專利名稱：一種分離純化丹參酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是應(yīng)用高速逆流色譜(HSCCC)法從丹參的粗提物中制備高純度的四種丹參酮類化合物丹參酮IIA、二氫丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮I的一種分離純化丹參酮的方法。
丹參(Salivia miltiorrhiza Bunge)是我困一種常用中藥，在臨床具有多方面的療效，如鎮(zhèn)痛、止癢，對(duì)治療神經(jīng)衰弱性失眠、晚期血吸蟲病引起的肝硬變和脾腫大、浮腫、婦科疾病和黃疸型傳染性肝炎的縮肝方面具有一定療效。近年來的藥理研究證明，丹參還具有改善冠狀循環(huán)、抑制血栓性疾病和抗炎消腫的功效，已有成藥上市。丹參酮是丹參脂溶性成分中的有效成分，主要含有丹參酮IIA(tanshinone IIA)、二氫丹參酮I(dihydrotanshnone I)、隱丹參酮(cryptotanshinone)和丹參酮I(tanshninoeI)。傳統(tǒng)的丹參酮提取采用柱色譜法，柱色譜法需使用固體填料，在分離過程中易產(chǎn)生不可逆吸附，具有樣品易損失、易污染、低效、速度慢和分離步驟煩瑣等缺點(diǎn)。高速逆流色譜技術(shù)不同于傳統(tǒng)的柱色譜需使用固體填料，而是應(yīng)用兩相互不混溶的溶劑系統(tǒng)在支撐管內(nèi)高速行星運(yùn)動(dòng)的方式下進(jìn)行天然產(chǎn)物的分離純化，因而沒有不可逆吸附，具有樣品無損失、無污染、高效、快速和大制備量分離的優(yōu)點(diǎn)。所以，在國(guó)內(nèi)外已被廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中活性物質(zhì)的分離純化。
本發(fā)明的目的是應(yīng)用高速逆流色譜(HSCCC)法從丹參的粗提物中制備高純度的四種丹參酮類化合物丹參酮IIA、二氫丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮I。
該發(fā)明方法有如下特點(diǎn)采用分析型或半制備型高速逆流色譜儀，可選用的溶劑體系由四個(gè)組分組成，a組分為乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸異丙酯，乙酸正丁酯等酯類；b組分為正己烷，環(huán)己烷，乙醚和石油醚等；c組分為甲醇，乙醇，丙酮等；d組分為水。優(yōu)選乙酸乙酯-石油醚-甲醇-水體系。體積比依次在1-4∶2-5∶2-3∶1-2范圍內(nèi)配置。一次分離可以得到隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA。根據(jù)檢測(cè)器紫外譜圖接收目標(biāo)成分，隱丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIA依次時(shí)間(小時(shí))為3.0-3.9、4.0-4.8、8.0-9.5紫外吸收值依次為0.4-1.5、0.4-1.3、0.4-1.1，增加原配比中水的體積比，可以提高隱丹參酮與丹參酮I的分離度，并且改善二氫丹參酮I與雜質(zhì)的分離情況，但是丹參酮IIA的出峰時(shí)間將延長(zhǎng)，造成分離時(shí)間過長(zhǎng)，所以體系中各種溶劑體積比的選擇主要以隱丹參酮與丹參酮I的完全分離為基準(zhǔn)，收集二氫丹參酮I與雜質(zhì)的部分，時(shí)間(小時(shí))為1.7-2.8，紫外吸收值為0.5-1.2，進(jìn)行第二次分離，時(shí)間(小時(shí))為2.5-3.0，紫外吸收值為0.3-0.9。室溫對(duì)分離度有一定的影響，以上分離條件適合室溫在18-30℃時(shí)使用。當(dāng)室溫降低時(shí)，可增加水的體積比，以提高分離度。反之亦然。本發(fā)明應(yīng)用高速逆流色譜(HSCCC)法從丹參的粗提物中制備高純度的四種丹參酮類化合物丹參酮IIA、二氫丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮I，純度可達(dá)98％以上。此方法適用于從由各種工藝條件制備的丹參酮粗品中分離制備以上幾種丹參酮單體。適用于用各種型號(hào)的逆流色譜儀分離制備丹參酮單體，如用分析型高速逆流色譜儀的小量制備及半制備型高速逆流色譜儀的較大量制備。高速逆流色譜(HSCCC)法是一種高效快速分離純化丹參酮的方法。
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。


圖1為本發(fā)明的紫外吸收值圖，A峰為二氫丹參酮I，B峰為隱丹參酮I，C峰為丹參酮I，E峰為丹參酮IIA。圖2為本發(fā)明的紫外吸收值圖，II峰為二氫丹參酮I和雜質(zhì)的混合液。圖3為本發(fā)明的紫外吸收值圖，A峰為二氫丹參酮I。
