專利名稱：抗腫瘤劑的聚合綴合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗腫瘤劑的聚合綴合物，在腫瘤部位主要通過基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)的作用釋放游離的活性藥物。藥物包括抗腫瘤劑，例如細胞毒素或參與腫瘤生長和傳播的酶的抑制劑。本發(fā)明的第一個目的是提供聚合的藥物綴合物，它在腫瘤部位主要通過基質(zhì)金屬蛋白酶明膠酶的作用選擇性釋放活性藥物。有人已經(jīng)報道了基質(zhì)金屬蛋白酶、確切為MMP2或明膠酶A的腫瘤分泌與實驗性轉(zhuǎn)移之間的相互關系(Liotta，L.A.等，J.Nat l.CancerInst.，81556，1989；Nakajima，M.等，Cancer Res.，474869，1987)。有人發(fā)現(xiàn)MMP2在圍繞轉(zhuǎn)移腫瘤的侵襲前部的基質(zhì)細胞內(nèi)被高度表達(Salo，T.等，J.Biol.Chem.，2583058，1983；Reponen，P.等，出處同上，2677856，1992)。這種酶在各種腫瘤類型中被表達，包括皮膚(Pyke，C.等，Cancer Res.，521336，1992)、肺(Kodate，M.等，Pathol.International，47461，1997；Nawrocki，B.等，International J.of Cancer，72556，1997)、胃(Endo，K.等，Anticancer Research，17225，3 1997)、結(jié)腸直腸(Liabakk，N.等，Cancer Res.，56190，1996；Pyke，C.等，Am.J.Pathol.，142359，1993)、乳腺(Gilles，C.等，Laboratory Invest.76651，1997；Davies，B.等，Br.J.Cancer，671126，1993)、前列腺(Stearns，M.E.等，Oncology Res.，869，1996)、卵巢(Fishman，D.等，Invasion & Metastasis，16150，1996)和膀胱(Miyake H.等，J.ofUrology，1572351，1997)。
不同類抗腫瘤劑的聚合綴合物已經(jīng)公開在PCT公報No.WO99/17805與WO 99/17804和美國專利5,773,522與5,618,790中。
本發(fā)明提供通式(A)的聚合的藥物綴合物P-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(A)其中P是水溶性聚合物；[W1]是式-HN-Z1-CO-殘基，其中Z1代表直鏈或支鏈C2-C12亞烷基鏈或式-C6H4-CH2-O-殘基；[W2]是式-HN-Z2-CO-殘基，其中Z2代表直鏈或支鏈C2-C12亞烷基鏈；p和r是0或1；S0是肽殘基，它可在腫瘤部位被基質(zhì)金屬蛋白酶的作用選擇性裂解；[D]是抗腫瘤劑的殘基。
因此，本發(fā)明提供通式(A)的抗腫瘤劑的聚合綴合物，它可以被基質(zhì)金屬蛋白酶、確切為明膠酶所裂解，釋放式S1-[W1]r-[D]的中間體，其中S1是從S0衍生的肽，[W1]、[D]和r是如上所定義的，從中抗腫瘤劑D是自發(fā)釋放的或者通過腫瘤組織中的蛋白水解酶的作用所釋放。
本發(fā)明的另一方面是提供治療實體腫瘤的方法，該方法包含新穎的通式(A)的聚合的藥物綴合物的給藥。
優(yōu)選地，P是水溶性聚合物，例如聚谷氨酸、羧基化葡聚糖、羧基化聚乙二醇或基于羥丙基甲代丙烯酰胺的聚合物。最優(yōu)選地，P是基于N-(2-羥丙基)甲代丙烯酰胺(N-(2-hydroxypropyl)methacryloylamide，HPMA)的聚合物。
優(yōu)選地，[W1]不存在，也就是r＝0，或者是自我犧牲性(self-imolative)對-氨基芐氧羰基連接基團(J.Med.Chem.vol.24，479(1991)；PABC，-pNH-C6H4-CH2-O-CO-)?？梢杂蒢1和Z2代表的C2-C12亞烷基鏈包含式-(CH2)3-、-CH2-C(CH3)2-CH2-和-(CH2)5-殘基。優(yōu)選地，[W2]是6-氨基己酸的殘基，Z2＝-(CH2)5-。
肽S0包含四至五個天然或合成氨基酸的序列。優(yōu)選地，肽S0代表Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO1)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO2)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Leu(SEQ IDNO3)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQ ID NO4)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO5)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO6)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO7)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO8)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp(SEQ ID NO9)，Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF(SEQ ID NO10)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO11)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQ ID NO12)，Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO13)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO14)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO15)，Smc-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO16)，Smc-Gly-Tha-Trp(SEQ ID NO17)，Smc-Gly-Met-Trp(SEQ ID NO18)，Smc-Gly-Tha-Trp-Gly(SEQ ID NO19)，Smc-Gly-Met-Trp-Gly(SEQ ID NO20)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO21)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO22)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO23)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO24)，Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO25)，Leu-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO26)，Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO27)，Leu-Gly-Leu-Trp-Gly(SEQ ID NO28).
最優(yōu)選的肽序列S0是Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO1)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO2)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO6)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQID NO7)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO8)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ IDNO11)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO14)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO15)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO21)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO22)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO23)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO24)，Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO25)，Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO27).
