專利名稱：調控免疫球蛋白e及抑制細胞增殖的苯并咪唑化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及對過敏原的反應的IgE的小分子抑制劑，其用于治療過敏和/或哮喘或任一其它因IgE而致病的疾病。本發(fā)明還涉及作為細胞增殖抑制劑的小分子，它們可作為抗癌劑。
背景技術：
過敏和哮喘估計在美國約一千萬個人(約為人口的5％)患有哮喘，其在美國哮喘治療預計成本超過六十億。大約25％的哮喘患者會有緊急狀況需要住院治療，而其中哮喘最大單項直接醫(yī)學支出是為住院病人醫(yī)院服務(急診護理)，該費用大于十六億。此外，處方藥物治療費用在1985和1990年之間增加54％而亦高達約十一億(Kelly，Pharmacotherapy 1213S-21S(1997))。
根據國民行動醫(yī)療保健調查，全部行動醫(yī)療護理的出訪中的1％是起因于哮喘，而且哮喘疾病一直是使孩子們無法到學校的主要起因。盡管對疾病過程了解的改進和更好藥品的出現，哮喘的發(fā)病率和死亡率持續(xù)在美國和全球各國上升(美國健康和人類服務部；1991出版號91-3042)。因此，哮喘是一項重要公共衛(wèi)生問題。
哮喘發(fā)作一連串階段的病理生理過程可被分成二個主要階段，都有支氣管狹窄的特征，其導致喘息，胸部緊縮和呼吸困難。其中，這第一或早期階段哮喘反應是經由過敏原、刺激物或運動所觸發(fā)引起。過敏原交聯的免疫球蛋白E(IgE)分子連結至肥大細胞的受體，致使其釋放許多事前形成的炎癥介質，包括組胺。其它引發(fā)物包括在運動后氣道組織滲透性的改變或吸入寒冷及干的空氣。隨后的第二或后期的反應特征在于活化的嗜酸細胞和其他的炎癥細胞滲入氣道組織，上皮的剝損(desquamonon)和氣道有極粘的粘液出現。炎癥反應的損害使該氣道“準備啟動”或敏感化，而使極小引發(fā)物即足以引發(fā)之后的哮喘癥狀。
許多藥物是對緩和哮喘治療有效；然而，它們的功效卻顯著不同。短效β2-腎上腺素能激動劑，包括特布他林和沙丁胺醇，一直是哮喘治療常用藥，主要是針對初期癥狀，作為為支氣管擴張藥。新型長效β2-激動劑，包括沙美特羅和福莫特羅，可以減低后期的支氣管狹窄誘因。然而，因為該β2-激動劑不具有明顯的抗炎能力，故對支氣管反應過度(hyperreactivity)并無效用。
其他多種的藥品針對哮喘早或晚期的特定癥狀。例如，抗組胺藥如氯雷他定，抑制早期組胺-介導的炎癥反應。某些新型抗組胺藥，諸如氮斯汀和酮替芬，可以兼顧抗炎和微弱支氣管擴張效果，但是目前在哮喘治療還沒有明確功效。磷酸二酯酶抑制劑，如茶堿/黃嘌呤，可能減弱后期炎癥反應，但是沒有證據顯示其能減少支氣管反應過度?？鼓憠A能藥，如異丙托溴銨，其用于急性哮喘抑制嚴重支氣管收縮，但對早或晚期炎癥并無效果，亦對支氣管反應過度無影響，因此，實質上不能用于慢性癥狀治療。
皮質類固醇藥色甘酸二鈉(cromolyn)，如布地奈德，是最強有力的抗炎劑。炎癥介質釋放抑制劑，如色甘酸二鈉(cromolyn)和萘多羅米，是通過穩(wěn)定肥大細胞，并由此抑制后期對過敏原的炎癥反應。如此，色甘酸二鈉(cromolyn)和萘多羅米，以及皮質類固醇藥色甘酸二鈉(cromolyn)，都可以通過將對呼吸道因炎癥的損傷減到最小限度，從而減低支氣管反應過度。不幸地，這些抗炎癥劑并不會幫助支氣管擴張。
目前有開發(fā)出幾種針對哮喘性炎癥特定方面的新型藥物。例如，白細胞三烯受體拮抗劑(ICI-204、219、accolate)，是特異性抑制白三烯-介導作用。有證據暗示白三烯涉及呼吸道炎癥與支氣管狹窄。
盡管目前有很多種治療哮喘的藥物，但是其主要用于緩和治療和/或有重要副作用。因此，目前亟需新的治療方是針對其起因，而非癥狀征候。哮喘和過敏都與IgE-介導機制有關。已知一般過敏的起因，特別是過敏性哮喘的起因，是與IgE生成過量有關(見Duplantier和Cheng，Ann.Rep.Med.Chem.2973-81(1994))。如此，降低IgE水平的化合物可能對治療哮喘和過敏的成因有效。
目前沒有任何治療可消除過量循環(huán)的IgE。降低血漿中IgE可能減低過敏反應的假說，已經經由最近利用嵌合抗IgE的抗體CGP-51901和人重組單克隆抗體rhuMAB-E25的臨床結果所證實。事實上，三家公司Tanox生物系統公司、Genentech有限公司和Novartis AG已合作開發(fā)人抗-IgE的抗體(見BioWorldToday；2月26日；1997，p.2)，其通過中和過量IgE以治療過敏和哮喘。Tanox已經成功試驗該抗-IgE抗體CGP-51901，在一個有155-病人的II期試驗中，其降低過敏鼻炎鼻征候的程度和持續(xù)時間(Scrip#2080，Nov24；1995；p.26)。Genentech最近公開了重組人單株抗體rhuMAB-E25在536患者的II/III期試驗中的陽性結果(Bio WorldToday；11月10日，1998，p.1)。該抗體rhuMAB-E25，與安慰劑相較，經由注射施用(如需要最高劑量300mg，每2到4星期)可降低病人在其間需要的其它“營救”藥品的量(如抗組胺和減充血劑)達50％。最近，在科羅拉多丹佛市的國家猶太醫(yī)學和研究中心的亨利醫(yī)生等，公開了施用rhuMAB-25于中至重度哮喘病人(317病人12周，每二個星期靜脈注射)的臨床結果，結論為該藥品是“將是一大突破”(新英格蘭醫(yī)藥志；12月23日；1999)。該產品的生物許可應用(BLA)已在2000年6月共同由Novartis藥品、Tanox公司和Genetech有限公司送到FDA。其抗-IgE抗體試驗的陽性結果建議針對IgE向下-調節(jié)(down-regulation)的治療戰(zhàn)略可能是有效的。
癌和過度增殖疾病細胞增殖是一正常過程，是大多生物過程中極重要的正常的功能。細胞增殖發(fā)生于所有活的有機體，并涉及兩個主要過程核分裂(有絲分裂)和細胞質分裂(胞質分裂)。因為有機體是不停地成長并置換細胞，故細胞增殖是健康細胞所必要的。而正常的細胞增殖能力被打亂會導致各種混亂。例如細胞過度增殖可能導致牛皮癬，血栓形成，動脈硬化癥，冠狀心臟病，心肌梗塞，中風，平滑肌贅生物，子宮纖維性或纖維瘤，和脈管移植和移殖器官的閉塞性疾病。不正常細胞增殖多與腫瘤和癌形成有密切關聯。
癌癥是重大疾病，在美國和國際上亦是一個常見致死原因。實際上，癌在美國是第二致死原因。依照國民健康局(NIH)，治癌年度成本是大概1070億，其中包括370億直接醫(yī)學費用，110億由于疾病喪失生產力的間接費用，和590億由于過早死亡而喪失生產力的間接的費用。毫無疑問，相當可觀努力已投注到發(fā)展新治療和預防方法以克服此種疾病。
現在，癌癥主要是以一結合外科，放療和化療的方法來治療?；熒婕笆褂玫幕瘜W藥劑來抑制癌細胞的復制和新陳代謝?，F在所使用治療癌癥的化療藥物可分為五大類天然物及其衍生物；anthacyclines；烷化劑；抗增殖藥和激素類藥物。
本發(fā)明的一個實施方案公開了調控IgE并抑制細胞增殖的苯并咪唑化合物。苯并咪唑化合物是本領域已知的，例如見于歐洲專利第719,765號和美國專利第5,821,258號。但是，這兩篇文獻僅公開了含有對DNA起作用的活性成分的化合物。且構造上不同于本發(fā)明的苯并咪唑衍生物?，F有技術的化合物烷基化DNA，但在文獻中沒有暗示苯并咪唑化合物可調控IgE或抑制細胞增殖。并且，兩文獻所提及的化合物被描述為抗癌藥、抗病毒藥或抗微生物藥。以前并沒有認識到本發(fā)明的苯并咪唑化合物的抗-過敏或抗-哮喘的性質。此外，在描述苯并咪唑化合物的抗癌性質時，該些文獻公開為DNA烷化劑的化療藥物。并沒有公開應用本發(fā)明化合物抑制細胞增殖。
發(fā)明概述本發(fā)明公開了幾種對過敏原或其它刺激物反應的IgE進行下調節(jié)(down-regulating)有活性的化合物。一種被公開用于治療與過量的IgE水平和/或異常細胞增殖相關的病癥的化合物具有下式結構 類別I
其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素(polyhalogens)，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
