專利名稱：一種槲皮素-7-o-鼠李糖苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中藥材地耳草中提取槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的方法。
槲皮素-7-O-鼠李糖苷的獲得途徑，可通過從藥材地耳草中提取獲得。但由于中藥材中含有各種黃酮類，多糖類，鞣質(zhì)，香豆素類等物質(zhì)，而且黃酮類物質(zhì)中也含有多種結(jié)構(gòu)相近的物質(zhì)。要得到槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體，需要把槲皮素-7-O-鼠李糖苷與其它各種物質(zhì)分離開來。以往的研究，未能提供一種可大量獲得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的可用于工業(yè)化生產(chǎn)的可行的提取方法。
槲皮素-7-O-鼠李糖苷的結(jié)構(gòu)式如下式所示，式中R1＝鼠李糖，R2＝H； 槲皮素-7-O-鼠李糖苷本發(fā)明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法的步驟包括①將含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的藥材，經(jīng)過一至多次水提取，濾過，合并濾液；②濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進(jìn)行柱分離，有機溶劑洗脫；③洗脫液揮干溶劑，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷粗品；再進(jìn)行二次柱分離，有機溶劑洗脫，洗脫液揮干溶劑，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體(純品)。
本發(fā)明方法所用的含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的藥材可以是地耳草。水提取前最好先把藥材粉碎或切成飲片。
本發(fā)明方法中的水提取可以采用在室溫～100℃條件下或/和超聲波條件下進(jìn)行；提取次數(shù)一般為一至三次，次數(shù)增加不限。水的用量為水至少能沒過藥材，水用量過多不限。提取時間一般為0.1-24小時，時間延長不限。加溫或/和超聲波條件下提取可縮短提取時間。
本發(fā)明方法中的浸膏醇沉所用的乙醇可以是無水乙醇或者各種濃度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液體的乙醇最終濃度可以是5％至95％的各種濃度。
本發(fā)明方法中的柱分離，采用的柱填料可以為硅膠、氧化鋁、聚酰胺或大孔樹脂。通常，首次柱分離的柱填料可采用聚酰胺或大孔樹脂離子交換樹脂，二次柱分離的填料可采用硅膠或氧化鋁。
本發(fā)明方法中的有機溶劑洗脫，有機溶劑可以采用乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯或石油醚等各種常用有機溶劑。有機溶劑的濃度可以采用各種濃度，包括濃度為100％的有機溶劑。通常，首次柱分離洗脫所用的有機溶劑可為包括濃度為10-100％的各種濃度的乙醇或甲醇的水溶液，二次柱分離所用的有機溶劑可為氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇或它們的混合液。
采用本發(fā)明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法，從不同的含槲皮素-7-O-鼠李糖苷藥材中提取槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體(純品)，提取得率均在80％以上，所得槲皮素-7-O-鼠李糖苷樣品中槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的含量達(dá)到95％以上。
采用本發(fā)明方法所得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體(純品)，經(jīng)按《中華人們共和國藥典》2000版一部高效液相色譜法進(jìn)行測定，并以其高效液相三維圖譜檢測純度。結(jié)果表明，樣品中槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的含量高于95％。表明本發(fā)明工藝可行。
本發(fā)明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法，具有提取工藝簡單，提取率高，提取得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體純度高等特點，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
圖2是本發(fā)明方法所得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的高效液相三維色譜圖。
各實施例所涉及到的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以wt/wt，vol/vol，wt/vol計算，除非另有說明。
實施例1地耳草藥材切成飲片，加水8倍量，煎煮提取三次，每次一小時，濾過；濾液濃縮成浸膏，過聚酰胺柱，用40％乙醇洗脫后，再用70％乙醇洗脫；收集70％乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀用硅膠混勻后，上硅膠柱，以乙酸乙酯洗脫，洗脫液回收乙酸乙酯，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體。得率為82.3％。
實施例2地耳草藥材粉碎，加100℃水沒過藥材，提取三次，每次1小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮，加入無水乙醇至乙醇濃度為70％，放置過夜，濾過，上清液回收乙醇。浸膏過聚酰胺柱，先用40％乙醇洗脫，再用70％乙醇洗脫；收集70％乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀用硅膠混勻后，上硅膠柱，以乙酸乙酯洗脫，洗脫液回收乙酸乙酯，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體。得率為84.5％。
實施例3地耳草藥材切成飲片，經(jīng)70℃水浸提兩次，每次3小時，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏加入95％乙醇至乙醇濃度為60％，靜置過夜，產(chǎn)生沉淀，濾過，去沉淀，濾液回收乙醇，浸膏過聚酰胺柱，先用40％乙醇洗脫，再用70％乙醇洗脫；收集70％乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀用氧化鋁混勻后，上氧化鋁柱，以乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體。得率為78.5％。