本說明書中，Leu是亮氨酸，Trp是色氨酸，Met是甲硫氨酸，Met(O)是甲硫氨酸亞砜，Cys(Bn)是S-芐基半胱氨酸，Smc是S-甲基半胱氨酸，Tha是噻吩基丙氨酸，pFF是對-氟苯基甘氨酸，Gly是甘氨酸。
藥物殘基[D]是攜帶用于連接連接基團W1或肽S0的官能團的抗腫瘤劑殘基。這類官能團包含羥基、羰基、羧基、伯或仲氨基和巰基。優(yōu)選的抗腫瘤劑包括屬于下類的細胞毒劑長春花生物堿類、蒽環(huán)霉素類、紫杉烷類、細胞毒核苷類、喜樹堿類、鬼臼毒素類、烷化劑類。這些種類的成員例如包括4-脫乙酰長春堿、4-脫乙酰長春新堿、長春地辛、多柔比星、4’-表多柔比星、柔紅霉素、4-脫甲氧基柔紅霉素、4’-脫氧-4’-碘多柔比星、3’-(2-甲氧基嗎啉代)多柔比星、紫杉醇、多西他賽、5-氟尿嘧啶、喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、依托泊苷、雌莫司汀。本發(fā)明的其他抗腫瘤藥物包括參與腫瘤生長和傳播的酶的抑制劑。
本發(fā)明還提供用于制備通式(A)的藥物綴合物的方法，該方法包含使通式(1)化合物或?qū)氖?1’)鹽衍生物H-[W2]p-S0-[W1]r-[D] RH H-[W2]p-S0-[W1]r-[D](1) (1’)其中[W1]、[W2]、p、r、S0和[D]是如上所定義的，RH是一種酸，與攜帶適合與化合物(1)或(1’)偶聯(lián)的官能團的聚合物P1反應。聚合物P1上適合與化合物(1)或(1’)連接的官能團包含羧基或活化的羧基，例如對-硝基苯基酯或咪唑甲?；?。優(yōu)選地，(1’)中的RH代表HCl或CF3COOH。
本發(fā)明還提供式(1)化合物和對應的鹽衍生物(1’)。它們可以按照不同的合成方法制備。一種方法包含優(yōu)選在酸性條件下，從式(2)衍生物除去N-保護基團R2-[W2]p-S0-[W1]r-[D](2)其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如上所定義的，R2代表氨基保護基團，例如Boc(叔丁氧羰基)、Fmoc、三苯基甲硅烷基、二苯基亞甲基或三苯甲基，得到如上所定義的通式(1)或(1’)化合物，再可選地通過溫和的堿處理轉(zhuǎn)化通式(1’)化合物為對應的游離氨基衍生物(1)。
式(2)衍生物優(yōu)選地利用這樣一種方法制備，該方法包含可選地在縮合劑的存在下，使式(3)化合物與式(4)化合物反應，H-Sx-[W1]r-[D] R2-[W2]p-Sy-R1(3)(4)其中[W1]、[W2]、R2、p、r是如上所定義的，R1是羥基，或活化酯殘基，例如對-硝基苯氧基或N-羥基琥珀酰亞氨基，或鹵素，例如氯，Sx、Sy獨立地是氨基酸或肽殘基，其特征在于當連接在一起時，構(gòu)成如上所定義的肽殘基S0，得到如上所定義的式(2)衍生物。優(yōu)選地，Sy代表Met(O)-Gly，Smc-Gly或Leu-Gly，Sx代表Cys(Bn)-Leu，Cys(Bn)-Gly，Cys(Bn)-Gly-Leu，Cys(Bn)-Trp-Gly，-Cys(Bn)-pFF-Gly，Cys(Bn)-Gly-Gly，Cys(Bn)-Leu-Gly，Cys(Bn)-Trp，Cys(Bn)-pFF，Leu-Trp，Tha-Trp，Met-Trp，Tha-Trp-Gly，Met-Trp-Gly，Leu-Leu，Leu-Leu-Gly或Leu-Trp-Gly.
