專利名稱：：高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A₁用于大豆毛油脫膠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種高碘酸鈉氧化法固定化磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法。
背景技術(shù)：
：大豆油含有3%左右磷脂，它們對(duì)油脂制品風(fēng)味性和穩(wěn)定性及在使用時(shí)與油的起泡、出腦等現(xiàn)象均有直接關(guān)系，脫膠工藝中欲脫除的磷脂大體可分為水化磷脂(hy-dratablePhospholipids,HP)與非水化磷脂(NonhydratablePhospholipids,NHP),兩者在性質(zhì)和脫除工藝上均有一定差異。水化磷脂是比較容易除掉，而非水化磷脂難以除去?，F(xiàn)有主要的大豆油脫膠方法是酶脫膠法，酶法脫膠是油脂精煉的一項(xiàng)高新技術(shù)，該技術(shù)在提高油脂工業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益和環(huán)保性能方面具有巨大的應(yīng)用價(jià)值。酶脫膠法以其良好的經(jīng)濟(jì)環(huán)保性能而受到越來(lái)越多的重視，酶脫膠法可將油中磷含量降到15mg/Kg以下，但是現(xiàn)有的酶脫膠法使用游離酶進(jìn)行脫膠，存在一些問題需要解決，如溫度和PH不易控制，從而影響脫膠效果。而且現(xiàn)有的酶脫膠法成本高，自然酶混溶在反應(yīng)體系中不僅不易分離回收，而且酶的制取一般較困難，且成本高昂，難以反復(fù)或連續(xù)使用。固定化酶技術(shù)是通過物理和/或化學(xué)作用將水溶性的游離酶分子束縛在一定的區(qū)間內(nèi)(通常在非水溶性載體上)，用簡(jiǎn)單的分離方法(如離心沉降)即可回收并反復(fù)使用，這樣改良的酶即稱為固定化酶。酶可以通過吸附法固定在膜上，但吸附法固定的酶不牢固，易流失?；瘜W(xué)交聯(lián)法是通過共價(jià)鍵達(dá)到載體與酶結(jié)合的目的，因而固定的酶比較牢固。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有的酶脫膠法存在溫度和pH不易控制而導(dǎo)致大豆油脫膠效果差以及現(xiàn)有的酶脫膠法成本高和自然酶混溶在反應(yīng)體系中不僅不易分離回收，而且酶的制取一般較困難，且成本高昂，難以反復(fù)或連續(xù)使用等問題，而提出了用高碘酸鈉氧化法固定化磷脂酶A1應(yīng)用在大豆毛油脫膠中。所述目的是通過如下方案實(shí)現(xiàn)的一種高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)一、磷脂酶A1的固定化取一張含有羥基的膜懸浮于0.010.3mol/L的高碘酸鈉溶液中，室溫下置于搖床中活化30lOOmin，取出立即用去離子水洗至中性，吸干水分；然后將含有羥基的膜置于平皿中，在535°C條件下，分別與0.010.09g/mL的酶液和PH為5.8的磷酸鹽緩沖液，加入體積濃度0.050.6%戊二醛進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)16h，交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后將所述含有羥基的膜懸浮于體積濃度為的氫硼化鈉溶液中，4°C反應(yīng)2040min，然后用HAI溶液、KCl溶液和水分別洗滌三次，晾干剪碎即得固定化磷脂酶A1；二、大豆毛油脫膠先經(jīng)水化脫膠法去除大豆油中的水化磷脂，然后向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為40%45%的檸檬酸溶液并以10001500r/min的速度攪拌520min，再向經(jīng)過處理的大豆油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆油的pH值在4.06.0之間時(shí)停止添加NaOH溶液；三、在4555°C條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入其質(zhì)量的0.0.5%的固定化磷脂酶A1；四、對(duì)加入固定化磷脂酶A1的大豆油以40lOOr/min的速度攪拌210h，然后對(duì)加入固定化磷脂酶A1的大豆油以30003500r/min的速度離心520min，去除雜質(zhì)，即可。優(yōu)選方案為，步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為41%44%的檸檬酸溶液并以11001400r/min的速度攪拌916min。優(yōu)選方案為，步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為4243%的檸檬酸溶液并以12001300r/min的速度攪拌11Hmin。優(yōu)選方案為，步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為4243%的檸檬酸溶液并以12001300r/min的速度攪拌1112min。優(yōu)選方案為，步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆油的PH值在4.55.5之間時(shí)停止添加NaOH溶液。優(yōu)選方案為，步驟三中在48條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入為調(diào)整好PH值的大豆油質(zhì)量的0.1%0.45%的固定化酶。優(yōu)選方案為，步驟三中在5052°C條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入為調(diào)整好PH值的大豆油質(zhì)量的0.2%0.3%的固定化酶。