上述類別的化合物可以含有多環(huán)脂肪族基團，其選自金剛烷基(adamantly)，雙環(huán)庚基，樟腦基，雙環(huán)[2，2，2]辛烷基和降冰片基(norbornyl)。
上述類別的化合物可以含有雜芳基和取代的雜芳基，其選自吡啶，噻唑，異噻唑，噁唑，嘧啶，吡嗪，呋喃，噻吩，異噁唑，吡咯，噠嗪，1，2，3-三嗪，1，2，4-三嗪，1，3，5-三嗪，吡唑，咪唑，吲哚，喹啉，異喹啉，苯并噻吩(benzothiophines)，苯并呋喃，對噻嗪，吡喃，色烯，吡咯烷，吡唑烷，咪唑烷，嗎啉，硫代嗎啉，以及相應的雜環(huán)。
按照本發(fā)明，還公開了類別I的特定化合物。該些化合物被標示為化合物I.1到I.192，它們代表性的結構在下面進行描述。
按照本發(fā)明，還公開了用于治療與過量的IgE水平和/或異常細胞增殖相關的病癥的另一種化合物。該化合物具有下式結構 類別II其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素(polyhalogens)，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
上述類別的化合物可以含有多環(huán)脂肪族基團，其選自金剛烷基，雙環(huán)庚基，樟腦基，雙環(huán)[2，2，2]辛烷基和降冰片基。
上述類別的化合物可以含有雜芳基和取代的雜芳基，其選自吡啶，噻唑，異噻唑，噁唑，嘧啶，吡嗪，呋喃，噻吩，異噁唑，吡咯，噠嗪，1，2，3-三嗪，1，2，4-三嗪，1，3，5-三嗪，吡唑，咪唑，吲哚，喹啉，異喹啉，苯并噻吩，苯并呋喃，對噻嗪，吡喃，色烯，吡咯烷，吡唑烷，咪唑烷，嗎啉，硫代嗎啉，以及相應的雜環(huán)。
按照本發(fā)明，還公開了類別II的特定化合物。該些化合物被標示為化合物II.1到II.90，它們代表性的結構在下面進行描述。
按照本發(fā)明，還公開了用于治療與過量的IgE水平和/或異常細胞增殖相關的病癥的另一種化合物。該化合物具有下式結構 類別III其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素(polyhalogens)，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
上述類別的化合物可以含有多環(huán)脂肪族基團，其選自金剛烷基，雙環(huán)庚基，樟腦基，雙環(huán)[2，2，2]辛烷基和降冰片基。
上述類別的化合物可以含有雜芳基和取代的雜芳基，其選自吡啶，噻唑，異噻唑，噁唑，嘧啶，吡嗪，呋喃，噻吩，異噁唑，吡咯，噠嗪，1，2，3-三嗪，1，2，4-三嗪，1，3，5-三嗪，吡唑，咪唑，吲哚，喹啉，異喹啉，苯并噻吩，苯并呋喃，對噻嗪，吡喃，色烯，吡咯烷，吡唑烷，咪唑烷，嗎啉，硫代嗎啉，以及相應的雜環(huán)。
按照本發(fā)明，還公開了類別III的特定化合物。該些化合物被標示為化合物III.1到III.154，它們代表性的結構在下面進行描述。
對于本文公開的每個化學結構，為了清楚的目的省略了雜原子上的氫原子。當雜原子上表示為開放的價，即假設這些原子價是被氫原子填補。
本發(fā)明還公開了用于治療哺乳動物的過量IgE水平及/或異常細胞增殖(即癌)的方法。在一方面，該方法包括對哺乳動物給藥IgE抑制量或抗-細胞增殖量的藥物制劑，所述藥物制劑來自上述公開的小分子家族的至少一種苯并咪唑化合物。
依據治療方法的一種變化，小分子的IgE-抑制化合物可與至少一種其它藥物一并施用，該藥物對減少與過敏反應相關的癥狀有活性。在一實施方案中，該小分子抑制劑可與至少一種其它的活性成分混合而形成藥物組合物。備選地，該小分子抑制劑可于同時或依照不同的治療方案與至少一種其它的活性藥物共同給藥。
所述至少一種其它的活性成分可以是選自特布他林和沙丁胺醇的短效β2-腎上腺素能激動劑；選自沙美特羅和福莫特羅的長效β2-腎上腺素能激動劑；選自氯雷他定、氮斯汀和酮替芬的抗組胺藥；磷酸二酯酶抑制劑，抗膽堿能藥，皮質類固醇藥，炎癥介質釋放抑制劑，或白細胞三烯受體拮抗劑。
在另一個實施方案中，所述苯并咪唑化合物可以與至少一種其它的活性藥物共同給藥。這些活性藥物包括抗真菌藥，抗病毒藥，抗生素，抗炎藥，和抗癌藥?？拱┧幇ǎ遣幌抻谕榛瘎?洛莫司汀，卡莫司汀，鏈佐星，氮芥，美法侖，尿嘧啶氮芥(uracil nitrogen mustard)，苯丁酸氮芥 環(huán)磷酰胺，異環(huán)磷酰胺，順鉑，卡鉑 絲裂霉素 塞替派dacarbazine 甲基芐肼，六甲三聚氰胺，三亞乙基密胺，白消安，溴丙哌嗪和鄰氯苯對氯苯二氯乙烷)；抗代謝產物(甲氨蝶呤，曲美沙特 噴司他丁，阿糖胞苷，ara-CMP，磷酸氟達拉濱，羥基脲，氟脲嘧啶，氟尿苷，氯去氧腺嘌呤核甘(chlorodeoxyadenosine)，gemcitabine，硫鳥嘌呤，和6-巰基嘌呤)；DNA剪切劑(cutter)(博萊霉素bleomycin)；拓撲異構酶I毒素(托泊替康 伊立替康和喜樹堿)；拓撲異構酶II毒素(柔紅霉素，阿霉素，伊達比星，米托蒽醌，替尼泊苷和依托泊苷)；DNA結合劑(放線菌素和光輝霉素)；和紡錘體毒素(長春堿，長春新堿，諾維本(navelbine)，紫杉醇和多西他賽(docetaxel))。
在另一個實施方案中，本發(fā)明的苯并咪唑化合物可以與一種或多種其他的治療法結合施用。這些治療包括，但是不限于放療、免疫治療、基因治療和外科手術。這些組合治療可以是同時施用或依次施用。例如，放療可與苯并咪唑化合物一同施用，或是于苯并咪唑化合物施行之前或之后的任何時間施用。
優(yōu)選地，以每日分劑量施用大約每日0.01mg/每公斤體重到100mg/每公斤體重的劑量的該小分子IgE抑制劑。
本發(fā)明還公開了用于治療與哺乳動物的過量IgE或異常細胞增殖有關的疾病的方法，其包括對哺乳動物給藥治療有效量的藥物制劑，所述藥劑包含至少一種選自類別I，類別II和/或類別III的化合物。
本發(fā)明提供的方法用于治療由不需要的、不受控制或異常的細胞增殖(如癌癥)介導的疾病和過程，其包括對哺乳動物給藥本文公開的苯并咪唑化合物以抑制細胞增殖。該方法特別用于防止或治療腫瘤形成和發(fā)展。在本發(fā)明的一個實施方案中，本文公開的化合物和方法特別用于治療雌激素受體陽性型和雌激素受體陰性型的乳腺癌。
參照下列的詳細描述，可以更完全地理解在本發(fā)明范圍內的其它變化。
圖1顯示了通過化合物I.82對脾臟細胞增殖反應的抑制。脾臟細胞培養(yǎng)是從原生BALB/c小鼠所得，在刺激物和藥物存在下溫育4天。將培養(yǎng)物與3H-胸苷搏動(plused)4小時并收獲。
優(yōu)選實施方案的詳細描述本發(fā)明涉及IgE的小分子抑制劑，其用于治療過敏和/或哮喘或任何由IgE致病的疾病。該抑制劑可影響IgE的合成、活性、釋放、代謝、降解，清除和/或藥理動力性。本發(fā)明公開的具體的化合物在體內和體外檢測中證實具有抑制IgE水平的能力。本發(fā)明公開的化合物還用于治療與異常細胞增殖有關的疾病，包括但不有限于腫瘤發(fā)生(tumorgenesis)和其他的增殖疾病諸如癌，炎癥疾病和循環(huán)性疾病。通過參照下述的體外和體內檢測，本領域技術人員可以調控臨床治療方案的發(fā)展和最佳化體外檢測該系統開始于體內抗原引發(fā)以及測定次生的體外抗體反應?；镜姆桨笇ο铝袇底C明并最優(yōu)化引發(fā)的抗原劑量，引發(fā)后的時間間隔，體外培養(yǎng)的細胞數，體外引發(fā)次生的IgE(和其他的Ig)反應的抗原濃度，體外允許最佳的IgE反應的胎牛血清(FBS)的批次，引發(fā)的CD4+T細胞和hapten-特異性B細胞的重要性，和ELISA分析對IgE的特異性(Marcelletti和Katz，細胞免疫學135471-489(1991)；在本文引用作為參考)。
