專利名稱：LFA－1α亞基抗體及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療LFA-1α亞基相關(guān)的生理狀況以及可通過與LFA-1α亞基相結(jié)合的抗體所治療疾病，如HIV的抗體。
背景技術(shù)：
人類淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原(LFA)-1是一種異源二聚體淋巴細(xì)胞表面糖蛋白，是整聯(lián)蛋白家族的成員。其分布廣泛，存在于淋巴細(xì)胞系、粒細(xì)胞系和單核細(xì)胞系的細(xì)胞上。LFA-1主要作為一種粘附分子，在炎癥中介導(dǎo)細(xì)胞和細(xì)胞之間的相互作用，通過使CTLs和它們的靶細(xì)胞之間形成綴合物，在細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)介導(dǎo)的細(xì)胞裂解中起重要的作用。
動物和人類的研究已經(jīng)證實了粘附分子在各種病理過程中的作用，包括慢性病毒性肝炎、移植排斥、膿毒性休克、免疫介導(dǎo)的肺和腎臟疾病以及其它自身免疫紊亂。研究提示這些粘附分子的表達(dá)可能在某種條件下是活性炎癥的有用標(biāo)記，通過干擾這些分子取消內(nèi)皮的粘附可能會抑制組織損傷。
已經(jīng)證明了粘附分子在HIV疾病中的作用。在HIV-1感染的不同階段涉及不同的粘附分子，并且通過病毒特異性抗體影響HIV-1的中和。在細(xì)胞和細(xì)胞的相互作用中，發(fā)現(xiàn)LFA-1的存在對于病毒介導(dǎo)的合胞體形成是關(guān)鍵的。在無細(xì)胞的病毒傳播中，整合到病毒體中的LFA-1顆粒保持它們的生物學(xué)功能，并且顯示增強(qiáng)病毒-細(xì)胞的相互作用，提高病毒的感染性，以及擴(kuò)大病毒的宿主細(xì)胞范圍的作用。另外，據(jù)報道，通過能阻斷LFA-1功能的抗LFA-1單克隆抗體，提高了HIV+血漿和人抗gpl20單克隆抗體兩者的中和活性。
粘附分子在HIV感染個體中普遍存在的CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTLs)上表達(dá)。假設(shè)它們在CTL介導(dǎo)的靶細(xì)胞裂解中起作用，在HIV感染受試者的CD4+T細(xì)胞計數(shù)逐漸減少中可能也涉及LFA-1。除了病毒產(chǎn)物的致細(xì)胞病變效應(yīng)以及HIV特異性CTLs的直接殺傷之外，提出了間接的機(jī)理以解釋T細(xì)胞的減少。一種特別的假說認(rèn)為可能是由于未感染的CD4+T細(xì)胞的殺傷。幾組研究已經(jīng)鑒定了裂解未感染的活化的CD4+淋巴細(xì)胞的非HLA限制性CTLs的群體。這些群體僅在HIV血清反應(yīng)陽性的個體中出現(xiàn)，但是不在血清反應(yīng)陰性的對照中出現(xiàn)，其活性顯示與某些個體體內(nèi)CD4+淋巴細(xì)胞數(shù)量降低相一致。
已經(jīng)研究了幾個產(chǎn)生與LFA-1反應(yīng)的單克隆抗體的小鼠雜交瘤系。據(jù)稱，通過降低細(xì)胞裂解的初速度以及通過干擾效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞之間的綴合物形成，抗LFA-1單克隆抗體可逆性地抑制CTL殺傷。
附圖簡述

圖1顯示在第8，29和50天施用所示數(shù)量和劑量的LFA-1α亞基抗體后，HIV-1 RNA病毒負(fù)荷相相對基線的變化。2.0mg/kg*表示2.0mg/kg單劑量組。
圖2顯示S6F1抗體的每個劑量組和全部受試者群體在第8，29和50天測量的CD8+T細(xì)胞計數(shù)相相對基線的變化。2.0mg/kg*表示2.0mg/kg單劑量組。
圖3顯示在整個43天中的各個時間點上S6F1抗體的多倍劑量的結(jié)合百分率。
圖4顯示示例性的LFA-1α亞基氨基酸序列(SEQ ID NO1)；包括示例性LFA-1α亞基的編碼序列的核苷酸序列(SEQ ID NO3)；以及推測的LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域(propeller domain)氨基酸序列(SEQ ID NO2)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供治療患有或有患與CD4+細(xì)胞數(shù)量降低相關(guān)，或者由其導(dǎo)致的生理狀況風(fēng)險的受試者的方法。在一個實施方案中，方法包括施用于受試者高于1mg/kg體重數(shù)量的能結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的單克隆或多克隆抗體，例如，高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更高。在不同的方面，抗體抑制S6F1或TS2/4抗體結(jié)合到LFA-1α亞基上；結(jié)合到S6F1或TS2/4抗體結(jié)合的表位上；是S6F1或TS2/4的人源化形式。在另一個方面，抗體結(jié)合包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域在內(nèi)的表位，例如，位于LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或部分，如SEQ ID NO2中所述LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者部分。在另一方面，抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列，例如，F(xiàn)ab、Fab′、(Fab)2、Fv或者scFv。在另一個方面，結(jié)合LFA-1α亞基的抗體是人源化形式，例如，具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
本發(fā)明也提供提高受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)量的方法。在一個實施方案中，該方法包括向受試者施用高于1mg/kg體重數(shù)量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體，例如，高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更高。在不同的方面，所述抗體抑制S6F1或TS2/4抗體結(jié)合到LFA-1α亞基上；結(jié)合到S6F1或TS2/4抗體結(jié)合的表位上；是S6F1或TS2/4的人源化形式。在另一個方面，抗體結(jié)合包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域在內(nèi)的表位，例如，位于LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或部分，如SEQ ID NO2中所述LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者部分。在另一方面，抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列，例如，F(xiàn)ab、Fab′、(Fab)2、Fv或者scFv。在另一個方面，結(jié)合LFA-1α亞基的抗體是人源化形式，例如，具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