實(shí)施例1采用分析型高速逆流色譜儀，選用乙酸乙酯-石油醚-甲醇-水體系分離丹參酮IIA、二氫隱丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮I。首先以2∶3∶2.5∶1.7體積比將上述溶劑體系配置于分液漏斗中，搖均后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。取5mg丹參酮粗提物溶解于1ml上相和1ml下相的混合物中待用。采用北京市新技術(shù)應(yīng)用研究所研制開發(fā)的GS10A2分析型高速逆流色譜儀，并配有柱塞泵、進(jìn)樣閥、紫外檢測(cè)器和記錄儀。多層纏繞聚四氟乙烯的柱容量約為40ml。先用固定相充滿整個(gè)柱子；調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速到1700rpm，以1.0毫升/分的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測(cè)器紫外譜圖接收目標(biāo)成分，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。(見圖1)A峰為二氫丹參酮I，B峰為隱丹參酮，C峰為丹參酮I，E峰為丹參酮IIA。純度都在98％以上。
實(shí)施例2采用半制備型高速逆流色譜儀，選用乙酸丙酯-乙醚-乙醇-水體系分離制備丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I。首先以1∶4∶2∶2體積比將上述溶劑體系配置于分液漏斗中，搖均后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上相和下相分開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相。取100mg丹參酮粗提物溶解于10ml上相和10ml下相的混合物中待用。采用北京市新技術(shù)應(yīng)用研究所研制開發(fā)的GS10A2型半制備高速逆流色譜儀，并配有柱塞泵、進(jìn)樣閥、紫外檢測(cè)器和記錄儀。起多層纏繞聚四氟乙烯的柱容量約為240ml。先用固定相充滿整個(gè)柱子；調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速到800rpm，以2.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣；然后根據(jù)檢測(cè)器紫外譜圖接收目標(biāo)成分(見圖2)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后，冷凍干燥。得到丹參酮IIA和隱丹參酮各約10mg，丹參酮I約5mg。純度都在97％以上。
實(shí)施例3采用半制備型高速逆流色譜儀，溶劑選用乙酸異丙酯-正己烷-丙酮-水，體積比依次為4∶2∶3∶1。分離制備二氫丹參酮T和雜質(zhì)的混合液，檢測(cè)器紫外譜圖接收目標(biāo)成分見圖2。采用乙酸正丁酯-環(huán)己烷-甲醇-水，體積比依次為2∶3∶2.5∶1.8分離二氫丹參酮I和雜質(zhì)的混合液，上樣量為20mg，其他同實(shí)施例2。檢測(cè)器紫外譜圖接收目標(biāo)成分見圖3。
權(quán)利要求
1.一種分離純化丹參酮的方法，其特征在于它是采用逆流色譜法從丹參粗提物中分離制備出高純度丹參酮，其溶劑組可由a、b、c、d四個(gè)組分構(gòu)成，它們分別是a組分為乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸異丙酯，乙酸正丁酯等酯類；b組分為正己烷，環(huán)己烷，乙醚和石油醚等；c組分為甲醇，乙醇，丙酮等；d組分為水，體積比依次為1-4、2-5、2-3、1-2。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是一種應(yīng)用高速逆流色譜法從丹參的粗提物中制備四種高純度丹參酮類化合物丹參酮IIA、二氫丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮I的一種分離純化丹參酮的方法，分離純度可達(dá)98％以上，此方法適用于從由各種工藝條件制備的丹參酮粗品中分離制備以上幾種丹參酮單體，適用于用各種型號(hào)的逆流色譜儀分離制備丹參酮單體，如用分析型高速逆流色譜儀的小量制備及半制備型高速逆流色譜儀的較大量制備，本方法是一種高效快速分離純化丹參酮的方法。
文檔編號(hào)C07J73/00GK1394870SQ0112011
公開日2003年2月5日 申請(qǐng)日期2001年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月5日
發(fā)明者田桂連, 張?zhí)煊?申請(qǐng)人:北京天純維通生物技術(shù)有限公司