專利名稱：草栽靈芝多糖肽及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多糖類及制備，特別涉及一種草栽靈芝多糖肽及其提取方法。
本發(fā)明的目的可以經(jīng)如下途徑來實(shí)現(xiàn)。
草栽靈芝多糖肽，其要點(diǎn)在于，用于提取的原料是草栽靈芝。
本發(fā)明采用草栽靈芝提取靈芝多糖肽，是因?yàn)椴捎貌菰造`芝提取靈芝多糖肽比段木靈芝提取靈芝多糖肽的提取率要提高2倍多，而其余的成分，如蛋白質(zhì)，多肽，氨基酸的含量幾乎一致，這顯然可以提高靈芝的藥用價(jià)值，在相同提取工藝的條件下，成本大為下降，故而可以具有更高的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益，這是現(xiàn)有技術(shù)的一大改進(jìn)，現(xiàn)有思維定勢(shì)的一大突破，是克服技術(shù)偏見的發(fā)明。
栽培草栽靈芝所采用的培養(yǎng)物是采用野生的或人工栽培的禾本科或草本植物，而段木靈芝則需消耗大量的木材，這同我國(guó)乃至整個(gè)世界提倡保護(hù)環(huán)境，保持生態(tài)平衡的原意是格格不入的。
同時(shí)采用草栽靈芝提取的靈芝多糖肽中具有清除氧自由基、抗脂質(zhì)過氧化作用及增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等作用。
草栽靈芝多糖肽重均分子量(MW)為45萬～54萬。
經(jīng)研究表明靈芝多糖肽中起藥理活性的主要是大分子多糖，故而可以得出結(jié)論，草栽靈芝的藥理活性不會(huì)比段木靈芝差，甚至?xí)鼜?qiáng)。
草栽靈芝多糖肽中的多糖組成為鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，上述各糖的摩爾比為0.549∶3.614∶3.167∶0.556∶6.89。
草栽靈芝多糖肽中不含有小分子糖(單糖)甘露糖，而段木靈芝多糖肽中糖組分除了含有上述五種糖類外，還多含了甘露糖。
可采用如下提取方法來提取草栽靈芝多糖肽，具有如下步驟，1.利用菌草栽培靈芝產(chǎn)生子實(shí)體，洗清、干燥、破碎，2.用乙醇回流后熱水提取，3.將水提取液濃縮，4.用乙醇沉淀濃縮液得第一多糖肽沉淀物，5.用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌第一多糖肽沉淀物3次，6.離心，去上清液，7.沉淀物低溫干燥得粗多糖肽。
本發(fā)明還在于可以具有如下步驟來提純粗多糖肽1.將粗多糖肽溶于水，用乙醇沉淀得第二多糖肽沉淀物，2.用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌第二多糖肽沉淀物3次，3.離心，去上清液，4.沉淀物低溫干燥得多糖肽。
將粗多糖肽提取純化可以得到純度高的多糖肽，因此，服用時(shí)可以減少用量。
本發(fā)明進(jìn)一步講還在于破碎步驟具體為將草栽靈芝破碎成煙絲狀。
顯然成煙絲狀的破碎物要比段木靈芝破碎后成塊狀更細(xì)、更容易提取，提取率自然就可以高些。
本發(fā)明用乙醇回流后熱水提取的具體步驟為，1.用95％的乙醇回流3小、時(shí)，2.回收乙醇，3.靈芝粉碎物用熱水提取3次。
用乙醇回流的目的是先去除部分的脂肪和小分子多糖及雜質(zhì)。乙醇的體積(毫升)同靈芝粉碎物質(zhì)量(克)的比例為(10～13)∶1。
而熱水提取的具體方法為用15倍于靈芝粉碎物的水加熱提取3次，提取3次的時(shí)間分別為2.5小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，然后將過濾后的水提取液合并備用。
將水提取液濃縮的具體步驟為，
1.在90℃的溫度下濃縮至原體積的十分之一，2.再離心分離，3.將上清液濃縮。
離心的速度為3000r/min，時(shí)間為15min；上清液濃縮至相當(dāng)于每毫克含靈芝生藥量1克為標(biāo)準(zhǔn)。
用乙醇沉淀第一多糖肽及第二多糖肽的具體步驟為，1.加入三倍量于濃縮液的95％沉淀，2.攪拌，5℃左右靜置得第一沉淀物，3.將第一沉淀物再離心得第二沉淀物。