式(2)衍生物還可以利用這樣一種方法制備，該方法包含使攜帶用于連接連接基團W1或肽S0的官能團的抗癌藥D與N-保護的式(5)衍生物反應，R2-[W2]p-S0-[W1]r-R1(5)其中[W1]、[W2]、R2、R1、p、r和S0是如上所定義的，得到如上所定義的式(2)衍生物。
如上所定義的式(2)化合物的替代制備方法例如包含a)使藥物D與式(6)化合物反應，R2-[W1]r-R1(6)其中[W1]、r、R1和R2是如上所定義的，b)從所得式(7)化合物除去保護基團，R2-[W1]r-[D](7)其中[W1]、r、R2和[D]是如上所定義的，c)使所得式(8)衍生物H-[W1]r-[D](8)其中[W1]、r和[D]是如上所定義的，與N-保護的式(9)衍生物反應，
R2-[W2]p-S0-R1(9)其中[W2]、R1、R2、p和S0是如上所定義的，得到如上所定義的式(2)衍生物。
式(2)化合物的另一種制備方法包含使游離堿(10)H-S0-[W1]r-[D](10)其中[W1]、[D]、r和S0是如上所定義的，與N-保護的并被活化的式(11)化合物反應，R2-[W2]p-R1(11)其中[W2]、p、R1和R2是如上所定義的，得到如上所定義的式(2)化合物。
式(4)、(5)和(9)化合物的制備遵照已知的肽制備工藝。例如，利用固相合成法，向附著于固相樹脂、例如Wang樹脂上的生長中的鏈逐步加入N-保護的氨基酸。優(yōu)選地，N-保護基團是Fmoc。因此，在有機堿的存在下，例如二異丙基乙胺(DIPEA)，在非質(zhì)子有機溶劑中，例如二氯甲烷，N-保護的氨基酸的C-末端與樹脂連接。鏈的延長是通過去保護/偶聯(lián)周期的標準循環(huán)而完成的。優(yōu)選地，F(xiàn)moc保護基團是用含20％哌啶的N-甲基-2-吡咯烷酮去保護的，偶聯(lián)步驟是利用含TBTU、HOBt、DIPEA的N-甲基-2-吡咯烷酮進行的。樹脂裂解可以利用二氯甲烷、乙酸、三氟乙酸的混合物(3/1/1，v/v)或二氯甲烷、三氟乙酸的混合物(99/1，v/v)完成。
式(3)和(10)化合物可以這樣制備，使如上所定義的化合物(8)先后與N-保護的氨基酸或肽反應。式(6)、(7)、(8)和(11)起始化合物的制備遵照已知工藝。式(1)化合物的制備遵照類似于我們以前的PCT公報No.WO 99/17805與WO 99/17804和美國專利5,773,522與5,618,790所述的合成工藝。
下列合成流程闡述聚合物-藥物-綴合物(A)的制備中間體式(1)和(1’)藥物-綴合物的制備。例如在流程1中，闡述了7-乙基-10-羥基-20-O-[6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亞砜)-甘氨酰-(S-芐基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜樹堿鹽衍生物(1’a)的制備。合成過程包含先后向7-乙基-10-羥基-喜樹堿(D112)連接N-保護的氨基酸。確切地說，在氬下，在活化劑的存在下，例如4-二甲氨基吡啶(DMAP)，在無水非質(zhì)子溶劑中，例如二甲基亞砜，使(12)與摩爾過量的、例如多達三摩爾當量的N-叔丁氧羰基-甘氨酸對-硝基苯基酯(Boc-G1y-ONP)反應。以這種方式，在化合物(12)的兩個羥基化位置C-10和C-20引入被保護的氨基酸。反應通常可以進行8至48小時。反應通常在15至40℃的溫度下進行。在仲胺，例如嗎啉、1-氨基-脯氨醇的存在下，除去C-10位的取代基，得到在C-20單取代的N-Boc-甘氨酰衍生物(13)。氨基保護基團可以通過酸處理除去，例如在10至30℃的溫度下用1.5N HCl的乙酸溶液或95％三氟乙酸水溶液處理10分鐘至6小時，優(yōu)選在室溫下處理半小時，得到酸鹽形式的20-O-甘氨酰衍生物(14’)。第二種氨基酸亮氨酸可以這樣引入，即在縮合劑，例如1-羥基苯并三唑(HOBt)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)和二異丙基胺(DIPEA)的存在下，在無水非質(zhì)子溶劑，優(yōu)選二甲基甲酰胺中，使化合物(14’)與摩爾過量的、例如多達兩摩爾當量的N-叔丁氧羰基-亮氨酸(Boc-Leu-OH)反應。反應通常可以進行8至48小時。反應通常在15至40℃的溫度下進行。用嗎啉處理，然后進行化合物(15)的N-保護基團的酸置換作用，得到7-乙基-10-羥基-20-O-(亮氨酰-甘氨酰)-喜樹堿(16’)。在與前述連接亮氨酸相同的條件下，將該化合物按順序用N-叔丁氧羰基-S-芐基半胱氨酸處理，得到化合物(17)和N-叔丁氧羰基-6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亞砜)-甘氨酰，制得鹽形式的最終中間體(1’a)，例如三氟乙酸鹽衍生物。
流程1 aBoc-Gly-ONp，DMSO，DMAP，rt，24hb嗎啉cCF3COOHdBoc-Leu-OH，DMF，HOBt，TBTU，DIPEA，rt，18heBoc-Cys(Bn)-OH，DMF，HOBt，TBTU，DIPEA，rt，18hfBoc-HN-(CH2)5-Met(O)-Gly-OH，DMF，HOBt，TBTU，DIPEA，rt，18h流程2闡述攜帶序列6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰-亮氨酰的4-脫乙酰長春堿綴合物(1c)的制備過程。該過程開始于硫酸長春堿(20)，它首先通過堿處理轉(zhuǎn)化為游離堿，然后利用甲醇鈉的無水甲醇溶液在C-4位脫?；癁榛衔?21)。4-脫乙酰長春堿(21)與酰氯形式的N-保護的亮氨酰衍生物、例如Fmoc衍生物反應，得到Fmoc-亮氨酰衍生物(22)。除去N-保護基團，生成化合物(23)，這通常是在哌啶與二甲基甲酰胺的混合物中進行的。6-氨基己酰-亮氨酰-亮氨酰-甘氨酰的連接通常是如上所述進行的，在N-保護基團的除去和鹽的生成之后，制得(1c’)。流程2
如上所述，式(1)或(1’)化合物是可用于制備本發(fā)明式(A)聚合抗癌劑的中間體。
在不限制本發(fā)明范圍的前提下，下面報道式(A)聚合的藥物綴合物的實施例，其中水溶性聚合物P是基于N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺(HPMA)的。
在這樣的情況下，以(A)表示的聚合的藥物綴合物包含組成如下的可溶性聚合物P’(i)85至97mol％的由式(25)代表的N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺單元 (ii)3至15mol％的由式(26)代表的單元 其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如上所定義的，(iii)0至12mol％的由式(27)代表的N-甲代丙烯酰-甘氨酸或N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰-甘氨酰胺單元 其中R3代表羥基或式-NH-CH2-CH(OH)-CH3殘基。