實施例4地耳草藥材不粉碎，經(jīng)超聲波用水提取4次，每次30分鐘，濾過，合并濾液；濃縮，得浸膏，過聚酰胺柱，用40％乙醇洗脫后，再用70％乙醇洗脫；收集70％乙醇洗脫液，洗脫液回收乙醇，得沉淀，沉淀用硅膠混勻后，上硅膠柱，以氯仿洗脫，洗脫液回收氯仿，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體。得率為80.3％。
實施例5槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體純度測定實驗取上述提取方法制備得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體適量，甲醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔濾膜(0.45um)過濾后，注入高效液相色譜儀中，可以得到其高效液相色譜圖(

圖1)。進(jìn)行三維圖譜掃描，得到高效液相色譜三維色譜圖(圖2)。利用其三維圖譜(圖2)觀測其純度，利用歸一化法計算其提取所得槲皮素-7-O-鼠李糖苷樣品中槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的含量。從其三維圖譜(圖2)上我們可以觀測到其在其高效液相色譜圖(圖1)上除槲皮素-7-O-鼠李糖苷的峰沒有其他物質(zhì)出現(xiàn)。
色譜條件Agilent1100高效液相色譜儀(自動進(jìn)樣器，真空脫氣機，四元泵，柱溫箱，二極管陣列檢測器)；色譜柱MERKER ODS柱(5um，4.0×250mm)；流動相甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶61)；檢測波長370nm；柱溫30℃；流速1ml/min；進(jìn)樣量5μl。
從結(jié)果看出，提取所得樣品的高效液相一維及三維圖譜中除槲皮素-7-O-鼠李糖苷外沒有其他雜質(zhì)峰，其中槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體的含量高于95％。說明本發(fā)明的提取方法所得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷樣品純度高。
另外，對所得的槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體進(jìn)行了熔點測定，其熔點為274.0～274.5℃，其熔程只有0.5℃，也說明其純度是很高的。
綜上所述，說明本發(fā)明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法，能有效地從含槲皮素-7-O-鼠李糖苷藥材中提取得到槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體，所得槲皮素-7-O-鼠李糖苷樣品純度高，含量均高于95％以上，而且工藝簡單可行。
權(quán)利要求
1.一種槲皮素-7-O-鼠李糖苷的提取方法，依次包括以下步驟①將含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的中藥材，經(jīng)過一至多次水提取，濾過，合并濾液；②濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進(jìn)行柱分離，有機溶劑洗脫；③洗脫液揮干溶劑，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷粗品；槲皮素-7-O-鼠李糖苷粗品再進(jìn)行二次柱分離，有機溶劑洗脫，洗脫液揮干溶劑，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷單體。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是水提取前先把藥材粉碎或切成飲片。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是所說的含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的中藥材為地耳草。
4.按照權(quán)利要求1，2或3所述的方法，其特征是所說的水提取是在室溫至100℃條件下或/和超聲波條件下進(jìn)行；提取次數(shù)為一至三次。
5.按照權(quán)利要求4所述的方法，其特征是所說水提取的提取時間為0.1-24小時。
6.按照權(quán)利要求1，2或3所述的方法，其特征是所說的浸膏醇沉所用的乙醇是無水乙醇或者各種濃度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液體的乙醇最終濃度為5％至95％的各種濃度。
7.按照權(quán)利要求1，2或3所述的方法，其特征是所說的首次柱分離采用的柱填料為聚酰胺或大孔樹脂離子交換樹脂，二次柱分離采用的填料為硅膠或氧化鋁。
8.按照權(quán)利要求1，2或3所述的方法，其特征是首次柱分離洗脫所用的有機溶劑為包括濃度為10-100％的各種濃度的乙醇或甲醇的水溶液，二次柱分離所用的有機溶劑為氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇或它們的混合液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從含槲皮素－7－O－鼠李糖苷的中藥材中提取槲皮素－7－O－鼠李糖苷單體的方法。該方法是將藥材粉碎，經(jīng)過一至多次水提取，濾過，合并濾液；濾液濃縮成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，進(jìn)行二次柱分離，有機溶劑洗脫；洗脫液揮干溶劑，得槲皮素－7－O－鼠李糖苷單體。采用本發(fā)明方法，從不同的含槲皮素－7－O－鼠李糖苷藥材中提取槲皮素－7－O－鼠李糖苷，提取得率均在80％以上，所得槲皮素－7－O－鼠李糖苷樣品中槲皮素－7－O－鼠李糖苷單體的含量達(dá)到95％以上。因此，本發(fā)明方法具有提取工藝簡單，提取率高，提取得到的槲皮素－7－O－鼠李糖苷單體純度高，適用于工業(yè)化生產(chǎn)等特點。
文檔編號C07H17/07GK1470518SQ0312699
公開日2004年1月28日 申請日期2003年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月26日
發(fā)明者蘇薇薇, 王永剛, 彭維, 吳忠, 唐西, 楊立偉, 方鐵錚, 宋曉虹 申請人:中山大學(xué)