靈芝多糖的分離純化采用的是乙醇沉淀法，本發(fā)明采取的兩次純化都是乙醇沉淀法。離心的速度為3000r/min，時(shí)間為15min。第一次純化時(shí)必需反復(fù)采用上述步驟兩次，也就是提純兩次得第一多糖肽即粗多糖肽。而第二次純化只采用一次即可得第二多糖肽即多糖肽，本方法在利用現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，采用了兩次提純的方法，從而大大提高了靈芝多糖的純度。
將粗多糖純化得多糖肽的過程中還可以加入透析這道工藝以除去低分子量多糖和雜質(zhì)，具體步驟為，1.將粗多糖溶于蒸餾水，2.放置于透析袋內(nèi)，3.逆流透析48小時(shí)得透析液。
本發(fā)明還改變傳統(tǒng)的某些工藝步驟，增加了透析這道工藝。一般認(rèn)為靈芝多糖的藥理活性來自于所含的大分子多糖，所以提取時(shí)所采用的工藝就必需滿足盡量留住大分子多糖，去除了不具有藥理活性的小分子多糖及雜質(zhì)，而透析則剛好可以滿足此項(xiàng)要求，提高大分子多糖的提取率。
本發(fā)明進(jìn)一步講還在于低溫干燥的溫度為5℃。
采用低溫干燥是為了避免高溫干燥所引起的靈芝有效成分結(jié)構(gòu)的破壞而導(dǎo)致的藥理活性的大幅度降低。
靈芝既可以是靈芝鮮品，也可是靈芝干品。
本發(fā)明較之現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)采用草栽靈芝代替段木靈芝提取靈芝多糖肽，成本低，提取率高，同時(shí)避免了大量砍伐樹木而導(dǎo)致的生態(tài)平衡的破壞，且經(jīng)本方法提取的靈芝多糖純度也很高。
最佳實(shí)施例；
1.挑選草栽靈芝，清潔、干燥、破碎，將靈芝干品子實(shí)體清潔后，烘干，用粗顆粒粉碎機(jī)破碎成20目左右的煙絲狀物質(zhì)。
2.用乙醇回流后熱水提取，稱取300克的已經(jīng)粉碎的靈芝，1)用95％的乙醇3000～4000毫升回流3小時(shí)，2)回收乙醇，干燥靈芝醇及絲狀物，3)靈芝醇及粉碎物用其15倍量的熱水回流提取3次，時(shí)間分別為2.5小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，并合并過濾后的水提取液。
3.將水提取液濃縮，1)在90℃的溫度下濃縮至原體積的十分之一，2)再用速度為3000r/min，時(shí)間為15min的離心機(jī)進(jìn)行離心分離，3)將上清液濃縮至相當(dāng)于每毫升含靈芝生藥量1克為標(biāo)準(zhǔn)。
4.用乙醇沉淀粗多糖肽，1)用三倍量于濃縮液的95％乙醇沉淀，2)攪拌，恒溫5℃靜置得第一沉淀物，3)將第一沉淀物再離心得第二沉淀物，4)將第二沉淀物溶于適量的蒸餾水，5)將此溶液用2～3倍量的95％乙醇沉淀，6)攪拌，5℃左右靜置24小時(shí)得第三沉淀物，7)將第三沉淀物再離心得第一多糖肽沉淀。
5.將第一多糖肽沉淀用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌3次，6.用速度為3000r/min，時(shí)間為15min的離心機(jī)進(jìn)行離心分離，去上清液，7.沉淀物低溫5℃干燥得第一多糖肽，8.將第一多糖肽溶于水，透析，1)將第一多糖肽溶于蒸餾水，2)放置于透析袋內(nèi)，3)逆流透析48小時(shí)得透析液。
9.將透析液在90℃下濃縮，10.用乙醇沉淀多糖肽，1)用三倍量于濃縮液的95％乙醇沉淀，2)攪拌，恒溫5℃靜置得第一沉淀物，3)將第一沉淀物再離心得第二多糖肽沉淀。
11.將第二多糖肽沉淀用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌3次，12.用速度為3000r/min，時(shí)間為15min的離心機(jī)進(jìn)行離心分離，去上清液，13.沉淀物低溫5℃干燥即得靈芝多糖肽。
將段木靈芝同樣采用上述方法制備靈芝多糖。
下面將采用草栽靈芝和段木靈芝提取第一多糖肽的結(jié)果對(duì)比如下表表1 上表表明草栽靈芝提取第一多糖肽的得率平均為6.48％；段木靈芝第一多糖肽的得率為2.34％，草栽靈芝比段木靈芝高2.8倍。
采用草栽靈芝和段木靈芝提取第二多糖肽(即多糖肽)的結(jié)果對(duì)比如下表表2
上表表明，用草栽靈芝提取的多糖肽約占粗多糖的36％，用段木靈芝提取的多糖肽約占粗多糖的35.33％，兩者的得率相當(dāng)，從而說明兩者多糖肽中低分子量糖肽含量是基本一致的。