本發(fā)明進(jìn)一步提供抑制或防止受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)量降低的方法。在一個實施方案中，該方法包括施用于受試者高于1mg/kg體重數(shù)量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體，例如，高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更高。在不同的方面，抗體抑制S6F1或TS2/4抗體結(jié)合到LFA-1α亞基上；結(jié)合到S6F1或TS2/4抗體結(jié)合的表位上；是S6F1或TS2/4的人源化形式。在另一個方面，抗體結(jié)合包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域在內(nèi)的表位，例如，位于LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或部分，如SEQ ID NO2中所述LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者部分。在另一方面，抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列，例如，F(xiàn)ab、Fab′、(Fab)2、Fv或者scFv。在另一個方面，結(jié)合LFA-1α亞基的抗體是人源化形式，例如，具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
本發(fā)明另外提供治療患有或有患可用結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體治療的生理狀況風(fēng)險的受試者的方法，包括施用于受試者高于1mg/kg體重數(shù)量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。在一個實施方案中，該方法包括施用于受試者高于1mg/kg體重數(shù)量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體，例如，高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更高。在不同的方面，抗體抑制S6F1或TS2/4抗體結(jié)合到LFA-1α亞基上；結(jié)合到S6F1或TS2/4抗體結(jié)合的表位上；是S6F1或TS2/4的人源化形式。在另一個方面，抗體結(jié)合包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域在內(nèi)的表位，例如，位于LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或部分，如SEQ ID NO2中所述LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者部分。在另一方面，抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列，例如，F(xiàn)ab、Fab′、(Fab)2、Fv或者scFv。在另一個方面，結(jié)合LFA-1α亞基的抗體是人源化形式，例如，具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
本發(fā)明此外提供治療接觸HIV或有接觸HIV風(fēng)險受試者的方法。在一個實施方案中，該方法包括施用于受試者高于1mg/kg體重數(shù)量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體，例如，高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更高。在不同的方面，抗體抑制S6F1或TS2/4抗體結(jié)合到LFA-1α亞基上；結(jié)合到S6F1或TS2/4抗體結(jié)合的表位上；是S6F1或TS2/4的人源化形式。在另一個方面，抗體結(jié)合包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域在內(nèi)的表位，例如，位于LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或部分，如SEQID NO2中所述LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者部分。在另一方面，抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列，例如，F(xiàn)ab、Fab′、(Fab)2、Fv或者scFv。在另一個方面，結(jié)合LFA-1α亞基的抗體是人源化形式，例如，具有一個或多個氨基酸取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。在另一個方面，受試者對HIV感染無癥狀或者有癥狀，或者以前一直沒有接觸HIV。
本發(fā)明的方法包括全身或局部施用于受試者單劑量或多倍劑量。在各個方面，其中首次施用的劑量高于1mg/kg體重，隨后的一個或多個劑量可以少于1mg/kg體重，或者高于1mg/kg體重。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供包含所述抗體的組合物和試劑盒。在不同的實施方案中，組合物或試劑盒包括100mg或更多的S6F1、TS2/4抗體，其人源化形式或亞序列，以及藥學(xué)可接受的載體，所述的組合物任選地為單一單位劑量或多單位劑量形式，例如，100mg或更多的S6F1、TS2/4抗體，其人源化形式或亞序列的多單位劑量形式。在不同的方面，組合物或試劑盒包括在安瓿、小瓶、瓶或注射器內(nèi)存在的組合物。在另一個方面，試劑盒包括施用于受試者高于1mg/kg體重組合物的使用說明，例如，施用于受試者1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重的組合物，或者更高。
發(fā)明詳述本發(fā)明是基于，至少部分基于LFA-1α亞基抗體。當(dāng)施用于受試者特定劑量時，結(jié)合LFA-1α亞基的抗體能改善顯示一種或多種HIV感染癥狀受試者的生理狀態(tài)。例如，在用LFA-1α亞基抗體治療的HIV感染受試者中HIV病毒滴度降低(見，實施例2和圖1)。另外，在用LFA-1α亞基抗體治療的HIV感染受試者中，CD4+細(xì)胞的數(shù)量增加(見，實施例2)。用LFA-1α亞基抗體治療的HIV感染受試者也報道精力增加以及他們的健康全面改善(見表2)。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供治療患有或有患與CD4+細(xì)胞數(shù)量降低相關(guān)的或者由其所導(dǎo)致的生理狀況風(fēng)險受試者的方法；增加受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)量的方法；抑制或防止受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)量降低的方法；治療接觸HIV或有接觸HIV風(fēng)險受試者的方法。在一個方面，該方法包括施用于受試者高于1.0mg/kg體重量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體。
在免疫反應(yīng)通路中涉及LFA-1α亞基。因此，除了LFA-1α亞基結(jié)合抗體用于治療與CD4+細(xì)胞數(shù)量降低相關(guān)的或由其導(dǎo)致的生理狀況；提高CD4+細(xì)胞數(shù)量；抑制或防止CD4+細(xì)胞數(shù)量降低；以及治療接觸HIV或有接觸HIV風(fēng)險的受試者外，可類似地治療LFA-1參與的其它生理狀況。
因此，在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療患有或有患可用結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)抗體治療的生理狀況風(fēng)險受試者的方法。在一個方面，該方法包括施用于受試者高于1.0mg/kg體重量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體。
本發(fā)明的一個實施方案包括藥物和制備藥物的方法，其中該藥物含有結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體，如S6F1或TS2/4，且該藥物用于治療患有或有患可用這種抗體治療的生理狀況，例如HIV感染風(fēng)險受試者或受試者。