應用該計劃的實際方案采用更全面的分析。BALB/cByj小鼠i.p.給予吸附到4mg明礬的10μg的DNP-KLH進行免疫，15天后處死。切除脾，在組織粉碎機中均化，洗滌兩次，保存于補充10％FBS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和0.0005％的2-巰基乙醇的DMEM中。在存在或不存在DNP-KLH(10ng/ml)下，建立脾細胞培養(yǎng)物(2-3百萬細胞/ml、一式四份0.2ml/每孔、96孔培養(yǎng)板)。將測試化合物(2μg/ml和50ng/ml)加入到含有抗原的脾臟細胞培養(yǎng)中，在10％CO2的大氣下，在37℃下溫育8天。
8天后收集上清液，并通過Marcelletti和Katz(見上文)描述的特異性同種型-選擇性ELISA分析的改進方法測定Ig。該方法備修改為易于高的處理量。通過用DNP-KLH或DNP-OVA涂覆過夜制備ELISA板。用牛血清白蛋白阻斷后，稀釋每個培養(yǎng)物上清液的等份(1∶4，用含有BSA、疊氮化鈉和Tween20的磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋)，加入到ELISA板中，在4℃潮濕箱中溫育過夜。在與生物素化的-山羊抗小鼠IgE(b-GAME)、AP-鏈霉抗生物素與基質連續(xù)培養(yǎng)之后，定量IgE的水平。
類似地測定抗原-特異性IgG1。除了培養(yǎng)物上清液稀釋200倍，并用生物素化的-山羊抗小鼠(b-GAMG1)代替b-GAME。在培養(yǎng)物上清液以1∶20的比例稀釋并與生物素化的-山羊抗小鼠IgG2a(b-GAMG2a)溫育后，用DNP-KLH涂覆的ELISA板測定IgG2a，通過與標準曲線比較測定每種同種型的定量。全部抗體的可檢測水平是大約200-400pg/ml，在對IgE的ELISA中，與任何其它的Ig同種型有小于0.001％的交叉反應性。
體內檢測在體外檢測(上述)發(fā)現有活性的化合物進一步測試其在體內抑制IgE反應的活性。小鼠在用載體免疫前接受一低劑量輻射，以表現出7天后IgE對抗原激發(fā)的提高的反應。在抗原敏化之前立即或之后施用試驗化合物，測定藥物對抑制IgE反應的能力。比較在血清中抗原特異性的IgE、IgG1和IgG2a的水平。
雌性BALB/cByj小鼠在每日光線循環(huán)開始后以250rads照射7小時。二小時后，對小鼠i.p.施以在4mg明礬中的2μgKLH進行免疫。6天后，開始予以二至七連續(xù)天的化合物注射，以一天一次或一天二次的頻率。典型地，i.p.注射和口灌食是以具有10％乙醇和0.25％甲基纖維素的食鹽水懸浮液(150μl/注射)施用。每個治療組由5-6只小鼠組成。在化合物給藥的第二天，就在早晨注射藥品之后，通過i.p.給藥在4mg明礬中的2μg DNP-KLH。小鼠在DNP-KLH激發(fā)后取血7-21天。
通過ELISA測定抗原-特異性IgE、IgG1和IgG2a抗體?？糁苋⊙?4,000rpm離心10min，上清液用鹽水稀釋5倍，再離心。四次稀釋通過ELISA測定每個取樣的抗體濃度(一式三份)，再與標準曲線相較抗-DNP IgE(1∶100到1∶800)、抗-DNP IgG2a(1∶100到1∶800)和抗-DNPIgG1(1∶1600到1∶12800)。
本發(fā)明的活性化合物發(fā)現在下面以副標題標示為類別I、類別II和類別III的下列化合物在體內或體外模型中都是有效的IgE抑制劑。這些化合物還顯示出抗-增殖的效果，可以作為治療如包括癌的過度增殖性疾病的藥物。
類別I的化合物按照本發(fā)明的小分子IgE抑制劑的一類包括苯并咪唑酰胺(carboxamides)化合物，其如下列的類別(類別I)所定義 類別I其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素(polyhalogens)，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
下列的特定的化合物包括在苯并咪唑酰胺化合物(類別I)的定義中
通過本領域已知的任何常規(guī)反應，可以合成類別I的化合物。合成的例子包括下列反應，如反應路線I所示反應路線I 類別I化合物的合成反應路線I顯示了可以用于制備類別I化合物的一種方法。本領域技術人員可以理解多種不同的合成反應方案可以用于合成該類別I的化合物。并且，本領域技術人員可以理解多種不同的溶劑、偶合劑和反應條件均可用于該合成反應獲得類似的結果。
在步驟1中，化合物A或其鹽是從3，4-二氨基苯甲酸或其鹽與4-硝基苯甲醛進行環(huán)縮合反應制備的。該環(huán)縮合反應可以在溶劑中加熱下進行。溶劑的例子為硝基苯。環(huán)縮合反應溫度是從約100℃到200℃，優(yōu)選約155℃到160℃。相同的化合物可以通過兩步反應制備，如下所述在堿如三乙胺、DIEP、DMAP、或吡啶、或其他類似的堿存在下，二胺和p-硝基苯甲酰氯反應；在環(huán)境溫度下，用PPA、H2SO4或其他的脫水劑環(huán)化得到的酰胺(通過除去一摩爾的水)，得到苯并咪唑環(huán)。
在步驟2中，用氨或胺處理化合物A或其鹽，獲得化合物B或其鹽。酰胺形成的反應可以在偶合劑存在下發(fā)生，或者通過將其轉化為酰基氯，然后將其在溶劑中另一種堿存在下與胺如芳香胺、脂肪族胺、雜環(huán)胺等)反應，吸收產生的酸。該反應可以有或沒有加熱下進行。偶合劑的例子為1，1’-羰基二咪唑(CDI)、EDC和其他類似的偶合劑。溶劑的例子為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、THF、吡啶、三乙胺、或混和溶劑系統如DMF和THF等。
在步驟3中，化合物B或其鹽可以進行還原以生成化合物C或其鹽。可以在溶劑系統中催化劑存在下進行催化氫化而完成該還原。催化劑是鈀、鎳、鉑等等。用于催化氫化的試劑的例子為在5％Pd-C存在下的氫。該還原可以發(fā)生在羥基溶劑中，如甲醇或乙醇，或混合溶劑系統如DMF-MeOH，或在醋酸中，或酸存在下的羥基溶劑中，等等。
在步驟4中，通過用適當的試劑處理，化合物C或其鹽在胺部分被烷基化或?；?。在合成反應路線I中，顯示化合物C與R3-X和R4-X反應，以烷基化或酰化該胺?？梢岳斫?，式R3和R4是烷基化該胺的基團，X是離去基團。該氨基可以被諸如酰基鹵、酸酐、羧酸，羧酸酯，或酰胺化合物的試劑?；?。在堿，優(yōu)選用于制備叔胺或受阻胺等的堿存在下，可以用烷基鹵化物烷基化該氨基。
對氨基烷基化的另一個備選的方法是還原性胺化。在還原性胺化中，胺與醛或酮縮合得到亞胺。隨后，亞胺被還原產生烷基化的胺。在還原性胺化中，在與胺反應時R3和R4可以不具有離去基團。另一個備選的方法是胺與重氮基化合物的反應。胺的酸度不夠大到在沒有催化劑下進行反應，但是BF3，可將胺轉化為復合物，使反應發(fā)生。氰化亞銅也能用作催化劑。
化合物D是類別I的代表性化合物。
本領域技術人員可以理解順序變化，和更進一步理解與所示或已知的類似反應的適當的反應條件的變化，這些方法適合用于上述過程，制備化合物A-D。
在本發(fā)明描述的制備化合物A-D的方法中，其保護基的要求是一般有機化學領域技術人員所熟知的，因此，適當保護基的應用也包括在本發(fā)明反應路線的過程中，盡管這些保護基沒有舉例說明。引入與除去這些適當的保護基是有機化學領域所公知的，例如參見T.W.Greene，“有機合成的保護基團”，Wiley(紐約)，1981。
本發(fā)明描述的產品通過常規(guī)方法如萃取、蒸餾、色譜層析等分離。
在本發(fā)明中未描述的起始原料通過商業(yè)購買獲得，或是已知的，或可以通過本領域已知的方法制備。
上述化合物A-D的鹽通過適當堿或酸與等化學計量的化合物A-D反應而制備。
類別II的化合物按照本發(fā)明的小分子IgE抑制劑另一類包括苯并咪唑-2-苯甲酰胺化合物，其如下列的類別(類別II)所定義 類別II其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素(polyhalogens)，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
下列的特定的化合物包括在類別II的定義中
通過本領域已知的任何常規(guī)反應，可以合成類別II的化合物。合成的例子包括下列反應，如反應路線II所示反應路線II 類別II化合物的合成反應路線II顯示了可以用于制備類別II化合物的一種方法。本領域技術人員可以理解多種不同的合成反應方案可以用于合成該類別II的化合物。并且，本領域技術人員可以理解多種不同的溶劑、偶合劑和反應條件均可用于該合成反應獲得類似的結果。
