎、貝切特氏病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風、白內障、糖尿病、動脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧參與的各種障礙。另外，本實施過程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑可完全 用于人，但是，各作用效果明顯，也可以用于人以外的動物?！矊嵤├骋韵卤硎緦嵤┦吕捅容^事例，對本發(fā)明進行詳細說明，本發(fā)明不受以下各例的 限制。〔實施例1〕獼猴桃采摘果實提取物的制造在稱猴桃(Actinidiachinensis Planch. (Actinidiaceae)，憬紅色種)采摘果實 (含糖量4. 3%，長半徑:2cm)的粉碎物200g中，加入提取溶劑(精制水)400mL，在30°C條 件下加溫、提取1小時，熱過濾。關于殘渣，則進行同樣的提取處理。將獲得的提取液混合， 在減壓條件下濃縮，干燥以后，得到獼猴桃采摘果實的提取物5. 5g?！脖容^例〕獼猴桃果實提取物的制造除了稱猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae)，憬紅色種)熟透果 實(含糖量13.4%，長半徑5cm)的粉碎物200g以外，其他內容與實施事例1相同，得到 獼猴桃果實的提取物18. 5g?！苍囼灷?〕過氧化物清除作用試驗(NBT法)關于實施事例1的獼猴桃采摘果實提取物、比較事例1的獼猴桃果實提取物，按照 以下方法，對過氧化物清除作用進行試驗。在試驗管內加入0. 05M的NaHC03緩沖液(pH10. 2) 2. 4mL,再加入3mM的黃嘌呤、 3nM 的 EDTA、50ug/mL 的牛血清清蛋白溶液、0. 75mM 的 NBT (nitroblue tetrazolium)，每次 0. lmL，然后加入樣品溶液(實施事例1和比較事例1，樣品的濃度請參照下表1)0. lmL，在 25°C條件下放置10分鐘。然后，加入酶溶液“黃嘌呤氧化酶”0. lmL，立即攪拌，在25°C條件 下使其反應20分鐘。之后，加入6mM的氯化銅0. ImL,使反應停止，測試波長560nm時的吸 光度。在不加入酶溶液的情況下，實施同樣的操作、吸光度的測試；然后，在不加入樣品 溶液而加入蒸餾水的情況下，實施同樣的測試。根據(jù)得到的結果，由以下公式算出過氧化物 清除率(％)。過氧化物清除率(%) = {1-(A-B) / (C-D)} X 100這里，A表示“酶溶液添加、樣品溶液添加時的吸光度”，B表示“酶溶液不添加、樣 品溶液添加時的吸光度”，C表示“酶溶液添力卩、樣品溶液不添加時的吸光度”，D表示“酶溶 液不添加、樣品溶液不添加時的吸光度”。結果如表1所示。表1
權利要求
1.一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細胞障礙抑制劑，其特征在于，包括 活性氧清除劑，所述活性氧清除劑以獼猴桃采摘果實的提取物為有效成分。
2.一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細胞障礙抑制劑，其特征在于，包括 自由基清除劑，所述自由基清除劑以獼猴桃采摘果實的提取物為有效成分。
3.一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細胞障礙抑制劑，其特征在于，包括 自由基清除劑，所述自由基清除劑以獼猴桃采摘果實的提取物為有效成分；氧化性細胞障 礙抑制劑，所述氧化性細胞障礙抑制劑以獼猴桃采摘果實的提取物為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以安全性高的天然提取物為有效成分的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑。在本發(fā)明所說明的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細胞障礙抑制劑中，獲取獼猴桃采摘果實的提取物。
文檔編號A61Q19/08GK102125585SQ20101056571
公開日2011年7月20日 申請日期2010年11月30日 優(yōu)先權日2010年1月12日
發(fā)明者小谷麻由美, 田部早已, 藤田晃人 申請人:株式會社布倫克蕾喜