LFA-1α亞基參與或其對改變一種或者多種LFA-1α亞基活性起反應(yīng)的生理狀況或紊亂包括，例如，免疫紊亂如非何杰金(Hodgkin′s)淋巴瘤，萊特爾氏(Reiter′s)綜合征以及漸進(jìn)性全身性淋巴結(jié)病。
結(jié)合LFA-1α亞基的示例性抗體是單克隆抗體，如S6F1(ATCC登記號HB-9579)和TS2/4(ATCC登記號HB-244)。這些抗體已被描述過(見，例如，美國專利No.5,002,869；Morimoto等，Nature 330479(1987)；和Sanchez-Madrid等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 797489(1982))。
在本發(fā)明的方法中所用抗體的示例性劑量或數(shù)量是高于1.0mg/kg體重，例如2.0mg/kg體重。在另一個實施方案中，施用于受試者的抗體的劑量或數(shù)量包括在約1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重之間，或者更高。
術(shù)語“抗體”指通過重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，分別是VH和VL，結(jié)合到其它分子(抗原)的蛋白。抗體包括IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4)、IgM、IgA、IgD、IgE、IgD、IgA、IgM和IgE。例如，IgG分子包括兩個分子量大約23,000道爾頓的相同的輕多肽鏈，以及兩個分子量53,000-70,000的相同的重多肽鏈。四條鏈通過二硫鍵連接成“Y”構(gòu)型；輕鏈在“Y”的口部開始與重鏈括在一起并且持續(xù)到可變區(qū)。輕鏈分為κ或λ(κ，λ)。每一類重鏈可與κ或λ輕鏈結(jié)合。在天然抗體中，輕鏈和重鏈相互間以共價結(jié)合，兩個重鏈的“尾”部通過共價二硫鍵相互結(jié)合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構(gòu)型的叉狀末端的N末端到每條鏈底部的C末端。N末端是可變區(qū)，C末端是恒定區(qū)。在現(xiàn)有技術(shù)中重鏈被分成γ、μ、α、δ、或ε(γ、μ、α、δ、ε)，它們中的一些亞型決定抗體的“種類”是IgA、IgD、IgE、IgG、或IgM。
輕鏈的可變區(qū)(VL)和重鏈的可變區(qū)(VH)決定抗原特異性和親和力。通過每個VH和VL鏈上的3個互補決定區(qū)(CDRs)決定抗原的結(jié)合位點。構(gòu)架區(qū)主要采用β折疊構(gòu)象，CDRs形成連接β折疊結(jié)構(gòu)的環(huán)，在某些實例中形成β折疊結(jié)構(gòu)的一部分。因此，構(gòu)架區(qū)形成支架結(jié)構(gòu)，該支架結(jié)構(gòu)通過鏈間非共價相互作用以允許CDRs非共價結(jié)合到抗原表位的方向安置6個CDRs。輕鏈的恒定區(qū)(CL)和重鏈的恒定區(qū)(CH1、CH2或CH3)賦予生物特性，如分泌、經(jīng)胎盤流動性、Fc受體結(jié)合、補體結(jié)合等。
抗體可以是完整的免疫球蛋白分子，通過二硫鍵連接到兩條全長輕鏈上的兩條全長重鏈，以及結(jié)合抗原表位的有或沒有恒定區(qū)的免疫球蛋白分子的亞序列(即，片段)，或者結(jié)合抗原表位的有或沒有恒定區(qū)的免疫球蛋白分子的其亞序列(即，片段)?？贵w可以單獨地或任意組合地包括全長重鏈和輕鏈可變區(qū)，VH和VL。
抗體包括多克隆和單克隆抗體?！皢慰寺】贵w”是從基本上同源的抗體群中獲得的抗體，即，除了存在少量可能天然發(fā)生的突變之外，抗體群所包含的單個抗體是相同的。單克隆抗體是特異的，它們抗抗原位點上的單一決定簇(表位)，而多克隆抗體典型地包括結(jié)合不同抗原決定簇(表位)的抗體。除了特異性之外，單克隆抗體具有優(yōu)點，因為它們是通過培養(yǎng)雜交瘤產(chǎn)生，因而沒有其它免疫球蛋白的污染。
術(shù)語“單克隆”指從基本上同源的抗體群中獲得的抗體，不能理解為需要通過任何特殊的方法產(chǎn)生的抗體。例如，單克隆抗體可以通過Kohler等，Nature 256495(1975)第一次描述的雜交瘤方法制備。在這個方法中，將來自經(jīng)抗原注射的哺乳動物的淋巴細(xì)胞與無限增殖的腫瘤細(xì)胞系(例如，骨髓瘤細(xì)胞系)融合，因而產(chǎn)生雜交細(xì)胞或“雜交瘤”。雜交瘤是無限增殖的并且能夠產(chǎn)生抗體。克隆雜交瘤產(chǎn)生單一遺傳品系，其中每個遺傳株產(chǎn)生單一抗體。然后抗體可以用可買到的G蛋白親和樹脂或通過現(xiàn)有技術(shù)中的其它已知技術(shù)進(jìn)行純化(見，例如，AntibodiesALaboratory Manual，Harlow和Lane(編輯)，Cold Spring HarborLaboratory Press，1988)。適宜的技術(shù)包括LFA-1α亞基親和純化、非變性凝膠純化、HPLC或RP-HPLC、A蛋白柱上的純化、或者這些技術(shù)的任意組合。
或者，單克隆抗體可以通過重組DNA方法制備，例如，可使用能特異結(jié)合到編碼抗體重鏈和輕鏈基因的寡核苷酸探針篩選亞克隆的雜交瘤細(xì)胞以及分離DNA。一旦被分離，DNA可被插入到表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)染到原核或真核宿主細(xì)胞中，如大腸桿菌、COS細(xì)胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞或者骨髓瘤細(xì)胞，(見，例如，美國專利No.4,816,567)。例如，在美國專利No.5,658,570中描述了用于生產(chǎn)抗體目的的恒定區(qū)和可變區(qū)序列的克隆。編碼抗體或抗體亞序列的DNA也可以來源于例如，EP 368684 B1和美國專利No.5,969,108中描述的抗體噬菌體文庫。幾個出版物(例如，Clackson等，Nature 352624-628(1991)；和Marks等，Bio/Technology 10779-783(1992))描述了通過鏈改組(chainshuffling)，以及作為構(gòu)建大量噬菌體文庫策略的組合感染和體內(nèi)重組生產(chǎn)高親和人抗體。這些方法是傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)分離和隨后單克隆抗體克隆的替代方法。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，多克隆抗體的制備和它們的純化也是公知的(見，例如，Green等，(1992)在Immunochemical Protocols，pages1-5，Manson編，Humana Press；和Coligan等，(1994)在CurrentProtocols in Immunology，Wiley；和Barnes等，(1992)在Methods inMolecular Biology，Vol.10，pages 79-104，Humana Press)。
抗LFA-1α亞基抗體包括抑制示例性的S6F1或TS2/4單克隆抗體與LFA-1α亞基的結(jié)合的抗體。換句話說，這種抑制性或競爭性抗體將與S6F1或TS2/4抗體競爭結(jié)合LFA-1α亞基。這些抗體將可能在大約等摩爾的基礎(chǔ)上與S6F1或TS2/4抗體競爭結(jié)合LFA-1α亞基。也就是說，在含有給定摩爾濃度S6F1的混合物中，等摩爾濃度的競爭抗體將使S6F1對LFA-1α亞基的結(jié)合降低50％。這是因為競爭性抗體對LFA-1α亞基具有大約與S6F1相等的結(jié)合親和力。當(dāng)然，還包括在與S6F1或TS2/4抗體競爭結(jié)合LFA-1α亞基中或多或少有影響的抗體。例如，也包括需要高于2-5倍摩爾濃度才能將S6F1對LFA-1α亞基的結(jié)合抑制50％的抗體(例如，需要1-2.5uM量的抗體將0.5uM的S6F1或TS2/4抗體對LFA-1α亞基的結(jié)合抑制50％)，或者低于2-5倍摩爾濃度可將S6F1對LFA-1α亞基的結(jié)合抑制50％的抗體(例如，需要0.1-0.5uM量的抗體將1uM的S6F1或TS2/4抗體對LFA-1α亞基的結(jié)合抑制50％)。競爭性結(jié)合研究對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，并且可用于鑒定能抑制S6F1或TS2/4抗體對LFA-1α亞基結(jié)合的抗體。