采用草栽靈芝和段木靈芝提取多糖肽氨基酸分析的結(jié)果對(duì)比如下表表3 此表表明，草栽靈芝多糖肽中所含氨基酸組成與段木靈芝多糖肽中的相同，而氨基酸總量也基本一致。
權(quán)利要求
1.草栽靈芝多糖肽，其特征在于，用于提取的原料是草栽靈芝。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草栽靈芝多糖肽，其特征在于，草栽靈芝多糖肽重均分子量(MW)為45 萬～54萬。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草栽靈芝多糖肽，其特征在于，多糖組成為鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，上述各糖摩爾比為0.549∶3.614∶3.167∶0.556∶6.89。
4.草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，具有如下步驟，4.1利用菌草栽培靈芝產(chǎn)生子實(shí)體，洗清、干燥、破碎，4.2用乙醇回流后熱水提取，4.3將水提取液濃縮，4.4用乙醇沉淀濃縮液得第一多糖肽沉淀物，4.5用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌第一多糖肽沉淀物3次，4.6離心，去上清液，4.7沉淀物低溫干燥得粗多糖肽。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，還可以增加有如下步驟5.1將粗多糖肽溶于水，用乙醇沉淀得第二多糖肽沉淀物，5.2用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌第二多糖肽沉淀物3次，5.3離心，去上清液，5.4沉淀物低溫干燥得多糖肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，破碎步驟具體為將草栽靈芝破碎成煙絲狀。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，用乙醇回流后熱水提取的具體步驟為，7.1用95％的乙醇回流3小時(shí)，7.2回收乙醇，7.3靈芝粉碎物用熱水提取3次。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，用乙醇沉淀濃縮液得第一多糖肽沉淀物及第二多糖肽沉淀物的具體步驟為，8.1用三倍量于濃縮液的95％乙醇沉淀，8.2攪拌，5℃左右靜置得第一沉淀物，8.3將第一沉淀物再離心得第二沉淀物。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，將粗多糖純化得多糖肽的過程中還可以加入透析這道工藝，具體步驟為，9.1將粗多糖溶于蒸餾水，9.2放置于透析袋內(nèi)，9.3逆流透析48小時(shí)得透析液。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的草栽靈芝多糖肽的提取方法，其特征在于，低溫干燥的溫度為5℃。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多糖類及制備，特別涉及一種草栽靈芝多糖肽，用于提取的原料是草栽靈芝，提取方法的具體步驟為1.利用菌草栽培靈芝產(chǎn)生子實(shí)體，洗清、干燥、破碎；2.用乙醇回流后熱水提??；3.將水提取液濃縮；4.用乙醇沉淀濃縮液得第一多糖肽沉淀物；5.用95％乙醇，丙酮和乙醚各洗滌第一多糖肽沉淀物3次；6.離心，去上清液；7.沉淀物低溫干燥得粗多糖肽。采用草栽靈芝提取靈芝多糖肽，成本低，提取率高，同時(shí)避免了大量砍伐樹木而導(dǎo)致的生態(tài)平衡的破壞，且經(jīng)本方法提取的靈芝多糖純度也很高。
文檔編號(hào)C07K14/37GK1429837SQ01138079
公開日2003年7月16日 申請(qǐng)日期2001年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月29日
發(fā)明者林樹錢, 王賽貞, 呂松濤, 林志彬 申請(qǐng)人:福州綠谷生物藥業(yè)技術(shù)研究所, 林樹錢, 王賽貞, 呂松濤, 林志彬