這種聚合的藥物綴合物(A)還可以如下所代表[(25)]x；[(26)]y；[(27)]z，其中(25)、(26)和(27)是如上所定義的單元，x是85至97mol％，y是3至15mol％，z是0至12mol％。
優(yōu)選地，如上所定義的這種聚合的藥物綴合物(A)含有90％或以上、更優(yōu)選90％的由式(25)代表的N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺單元。該綴合物還可以含有3至10mol％、更優(yōu)選10mol％的由式(26)代表的甲代丙烯酰-甘氨酰衍生物單元。優(yōu)選地，(A)不含有式(27)殘基，也就是說z是0。
本發(fā)明還提供用于制備式(A)藥物綴合物的方法，該方法包含使通式(1)化合物與活化的聚合物P1’反應，后者的基本組成如下(i)85至97mol％的由如上所定義的式(25)代表的N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺單元，和(ii)3至15mol％的由式(28)代表的N-甲代丙烯酰-甘氨酰單元 其中R4是活性酯的殘基，再可選地用1-氨基-2-丙醇置換其余活性酯基團。
式P1’聚合物已經(jīng)描述在Makromol.Chem.178，2159(1977)中。優(yōu)選地，其中式(28)中的R4代表活性酯殘基的聚合物(P1’)與式(1)化合物之間制備聚合的藥物綴合物(A)的反應是在無水極性有機溶劑例如二甲基亞砜中進行的。反應通?？梢栽?5至30℃的溫度下、優(yōu)選在室溫下進行15小時；然后其余活性酯基團的氨解作用可以在1-氨基-2-丙醇的存在下、在室溫下進行0.5至1小時。適宜將綴合物用乙酸乙酯沉淀，溶于乙醇，用乙酸乙酯沉淀。
例如，在室溫下，在叔胺例如DPEA或三乙胺的存在下，將其中式(28)中的R4代表活性酯殘基、例如對-硝基苯酚的聚合物P1’的15％(w/v)無水二甲基亞砜溶液用3％(w/v)的式(1’a-1’c)化合物處理15小時。然后加入1-氨基-2-丙醇的0.1％(w/v)DMF溶液，將反應混合物在室溫下保持8小時?？梢詫⑺镁酆系乃幬锞Y合物(A1a-A1c)用乙酸乙酯沉淀，收集，用乙酸乙酯洗滌，然后用無水乙醇溶解，濃度10％(w/v)，用磺酸型樹脂處理，過濾，再次用乙酸乙酯沉淀。
該過程闡述在流程3和4中。流程3 方案4 活性藥物在本發(fā)明的聚合綴合物中的含量是通過HPLC或吸光度光譜分析測定的。
式(A)的聚合的藥物綴合物的分子量在5,000至45,000的范圍內(nèi)，優(yōu)選從12,000至25,000。式(A)化合物和本發(fā)明的其他化合物是水溶性的，與游離藥物相比顯示更強的抗腫瘤活性和更低的毒性。它們可用于治療白血病和實體腫瘤，例如結(jié)腸、結(jié)腸直腸、卵巢、乳腺、前列腺、肺、腎的腫瘤和黑素瘤。因此可以用這樣一種方法治療人，對其給以治療有效量的本發(fā)明聚合綴合物。因而能夠改善人類患者的疾病。
所采用的劑量范圍將取決于給藥的途徑和受治療患者的年齡、體重和狀況。式(A)的聚合的藥物綴合物以及式(1’)的可溶性鹽衍生物通常是通過腸胃外途徑給藥的，例如肌內(nèi)、靜脈內(nèi)或大丸劑輸注。適合的劑量范圍是每m2體表面積1至1000mg活性藥物等價物，例如10至500mg/m2。
聚合的藥物綴合物(A)或式(1’)的可溶性鹽衍生物可以與藥物載體或稀釋劑一起配制成藥物組合物。通常，它們被配制成腸胃外給藥劑型，例如溶解在注射用水或生理鹽水中。
酶測定在緩沖液中、在若干蛋白水解酶(基質(zhì)金屬蛋白酶MMP、絲氨酸蛋白酶(彈性蛋白酶))的存在下和在血漿中研究了式(A)的聚合的藥物綴合物的體外降解作用。
將聚合的藥物綴合物(A)按標準濃度10mM溶于無菌蒸餾水。根據(jù)聚合物負載百分率(5-10wt％藥物)計算藥物等價物的濃度。在50mMTris/HCl pH 7.4緩沖液中測定化合物(A)，緩沖液含有0.15M NaCl、10μM CaCl2、0.01mM乙酸鋅和0.05％C12E9。使聚合的藥物綴合物在37℃下、在緩沖液中平衡5分鐘，濃度從5至1000μM不等。加入酶(MMP)至最終濃度為50μM，開始反應。加入0.05％ TFA緩沖液(pH 2.5)終止反應，使聚合的藥物綴合物的水解作用在5％以內(nèi)，隨后通過aquapore OD300柱用RP-HPLC分析。
反應產(chǎn)物的量化是用RP-HPLC得到的。例如Perkin Elmer HPLC，其由ISS 200自動取樣儀、Series 200LC泵和LC240熒光檢測儀組成，或者作為替代選擇的Waters HPLC，其由717+自動取樣儀、Model 600泵和Model 474熒光計組成。
我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的式(A)和(1’)化合物在明膠酶的存在下選擇性地釋放抗腫瘤劑D，在血漿中和在其他蛋白水解酶的存在下基本上是穩(wěn)定的。
下列實施例闡述本發(fā)明。
實施例17-乙基-10-羥基-20-O-甘氨酰-喜樹堿三氟乙酸鹽(14’)將7-乙基-10-羥基-喜樹堿(12)(2.1g，5.3mmol)溶于無水二甲基亞砜(50ml)，加入N-叔丁氧羰基-甘氨酸對-硝基苯基酯(4.8g，16.2mmol)和二甲氨基吡啶(0.8g，6.5mmol)。將反應混合物在氬氣氛和室溫下攪拌24小時。然后加入嗎啉(4.6ml)，將反應混合物在室溫下攪拌24小時。然后加入二氯甲烷(200ml)和0.5N HCl水溶液。分離有機相，用水洗滌(3×200ml)。在減壓下除去有機溶劑，得到7-乙基-10-羥基-20-O-[叔丁氧羰基-甘氨酰]-喜樹堿(13)。在kiesel凝膠板(Merck)上進行TLC，用二氯甲烷/甲醇(95/5，v/v)洗脫，Rf＝0.3。
將化合物(13)溶于三氟乙酸(50ml 95％水溶液)，1小時后在減壓下除去溶劑，得到標題化合物(14’，收率3g)，為三氟乙酸鹽衍生物的形式。