抗LFA-1α亞基抗體也包括結(jié)合S6F1或TS2/4抗體所結(jié)合的表位的抗體，即，抗體具有S6F1或TS2/4的結(jié)合特異性。
如這里使用的，當(dāng)用于指抗體結(jié)合抗原時，術(shù)語“特異性”意思是抗體識別與相比較的抗體所識別的相同的表位。因此，具有表示為S6F1抗體的結(jié)合特異性的抗體識別與S6F1所識別的相同的表位；具有表示為TS2/4抗體的結(jié)合特異性的抗體識別與TS2/4所識別的相同的表位；等等。所以，通過簡單的試驗，例如，對照抗體分別抑制S6F1或TS2/4結(jié)合的競爭試驗，可以很容易地鑒定識別與S6F1或TS2/4相同表位的對照抗體。
如這里使用的，當(dāng)用于指抗原和抗體之間的相互作用時，術(shù)語“結(jié)合(bind)”或“結(jié)合(binding)”意思是結(jié)合在兩個分子之間是選擇性的。典型地，當(dāng)解離常數(shù)(KD)低于約1×10-5M或者低于約1×10-6M或1×10-7M時，可將抗體和抗原之間發(fā)生的結(jié)合與非特異結(jié)合相區(qū)別。
對于LFA-1α亞基，據(jù)信S6F1結(jié)合完全位于或至少部分位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基(Genbank登記號NM002209；Corbi等，J.Exp.Med.167(5)1597-1607(1988)；Loftus等，Genomics 60(3)，295-308(1999))的1到57位氨基酸內(nèi)的表位。典型地，表位是短氨基酸序列，例如，長度至少約5個氨基酸。因而用于本發(fā)明的方法中的抗體的表位可完全位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基內(nèi)的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或者50到57位氨基酸內(nèi)或者部分所述氨基酸內(nèi)。結(jié)合LFA-1α亞基這樣區(qū)域的抗體因此根據(jù)本發(fā)明是有用的(Huang和Springer，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 943162-3167(1997))。
LFA-1β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域可含有示例性抗體S6F1或TS2/4結(jié)合的一個或多個表位(Zang等，J.Biol.Chem.275(29)22202(2000))?？筁FA-1α亞基抗體因而也包括結(jié)合到LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域或其內(nèi)表位的抗體。至少有3個β折疊結(jié)構(gòu)域位于LFA-1α亞基的1到57氨基酸內(nèi)(Huang和Springer，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 943162-3167(1997))。預(yù)測N末端部分β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域含有7個β折疊，前3個位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到57氨基酸內(nèi)。因此，結(jié)合完全位于或至少部分位于LFA-1α亞基的β折疊或β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域內(nèi)的表位的抗體根據(jù)本發(fā)明是有用的。
可通過用表位長度肽序列免疫動物生產(chǎn)結(jié)合指定表位的抗體。同樣，包括結(jié)合SEQ ID NO2內(nèi)所述LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或者50到57位氨基酸的全部或者部分，或者LFA-1α亞基的β折疊或β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域的抗體。
結(jié)合LFA-1α亞基抗體可以它們的表位特異性來表征。鑒定抗體結(jié)合表位的系統(tǒng)技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的并且在例如，美國專利No.4,708,871中描述。簡要地，可以合成來源于LFA-1α亞基的一系列重疊的寡肽，如1到57位氨基酸或β折疊或β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域，或者其內(nèi)的序列，并且結(jié)合到固相針陣列上，每個針上有唯一的寡肽。針陣列可包括96孔微量滴定板，允許同時分析所有96個寡肽與例如，抗LFA-1α亞基抗體的結(jié)合?；蛘?，噬菌體展示肽文庫試劑盒(New England BioLabs)是當(dāng)前可買到的用于表位作圖的試劑盒。為了鑒定指定抗體結(jié)合的表位，使用這些方法可測定連續(xù)氨基酸的每個可能子集的結(jié)合親和力。
根據(jù)本發(fā)明，有用的抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的抗體。對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的這類抗體進(jìn)一步包括人源化的抗體，如這里描述的人源化S6F1或者TS2/4，完全人抗體及其修飾型和變體。測量抗體結(jié)合親和力的技術(shù)對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是常規(guī)的和公知的。
因此，在另一個實施方案中，本發(fā)明提供治療患有或有患與CD4+細(xì)胞數(shù)量降低相關(guān)或其所致生理狀況風(fēng)險受試者的方法；提高受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)量的方法；抑制或防止受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞數(shù)量減少的方法；治療患有或有患可用結(jié)合LFA-1α亞基(CD 11a)的抗體所治療的生理狀況風(fēng)險受試者的方法；以及使用與S6F1或TS2/4相比對LFA-1α亞基具有相同或者改變的結(jié)合親和力的抗體治療接觸HIV或有接觸HIV風(fēng)險受試者的方法。在一個實施方案中，抗體是人源化的，例如，S6F1或TS2/4的人源化形式，或者具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。在另一個實施方案中，抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。在另一個實施方案中，抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體。
包括抗體的修飾型。修飾的抗體包括具有一個或者多個氨基酸缺失的變體。缺失的實例是從氨基酸序列的N或C末端，或者在內(nèi)部缺失一個或多個氨基酸。因此，抗體包括完整的或者全長單克隆和多克隆抗體，以及其生物活性亞序列，即，保留親代或參考抗體的全部或者至少部分活性的免疫球蛋白片段，(例如，具有兩個全長重鏈和可變鏈序列的天然抗體)。示例性的活性包括，例如，保留至少部分親代(未修飾的或全長)抗體結(jié)合抗原的結(jié)合特異性或結(jié)合親和力的能力。因此，就結(jié)合LFA-1α亞基的抗體來說，例如，S6F1亞序列，該亞序列將保留至少部分親代S6F1抗體對LFA-1α亞基的結(jié)合親和力或特異性。