在步驟1中，化合物A或其鹽是從4-硝基-1，2-苯二胺或其鹽與烷基(如4-甲?；郊姿峒柞?行環(huán)縮合反應制備的。該環(huán)縮合反應可以在溶劑中加熱下進行。溶劑的例子為將咪唑烷轉化成咪唑的氧化劑的硝基苯或其它溶劑。相同的化合物可以通過兩步反應制備，如下所述在堿如三乙胺、DIEP、DMAP、或吡啶、或其他類似的堿存在下，二胺和p-烷氧羰基苯甲酰氯反應；在環(huán)境溫度下，用PPA、H2SO4或其他的脫水劑環(huán)化得到的酰胺(通過除去一摩爾的水)，得到苯并咪唑環(huán)。
在步驟2中，用堿如氫氧化鋰溶液或氫氧化鈉水溶液處理化合物E或其鹽，以水解酯得到酸，由此獲得化合物F或其鹽。脫保護反應可以在溶劑如水或醇如甲醇、乙醇、THF等存在下發(fā)生。
在步驟3中，用氨或胺處理化合物F或其鹽，獲得化合物G或其鹽。酰胺形成的反應可以在偶合劑存在下發(fā)生，或者通過將其轉化為?；?，然后將其在溶劑中另一種堿存在下與胺如芳香胺、脂肪族胺、雜環(huán)胺等)反應，吸收產生的酸。該反應可以有或沒有加熱下進行。偶合劑的例子為1，1’-羰基二咪唑(CDI)、EDC和其他類似的偶合劑。溶劑的例子為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、THF、吡啶、三乙胺、或混和溶劑系統如DMF和THF等。
在步驟4中，化合物G或其鹽可以進行還原以生成化合物H或其鹽。優(yōu)選地在溶劑系統中催化劑存在下可以進行催化氫化而完成該還原。催化劑是鈀、鎳、鉑等等。用于催化氫化的試劑的例子為在5％Pd-C存在下的氫。該還原可以發(fā)生在羥基溶劑中，如甲醇或乙醇，或混合溶劑系統如DMF-MeOH，或在醋酸中，或酸存在下的羥基溶劑中，等等。
在步驟5中，用酰基鹵處理化合物H或其鹽得到化合物I或其鹽。該酰化反應可以在堿如三乙胺、DIEP、DMAP或吡啶等存在下，在溶劑如THF、DMF或Et3N、吡啶中發(fā)生。該反應可以有或沒有加熱下進行。該堿的一個具體例子是吡啶。該溶劑的一個具體例子是四氫呋喃(THF)。
如果需要，在步驟6中，在堿存在下用烷基鹵化物處理化合物I或其鹽以進行酰胺的N-烷基化。為了去質子，通過應用堿如鈉氫化鈉烷基化仲酰胺，隨后與烷基鹵化物反應。該反應可在常規(guī)溶劑系統或在相轉移條件下進行。還可以用重氮化合物烷基化酰胺。在另一個方法，通過在室溫下用等摩爾量的酰胺化合物、Ph3P和偶氮二羧酸二乙酯(EtOOCN＝NCOOEt)處理醇，可以從醇開始制備N-烷基酰胺。
化合物I(b)是類別II的代表性化合物。
本領域技術人員可以理解順序變化，和更進一步理解與所示或已知的類似反應的適當的反應條件的變化，這些方法適合用于上述過程，制備化合物E-I(b)。
在本發(fā)明描述的制備化合物E-I(b)的方法中，其保護基的要求是一般有機化學領域技術人員所熟知的，因此，適當保護基的應用也包括在本發(fā)明反應路線的過程中，盡管這些保護基沒有舉例說明。引入與除去這些適當的保護基是有機化學領域所公知的，例如參見T.W.Greene，“有機合成的保護基團”，Wiley(紐約)，1981。
本發(fā)明描述的產品通過常規(guī)方法如萃取、蒸餾、色譜層析等分離。
在本發(fā)明中未描述的起始原料通過商業(yè)購買獲得，或是已知的，或可以通過本領域已知的方法制備。
上述化合物E-I(b)的鹽通過適當堿或酸與等化學計量的化合物E-I(b)反應而制備。
類別III的化合物按照本發(fā)明的小分子IgE抑制劑另一類包括苯并咪唑-二-酰胺化合物，其如下列的類別(類別III)所定義 類別III其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素(polyhalogens)，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
下列的特定的化合物包括在類別III的定義中
通過本領域已知的任何常規(guī)反應，可以合成類別III的化合物。合成的例子包括下列反應，如反應路線III所示反應路線III 類別III化合物的合成反應路線III顯示了可以用于制備類別III化合物的一種方法。本領域技術人員可以理解多種不同的合成反應方案可以用于合成該類別III的化合物。并且，本領域技術人員可以理解多種不同的溶劑、偶合劑和反應條件均可用于該合成反應獲得類似的結果。
在步驟1中，化合物J是從3，4-二氨基苯甲酸或其鹽與4-烷氧基羰基苯甲醛進行環(huán)縮合反應制備的。該環(huán)縮合反應可以在溶劑中加熱下進行。溶劑的例子為將咪唑烷轉化成咪唑的氧化劑的硝基苯或其它溶劑。相同的化合物可以通過兩步反應制備，如下所述在堿如三乙胺、DIEP、DMAP、或吡啶、或其他類似的堿存在下，二胺和p-烷氧羰基苯甲酰氯反應；在環(huán)境溫度下，用PPA、H2SO4或其他的脫水劑環(huán)化得到的酰胺(通過除去一摩爾的水)，得到苯并咪唑環(huán)。
在步驟2中，用無機酰基鹵如亞硫酰氯、POCl3、PCl5等，或有機?；u如草酰氯等，或混合的酐如氯甲酸t(yī)-丁基酯等處理化合物J或其鹽，得到化合物K，或類似的反應中間體和其鹽。該反應可以在溶劑中無機?；u、有機酰基鹵或混合的酐存在下進行。該無機?；u的試劑的一個具體實例是亞硫酰氯。該溶劑的一個例子是DMF。
在步驟3中，用氨或胺處理化合物K或其鹽，獲得化合物L或其鹽。酰胺形成的反應可以在偶合劑存在下發(fā)生，或者通過將其轉化為?；然蚧旌系聂缓髮⑵湓谌軇┲辛硪环N堿存在下與胺如芳香胺、脂肪族胺、雜環(huán)胺等)反應，吸收產生的酸。該反應可以有或沒有加熱下進行。偶合劑的例子為1，1’-羰基二咪唑(CDI)、EDC和其他類似的偶合劑。溶劑的例子為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、THF、吡啶、三乙胺、或混和溶劑系統如DMF和THF等。
在步驟4中，用堿如氫氧化鋰溶液或氫氧化鈉水溶液處理化合物L或其鹽，以水解酯得到酸，由此獲得化合物M或其鹽。脫保護反應可以在溶劑如水或醇如甲醇、乙醇、THF等存在下發(fā)生。
在步驟5中，用氨或胺處理化合物M或其鹽，獲得化合物O或其鹽。酰胺形成的反應可以在偶合劑存在下發(fā)生，或者通過將其轉化為?；然蚧旌系聂?，然后將其在溶劑中另一種堿存在下與胺如芳香胺、脂肪族胺、雜環(huán)胺等)反應，吸收產生的酸。該反應可以有或沒有加熱下進行。偶合劑的例子為1，1’-羰基二咪唑(CDI)、EDC和其他類似的偶合劑。溶劑的例子為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、THF、吡啶、三乙胺、或混和溶劑系統如DMF和THF等。
備選地，用無機酰基鹵處理化合物M或其鹽，以獲得化合物N或其鹽。該反應可以在溶劑中無機?；u存在下進行。該無機酰基鹵的試劑的一個具體實例是亞硫酰氯。該溶劑的一個例子是DMF。
然后，用氨或胺處理化合物N或其鹽，獲得化合物O或其鹽。酰胺形成的反應可以在溶劑中、堿存在下發(fā)生。
化合物O是類別II的代表性化合物。
本領域技術人員可以理解順序變化，和更進一步理解與所示或已知的類似反應的適當的反應條件的變化，這些方法適合用于上述過程，制備化合物J-O。
在本發(fā)明描述的制備化合物J-O的方法中，其保護基的要求是一般有機化學領域技術人員所熟知的，因此，適當保護基的應用也包括在本發(fā)明反應路線的過程中，盡管這些保護基沒有舉例說明。引入與除去這些適當的保護基是有機化學領域所公知的，例如參見T.W.Greene，“有機合成的保護基團”，Wiley(紐約)，1981。
本發(fā)明描述的產品通過常規(guī)方法如萃取、蒸餾、色譜層析等分離。
在本發(fā)明中未描述的起始原料通過商業(yè)購買獲得，或是已知的，或可以通過本領域已知的方法制備。
上述化合物J-O的鹽通過適當堿或酸與等化學計量的化合物J-O反應而制備。