實施例27-乙基-10-羥基-20-O-(亮氨酰-甘氨酰)-喜樹堿三氟乙酸鹽(16’)將含有N-叔丁氧羰基-亮氨酸(2.49g，10mmol)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(1.53g，10mmol)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)(3.21g，10mmol)與二異丙基乙胺(DIPEA)(3.5ml，20mmol)的二甲基甲酰胺(50ml)溶液與如實施例1所述制備的化合物(14’)(3g，5.28mmol)在含有DIPEA(1.75ml，10mmol)的二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液混合30分鐘。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。然后加入嗎啉(4.5ml，5.6mmol)，將混合物攪拌6小時。然后在減壓下蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶于二氯甲烷(200ml)，用0.5N HCl水溶液、5％NaHCO3水溶液(200ml)和水(2×200ml)洗滌。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，然后在減壓下除去溶劑，得到7-乙基-10-羥基-20-O-(N-叔丁氧羰基-亮氨酰-甘氨酰)-喜樹堿(16)。在kiesel凝膠板(Merck)上進行TLC，用二氯甲烷/甲醇(95/5，v/v)洗脫，Rf＝0.5。
將化合物(16)溶于三氟乙酸(50ml 95％水溶液)，1小時后在減壓下除去溶劑，得到標題化合物((16’)，收率3g)，用乙醚收集，為三氟乙酸鹽衍生物的形式。
實施例37-乙基-10-羥基-20-O-[(S-芐基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜樹堿三氟乙酸鹽(18’)按照與實施例2所述相同的條件使化合物(16’，3g)與N-叔丁氧羰基-(S-芐基-半胱氨酸)反應，得到7-乙基-10-羥基-20-O-[N-叔丁氧羰基-(S-芐基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜樹堿(17)，如實施例2所述轉(zhuǎn)化為標題化合物(18’)。
實施例47-乙基-10-羥基-20-O-[6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亞砜)-甘氨酰-(S-芐基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜樹堿三氟乙酸鹽(1’a)按照與實施例2所述相同的條件，將含有N-叔丁氧羰基-6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亞砜)-甘氨酸(0.358g，0.57mmol)的二甲基甲酰胺(DMF，5ml)溶液與化合物(18’)(0.257g，0.76mmol)的二甲基甲酰胺(2ml)溶液混合，然后除去Boc保護基團，制備標題化合物。
實施例5N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺、7-乙基-10-羥基-20-O-[N-甲代丙烯酰-6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亞砜)-甘氨酰-(S-芐基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜樹堿與N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰甘氨酰胺的共聚物(A1a)向聚合物(P1’)(0.756g)的無水二甲基亞砜(4ml)溶液加入如實施例4所述制備的7-乙基-10-羥基-20-O-[6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亞砜)-甘氨酰-(S-芐基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜樹堿三氟乙酸鹽(1’a)(0.23g，0.193mmol)和三乙胺(0.53ml，0.396mmol)。將反應混合物在氬氣氛和室溫下攪拌24小時。然后加入0.1ml1-氨基-2-丙醇(0.3ml)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液，繼續(xù)攪拌8小時。然后在攪拌下向反應混合物加入乙酸乙酯(200ml)。收集沉淀，用乙酸乙酯洗滌，溶于乙醇(8ml)，用磺酸型樹脂(DOWEX 50-磺酸)處理30分鐘。將溶液過濾，用乙酸乙酯沉淀。所得固體用乙醚洗滌，干燥至恒重，得到標題化合物(A1a)。收率0.8g，Mw 20,800，多分散性1.48，7-乙基-10-羥基-喜樹堿的負載率7.5％(w/w％)。
實施例64-脫乙酰-4-O-亮氨酰-長春堿(23)在劇烈攪拌下，向硫酸長春堿(20)(1.5g，1.65mmol)的水(15ml)溶液加入二氯甲烷(15ml)和濃氨(1.5ml)。5分鐘后，傾析混合物，含水層用二氯甲烷萃取(3×15ml)。合并有機相，用水(30ml)和鹽水(30ml)洗滌，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，在減壓下蒸發(fā)，得到游離堿形式的長春堿，用乙醚與己烷的混合物(1∶1)沉淀后收集之。得到1.31g(1.61mmol，收率98％)。將長春堿游離堿(60mg，0.06mmol)溶于無水甲醇(5ml)，加入到甲醇鈉溶液(NaOCH3，190mg，無水甲醇7ml)中，在室溫下攪拌3小時。然后將反應混合物用二氯甲烷稀釋，用冷鹽水洗滌，然后用NaHCO3水溶液洗滌兩次，最后再次用鹽水洗至pH 7-8。分離有機層，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，在減壓下除去溶劑，得到4-脫乙酰長春堿的灰白色結(jié)晶性固體(21)(46mg)。在kiesel凝膠板(Merck)上進行TLC，用二氯甲烷/甲醇(90/10，v/v)洗脫，Rf＝0.34。
將化合物(21)(0.2g，0.26mmol)的無水吡啶(4.5ml)溶液用Fmoc-Leu-Cl(0.385g，1.04mmol)的無水二氯甲烷(1.9ml)溶液處理。將反應混合物在室溫下保持12小時。然后向反應混合物加入水(0.5ml)，破壞過量的酰氯，在減壓下蒸發(fā)溶劑。使殘余物在乙酸乙酯與飽和NaHCO3之間分配，用鹽水洗滌。有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥，然后在減壓下除去溶劑。在室溫下將殘余物溶于哌啶(1.3ml)與無水DMF(2.7ml)的混合物。30分鐘后，在減壓下除去溶劑，粗品油經(jīng)過硅膠快速色譜純化，使用氯仿與甲醇(95/5，v/v)作為洗脫系統(tǒng)，得到標題化合物(23)(0.178g，收率62％)。在kiesel凝膠板(Merck)上進行TLC，用二氯甲烷/甲醇(90/10，v/v)洗脫，Rf＝0.3。