如這里使用，術(shù)語“亞序列”或者“片段”意思是全長分子的一部分。例如，抗體的亞序列是長度上比所參考的，例如全長多肽少一個或多個氨基酸的亞序列(例如，從氨基或羧基末端缺失一個或多個內(nèi)部或者末端的氨基酸)。亞序列因而可以是最長到全長分子的任意長度。
抗體亞序列的特殊實例包括，例如，F(xiàn)ab、Fab′、(Fab′)2、Fv、或者單鏈抗體(SCA)片段(例如，scFv)。亞序列包括保留對至少部分全長序列的功能或活性的部分。例如，即使亞序列的結(jié)合親和力可能高于或低于全長抗體的結(jié)合親和力，抗體亞序列將保留選擇性結(jié)合到抗原上的能力。例如，亞序列可包括S6F1或TS2/4的部分。
可用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化整個抗體產(chǎn)生抗體亞序列。具體地，F(xiàn)ab片段由抗體分子的單價抗原結(jié)合亞序列組成，可通過用木瓜蛋白酶消化整個抗體分子生產(chǎn)，產(chǎn)生由完整的輕鏈和部分重鏈構(gòu)成的片段?？赏ㄟ^用胃蛋白酶處理整個抗體分子且無隨后的還原獲得抗體的(Fab′)2亞序列?？赏ㄟ^用硫醇還原劑的還原作用，從(Fab′)2獲得抗體分子的Fab′片段，產(chǎn)生由完整的輕鏈和部分重鏈組成的分子。在這種方式中，每個處理的抗體分子獲得兩個Fab′亞序列。
Fv片段是含有表達(dá)為兩條鏈的輕鏈可變區(qū)VL和重鏈可變區(qū)VH的片段。聯(lián)系可以是非共價的或者可以是共價的，如化學(xué)交聯(lián)劑或者分子間二硫鍵(Inbar等，Proc.Natl.Acad Sci.USA 692659(1972)；SandhuCrit.Rev.Biotech.12437 1992)。
單鏈抗體(″SCA″)是基因工程構(gòu)建的或者是酶促消化的含有輕鏈可變區(qū)VL和重鏈可變區(qū)的抗體，任選地通過柔性連接體連接，如多肽序列，在VL-連接體-VH方向，或者在VH-連接體-VL方向?；蛘?，可通過經(jīng)兩個半胱氨酸殘基之間的二硫鍵連接兩個可變結(jié)構(gòu)域產(chǎn)生單鏈Fv片段。例如，Whitlow等，(1991)InMethodsA Companion toMethods in Enzymologv 297；美國專利Nos.4,946,778 5,892,019；和Pack等，(1993)Bio/Technology 111271描述了產(chǎn)生svFv抗體的方法。
也可以使用產(chǎn)生抗體亞序列的其它方法，如分離重鏈形成單價輕鏈-重鏈片段，進(jìn)一步斷裂片段，或者其它酶促、化學(xué)、或者基因技術(shù)，條件是亞序列保留至少部分完整參考抗體的抗原結(jié)合特異性或者親和力。
修飾抗體進(jìn)一步包括具有氨基酸取代的變體，只要取代的變體保留至少部分未取代參考抗體的活性。示例性的氨基酸取代包括保守氨基酸取代。術(shù)語“保守取代”意思是用生物或化學(xué)相似的殘基替換一種氨基酸。生物相似意思是取代與生物活性相容，例如，對于人源化抗體，該生物活性是抗原結(jié)合。保守取代的具體實例包括一種疏水殘基，如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或者甲硫氨酸取代另一種，或者用一種極性殘基取代另一種，如用精氨酸取代賴氨酸，谷氨酸取代天冬氨酸，或者谷氨酰胺取代天冬酰胺，絲氨酸取代蘇氨酸，等等。
這樣變體的另一個具體實例是用一個或多個人氨基酸取代的非人抗體。這樣變體的另一個實例是用一個或多個非人供體氨基酸取代的人抗體受體(例如，CDRs)。這種“人源化”抗體因而包含或者1)基于或來源于非人免疫球蛋白的序列，其中用一個或多個人殘基取代一個或多個非人氨基酸；或者2)人受體抗體序列，其中一個或多個非人氨基酸已經(jīng)被“移植”到人受體中。這種變體的另一個實例是用降低人體中免疫原性的氨基酸取代的非人抗體。人源化抗體因此通常是1)取代后在人體中免疫原性減少；或者2)含有至少一個在人抗體中一般發(fā)現(xiàn)的氨基酸殘基。這樣的抗體也包括全長免疫球蛋白分子或者其亞序列(如，F(xiàn)v、scFv、Fab、Fab′、F(ab′)2或者其它抗原結(jié)合亞序列)，其保留至少部分參考抗體的抗原結(jié)合特異性或親和力。
任何產(chǎn)生非人抗體的生物，如小鼠、大鼠、兔子、豬、馬、山羊、豚鼠、或者非人靈長類動物(例如，猿猴、黑猩猩、獼猴、猩猩等)或者可用作人受體的CDR供體，或作為用于生產(chǎn)人源化抗體的人氨基酸受體的其它動物。例如，可用一個或多個人氨基酸殘基取代非人抗體的互補決定區(qū)(CDR；位于高變區(qū)兩側(cè)的構(gòu)架殘基)的一個或多個可變構(gòu)架區(qū)(FR)殘基中的氨基酸殘基。因此，用人氨基酸取代非人氨基酸一般維持了構(gòu)象中的CDR，保留了所有或至少部分抗原結(jié)合親和力或特異性，而同時降低了在人體中的免疫原性。在具體實例中，人源化抗體包括所有或至少一個可變區(qū)域，其中與非人免疫球蛋白的那些區(qū)域?qū)?yīng)的一個或多個CDR區(qū)的全部或部分以及FR區(qū)的全部或部分是人免疫球蛋白序列的那些區(qū)域。人源化抗體也可包括至少部分人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)。
可使用本領(lǐng)域中已知的各種方法獲得人源化抗體，如(a)將非人可變結(jié)構(gòu)域域移植到人恒定區(qū)上產(chǎn)生嵌合抗體；(b)將一個或多個非人互補決定區(qū)(CDRs)的至少一部分移植到人構(gòu)架和恒定區(qū)中；或者(c)移植整個非人可變結(jié)構(gòu)域，但通過表面殘基的置換用人樣部分“遮掩(cloaking)”它們。例如，在Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.816851(1984)；Morrison等，Adv.Immunol.4465(1988)；Verhoeyen等，Science2391534(1988)；Padlan，Molec.Immun.28489(1991)；Padlan，Molec.Immun.31169(1994)，以及美國專利Nos.5,585,089；5,693,761；和5,693,762中描述了這些方法。
人源化抗體可包括在受體抗體中或在注入的CDR或構(gòu)架序列中均未發(fā)現(xiàn)的殘基。例如，可使用共同人免疫球蛋白序列選擇由于結(jié)構(gòu)與非人殘基類似而用于取代非人氨基酸的特殊氨基酸?！肮餐笨贵w序列是在檢查了許多人抗體序列后，具有在抗體或抗體區(qū)的特定位置上最頻繁發(fā)生的氨基酸殘基的序列。作為一個實例，在Kabat(Sequences of Proteinsof Immunological Interest.4th Ed.U.S.Department of Health andHuman Services.Public Health Service(1987))中描述了人可變區(qū)結(jié)構(gòu)域序列。檢查了在輕鏈構(gòu)架區(qū)1-23、35-49、和57-88，以及重鏈構(gòu)架區(qū)1-30、36-49、和66-94中完全決定的序列。選擇在指定位置上最頻繁發(fā)生的殘基作為共同序列的殘基。因而可通過檢查多數(shù)抗體每個位置上的氨基酸殘基鑒定人共同序列；在指定位置上最頻繁發(fā)生的氨基酸是共同序列的一部分。
可將公開的基于22個已知人VH III序列調(diào)查的人VH亞組III的共同序列，以及公開的基于30個已知人κ鏈I序列調(diào)查的人VLκ鏈亞組I的共同序列用作人抗體(Padlan，Mol.Immunol.31169(1994)；Padlan，Mol.Immunol.28489(1991))。已經(jīng)克隆了2類人輕鏈基因以及5類人重鏈基因，這樣，可從公眾可獲得的數(shù)據(jù)庫中獲得人來源的恒定區(qū)。對于更進(jìn)一步的詳細(xì)情況，見Jones等，Nature，321522(1986)；Reichmann等，Nature，332323(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2593(1992)。