實施例1類別I的化合物制備A.苯并咪唑酰胺(carboxamides)化合物的制備2-[4-硝基苯基]苯并咪唑-5-羧酸的制備將3，4-二氨基苯甲酸(300g；1.97摩爾)和4-硝基苯甲醛(298g；1.97摩爾)在硝基苯(15L)中的混合物在155℃-160℃下加熱過夜。將反應混合物冷卻至室溫，過濾沉淀的固體，用乙醚洗滌幾次以除去全部的硝基苯。用在熱DMF(2L)中的活性炭處理產物，過濾，然后在室溫下攪拌，用乙醚(6L)稀釋，得到393g固體。在此用在熱DMF(1L)中的活性炭處理粗產物，過濾，然后用甲醇(5L)稀釋，并冷卻至大約0℃。然后再從DMF和乙醚中結晶產物，得到225g純產物。其用于下一步驟。
2-[4-硝基苯基]苯并咪唑-5-(N-環(huán)己基)羧基酰胺的制備然后如下所示將羧酸轉化為環(huán)己基酰胺。在室溫下攪拌酸(1.0g；3.53mmol)和CDI(0.6g，4.24mmol)在DMF(20毫升)中的混合物3小時，然后冷卻至0℃，并用環(huán)己基胺(0.36g，0.42毫升；3.65mmol)處理，攪拌1h，然后過濾。從DMF和乙醚中重結晶粗產物，得到0.68g所需產物。其不經過進一步純化純化而用于下一步。在TLC顯示該產物為單一點，不同于起始原料。
2-[4-氨基苯基]苯并咪唑-5-(N-環(huán)己基)羧基酰胺的制備將上述酰胺化合物(0.5g；1.37mmol)、5％Pd-C(0.35g)和甲醇的混合物在氫氣氛下攪拌，直到消耗掉所需量的氫氣。過濾催化劑，濃縮濾液得到固體(430g)。在TLC顯示該產物為單一點，不同于起始原料。
2-[4-((5-甲基異噁唑基)-3-脲基)苯基]苯并咪唑-5-(N-環(huán)己基)羧基酰胺的制備將5-甲基異噁唑-3-羧酸(0.23g；1.80mmol)、草酰氯(0.46g；3.58mmol)和一滴DMF在CH2Cl2(10毫升)中的混合物加熱回流一小時。反應混合物濃縮至干燥，粗制的?；扔糜谙乱徊椒磻⑸鲜霭?0.5g；1.50mmol)、粗制的?；取HF(50毫升)和吡啶(0.54g)的混合物回流過夜。將反應混合物倒入水(600毫升)中。過濾粗產物、以水和己烷洗滌并干燥。產量為380mg，熔點＞310℃。產物在TLC顯示為單一點。
B.2-4-[4-(N-(1-金剛烷基-酰胺基)苯基)苯并咪唑-5-(N-2-吡啶基)羧基酰胺2-[4-硝基苯基]苯并咪唑-5-(N-2-吡啶基)羧基酰胺的制備將2-[4-硝基苯基]苯并咪唑-5-羧酸(20.0g；0.07摩爾)和CDI(17.2g；0.11摩爾)在DMF中的混合物于室溫下攪拌三小時，然后冷卻至0℃，然后加入2-氨基吡啶(7.3g；0.078摩爾)，在室溫下連續(xù)攪拌過夜。HPLC顯示該反應未完全。加入另外量的CDI(17.2g)和2-氨基吡啶(7.3g)，然后加熱以制備澄清溶液，并再攪拌24小時。TLC分析顯示該反應未完全。因此加入另外量的2-氨基吡啶(7.3g)與DMAP(13.4g；0.11mol)，攪拌過夜。TLC顯示此反應完成，反應混合物倒入水(3.0L)中，攪拌一小時，過濾，以水和乙醚(3×100mL)洗滌并干燥。產率為17g(67％)。其不經過任何其它純化用于下一步。TLC顯示為單一點(CH2Cl2-CH3OH9∶1)。
2-[4-氨基苯基]苯并咪唑-5-(N-2-吡啶基)羧基酰胺的制備將2-[4-硝基苯基]苯并咪唑-5-(N-2-吡啶基)羧基酰胺(17g；0.47摩爾)和5％Pd-C(93.0g)的混合物在甲醇(1.0L)和DMF(200mL)中的混合物在氫氣氛下攪拌，直到反應完全。過濾催化劑并濃縮，然后倒入水(5.0L)中、過濾、以水和乙醚(3×100mL)洗滌，并在80℃、真空下干燥。產量為10g，熔點260℃-265℃。TLC顯示為單一點，用CH2Cl2-CH3OH(9∶1)做洗脫劑。
2-[4-(N-(1-金剛烷基-酰胺基)苯基)苯并咪唑-5-(N-2-吡啶基)羧基酰胺將2-[4-氨基苯基]苯并咪唑-5-(N-2-吡啶基)羧基酰胺(2.6g；7.89mmol)和吡啶(2.9mL)在THF(250mL)中的混合物加熱制備澄清溶液。然后用在THF(10mL)中的1-金剛烷基碳酰氯(1.88g；9.47mmol)處理反應混合物，將混合物加熱回流24小時。將混合物倒入水(1.5L)中，攪拌一小時、過濾、以水(3×50mL)和乙醚(3×50mL)洗滌并干燥。以活性炭處理，并從THF和甲醇中重結晶。濾液用乙醚(150mL)稀釋，并冷卻至-70℃4小時，這時產物結晶出來。過濾、以乙醚洗滌并干燥。產量為2.9g，熔點333℃-336℃。TLC顯示為單一點，用CH2Cl2-CH3OH(9∶1)做洗脫劑。
實施例2類別II的化合物的制備A.2-(4-N-(2-甲基-環(huán)己基)苯甲酰氨基)-5-(苯甲酰氨基)-苯并咪唑的制備2-(4-甲酯基-苯基)-5-硝基-苯并咪唑的制備4-硝基苯-1，2-二氨(634g)和4-甲?；郊姿峒柞?680g)的混合物在硝基苯(17L)中、150℃-155℃下加熱24小時，冷卻到室溫，過濾、以乙醚(3×1.0L)洗滌，干燥得到所需產物。產量800g，TLC顯示單一點洗脫液(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
2-(4-羧基-苯基)-5-硝基-苯并咪唑的制備在室溫、攪拌下，用LiOH(339g)處理上述酯(800g)、THF(2.7L)和水(2.6L)的混合物。反應進展由TLC監(jiān)測直到水解完全。反應混合物以熱水(2.0L)稀釋，活性炭處理，然后過濾。濾液以2.0公斤的冰和水(1.0L)稀釋并以濃HCl酸化。過濾產物，水洗滌，然后從熱DMF(7.0L)(以活性炭處理)中重結晶，并過濾。濾液以乙醚(7.0L)稀釋，并冷卻到4.0℃。過濾產物，以乙醚洗滌并干燥。產量537g；熔點＞355℃。TLC為單一點洗脫液(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
2-(4-N-(2-甲基-環(huán)己基)苯甲酰氨基)-5-硝基-苯并咪唑的制備將上述酸(20.0g)在DMF(400mL)中的混合物用CDI(13.7g)處理，將該混合物在室溫下攪拌2小時，然后用2-甲基-環(huán)己胺(11.2g)處理。反應混合物加熱回流16小時。倒入冰水(3.0L)中，在室溫下攪拌16小時。過濾粗產物、用水(3×100mL)和乙醚洗滌，并干燥。產量19g；TLC為單一點洗脫液(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
2-(4-N-(2-甲基-環(huán)己基)苯甲酰氨基)-5-氨基-苯并咪唑的制備將上述的硝基酰胺(19.0g)在MeOH(600mL)中、5％Pd-C(4.0g)存在下氫化。過濾催化劑，真空濃縮濾液，以乙醚(200mL)處理殘余物并過濾。然后將殘余物從THF、MeOH和己烷中重結晶。過濾產物、以己烷洗滌并烘干。產量10.5g；TLC為單一點洗脫液(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
2-(4-N-(2-甲基-環(huán)己基)苯甲酰氨基)-5-(苯甲酰氨基)-苯并咪唑的制備將上述的胺(0.5g)在THF(50mL)和吡啶(0.53mL)中的混合物加熱至澄清溶液，逐滴用在10mL THF中的苯甲酰氯(0.24g)處理該溶液。將反應混合物加熱回流24小時，冷卻然后倒入水(600mL)中。過濾產品、以水，乙醚洗滌并干燥。用在熱THF-甲醇中的活性炭處理粗產物，并過濾。
濾液以乙醚稀釋并冷卻。過濾產品、以乙醚洗并干燥。產量338mg；熔點285-289℃；TLC為單一點(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
實施例3類別III的化合物的制備A.2-(4-環(huán)己基氨基甲酰基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸環(huán)己基酰胺的制備2-(4-甲酯基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸的制備將3，4-二氨基苯甲酸(300g)和4-甲酰基苯甲酸甲酯(324g)在硝基苯(8.0L)中的混合物在150℃-155℃下加熱24小時，然后冷卻到＜10℃，這時產物結晶出來。過濾，然后用乙醚(3×200mL)洗滌，并真空干燥。產量320g；熔點308℃-309℃。其未經過另外的純化而用于下一步。