實施例74-脫乙酰-4-O-(6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰-亮氨酰)-長春堿三氟乙酸鹽(1’c)將N-叔丁氧羰基-6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰(0.17g，0.32mmol)與4-脫乙酰-4-O-亮氨酰-長春堿(23)(0.28g，0.32mmol)、TBTU(0.1g，0.32mmol)和HOBt(0.05g，0.32mmol)一起溶于無水二甲基甲酰胺(6ml)。加入二異丙基乙胺(0.1ml，0.26mmol)后，將反應混合物攪拌48小時。然后在減壓下除去溶劑，使殘余物在二氯甲烷與飽和NaHCO3之間分配。將有機層再次用飽和NaHCO3洗滌，最后用鹽水洗滌。經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，在減壓下除去溶劑，得到粗品油，經(jīng)過快速色譜純化，使用氯仿/甲醇混合物(95/5，v/v)作為洗脫系統(tǒng)，得到4-脫乙酰-4-O-(叔丁氧羰基-6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰)-長春堿(24)(0.32g，收率75％)。在kiesel凝膠板(Merck)上進行TLC，用二氯甲烷/甲醇(90/10，v/v)洗脫，Rf＝0.59。
將化合物(24)用二氯甲烷中的50％三氟乙酸溶液(2.5ml)處理。在室溫下攪拌2小時后，在減壓下除去溶劑，將殘余物用甲苯處理兩次，干燥，得到標題化合物(1c’)，為二-三氟乙酸鹽。
實施例8N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺、4-O-(N-甲代丙烯酰-甘氨酰-6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰-亮氨酰)-長春堿與N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰甘氨酰胺的共聚物(A1c)將如實施例7所述制備的化合物(1’c)(0.3g，0.22mmol)溶于無水二甲基亞砜(1.5ml)，加入到P1’(1.5g)的無水二甲基亞砜(6ml)溶液中，然后加入二異丙基乙胺(0.7ml，0.25mmol)。在室溫下攪拌24小時后，向反應混合物加入1-氨基-2-丙醇(0.1ml)，1小時后，將反應混合物倒入乙酸乙酯(100ml)中。過濾含有(A1c)的沉淀，用乙醚洗滌，然后溶于15ml水(HPLC級)，在G-25大小排阻柱體上純化(7次，洗脫劑水)。收集各部分，冷凍干燥后得到標題化合物(A1c)(1.2g，收率78％)。
抗腫瘤活性通過i.v.途徑試驗化合物(A1a)與游離藥物7-乙基-10-羥基喜樹堿(12)相比對移植在裸鼠中的人結(jié)腸癌(HT29)的作用。發(fā)現(xiàn)A1a在所有試驗劑量下都是無毒的，在最高試驗劑量20mg/kg下產(chǎn)生98％的腫瘤抑制作用(表1)。
表1A1a與7-乙基-10-羥基喜樹堿(12)相比對人結(jié)腸癌(HT29)的抗腫瘤活性。i.v.處理q4dx6
腫瘤片段是s.c.植入的。
處理開始于腫瘤可觸摸到之時。
TI％(腫瘤抑制％)是在第46天計算的。
Tox是死于毒性的小鼠數(shù)/總小鼠數(shù)。
序列表<110>Pharmacia & Upjohn S.p.A.<120>抗腫瘤劑的聚合綴合物<130>SEQUENCE S-S1’<140><141><150>GB 0018240.2<151>2000-07-25<160>28<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>1Xaa Gly Xaa Leu1<210>2<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>2Xaa Gly Xaa Gly1<210>3<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<220><223>人工序列描述合成<400>3Xaa Gly Xaa Gly Leu1 5<210>4<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>4Xaa Gly Xaa Trp Gly1 5<210>5<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(4)<223>對氟苯基甘氨酸<400>5Xaa Gly Xaa Xaa Gly1 5<210>6<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>6Xaa Gly Xaa Gly Gly1 5<210>7<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亞砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>7Xaa Gly Xaa Leu Gly1 5<210>8<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>8Xaa Gly Xaa Leu1<210>9<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>9Xaa Gly Xaa Trp1<210>10<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(4)<223>對氟苯基甘氨酸<400>10Xaa Gly Xaa Xaa1<210>11<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>11Xaa Gly Xaa Gly1<210>12<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>12Xaa Gly Xaa Trp Gly1 5<210>13<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(4)<223>對氟苯基甘氨酸<400>13Xaa Gly Xaa Xaa Gly1 5<210>14<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>14Xaa Gly Xaa Gly Gly1 5<210>15<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>15Xaa Gly Xaa Leu Gly1 5<210>16<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<400>16Xaa Gly Leu