優(yōu)選方案為，步驟四中對(duì)加入固定化酶的大豆油以6080r/min的速度攪拌59h。優(yōu)選方案為，步驟四中對(duì)加入固定化酶的大豆油以32003300r/min的速度離心1416min。本發(fā)明采用高碘酸鈉氧化法固定化磷脂酶A1,高碘酸鈉具有將濾紙表面的羥基氧化成醛基的作用，根據(jù)醛基含量越高，與酶的交聯(lián)率越大的特性固定化磷脂酶A1，提高了酶在反應(yīng)體系中的活性和穩(wěn)定性，調(diào)節(jié)和控制酶的活性與選擇性，從而有利于酶的回收；然后將高碘酸鈉氧化法固定化的磷脂酶A1應(yīng)用在大豆毛油脫膠中，溫度和pH值得到可控，從而加大了酶的最適反應(yīng)條件范圍，使酶可以在更加寬泛的范圍中保持較好的活力，本發(fā)明可進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)操作。本發(fā)明所述方法成本低廉，對(duì)自然酶混溶在反應(yīng)體系中分離回收容易，酶的制取容易，成本低廉，可反復(fù)或連續(xù)使用。具體實(shí)施例方式下面詳細(xì)闡述本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式。實(shí)施例一一、高碘酸鈉的氧化活化取一張纖維素濾紙膜懸浮于IOml濃度為0.010.3mol/L的高碘酸鈉溶液中，室溫下置于搖床中搖動(dòng)30lOOmin，取出立即用去離子水洗至中性，吸干水分；二、磷脂酶A1的固定化取Icm2纖維素濾紙膜置于平皿中，在535°C條件下，分別與0.010.09g/mL的酶液和pH為5.8的磷酸鹽緩沖液，加入體積濃度0.050.6%戊二醛進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)1他，交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后將所述纖維素濾紙膜懸浮于IOml體積濃度為的氫硼化鈉溶液中，4°C反應(yīng)2040min，然后用0.Imol的HAI溶液、2mol的KCl溶液和水分別洗滌三次，晾干剪碎即得固定化磷脂酶A1；三、大豆毛油脫膠取11.2kg大豆油，先經(jīng)現(xiàn)有技術(shù)任意一種水化脫膠法去除大豆油中的水化磷脂，然后向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為40%45%的檸檬酸溶液并以10001500r/min的速度攪拌520min，再向經(jīng)過處理的大豆油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆油的pH值在4.06.0之間時(shí)停止添加NaOH溶液；四、在4555°C條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入其質(zhì)量的0.0.5%的固定化酶；五、對(duì)加入固定化酶的大豆油以40lOOr/min的速度攪拌210h，然后對(duì)加入固定化酶的大豆油以30003500r/min的速度離心520min，去除雜質(zhì)，即實(shí)現(xiàn)高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠。用本實(shí)施方式進(jìn)行大豆毛油脫膠后，大豆油的磷含量在1215mg/Kg，磷含量比未脫膠時(shí)降低了85%以上，經(jīng)測(cè)定，本實(shí)施方式中高碘酸鈉氧化法固定化磷脂酶A1活力在60%80%之間。實(shí)施例二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟三中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為41%44%的檸檬酸溶液并以11001400r/min的速度攪拌916min。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟三中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為4243%的檸檬酸溶液并以12001300r/min的速度攪拌11Hmin。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟三中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為4243%的檸檬酸溶液并以12001300r/min的速度攪拌1112min。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟三中向經(jīng)過處理的大豆油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆油的pH值在4.55.5之間時(shí)停止添加NaOH溶液。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟四中在48條件下向調(diào)整好PH值的大豆油中加入為調(diào)整好pH值的大豆油質(zhì)量的0.0.45%的固定化酶。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟四中在5052°C條件下向調(diào)整好PH值的大豆油中加入為調(diào)整好pH值的大豆油質(zhì)量的0.2%0.3%的固定化酶。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟五中對(duì)加入固定化酶的大豆油以6080r/min的速度攪拌59h。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。實(shí)施例九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)在于步驟五中對(duì)加入固定化酶的大豆油以32003300r/min的速度離心1416min。