修飾抗體進(jìn)一步包括具有一個或多個氨基酸添加或插入的變體。添加的實例是將一個或多個氨基酸添加到人源化抗體的N-或C末端。插入的實例是將氨基酸插入到序列中。具體的實例是將不同的免疫球蛋白序列添加到另一個免疫球蛋白序列中?？贵w因此包括“嵌合”抗體，其中重鏈或輕鏈的全部或部分與來源于特定物種或?qū)儆谔囟贵w類型或亞類抗體中的相應(yīng)序列相同或者同源，而鏈的其余部分與來源于其它物種或?qū)儆谄渌贵w類型或亞類抗體中的相應(yīng)序列相同或者同源，以及這樣抗體的片段(美國專利No.4,816,567；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，816851-5(1984))。因此，這種變體的一個具體實例是多特異性抗體。術(shù)語“多特異性”意思是結(jié)合到兩個或多個不同抗原表位上的抗體。“多特異性”抗體含有兩個或多個結(jié)合到不同表位上的可變區(qū)序列。例如，雙特異性抗體包括結(jié)合第一個表位的第一個可變鏈以及結(jié)合到不同的第二個表位上的第二個可變鏈。
添加包括不同于免疫球蛋白序列的異種肽序列，一種異種肽序列，以形成融合或嵌合抗體。異種序列可能含有與嵌合體的抗體部分截然不同的活性。因此，這種變體的另一個具體實例是多功能抗體。術(shù)語“多功能”意思是所指的組合物具有兩個或多個活性或者功能(例如，抗原結(jié)合、酶活性、配體或受體結(jié)合、毒素，等)。例如，結(jié)合到也附著有具有酶活性的多肽(例如，螢光素酶、乙酰轉(zhuǎn)移酶、半乳糖苷酶、過氧化物酶，等)的特定抗原上的抗體是具有結(jié)合功能和第二功能的雙功能抗體的實例。
除了酶活性外，多功能抗體的候選功能包括，例如，可檢測的部分，如放射性同位素和氨基酸序列(例如，35S、13lI)、T7、免疫球蛋白或聚組氨酸標(biāo)簽、毒素(例如，蓖麻毒蛋白、霍亂毒素、百日咳毒素)、細(xì)胞表面蛋白，如受體、配體(底物、激動劑和拮抗劑)、粘著蛋白(例如，鏈霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、凝集素)、生長因子、分化因子以及趨化因子。
添加不限于氨基酸序列。因此，可添加含有各種不同類型的小或者大功能部分中任何一種的功能結(jié)構(gòu)域。這樣的部分包括核酸、肽、碳水化合物、脂類或小的有機(jī)化合物，如藥物(例如，化學(xué)治療藥物，如長春花新堿、氨甲蝶呤等)，可檢測的標(biāo)記(熒光團(tuán)、發(fā)色團(tuán)、放射性核素，等)。
可通過在細(xì)胞，例如昆蟲、或哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)編碼特定變體的核酸并從細(xì)胞或培養(yǎng)基分離變體抗體以生產(chǎn)具有氨基酸添加、缺失和取代的變體。例如，可通過標(biāo)準(zhǔn)DNA克隆方法從產(chǎn)生期望抗體的細(xì)胞中獲得可變區(qū)基因。當(dāng)然，可使用幾種可買到的自動合成儀中的任何一種(例如，ABI型403A)化學(xué)合成基因。另外，可通過商品化DNA合成商的服務(wù)獲得編碼重鏈和輕鏈的DNA序列。
或者，一旦獲得編碼抗體的DNA序列，例如，通過使用適當(dāng)?shù)奶结樅Y選特定功能性重排的可變區(qū)的基因組文庫或者表達(dá)文庫(例如，mRNA)，可使用基于誘變的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)將氨基酸變體引入DNA序列中。例如，可分離對應(yīng)于抗體可變區(qū)或者恒定區(qū)的遺傳序列，修飾或缺失適當(dāng)?shù)暮塑账嵋蕴峁┡c本發(fā)明一致的變體抗體。更具體地，使用基于PCR的誘變，可將單個或者多個核苷酸突變引入到DNA片段中以編碼重鏈或者輕鏈可變區(qū)或恒定區(qū)內(nèi)位置上的不同氨基酸。基于PCR將氨基酸殘基添加到抗體中或者將氨基酸序列融合到抗體上生產(chǎn)嵌合或融合抗體的方法在本領(lǐng)域中也是已知的。
生產(chǎn)多特異性和多功能抗體可通過所選分子(其通過合成方法或者通過編碼多肽的核酸的表達(dá)生產(chǎn))的化學(xué)交聯(lián)或者通過在體外聯(lián)合重組DNA技術(shù)，或者通過多肽的細(xì)胞表達(dá)，產(chǎn)生具有不同表位特異性抗體的雜交瘤的融合，或者通過在單個細(xì)胞內(nèi)表達(dá)編碼具有不同表位特異性的抗體可變鏈的多核酸。
將所獲得的編碼全部或部分免疫球蛋白的遺傳材料裝配或插入到用于進(jìn)一步操作或者用于隨后整合到受體細(xì)胞和表達(dá)的載體中。這樣的載體可選自質(zhì)粒、噬菌體和病毒。載體可任選地包括選擇標(biāo)記、便于基因克隆的和進(jìn)入或者在真核或原核細(xì)胞中復(fù)制的能力。可通過各種技術(shù)實現(xiàn)將質(zhì)粒引入到宿主細(xì)胞中，包括轉(zhuǎn)染(例如，電泳和電穿孔)、原生質(zhì)體融合、磷酸鈣沉淀、與有包膜DNA的細(xì)胞融合、顯微注射、以及用病毒的感染。見，Ridgway，A.A.G.″Mammalian Expression Vectors″Chapter 24.2，pp.470-472 Vectors，Rodriguez和Denhardt編(Butterworths，Boston，Mass.1988)?？赏ㄟ^本領(lǐng)域中已知的各種方法實現(xiàn)將基因構(gòu)建體引入到用于克隆和操作的質(zhì)粒載體以及用于細(xì)胞表達(dá)的表達(dá)載體中。
用于抗體表達(dá)的受體細(xì)胞系包括淋巴樣細(xì)胞，如骨髓瘤(或雜交瘤)。骨髓瘤可合成、裝配以及分泌轉(zhuǎn)染基因編碼的免疫球蛋白，且它們在翻譯后修飾該蛋白。具體的受體細(xì)胞是Sp2/0骨髓瘤，其正常不產(chǎn)生內(nèi)源免疫球蛋白。當(dāng)被轉(zhuǎn)染后，該細(xì)胞將僅產(chǎn)生轉(zhuǎn)染基因編碼的免疫球蛋白。轉(zhuǎn)染的骨髓瘤可在培養(yǎng)基中生長并可從培養(yǎng)基中分離或者可在小鼠的腹膜內(nèi)生長，從腹水中可回收分泌的免疫球蛋白。其它的淋巴樣細(xì)胞，如B淋巴細(xì)胞，也可用作受體細(xì)胞。
修飾也包括衍生的序列。例如，氨基酸，其中游離氨基形成鹽酸化胺、對甲苯磺酰基、芐氧羰基；游離羧基形成鹽、甲基和乙基酯；游離羥基形成O-?；騉-烷基衍生物，以及天然存在的氨基酸衍生物，例如，脯氨酸的衍生物4-羥脯氨酸，賴氨酸的衍生物5-羥賴氨酸，絲氨酸的衍生物高絲氨酸，賴氨酸的衍生物鳥氨酸，等。也包括賦予共價結(jié)合的修飾，例如，產(chǎn)生環(huán)多肽的兩個半胱氨酸殘基之間的二硫鍵。
進(jìn)一步提供對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基內(nèi)表位具有結(jié)合親和力的完全人抗體，其中該結(jié)合親和力在S6F 1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1到3、2到5、5到10、10到50或10到100內(nèi)。
如這里使用的，當(dāng)用于指抗體時，術(shù)語“人”或“完全人”，意思是抗體是完全人抗體?？墒褂貌荒墚a(chǎn)生內(nèi)源免疫球蛋白的動物(例如，小鼠)生產(chǎn)人抗體(見例如，美國專利Nos.6,075,181；5,939,598；5,591,669；和5,589,369)。例如，嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區(qū)的純合缺失導(dǎo)致完全抑制產(chǎn)生內(nèi)源抗體。將人免疫球蛋白基因陣列轉(zhuǎn)移到這種種系突變小鼠中將導(dǎo)致當(dāng)動物接觸抗原時產(chǎn)生人抗體。