Trp1<210>17<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>噻吩丙氨酸<400>17Xaa Gly Xaa Trp1<210>18<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<400>18Xaa Gly Met Trp1<210>19<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>噻吩丙氨酸<400>19Xaa Gly Xaa Trp Gly1 5<210>20<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<400>20Xaa Gly Met Trp Gly1 5<210>21<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>21Leu Gly Xaa Leu1<210>22<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>22Leu Gly Xaa Gly1<210>23<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>23Leu Gly Xaa Leu Gly1 5<210>24<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-芐基半胱氨酸<400>24Leu Gly Xaa Gly Gly1 5<210>25<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<400>25Leu Gly Leu Leu1<210>26<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<400>26Leu Gly Leu Trp1<210>27<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<400>27Leu Gly Leu Leu Gly1 5<210>28<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述合成<400>28Leu Gly Leu Trp Gly1 權利要求
1.式(A)的聚合的藥物綴合物P-[W2]p-S0-[W1]r-[D](A)其中P是水溶性聚合物；[W1]是式-HN-Z1-CO-殘基，其中Z1代表直鏈或支鏈C2-C12亞烷基鏈或式-C6H4-CH2-O-殘基；[W2]是式-HN-Z2-CO-殘基，其中Z2代表直鏈或支鏈C2-C12亞烷基鏈；p和r是0或1；S0是肽殘基，它可在腫瘤部位被基質(zhì)金屬蛋白酶的作用選擇性裂解；[D]是抗腫瘤劑的殘基。
2.根據(jù)權利要求1的聚合綴合物，其中[D]是攜帶用于連接如權利要求1所定義的式(A)綴合物的連接基團W1或肽S0部分的官能團的抗腫瘤劑殘基；r是0或者[W1]是自我犧牲性對-氨基芐氧羰基連接基團，[W2]是6-氨基己酸殘基；P是聚谷氨酸、羧基化葡聚糖、羧基化聚乙二醇或基于N-(2-羥丙基)甲代丙烯酰胺的聚合物。
3.根據(jù)權利要求1或2的聚合綴合物，其中肽S0包含四至五個天然或合成氨基酸的序列。
4.根據(jù)權利要求3的聚合綴合物，其中S0代表下式序列Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO1)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO2)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Leu(SEQ ID NO3)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQID NO4)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO5)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO6)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO7)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO8)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp(SEQ ID NO9)，Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF(SEQ ID NO10)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO11)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQ ID NO12)，Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO13)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO14)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ IDNO15)，Smc-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO16)，Smc-Gly-Tha-Trp(SEQ ID NO17)，Smc-Gly-Met-Trp(SEQ ID NO18)，Smc-Gly-Tha-Trp-Gly(SEQ ID NO19)，Smc-Gly-Met-Trp-Gly(SEQ ID NO20)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO21)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO22)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO23)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO24)，Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO25)，Leu-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO26)，Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO27)或Leu-Gly-Leu-Trp-Gly(SEQ ID NO28).
