專利名稱：一種提取分離齊墩果酸的新方法
所屬領(lǐng)域本發(fā)明涉及植物有效成分的提取制備方法，具體地說是從植物中提取分離齊墩果酸的方法。
背景技術(shù)：
齊墩果酸(oleanolic acid，又名慶四素)屬于五環(huán)三萜類化合物，以游離子體和配糖體的形式存在于多種植物中。國外文獻報導齊墩果酸具有消炎、鎮(zhèn)靜、強心、利尿、增強免疫和抑制S180瘤株生長等作用。實驗表明齊墩果酸對CCl4引起的急、慢性肝損傷有明顯的保護作用，能防止實驗性肝硬化的發(fā)生，并且通過抑制或減輕肝細胞變性的壞死，促進肝細胞再生，加速壞死組織的修復，抑制膠原纖維增生和特異性炎癥反應，以至肝硬化難以形成，發(fā)揮其保肝作用。體外試驗還證明齊墩果酸有明顯的抗病毒作用。齊墩果酸活潑的官能團使之競爭性地與肝炎病毒的生長和繁殖所必須的酶相結(jié)合，從而抑制乙肝病毒。臨床用于急性黃疸型肝炎、慢性肝炎的齊墩果酸主要是從女貞子、青葉膽等植物中提取。也有報道從 木、木瓜中提取分離。
目前齊墩果酸的提取分離多采用醇提、層析分離的方法。例如《中國野生植物資源》第20卷第2期48頁公開的“木瓜中齊墩果酸的提取分離方法及含量測定”就是將木瓜原料用適量的95％乙醇浸泡、滲漉、抽濾，得浸膏狀物后，加無水乙醇溶解，加活性炭回流脫色，用抽濾法除去活性炭后再濃縮至一定量，加適量層析用硅膠吸附、拌勻、研碎成細粉裝柱，依次用一定的比例的乙酯一石油醚為洗脫液進行洗脫，在第25-42餾分中得到齊墩果酸。這種方法存在的不足之處是工藝周期長、效率低、有效成分耗損大，且在分離過程中要消耗大量有機溶劑，這樣不僅加大了齊墩果酸的生產(chǎn)成本，還給環(huán)境保護造成一定的壓力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的提取分離齊墩果酸的方法，該方法工藝簡單、成本低、齊墩果酸富集量高、且對生態(tài)環(huán)境無負面影響。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的所提供的提取分離齊墩果酸的方法，包括以下步驟a、以沙棘果、沙棘果皮渣、沙棘種籽或沙棘葉為原料，分別負壓干燥使其水分≤7％，粉碎為40～80目的細粉；b、將沙棘果、沙棘果皮渣、沙棘種籽的細粉，采用超臨界CO2萃取，萃取獲得的沙棘全果油、沙棘果渣油、沙棘籽油另作他用(這些萃取物有其自身的藥用價值)。留取萃取后剩余的全果渣、果皮渣、籽渣；c、將a步驟中的沙棘葉或b步驟中留取的全果渣、果皮渣、籽渣加6～8倍、60～90％的食用乙醇，回流提取2-3次，離心、合并提取液，得到沙棘齊墩果酸提取液；d、將沙棘齊墩果酸提取液先用200～300目的板框過濾機粗濾，再用400～500目的板框過濾機精濾，得精濾液；e、精濾液在壓力為0.10～0.50Mpa、溫度40～60℃的條件下，先用截留分子量1500～2000dalton的膜過濾，過濾液再用截留分子量300dalton的膜過濾，得到沙棘齊墩果酸濃縮液；f、將沙棘齊墩果酸濃縮液在60℃以下減壓干燥或噴霧干燥，得沙棘齊墩果酸粉。
本發(fā)明膜過濾時壓力優(yōu)選范圍為0.20～0.40Mpa。
本發(fā)明的創(chuàng)新之處在于采用膜技術(shù)從沙棘果、沙棘果皮渣、沙棘種籽以及沙棘葉中提取分離出齊墩果酸。它為人們提供了一種新的齊墩果酸的提取分離方法。
沙棘齊墩果酸分子量為456.71，齊墩果酸甙分子量一般為900左右。本發(fā)明采用膜分離技術(shù)，將沙棘植物中的在此分子量范圍內(nèi)的物質(zhì)進行提取分離，對其提取物進行定性定量分析，確定其含有大量齊墩果酸，因而，本發(fā)明的創(chuàng)新之處還在于有效濃縮富集了沙棘植物中的齊墩果酸。
本發(fā)明方法提取分離的齊墩果酸采用2000版中華人民共和國藥典(一部)34頁，薄層色譜法進行定性分析。
其定量分析方法為
取本發(fā)明方法提取分離的沙棘齊墩果酸粉1g，用無水乙醇回流提取3次(20ml，15ml，10ml)，過濾。定容至50ml，用millipore濾膜過濾進樣。色譜柱C18-ODS柱，流動相甲醇-水(88∶12)，檢測波長220nm，靈敏度0.05AUFS，流速0.6ml/分鐘，室溫。外標法定量(見楊正權(quán)等《中草藥》1980.11(6)385頁。