2-(4-羧基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸的制備2-(4-甲酯基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸(4.1g)在THF(15mL)和水(18mL)和LiOH(1.74g)中的混合物在室溫下攪拌16小時，然后與熱水(100mL)和活性炭混合。過濾混合物，濾液以冰和水(100mL)稀釋，并以濃縮HCl酸化。過濾該粗制的二酸、水和乙醚洗滌，然后從THF和MeOH重結晶。產量3.3g；TLC單一點[CH2Cl2-CH3OH(9∶1)]。
2-(4-環(huán)己基氨基甲酰基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸環(huán)己基酰胺的制備將2-(4-羧基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸(0.50g)在DMF(50mL)和N-甲基嗎啉(0.72g)中的混合物冷到-10℃-20℃，然后逐滴加入氯甲酸異丁基酯(0.60g)保持該溫度。10分鐘后，逐滴加入在DMF(10mL)中的環(huán)己胺(0.53g)。然后將混合物緩慢升溫至室溫，并攪拌48小時。反應由TLC監(jiān)測反應完成。然后將混合物倒入水(600mL)中，過濾、以水和乙醚洗滌，從THF和MeOH中重結晶。應用活性炭處理，進行第二次重結晶，得到純化產物。產量270mg；熔點334℃-337℃。
B.2-(4-甲酯基-苯基)-5-(N-環(huán)己基-酰胺)-苯并咪唑的制備將2-(4-甲酯基-苯基)-3H-苯并咪唑-5-羧酸(5.0g)在DMF(250mL)和CDI(7.1g)中的混合物在室溫下攪拌3.0小時，然后用環(huán)己胺(2.0g)處理，并回流96小時。冷卻反應混合物，然后倒入水(2.0L)中，在室溫下攪拌16小時。過濾產物、以水和乙醚洗滌，然后從THF，甲醇和乙醚中重結晶。產量0.4g。TLC為單一點(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
水解該酯以產生酸，其被用于與多種胺偶合，生成不對稱二酰胺化合物。
C.2-(4-(N-環(huán)己基)-苯甲酰氨基)-苯并咪唑-5-羧酸和不對稱二酰胺化合物的制備將3，4-二氨基苯甲酸(1.71g)和4-(N-環(huán)己基)-苯甲酰氨基)-苯甲醛(2.6g)在200mL硝基苯中的混合物在150-155℃下加熱16小時。冷卻，過濾，以乙醚洗并干燥。產量1.9g；TLC為單一點(9∶1)-CH2Cl2-CH3OH。
該酸然后與多種胺偶合，和在DMF和/或THF的CDI反應，生成不對稱二酰胺化合物。
D.2-(4-羧基-苯基)-5-(環(huán)己基-酰胺)-苯并咪唑的制備將5.2g的2-(4-甲酯基-苯基)-5-(N-環(huán)己基-酰胺)-苯并咪唑在THF(50mL)和水(40mL)混合物加入到LiOH(1.73g)中。在室溫下攪拌混合物2小時，然后與活性炭混合，在輕微加熱下攪拌，然后過濾。在冰中冷卻濾液，然后以濃HCl酸化到PH值1.0。過濾該酸、以水和乙醚洗并干燥。產量4.7g；HPLC95％；熔點311℃-314℃。應用CDI或氯甲酸異丁基酯作為偶合劑將其與多種胺偶合，得到不對稱二酰胺化合物。一個例子如下所述將該酸(0.5g)在THF(50mL)和N-甲基嗎啉(0.64g)的混合物冷卻到-10℃-20℃，然后逐滴用氯甲酸異丁基酯(0.3g)處理。攪拌反應混合物10分鐘，然后將1-金剛烷胺加到混合物中，將反應混合物攪拌15小時。將反應混合物倒入水和冰中，然后過濾、以水，乙醚洗滌，然后從THF/MeOH中重結晶得到所需產物。產量320mg；熔點＞355℃。
實施例4IgE反應的抑制應用如上所述的體內與體外檢測，測定本發(fā)明的小分子的抑制活性。上述所有化合物對抑制IgE反應有活性。在體外的分析中，類別I-III的化合物產生50％抑制的濃度范圍在1pM到100μM之間。在體內檢測中，以分劑量施用(例如，二到四次每天)，至少連續(xù)二到七天給藥，化合物在濃度少于約0.01mg/公斤/天至約100mg/公斤/天是有效的。因此公開了本發(fā)明的小分子抑制劑可用于降低抗原誘導的IgE濃度增加，因此對依賴IgE的過程，如一般過敏和過敏性哮喘特別地有效。
實施例5關于細胞增殖的功效進行多種實驗以確定苯并咪唑化合物對細胞增殖的效果。這些實驗最終測量摻入到增殖細胞DNA中的3H-胸苷量。特定程序隨細胞和刺激原而改變。以3百萬/ml培養(yǎng)衍生于小鼠脾臟的細胞；在0.1到1百萬/ml接種細胞系。通過T細胞去除，分離脾臟B細胞并以佛波醇肉豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)(10ng/ml)加伊屋諾霉素(100nM)、或1L-4(10ng/ml)加抗-CD40抗體(100ng/ml)刺激。T細胞是在培養(yǎng)之前去除，是通過先與抗-Thy1腹水(10％)、抗-CD4 Ab(0.5μg/ml)和抗-CD8 Ab(0.5μg/ml)的混和液溫育脾細胞，隨后豚鼠補充物(吸附)。細胞系是未刺激的，或用人表皮生長因子(EGF)(100ng/ml)刺激。全部細胞是在96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)2-3天，并與3H-胸苷脈沖6到14小時。
在脾細胞中，化合物I.82以在體外對IL-4/抗-CD40 Ab反應的IgE抑制的大致相同的強度抑制對PMA/伊屋諾霉素和IL-4/抗-CD40 Ab反應的B細胞增殖(圖1)。在ConA-刺激的T細胞增殖和LPS-刺激的B細胞增殖中，化合物I.82獲得類似的抑制強度(經MDS Pharma公司測試)，表明這些藥物的活性缺乏特異性。另一方面，一組應用化合物I.82進行的免疫學試驗，表明除了抑制ConA-刺激的細胞因子釋放外，少有其他的效果。
在腫瘤細胞中，通過測量腫瘤細胞在有這些藥物下的生長，其在脾臟淋巴細胞的結果導致進一步的細胞增殖分析。最初的分析是以小鼠M12.4.1淋巴瘤細胞進行，其是未刺激的，或用IL-4/抗CD40 Ab刺激。化合物I.82抑制M12.4.1細胞的增殖，但是在刺激的脾細胞中觀察到較低的強度。但是，當細胞和IL-4/抗-CD40 Ab一起培養(yǎng)時，化合物I.82的強度增加。已知該刺激誘導在M12.4.1細胞中NF-κB的活性。
一類似方法用以建立抗-增殖活性的選擇性，它是通過測試大部分人源的來自多種組織的一系列腫瘤系。從每個組織選擇至少兩種細胞系以產生增殖資料。只有一些細胞系可被每個化合物以100nM或以下的濃度抑制，細胞抑制多半需要較高的濃度。由于某些測試細胞系的已知特性和先前的Western blot結果，有證據證明NF-κB抑制和藥物活性的關系。乳腺癌細胞因為有兩個主要的類型雌激素受體(ER)-陽性和ER-陰性，從而提供了測試該現象的良好的模型。后者的細胞傾向于較少分化，具有EGF受體表達的更高密度，并且對治療更耐受。ER-陰性/EGFR陽性細胞的增殖傾向于受NF-κB推動，因此選擇這些細胞用以試驗藥物在體外的增殖反應。所有對EGF有反應性的細胞系在體外被化合物I.82強而有力地抑制。相反地，5個ER-陽性細胞系中只有2個被藥品抑制。
化合物I.82對體外暴露于多種的免疫刺激物的T和B淋巴細胞產生抗-增殖活性。這些作用是強有效的，并與其IgE-抑制活性平行。雖然其作用的機理未知，但已知是與IL-4/抗-CD40 Ab-誘導IgE生產的機理相關。該反應的主要因素是轉錄活化劑NF-κB。該因素和許多腫瘤細胞增殖有關，故藥品被用來試驗體外多種腫瘤細胞系的增殖活性。實驗顯示許多腫瘤細胞系對化合物I.82的作用敏感，且許多敏感細胞系的增殖是經由NF-κB因子推動。然而，已知其它的細胞系是經除NF-κB以外的因素推動(例如，ER-陽性的HCC1500和ZR-75-1)。因此，化合物I.82似乎對某些腫瘤細胞有選擇性的影響。按照本發(fā)明的其它化合物也顯示類似特性，特別是那些結構上類似于化合物I.82的化合物。