或者，可用抗原或表位免疫在其染色體中含有κ或λ人IgG鏈的人轉(zhuǎn)染色體(Tc)小鼠，(Tomizuka等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97722(2000)和Tomizuka，等，Nat Genet 16133(1997))。然后可使用Kohler，Nature 256495(1975)的方法，從顯示最高抗體滴度的動物中制備單克隆抗體。將得到的雜交瘤鋪平板，分析重鏈或κ鏈的產(chǎn)生，接著分析抗體產(chǎn)生。然后可通過限制性稀釋克隆細(xì)胞并重新篩選該細(xì)胞的抗體產(chǎn)生。
本發(fā)明的方法包括聯(lián)合療法。例如，治療患或有患HIV風(fēng)險受試者的方法任選地包括治療HIV的另外藥物或療法。接受聯(lián)合療法的受試者可在用結(jié)合LFA-1α亞基的抗體治療前、同時或者隨后施用或用該藥物或療法治療。
與本發(fā)明的方法和組合物聯(lián)合使用的示例性的藥物或療法包括抗病毒藥物，如蛋白酶抑制劑；適當(dāng)?shù)目姑庖呒?xì)胞刺激或免疫細(xì)胞抑制藥物，如細(xì)胞因子、趨化因子、白細(xì)胞介素、干擾素和結(jié)合它們的分子，如它們的受體；抗炎藥物如類固醇和非類固醇藥物。
抑制病毒蛋白酶、逆轉(zhuǎn)錄酶或整合酶的抗病毒藥物的具體實例包括，例如，病毒融合抑制劑，例如，T20和T20類似物(Trimeris，Inc.)；進(jìn)入抑制劑；整合酶抑制劑；蛋白酶抑制劑(例如，沙喹那韋、利托那韋、吲哚那韋、奈非那韋、安潑那韋)；核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如，齊多夫定(AZT)、司他夫定(d4T)，拉米夫定(3TC)，雙脫氧腺苷(DDI)，扎西他賓(ddC)，阿波卡韋)；非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如，奈韋拉平、地拉韋定、依非韋倫)；病毒成熟形成感染病毒(例如，“鋅指注射器”，一類抑制固有病毒α核酸衣殼蛋白裝配因而防止形成感染病毒顆粒的抑制劑)；及其混合物。
類固醇抗炎劑的具體實例包括糖皮質(zhì)激素。類固醇抗炎劑的非限制性說明性實例包括，例如，9-去氟膚輕松、去炎松、醋酸去炎松、倍氯美松雙丙酸酯、二丙酸倍他米松、氫化可的松、可的松、地塞米松、布地奈德、強(qiáng)的松、甲基強(qiáng)的松龍、強(qiáng)的松龍、這些化合物中任意一種的酯及其組合。非類固醇抗炎劑(NSAIDs)的非限制性說明的具體實例包括，例如，布他酮，如保泰松、羥保泰松、安乃近和異比林、以及喜康，其包括吡羅昔康和美洛西康；水楊酸鹽，例如，乙酰水楊酸鹽(阿司匹林)；丙酸，例如，布洛芬和萘普生；鄰氨基苯甲酸，例如，甲氧胺苯酸；苯乙酸，例如，對乙酰氨基酚；氨基煙酸，例如，氟胺煙酸；以及消炎靈，例如，消炎痛?？寡讋┑钠渌窍拗菩詫嵗陌愤哙ね?Thalidomide)(Celgene制造)。
“受試者”是活的動物，如哺乳動物。示例性的受試者包括人和非人靈長類(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、獼猴、長臂猿)。非人哺乳動物包括，例如，狗、貓、豬、奶牛、綿羊、山羊、馬、大鼠、兔子和小鼠。人類受試者包括成人、以及兒童，例如，嬰兒和新生兒。受試者包括疾病模型動物(例如，如HIV或SIV感染的非人靈長類)。
適合在本發(fā)明的方法中治療的候選受試者包括，例如，CD4+細(xì)胞數(shù)量不足或者由于疾病或治療(例如，抗細(xì)胞增殖的治療如化療或免疫抑制治療)所致免疫抑制或者有CD4+細(xì)胞數(shù)量降低風(fēng)險的受試者。適合治療的候選受試者也包括渴望提高CD4+細(xì)胞數(shù)量的受試者，如無免疫應(yīng)答的受試者或者那些有成為無免疫應(yīng)答風(fēng)險的受試者。這樣的受試者因此包括導(dǎo)致降低CD4+細(xì)胞數(shù)量的任何疾病或治療，或者提高CD4+細(xì)胞數(shù)量將改善受試者狀況的任何疾病或治療。
適合在本發(fā)明的方法中治療的候選受試者包括已經(jīng)接觸HIV的受試者，無論他們有癥狀或無癥狀，或者無論它們產(chǎn)生可檢測到的抗體HIV蛋白或沒有。因此，候選受試者可能接觸或可能沒有接觸HIV，有HIV的一個或多個癥狀，或者可能易感染該病或有感染該病的風(fēng)險，例如，與HIV+或可能HIV+個體的性接觸，但是該可能的HIV+個體必須產(chǎn)生可檢測到的抗HIV蛋白抗體或者HIV的一個或多個癥狀。
成功的治療將導(dǎo)致受試者狀況的改善或者生理、生物化學(xué)或細(xì)胞表現(xiàn)或者疾病特征中的一個或多個的抑制或逆轉(zhuǎn)。成功的治療包括癥狀的嚴(yán)重程度或頻率的減少、受試者主觀感覺的改善，如精力增加、食欲提高、心理健康，等。當(dāng)然，在已知疾病逐漸惡化的，在生理、生物化學(xué)或細(xì)胞表現(xiàn)中的一個或多個方面的穩(wěn)定，也認(rèn)為是成功的治療。
例如，隨著疾病的發(fā)展，HIV感染的受試者一般經(jīng)歷病毒滴度逐漸增加和CD4+細(xì)胞數(shù)量逐漸下降。因此，抑制病毒滴度增加或降低，或者抑制受試者體內(nèi)CD4+細(xì)胞的數(shù)量降低或增加被認(rèn)為是受試者狀況的改善。因此，術(shù)語“治療有效”意思是達(dá)到成功治療效果的量、施用方案或者治療方案或其結(jié)合，如增加CD4+細(xì)胞數(shù)量或者防止或抑制CD4+細(xì)胞數(shù)量降低，即，穩(wěn)定CD4+細(xì)胞數(shù)量；或者降低或穩(wěn)定HIV滴度或HIV蛋白水平；改善精力水平或主觀健康，降低機(jī)會感染或與HIV感染相關(guān)疾病的數(shù)量或嚴(yán)重性等的抗LFA-1α亞基抗體的量。
改善可能持續(xù)時間相對短，例如，幾個小時、幾天或幾周，或者延長較長的時間，例如，幾個月或幾年。改善不必是疾病的任何或所有癥狀的完全消失。例如，減少但沒有完全消除與HIV相關(guān)的癥狀是一種改善。因此，當(dāng)短期或長時間受試者狀況逐漸改善或者一個或多個相關(guān)癥狀部分減少時，即可獲得令人滿意的臨床終點和因而成功的治療。
有效劑量通常將高于1.0mg/kg。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會意識到劑量可根據(jù)各種因素變化，如所治療的疾病和疾病是否處于早期或晚期、年齡、性別、身體狀態(tài)/健康、以及受試者的體重。因此可調(diào)節(jié)劑量方案以提供最佳治療反應(yīng)，任選地將有害的副作用降低到最小。例如，可每日、隔天(例如，每隔一天、每隔二天，每隔三天，每隔四天等)、每周、每月施用幾個分開的劑量。根據(jù)治療疾病的狀態(tài)或治療的副作用，可以按比例增加或減少劑量。例如，第一次可施用高于1.0mg/kg劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體，隨后為一次或多次施用減少的劑量，如1.0mg/kg抗體或更少(例如，0.75、0.5、0.25、0.1mg/kg、或更少)。
第一次可施用高于1.0mg/kg劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體，隨后為一次或多次施用增加的劑量，如1.0mg/kg抗體或更多(例如，1.25、1.5、1,75、2.0、2.5、3.0mg/kg、或更多)。
本發(fā)明的方法也包括預(yù)防性的治療。在本發(fā)明的預(yù)防性治療方法中，施用的量能夠抑制或預(yù)防CD4+細(xì)胞數(shù)量的降低。就HIV來說，抑制或防止通過至少3個已知途徑發(fā)生的傳播性接觸、輸血(或血液制品)以及通過胎盤。傳播可通過如下的方法被抑制，即通過施用于未感染個體藥物以降低他們從HIV感染個體受到HIV感染的可能性，或者通過施用于HIV感染個體藥物以降低HIV感染另一個體的可能性。