其它步驟與具體實(shí)施方式一相同。含有羥基的膜除了本發(fā)明所述纖維素濾紙膜之外，醋酸纖維素聚丙烯復(fù)合膜同樣可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述目的。但本發(fā)明不限于所列舉的含有羥基的膜，其它現(xiàn)有技術(shù)中含有羥基的膜，只要采本發(fā)明所述方法能夠?qū)崿F(xiàn)所述目的，都在本專利的保護(hù)范圍之內(nèi)。上述實(shí)施方式只是對(duì)本專利的示例性說(shuō)明而并不限定它的保護(hù)范圍，本領(lǐng)域人員還可以對(duì)其進(jìn)行局部改變，只要沒有超出本專利的精神實(shí)質(zhì)，都視為對(duì)本專利的等同替換，都在本專利的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于通過以下步驟實(shí)現(xiàn)一、磷脂酶A1的固定化取一張含有羥基的膜懸浮于0.010.3mol/L的高碘酸鈉溶液中，室溫下置于搖床中活化30lOOmin，取出立即用去離子水洗至中性，吸干水分；然后將含有羥基的膜置于平皿中，在535°C條件下，分別與0.010.09g/mL的酶液和pH為5.8的磷酸鹽緩沖液，加入體積濃度0.050.6%戊二醛進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)16h，交聯(lián)反應(yīng)結(jié)束后將所述含有羥基的膜懸浮于體積濃度為的氫硼化鈉溶液中，4°C反應(yīng)2040min，然后用HAI溶液、KCl溶液和水分別洗滌三次，晾干剪碎即得固定化磷脂酶A1；二、大豆毛油脫膠先經(jīng)水化脫膠法去除大豆油中的水化磷脂，然后向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為40%45%的檸檬酸溶液并以10001500r/min的速度攪拌520min，再向經(jīng)過處理的大豆油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆油的PH值在4.06.0之間時(shí)停止添加NaOH溶液；三、在4555°C條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入其質(zhì)量的0.1%0.5%的固定化磷脂酶A1;四、對(duì)加入固定化磷脂酶A1的大豆油以40lOOr/min的速度攪拌210h，然后對(duì)加入固定化磷脂酶A1的大豆油以30003500r/min的速度離心520min，去除雜質(zhì)，即可。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為41%44%的檸檬酸溶液并以11001400r/min的速度攪拌916min。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為4243%的檸檬酸溶液并以12001300r/min的速度攪拌1114min。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中加入質(zhì)量濃度為4243%的檸檬酸溶液并以12001300r/min的速度攪拌1112min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中向經(jīng)過處理的大豆油中添加質(zhì)量濃度為4%的NaOH溶液并不斷進(jìn)行攪拌直至大豆油的PH值在4.55.5之間時(shí)停止添加NaOH溶液。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟三中在48條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入為調(diào)整好pH值的大豆油質(zhì)量的0.0.45%的固定化酶。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟三中在5052°C條件下向調(diào)整好pH值的大豆油中加入為調(diào)整好pH值的大豆油質(zhì)量的0.20Z00.3%的固定化酶。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟四中對(duì)加入固定化酶的大豆油以6080r/min的速度攪拌59h。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟四中對(duì)加入固定化酶的大豆油以32003300r/min的速度離心1416min。全文摘要本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有的酶脫膠法存在溫度和pH不易控制而導(dǎo)致大豆油脫膠效果差以及現(xiàn)有的酶脫膠法成本高和自然酶混溶在反應(yīng)體系中不僅不易分離回收，而且酶的制取一般較困難，且成本高昂，難以反復(fù)或連續(xù)使用等問題，而提出了一種高碘酸鈉氧化法固定磷脂酶A1用于大豆毛油脫膠的方法，包括高碘酸鈉的氧化活化、磷脂酶A1的固定化、大豆毛油脫膠的過程。本發(fā)明將高碘酸鈉氧化法固定化的磷脂酶A1應(yīng)用在大豆毛油脫膠中，溫度和pH值得到可控，從而加大了酶的最適反應(yīng)條件范圍，使酶可以在更加寬泛的范圍中保持較好的活力，本發(fā)明可進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)操作。文檔編號(hào)C11B3/00GK102367396SQ201110233409公開日2012年3月7日申請(qǐng)日期2011年8月16日優(yōu)先權(quán)日2011年8月16日發(fā)明者于博涵,于殿宇,劉晶,周曉丹,孫博,常云鶴,李振嵐,李琳,李紅玲,王玉,馬鶯,齊穎申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)