治療方案可以有效治療特定的過敏或用作抗-增殖劑的苯并咪唑化合物的有效量根據于疾病的性質而定，可以由標準臨床技術而測定。在給定情況下的精確的劑量依賴于化合物的選擇和疾病的嚴重性，應依照醫(yī)生的判斷和患者的情況來決定。
作為抗-過敏治療，醫(yī)生可以根據病人IgE水平以及肺標準指數與血流動力學變化之間的劑量反應關系確定和調節(jié)合適的劑量。而且本領域技術人員可以理解通過本文公開的體內和體外篩選方法，可以不用試驗而確定劑量范圍(參見如Hasegawa等，J.Med.Chem.40395-407(1997)和Ohmori等，Int.J.Immunopharmacol.15573-579(1993)；使用類似的體內和體外檢測，用以測定萘衍生物對IgE抑制的劑量反應關系；在此附為參考)。
一開始為確定抗-過敏或抗-哮喘的效果，化合物適合的劑量范圍通常是約0.001mg-約300mg每公斤體重每日分劑量施用，更優(yōu)選地，在0.01mg-100mg每公斤體重每日分劑量施用。該化合物最好是系統性給藥，以適于該給藥途徑的藥物制劑給藥，如口服、吸入、靜脈內、皮下的，或經由能提供活性化合物系統劑量的任一其他的路徑給藥。藥物制劑的組合物是本領域公知的。該治療方案優(yōu)選地包括周期性的給藥。此外，長期治療可以顯示過敏反應似乎是由于連續(xù)曝露于過敏原而引發(fā)。當進行二到七日連續(xù)給藥時，一天一次或一天兩次給藥能有效地抑制動物的對單獨抗原激發(fā)反應的IgE。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，該化合物是以有規(guī)律周期性的間隔來施用至少連續(xù)二天。但是，治療方案，包括施用劑量的頻率和治療的期間，可以由有經驗的醫(yī)生確定，根據過敏原的性質、劑量、頻率、暴露于過敏原的時間長短和標準臨床指數，根據需要做出改變，以提供最佳的IgE下-調節(jié)。
在本發(fā)明的一個實施方案中，為了對患者的IgE反應產生最適的下-調節(jié)，IgE-抑制化合物可以與一種或多種公開的其他小分子抑制劑組合給藥。更進一步，可預見的是本發(fā)明的一種或多種化合物可以與其他已知的藥物或以后發(fā)現治療過敏或哮喘的起因及急性癥狀治療的藥物組合。該組合治療包括在本發(fā)明的范圍內，包括將一種或多種的小分子IgE-抑制劑與一種或多種已知有效減少所述疾病至少一種癥狀的化合物混合。或者，本文公開的小分子IgE-抑制劑可以與其它藥物分別給藥，但在疾病的相同階段，其中IgE-抑制劑和該緩和化合物均依據其各自獨立有效的治療方案給藥。
用作抗-增殖治療，本領域技術人員可以確定本文公開的苯并咪唑化合物的適當劑量。根據用于其他的抗-增殖劑和化療劑的標準治療技術，藥理學家和腫瘤學者可以不經過實驗而容易地確定每個單獨的患者所需的合適的劑量。
抗增殖苯并咪唑化合物適合的劑量范圍通常是約0.001mg-約300mg每公斤體重每日分劑量施用，更優(yōu)選地，在0.01mg-100mg每公斤體重每日分劑量施用。最優(yōu)選地，為了產生抗癌效果，劑量范圍在1mg-100mg每公斤體重每日。該化合物最好是系統性給藥，以適于該給藥途徑的藥物制劑給藥，如口服、吸入、靜脈內、皮下的，或經由能提供活性化合物系統劑量的任一其他的路徑給藥。
理想上，本發(fā)明的一種或多種苯并咪唑化合物應是給藥以獲得活性物質的最高血漿濃度，如本領域技術人員所決定。為了獲得適當的血漿水平，該藥劑制劑可以以適當溶液如鹽水溶液經由靜脈內注射，或以活性物質的藥丸(bolus)施用。
按照本發(fā)明幾個實施方案中使用的治療方案優(yōu)選包括周期給藥。并且，可以與其他的化療劑配合長期治療。某些病人可能需要一到三年期的每周、每日一次或每日兩次給藥。因此，在一個實施方案中，該化合物以有規(guī)律的周期間隔施用至少六個月。但是，治療方案，包括施用劑量的頻率和治療的期間，可以由有經驗的醫(yī)生確定，根據疾病的性質、異常細胞生長的程度、癌的類型、感染組織和標準臨床指數，根據需要做出改變，以提供最佳的抗增殖效果。
本領域技術人員可理解制劑中抗-增殖化合物的理想濃度基于幾個藥動學參數，如該藥物吸收、滅活、代謝和清除率。本領域技術人員也可理解其濃度將根據癥狀嚴重性而變化。其他可能影響治療劑量的因素包括腫瘤位置，病人年齡和性別，其他的疾病與之前的用藥等等。本領域技術人員可理解依照病人個體的需要和依照治療醫(yī)生的專業(yè)判斷，可以在一段時間評價或調節(jié)特定的患者和特定的治療方案。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物是口服給藥。優(yōu)選地，口服制劑包括惰性稀釋劑或可食用的載體?？诜苿┛梢园矣诿髂z膠囊中或制成片劑?？诜o藥還可經由顆粒、粒狀或粉狀物、糖漿、混懸液或溶液進行。本領域技術人員可以理解許多可接受的口服組合物可以用于按照本發(fā)明的幾個實施方案。例如，該活性化合物可與標準賦型劑、輔劑、滑潤劑、甜味劑、腸包衣劑、緩沖劑與穩(wěn)定劑等組合。
本發(fā)明的一個實施方案中，該活性化合物可被修飾成包括一個靶部分，使活性化合物靶向或濃縮至活性部位。靶部分包括，但不限于，抗體、抗體片斷或衍生物、細胞因子和在要治療的細胞上表達的受體配體。
在幾個實施方案中，本發(fā)明的化合物于其他的活性物質組合給藥，這些活性藥物或是補充或改善該苯并咪唑化合物的作用，或導致其他獨立的改善效果。這些另外的活性藥物包括，但不限于，抗真菌物、抗病毒藥、抗生素，抗炎藥和抗癌藥。還可以使用保護劑，其包括保護活性的苯并咪唑化合物不被快速代謝、降解或消除的載體或試劑?？蒯屩苿┮部梢杂糜诎凑毡景l(fā)明的幾個實施方案中。
在本發(fā)明的一個實施方案中，一種或多種抗增殖化合物可以與一種或多種抗癌藥結合使用，以產生最佳的抗癌效果?？拱┧幇?，但是不限于烷化劑(洛莫司汀，卡莫司汀，鏈佐星，氮芥，美法侖，尿嘧啶氮芥(uracil nitrogen mustard)，苯丁酸氮芥環(huán)磷酰胺，異環(huán)磷酰胺，順鉑，卡鉑 絲裂霉素 塞替派dacarbazine甲基芐肼，六甲三聚氰胺，三亞乙基密胺，白消安，溴丙哌嗪和鄰氯苯對氯苯二氯乙烷)；抗代謝產物(甲氨蝶呤，曲美沙特噴司他丁，阿糖胞苷，ara-CMP，磷酸氟達拉濱，羥基脲，氟脲嘧啶，氟尿苷，氯去氧腺嘌呤核甘(chlorodeoxyadenosine)，gemcitabine，硫鳥嘌呤，和6-巰基嘌呤)；DNA剪切劑(博萊霉素bleomycin)；拓撲異構酶I毒素(托泊替康伊立替康和喜樹堿)；拓撲異構酶II毒素(柔紅霉素，阿霉素，伊達比星，米托蒽醌，替尼泊苷和依托泊苷)；DNA結合劑(放線菌素和光輝霉素)；和紡錘體毒素(長春堿，長春新堿，諾維本(navelbine)，紫杉醇和多西他賽(docetaxel))。
更進一步，可預見一種或多種本發(fā)明的化合物可與其他的治療方法合并施用，如放療、免疫治療、基因療法和/或外科手術，以治療包括癌的異常增殖性疾病。該組合治療包括在本發(fā)明的范圍內，包括將一種或多種苯并咪唑化合物與一種或多種已知有效減少所述疾病至少一種癥狀的其它成分混合。或者，本文公開的苯并咪唑化合物可以與其它藥物分別給藥，但在疾病的相同階段，其中苯并咪唑化合物和該緩和化合物均依據其各自獨立有效的治療方案給藥。
盡管詳細地描述了本發(fā)明的多個優(yōu)選的實施方案及其變化形式，但是其它的改變和應用方法對本領域技術人員是顯而易見的。應該理解，在不偏離本發(fā)明的精神和權利要求的范圍下，可以作出多種等同的應用、改變和替換。
權利要求
1.一種用于治療或預防哺乳動物與增加的IgE水平相關的過敏反應或抑制哺乳動物的細胞增殖的藥物組合物，包括下列的一種或多種化合物 類別I； 類別II；以及 類別III其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中所述取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基。
