一種靈芝多糖的超聲波抽提方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靈芝多糖的超聲波抽提方法。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝多糖是由三股單糖鏈構(gòu)成的、具有螺旋狀立體構(gòu)形(三級結(jié)構(gòu))的葡聚糖，其立體構(gòu)形與脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似，是一種大分子化合物，其分子量從數(shù)千到數(shù)十萬，它是一種從靈芝孢子粉或靈芝中提取的物質(zhì)。不溶于高濃度的乙醇，微溶于低濃度的乙醇及冷水，在熱水中能全部溶解。靈芝多糖都存在于靈芝的細(xì)胞壁內(nèi)壁。靈芝多糖中除含有葡萄糖外，大多還含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖、鼠李糖等單糖，但含量較少。
[0003]傳統(tǒng)的靈芝多糖提取方法主要是采用熱水浸提法、酸浸提法、堿浸提法提取。酸或堿浸提法雖能提高提取率，但對設(shè)備要求高且極易破壞多糖的結(jié)構(gòu)，還存在環(huán)境污染問題。另外由于靈芝子實(shí)體由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等主要成分構(gòu)成，結(jié)構(gòu)緊密，活性多糖有效成分附著在細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)，傳統(tǒng)的熱水浸提法時(shí)間長、耗能高，活性成分提取物得率低。中國專利CN1181271介紹了使用低壓水煮工藝，多糖的藥理活性比常規(guī)水煮要高，但多糖提取率偏低，且所得提取物中靈芝三萜酸含量也偏低。中國專利CN1560072通過采用超臨界CO2萃取靈芝三萜酸提取液，提余物再經(jīng)熱水浸提得靈芝多糖提取液。但該方法所需設(shè)備投入較大、操作難度和生產(chǎn)成本也較高，且靈芝多糖提取率偏低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004](一)解決的技術(shù)問題
[0005]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種靈芝多糖的超聲波抽提方法。本發(fā)明不僅最大限度地保留了靈芝多糖的活性，而且全部加工過程實(shí)現(xiàn)了連續(xù)和高效化。
[0006]( 二)技術(shù)方案
[0007]為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
[0008]—種靈芝多糖的超聲波抽提方法，包括以下步驟:
[0009](I)原料前處理:將靈芝經(jīng)揀選，去除霉?fàn)€、畸形的子實(shí)體，子實(shí)體經(jīng)初破碎后過60-80目篩網(wǎng)，隨后將初粉碎后的靈芝粉粒放入納米粉碎機(jī)中再次粉碎，粉碎粒徑為100?200nm ；
[0010](2)脫脂:在靈芝微粒中加入95%乙醇浸泡3天，濾去乙醇；
[0011](3)粗提取:在乙醇處理過的靈芝微粒中加入復(fù)合酶，35?60°C下處理I?4h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶，隨后加入15?20倍量的蒸餾水，95?100°C下回流提取I?2h，重復(fù)2次，合并提取液后離心取上清液；
[0012](4)超聲波醇沉:在步驟(3)得到的上清液加入3?5倍量的85?95%的乙醇，攪拌均勻，再置于超聲振蕩器中超聲振蕩0.5?lh，超聲波頻率35?40KHz，超聲波功率為800?1000W，靜置12?24h，離心過濾得濾餅，將所得濾餅依次用95%乙醇、無水乙醇、乙醚各洗滌一次，低溫干燥后得到沉淀；
[0013](5)除蛋白和脫色:將干燥后的沉淀溶于蒸餾水中，攪拌下加入鞣酸溶液，煮沸15min后過濾除去固體雜質(zhì)，得到上清液，在鞣酸處理后得到的上清液中加入0.1%活性炭脫色兩次，熱過濾收集濾液；
[0014](6)超濾和濃縮:將脫色后的濾液進(jìn)行超濾，截留分子量30000，濾過液濃縮至相對密度為1.08?1.16，制成濃縮液；
[0015](7)純化:將濃縮液分別以0.025mol/L、0.lmol/L的硼砂，0.lmol/L的飽和氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗脫，然后用0.2%的恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脫液，濃縮脫鹽后真空干燥即得靈芝多糖。
[0016]優(yōu)選的，所述步驟(I)的復(fù)合酶溶液中復(fù)合酶為木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶中任意兩種或三種混合物。
[0017]優(yōu)選的，所述復(fù)合酶溶液用量為每克靈芝微粒中加入3mL。
[0018]優(yōu)選的，所述步驟⑷所述超聲波醇沉為:在步驟(3)得到的上清液加入4?5倍量的85?90%的乙醇，攪拌均勻，再置于超聲振蕩器中超聲振蕩0.5?lh，超聲波頻率35KHz，超聲波功率為800?900W，靜置12?24h，離心過濾得濾餅，將所得濾餅依次用95%乙醇、無水乙醇、乙醚各洗滌一次，低溫干燥后得到沉淀。
[0019]優(yōu)選的，所述步驟(3)所述粗提取為:在乙醇處理過的靈芝微粒中加入復(fù)合酶，45?50°C下處理2?3h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶，隨后加入16?18倍量的蒸餾水，95?100°C下回流提取I?2h，重復(fù)2次，合并提取液后離心取上清液。