5.根據(jù)權利要求4的聚合綴合物，其中S0代表下式序列Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO1)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQID NO2)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO6)，Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO7)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO8)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO11)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO14)，Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO15)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO21)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO22)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO23)，Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO24)，Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO25)或Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO27).
6.根據(jù)在先權利要求任意一項的聚合綴合物，其中抗腫瘤劑[D]是屬于下類的細胞毒劑長春花生物堿類、蒽環(huán)霉素類、紫杉烷類、細胞毒核苷類、喜樹堿類、鬼臼毒素類或烷化劑類。
7.根據(jù)權利要求6的聚合綴合物，其中抗腫瘤劑[D]是4-脫乙酰長春堿、4-脫乙酰長春新堿、長春地辛、多柔比星、4’-表多柔比星、柔紅霉素、4-脫甲氧基柔紅霉素、4’-脫氧-4’-碘多柔比星、3’-(2-甲氧基嗎啉代)多柔比星、紫杉醇、多西他賽、5-氟尿嘧啶、喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、依托泊苷或雌莫司汀。
8.根據(jù)在先權利要求任意一項的聚合綴合物，其中[P]是基于N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺的水溶性聚合物。
9.用于制備如權利要求1所定義的聚合綴合物的方法，該方法包含使通式(1)化合物或相應的式(1’)鹽衍生物H-[W2]p-S0-[W1]r-[D]RH H-[W2]p-S0-[W1]r-[D](1)(1’)其中[W1]、[W2]、p、r、S0和[D]是如權利要求1所定義的，RH是一種酸，與攜帶適合與化合物(1)或(1’)偶聯(lián)的官能團的聚合物P1反應。
10.根據(jù)權利要求9的方法，其中聚合物[P1]上適合與如權利要求9所定義的化合物(1)或(1’)連接的官能團包含羧基或活化的羧基。
11.如權利要求9所定義的式(1)抗腫瘤衍生物或?qū)氖?1’)鹽衍生物。
12.用于制備如權利要求11所定義的式(1)或(1’)化合物的方法，該方法包含-從式(2)衍生物除去N-保護基團R2-[W2]p-S0-[W1]r-[D](2)其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如權利要求9所定義的，R2代表氨基保護基團，-可選地通過溫和的堿處理將所得通式(1’)化合物轉(zhuǎn)化為相應的游離氨基衍生物(1)。
13.根據(jù)權利要求12的方法，其中N-保護基團的除去是在酸性條件下進行的，R2代表Boc(叔丁氧羰基)、Fmoc、三苯基甲硅烷基、二苯基亞甲基或三苯基甲基。
14.根據(jù)權利要求1的聚合的藥物綴合物，它包含組成如下的水溶性聚合物[P](i)85至97mol％的由式(25)代表的N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺單元 (ii)3至15mol％的由式(26)代表的單元 其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如權利要求1所定義的，(iii)0至12mol％的由式(27)代表的N-甲代丙烯酰-甘氨酸或N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰-甘氨酰胺單元 其中R3代表羥基或式-NH-CH2-CH(OH)-CH3殘基。
15.用于制備如權利要求14所定義的藥物綴合物的方法，該方法包含使如權利要求9所定義的式(1)或(1’)化合物與活化的水溶性聚合物(P1’)反應，后者的基本組成如下(i)85至97mol％的由權利要求14所定義的式(25)代表的N-(2-羥基丙基)甲代丙烯酰胺單元，和(ii)3至15mol％的由式(28)代表的N-甲代丙烯酰-甘氨酰單元 其中R4是活性酯的殘基，再可選地用1-氨基-2-丙醇置換其余活性酯基團。
16.藥物組合物，其中包含藥學上可接受的稀釋劑或載體和作為活性成分的如權利要求1至8或14任意一項所定義的聚合綴合物或如權利要求11所定義的式(1)或(1’)化合物。
17.用在人或動物治療方法中的如權利要求1至8或14任意一項所定義的聚合綴合物或如權利要求11所定義的式(1)或(1’)化合物。
18.如權利要求1至8或14任意一項所定義的聚合綴合物或如權利要求11所定義的式(1)或(1’)化合物在藥物制備中的用途，該藥物用于治療白血病或?qū)嶓w腫瘤。
19.根據(jù)權利要求18的用途，其中該實體腫瘤是結(jié)腸、結(jié)腸直腸、卵巢、乳腺、前列腺、肺、腎的腫瘤或黑素瘤。
全文摘要
描述了式(A)P－[W
文檔編號C07K5/10GK1443079SQ01813242
公開日2003年9月17日 申請日期2001年7月9日 優(yōu)先權日2000年7月25日
發(fā)明者A·蘇拉托, F·安格魯西, M·卡路索, A·斯克拉羅, D·沃爾皮, M·扎梅 申請人:法瑪西雅意大利公司