2.按照權利要求1所述的化合物，其中所述多環(huán)脂肪族基團選自金剛烷基，雙環(huán)庚基，樟腦基，雙環(huán)[2，2，2]辛烷基和降冰片基。
3.按照權利要求1所述的化合物，其中所述雜芳基和取代的雜芳基選自吡啶，噻唑，異噻唑，噁唑，嘧啶，吡嗪，呋喃，噻吩，異噁唑，吡咯，噠嗪，1，2，3-三嗪，1，2，4-三嗪，1，3，5-三嗪，吡唑，咪唑，吲哚，喹啉，異喹啉，苯并噻吩，苯并呋喃，對噻嗪，吡喃，色烯，吡咯烷，吡唑烷，咪唑烷，嗎啉，硫代嗎啉，以及相應的雜環(huán)。
4.按照權利要求1所述的藥物組合物，其進一步包括至少一種其它的成分，所述成分對減少與所述過敏反應或細胞增殖有關的至少一種癥狀有活性。
5.按照權利要求1的化合物在制備用于治療或預防哺乳動物過敏反應的藥物中的用途，其中所述過敏反應因IgE水平增加而引起。
6.按照權利要求5所述的用途，進一步包括給藥至少一種其它的成分，所述成分對減少與所述過敏反應有關的至少一種癥狀有活性。
7.按照權利要求6所述的用途，其中所述至少一種其它的成分選自短效β2-腎上腺素能激動劑，長效β2-腎上腺素能激動劑，抗組胺藥，磷酸二酯酶抑制劑，抗膽堿能藥，皮質類固醇藥，炎癥介質釋放抑制劑，或白細胞三烯受體拮抗劑。
8.按照權利要求6所述的用途，其中所述至少一種其它的成分與至少一種IgE抑制化合物在藥用稀釋劑中組合，一起施用于哺乳動物。
9.按照權利要求8所述的用途，其中所述至少一種IgE抑制化合物以約0.01毫克至100毫克/公斤體重/日的劑量施用。
10.按照權利要求9所述的用途，其中所述劑量是以有規(guī)律的周期間隔分劑量給藥。
11.按照權利要求10所述的用途，其中所述有規(guī)律的周期間隔發(fā)生在每日。
12.按照權利要求1的化合物在制備用于治療或預防哺乳動物哮喘的藥物中的用途，其中所述過敏反應因IgE水平增加而引起。
13.按照權利要求12所述的用途，進一步包括給藥至少一種其它的成分，所述成分對減少與所述哮喘有關的至少一種癥狀有活性。
14.按照權利要求13所述的用途，其中所述至少一種其它的成分選自短效β2-腎上腺素能激動劑，長效β2-腎上腺素能激動劑，抗組胺藥，磷酸二酯酶抑制劑，抗膽堿能藥，皮質類固醇藥，炎癥介質釋放抑制劑，或白細胞三烯受體拮抗劑。
15.按照權利要求1的化合物在制備用于抑制哺乳動物細胞增殖的藥物中的用途。
16.按照權利要求15所述的用途，進一步包括給藥至少一種其它的成分，所述成分對減少與所述細胞增殖有關的至少一種癥狀有活性。
17.按照權利要求16所述的用途，其中所述至少一種其它的成分選自抗真菌藥，抗病毒藥，抗生素，抗炎藥，和抗癌藥。
18.按照權利要求16所述的用途，其中所述至少一種其它的成分選自烷化劑，抗代謝產物，DNA剪切劑，拓撲異構酶I毒素，拓撲異構酶II毒素，DNA結合劑，和紡錘體毒素。
19.按照權利要求16所述的用途，其中所述至少一種其它的成分與至少一種權利要求1的化合物在藥用稀釋劑中組合，一起施用于哺乳動物。
20.按照權利要求19所述的用途，其中所述至少一種權利要求1的化合物以約0.01毫克至100毫克/公斤體重/日的劑量施用。
21.按照權利要求20所述的用途，其中所述劑量是以有規(guī)律的周期間隔分劑量給藥。
22.按照權利要求21所述的用途，其中所述有規(guī)律的周期間隔發(fā)生在每日。
23.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
24.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
25.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
26.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
27.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
28.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
29.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
30.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
31.按照權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物選自
32.一種制備具有下式的化合物或其鹽的方法 種類I其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中所述取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基，其中所述方法包括將3，4-二氨基苯甲酸與4-硝基苯甲醛反應，產生第一中間體或其鹽；胺化所述第一中間體或其鹽，產生第二中間體或其鹽；還原所述第二中間體或其鹽，產生第三中間體或其鹽；和?；龅谌虚g體或其鹽，得到所述化合物或其鹽。
33.一種制備具有下式的化合物或其鹽的方法 種類II其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中所述取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基，其中所述方法包括將4-硝基-1，2-苯二胺與4-甲?；郊姿嵬榛シ磻?，產生第一中間體或其鹽；用堿的水溶液處理所述第一中間體或其鹽，產生第二中間體或其鹽；胺化所述第二中間體或其鹽，產生第三中間體或其鹽；還原所述第三中間體或其鹽，產生第四中間體或其鹽；和?；龅谒闹虚g體或其鹽，得到所述化合物或其鹽。
34.一種制備具有下式的化合物或其鹽的方法 種類III其中R選自H，C1-C5烷基，苯甲基，p-氟苯甲基，二烷基氨基烷基，其中所述C1-C5烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基；其中R1和R2獨立地選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中所述取代的苯基、取代的萘基和取代的雜芳基含有1-3個取代基，其中所述取代基選自H，鹵素，多鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，COOR’COR’，CN，CF3，OCF3，NO2，NR’R’，NHCOR’和CONR’R’；其中R3和R4獨立地選自H，烷基，芳基，雜芳基和COR’；其中R’選自H，烷基，取代的烷基，C3-C9環(huán)烷基，取代的C3-C9環(huán)烷基，多環(huán)脂肪族基團，苯基，取代的苯基，萘基，取代的萘基，雜芳基和取代的雜芳基，其中所述雜芳基和所述取代的雜芳基含有1-3個雜原子，其中所述雜原子獨立地選自氮、氧和硫；其中X和Y獨立地選自H，鹵素，烷氧基，取代的烷氧基，烷基，取代的烷基，二烷基氨基烷基，羥烷基，OH，OCH3，COOH，CN，CF3，OCF3，NO2，COOR”，CHO和COR”；和其中R”為C1-C8烷基，其中所述C1-C8烷基選自直鏈、支鏈或環(huán)烷基，其中所述方法包括將3，4-二氨基苯甲酸與4-硝基苯甲醛反應，產生第一中間體或其鹽；用選自無機?；u、有機?；然蚧旌系聂奈镔|處理所述第一中間體或其鹽，產生第二中間體或其鹽；胺化所述第二中間體或其鹽，產生第三中間體或其鹽；用堿的水溶液處理所述第三中間體或其鹽，產生第四中間體或其鹽；
35.胺化所述第四中間體或其鹽，得到所述化合物或其鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及對過敏原的反應的IgE的小分子抑制劑，其用于治療過敏和/或哮喘或任一其它因IgE而致病的疾病。本發(fā)明還涉及作為細胞增殖抑制劑的苯并咪唑分子，它們可作為抗癌劑。
文檔編號C07DGK1496257SQ02806486
公開日2004年5月12日 申請日期2002年2月28日 優(yōu)先權日2001年3月12日
發(fā)明者J·C·希爾卡, M·L·里卡茲, M·W·梅杰, J C 希爾卡, 梅杰, 里卡茲 申請人:阿文尼爾藥品公司