[0020](三)有益效果
[0021]本發(fā)明提供了一種靈芝多糖的超聲波抽提方法，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果:
[0022](I)本發(fā)明采用的納米粉碎手段可以將存在于靈芝細(xì)胞內(nèi)壁的多糖最大程度的釋放出來；
[0023](2)本發(fā)明提供的方案中，先用乙醇處理后，以除去脂類物質(zhì)，同時(shí)使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解；采用復(fù)合酶降解外層纖維和果膠，更利于多糖的提取，可使靈芝多糖的提取率和含量得到較大提高；
[0024](3)本發(fā)明采用超聲波抽提方法從超細(xì)靈芝顆粒中提取靈芝多糖，減少了對靈芝多糖的破壞，顯著提高了有效成分的提取率，減少提取時(shí)間；醇沉工藝中采用超聲振蕩器振蕩，可以使得提取物中靈芝多糖最大化溶于乙醇中，提尚靈芝多糖的得率；
[0025](4)本發(fā)明方法所用溶劑安全，避免了傳統(tǒng)方法中采用氯仿、甲醇等有機(jī)溶劑對環(huán)境的污染。
【具體實(shí)施方式】
[0026]為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0027]實(shí)施例1:
[0028]本實(shí)施例靈芝多糖的超聲波抽提方法，包括以下步驟:
[0029](I)原料前處理:將靈芝經(jīng)揀選，去除霉?fàn)€、畸形的子實(shí)體，子實(shí)體經(jīng)初破碎后過60目篩網(wǎng)，隨后將初粉碎后的靈芝粉粒放入納米粉碎機(jī)中再次粉碎，粉碎粒徑為150nm;
[0030](2)脫脂:在靈芝微粒中加入95%乙醇浸泡3天，濾去乙醇；
[0031](3)粗提取:在乙醇處理過的靈芝微粒中加入木瓜蛋白酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶，加入量為3mL/g靈芝微粒，并于45°C下處理3h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶，隨后加入18倍量的蒸餾水，95°C下回流提取lh，重復(fù)2次，合并提取液后離心取上清液；
[0032](4)超聲波醇沉:在步驟(3)得到的上清液加入3倍量的90 %的乙醇，攪拌均勻，再置于超聲振蕩器中超聲振蕩0.5h，超聲波頻率35KHz，超聲波功率為750W，靜置18h，離心過濾得濾餅，將所得濾餅依次用95%乙醇、無水乙醇、乙醚各洗滌一次，低溫干燥后得到沉淀；
[0033](5)除蛋白和脫色:將干燥后的沉淀溶于蒸餾水中，攪拌下加入鞣酸溶液，煮沸15min后過濾除去固體雜質(zhì)，得到上清液，在鞣酸處理后得到的上清液中加入0.1%活性炭脫色兩次，熱過濾收集濾液；
[0034](6)超濾和濃縮:將脫色后的濾液進(jìn)行超濾，截留分子量30000，濾過液濃縮至相對密度為1.12，制成濃縮液；
[0035](7)純化:將濃縮液分別以0.025mol/L、0.lmol/L的硼砂，0.lmol/L的飽和氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗脫，然后用0.2%的恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脫液，濃縮脫鹽后真空干燥即得靈芝多糖。
[0036]實(shí)施例2:
[0037]本實(shí)施例靈芝多糖的超聲波抽提方法，包括以下步驟:
[0038](I)原料前處理:將靈芝經(jīng)揀選，去除霉?fàn)€、畸形的子實(shí)體，子實(shí)體經(jīng)初破碎后過60目篩網(wǎng)，隨后將初粉碎后的靈芝粉粒放入納米粉碎機(jī)中再次粉碎，粉碎粒徑為200nm ;
[0039](2)脫脂:在靈芝微粒中加入95%乙醇浸泡3天，濾去乙醇；
[0040](3)粗提取:在乙醇處理過的靈芝微粒中加入果膠酶和纖維素酶組成的復(fù)合酶，加入量為3mL/g靈芝微粒，并于60°C下處理4h，酶解結(jié)束后加熱滅活復(fù)合酶，隨后加入20倍量的蒸餾水，100°C下回流提取2h，重復(fù)2次，合并提取液后離心取上清液；
[0041 ] (4)超聲波醇沉:在步驟(3)得到的上清液加入5倍量的95 %的乙醇，攪拌均勻，再置于超聲振蕩器中超聲振蕩lh，超聲波頻率40KHz，超聲波功率為800W，靜置24h，離心過濾得濾餅，將所得濾餅依次用95%乙醇、無水乙醇、乙醚各洗滌一次，低溫干燥后得到沉淀；
[0042](5)除蛋白和脫色:將干燥后的沉淀溶于蒸餾水中，攪拌下加入鞣酸溶液，煮沸15min后過濾除去固體雜質(zhì)，得到上清液，在鞣酸處理后得到的上清液中加入0.1%活性炭脫色兩次，熱過濾收集濾液；
[0043](6)超濾和濃縮:將脫色后的濾液進(jìn)行超濾，截留分子量30000，濾過液濃縮至相對密度為1.16，制成濃縮液；
[0044](7)純化:將濃縮液分別以0.025mol/L、0.lmol/L的硼砂，0.lmol/L的飽和氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗脫，然后用0.2%的恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脫液，濃縮脫鹽后真空干燥即得靈芝多糖。
[0045]實(shí)施例3:
[0046]本實(shí)施例靈芝多糖的超聲波抽提方法，包括以下步驟:
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