由于本發(fā)明方法是采用膜分離技術(shù)對一定分子量范圍內(nèi)的物質(zhì)進行分離，因而，與齊墩果酸分子量相當?shù)奈瀛h(huán)三萜類化合物如熊果酸會一并提出。
本發(fā)明方法與傳統(tǒng)的齊墩果酸提取方法相比較，還具有工藝簡單，操作方便，分離效率高，無污染，無溶劑殘留，成本低的特點。
用本發(fā)明方法制備的齊墩果酸可用于制備治療肝炎、肝硬化的藥物。也可用于制備與其藥理作用(如消炎、鎮(zhèn)靜、強心、利尿、增強免疫)相符的藥物。
具體實施例方式
實施例1稱取沙棘果皮渣10kg，負壓干燥使其水分≤7％，粉碎，過80目篩，用SFE～24L超臨界CO2裝置萃取，在壓力28Mpa，溫度45℃，流量200升/小時，時間2.5小時條件下萃取。萃取獲得的沙棘果渣油另作他用，除去沙棘果渣油后剩余的果皮渣(9.6kg)，加8倍70％食用乙醇回流提取2次，離心、合并提取液，將提取液先用200目板框過濾機粗濾，再用500目板框過濾機精濾，得精濾液。精濾液用UF2540超濾膜裝置進行膜分離，在壓力0.30～0.50Mpa，溫度45-55℃條件下，先用截留分子量1500dalton的膜過濾，除去溶液中含有的大分子(如可溶性蛋白、大分子有機物等)的物質(zhì)，得到沙棘齊墩果酸濾液，再用截留分子量300dalton的膜過濾，除去溶液中的小分子(如鐵、鈣、鈉、鎂等無機物以及分子量在300以下的物質(zhì))，同時除去乙醇及水分，得沙棘齊墩果酸濃縮液。再將沙棘齊墩果酸濃縮液減壓干燥(60℃以下)，即得沙棘齊墩果酸分離物98.55g，其沙棘齊墩果酸的含量28.5％。
實施例2稱取沙棘葉10kg，負壓干燥使其水分≤7％，粉碎，過60目篩，得沙棘葉粉，加8倍70％食用乙醇回流提取3次，離心、合并提取液，將提取液先用300目板框過濾機進行粗濾，再用500目板框過濾機進行精濾，得沙棘葉齊墩果酸精濾液。將精濾液用超濾膜裝置進行膜分離，在壓力0.10～0.30Mpa，溫度45-55℃條件下，先用截留分子量2000dalaton的膜過濾，除去溶液中的大分子的物質(zhì)，再用截留分子量300dalton的膜過濾，除去溶液中的小分子的物質(zhì)，同時除去乙醇及水溶液，得沙棘齊墩果酸濃縮液。再將沙棘齊墩果酸濃縮液噴霧干燥，即得沙棘齊墩果酸分離物86.5g，其沙棘齊墩果酸的含量20.5％。
權(quán)利要求
1.一種提取分離齊墩果酸的方法，其特征在于它包括以下步驟a、以沙棘果、沙棘果皮渣、沙棘種籽或沙棘葉為原料，分別負壓干燥使其水分≤7％，粉碎為40～80目的細粉；b、將沙棘果、沙棘果皮渣、沙棘種籽的細粉，采用超臨界CO2萃取，留取萃取后剩余的全果渣、果皮渣、籽渣；c、將a步驟中的沙棘葉或b步驟中的全果渣、果皮渣、籽渣果加6～8倍、60～90％食用乙醇回流提取2-3次，離心合并，得到沙棘齊墩果酸提取液；d、將沙棘齊墩果酸提取液先用200～300目的板框粗濾，再用400～500目的板框精濾，得精濾液；e、精濾液在壓力為0.10～0.50Mpa、溫度40～60℃的條件下，先用截留分子量1500～2000dalton的膜過濾，再用截留分子量300dalton的膜過濾，得到沙棘齊墩果酸濃縮液；f、將沙棘齊墩果酸濃縮液在60℃以下減壓干燥或噴霧干燥，得沙棘齊墩果酸粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取分離齊墩果酸的方法，其特征在于所說e步驟中的膜過濾的壓力為0.20～0.40Mpa。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種工藝簡單、成本低、齊墩果酸富集量高、且對生態(tài)環(huán)境無負面影響的提取分離齊墩果酸的方法，它包括以下步驟a.以沙棘果、沙棘果皮渣、沙棘種籽或沙棘葉為原料，干燥、粉碎；b.采用超臨界CO
文檔編號C07J63/00GK1552722SQ03136688
公開日2004年12月8日 申請日期2003年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月26日
發(fā)明者鄒元生, 聶勇, 王岳, 劉玉平, 蘇琳, 孫力, 杜建永 申請人:河北神興沙棘研究院