預(yù)防治療方法的候選受試者包括那些有接觸該狀況或有發(fā)展成該病風(fēng)險的人。對于HIV，候選受試者因此包括可能接觸HIV感染受試者的體液或分泌物的任何人。具體實例包括同性或異性性伙伴；接觸或有接觸皮下注射器針頭風(fēng)險的人，如靜脈內(nèi)吸毒者或者醫(yī)院、診所或?qū)嶒炇业娜藛T；接受血液制品補充物的受試者，如血友病，或者接受輸血的受試者，如經(jīng)受手術(shù)或嚴(yán)重?fù)p傷的受試者；器官或組織移植受體。由于與HIV接觸不會必然導(dǎo)致有癥狀的感染，如通過血清轉(zhuǎn)變測定的，所有人都有潛在的危險，因此，應(yīng)當(dāng)考慮使用本發(fā)明的方法預(yù)防性治療。
可將根據(jù)本發(fā)明方法使用的包括亞序列、修飾型和變體的抗體及其組合整合入藥物組合物或制劑。這樣的藥物組合物用于體內(nèi)或來自體內(nèi)(ex vivo)施用于受試者，以及提供這里所述的可治療的生理紊亂或狀況的治療。
可以根據(jù)已知技術(shù)通過將抗體與常規(guī)藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑結(jié)合所制備的常規(guī)劑量形式施用抗體。通過與其結(jié)合的活性成分的量、施用途徑和其它公知變量決定藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的形式和特性。
藥學(xué)組合物包括“藥學(xué)可接受的”和“生理可接受的”載體、稀釋劑或賦形劑。如這里使用的，術(shù)語“藥學(xué)可接受的”和“生理可接受的”包括溶劑(含水的或非含水的)、去污劑、溶液、乳劑、分散介質(zhì)、包衣、等滲和吸收促進(jìn)或延遲劑、與藥物施用相容和與制劑的其它組分化學(xué)相容，如結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。因此，在除了在任何常規(guī)介質(zhì)或試劑破壞活性化合物活性的范圍內(nèi)，可包括在組合物中使用任何這樣的物質(zhì)。
這樣的制劑可包含在片劑(包衣的或無包衣的)、膠囊(硬的或軟的)、微珠、乳劑、粉末、顆粒、晶體、懸浮液、糖漿或酏劑中。也可以將補充的活性化合物(例如，防腐劑、抗菌劑、抗病毒劑和抗真菌劑)整合到組合物中。
可配制藥物組合物以與具體的施用途徑相容。因此，藥物組合物包括載體、稀釋劑、或適合通過各種途徑施用的賦形劑。
腸胃外、皮內(nèi)、或者皮下施用的藥物組合物可包括無菌稀釋劑，如水、鹽溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑。這些制劑可含有一種或多種防止微生物生長的防腐劑；抗菌劑如苯甲醇或羥苯甲酸甲酯(methyl parabens)；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽以及用于調(diào)節(jié)張力的試劑如氯化鈉或葡萄糖，這些僅僅是少數(shù)具體的實例。
用于注射的藥物組合物包括無菌水溶液(水可溶時)或分散體以及用于臨時制備無菌可注射溶液或分散體的無菌粉末。對于靜脈內(nèi)施用，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸鹽緩沖液(PBS)。載體可以是含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、和液體聚乙二醇，等)的溶劑或分散介質(zhì)，以及其適當(dāng)?shù)幕旌衔?。例如，可通過使用包衣如卵磷脂，或通過使用表面活性劑維持流動性。抗菌劑和抗真菌劑包括，例如，對羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、酚、抗壞血酸和硫柳汞。在許多實例中，組合物中包括等滲劑，例如，糖、多元醇如甘露醇、山梨糖醇、氯化鈉。包括延遲吸收的試劑，例如，單硬脂酸鋁和明膠可延長可注射組合物的吸收。
可通過將所需量的活性化合物在適當(dāng)?shù)娜軇┲信c上述成分中的一種或組合整合，隨后通過過濾滅菌制備無菌可注射溶液。通常，通過將活性化合物整合到含有堿性分散介質(zhì)和上述那些其它成分的無菌載體中制備分散體。
對于跨粘膜或經(jīng)皮施用，在制劑中使用適合滲透過屏障的滲透劑。這種滲透劑通常在本領(lǐng)域中是已知的，例如，對于跨粘膜施用，包括去污劑、膽鹽、以及梭鏈孢酸衍生物；對于經(jīng)皮施用，將活性化合物制成通常本領(lǐng)域中已知的軟膏、油膏、凝膠、或乳膏。
可使用可生物降解的、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate)、聚酐、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、膠原、聚原酸酯、以及聚乳酸。制備這樣制劑的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的。材料也可從Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc買到。也可以使用脂質(zhì)體懸浮液(包括使用抗體或病毒外殼蛋白的靶向細(xì)胞或組織的脂質(zhì)體，)作為藥學(xué)可接受的載體。這些可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如，根據(jù)美國專利No.4,522,810中描述的方法。
例如，抗體可通過共價偶聯(lián)到聚合物上進(jìn)行化學(xué)修飾以提高它們的循環(huán)半衰期。在美國專利Nos.4,766,106；4,179,337；4,495,285；和4,609,546中描述了具體的聚合物，以及將它們附著到肽上的方法。聚合物的實例是聚氧乙基化多元醇和聚乙二醇(PEG)。
另外的藥學(xué)制劑和遞送系統(tǒng)在本領(lǐng)域中是已知的，可在本發(fā)明的方法和組合物中應(yīng)用(見，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)第18版，Mack Publishing Co.，Easton，PA；The Merck Index(1996)第12版，Merck Publishing Group，Whitehouse，NJ；PharmaceuticalPrinciples of Solid Dosage Forms，Technonic Publishing Co.，Inc.，Lancaster，Pa.，(1993)；和Poznansky等，Drug Delivery Systems，R.L.Juliano，編，Oxford，N.Y.(1980)，pp.253-315)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供包含本發(fā)明的一種或多種抗體組合物的試劑盒，包括藥學(xué)制劑，包裝入適當(dāng)?shù)陌b材料中。在一個實施方案中，試劑盒包括結(jié)合LFA-1α亞基的抗體和的實施本發(fā)明方法的使用說明。在另一個實施方案中，試劑盒包括標(biāo)簽或者包括體內(nèi)或來自體內(nèi)治療受試者的使用說明的包裝用插頁。在另一個實施方案中，試劑盒包括標(biāo)簽或者包括用LFA-1α亞基結(jié)合抗體治療患或有患HIV風(fēng)險受試者的使用說明的包裝用插頁。
如這里使用的，術(shù)語“包裝材料”指安放試劑盒成分的物理結(jié)構(gòu)。包裝材料可保持成分無菌，可由通常用于這種目的的材料制成(例如，紙、皺褶的纖維、玻璃、塑料、箔、安瓿，等)。標(biāo)簽或包裝用插頁可包括適當(dāng)?shù)臅媸褂谜f明，例如，實施本發(fā)明的方法，例如，治療HIV。本發(fā)明的試劑盒因此可另外包括使用本發(fā)明方法中試劑盒成分的使用說明。
使用說明可包括實施本發(fā)明任何一種方法的使用說明。因此，本發(fā)明的藥物組合物可與向受試者施用的使用說明一起包括在容器、包裝或者分配器中。使用說明可另外包括令人滿意的臨床終點或任何可能發(fā)生的不利副作用的指征，或者食品和藥品管理局(Food and DrugAdministration)要求的在人受試者上使用的另外信息。
使用說明可在“印刷品”上，例如，在試劑盒內(nèi)的紙或卡片紙板上，在粘貼到試劑盒或包裝材料，或者附著到含有試劑盒成分的小瓶或管的標(biāo)簽上。使用說明可包括語音錄音或視頻磁帶以及另外可包含在計算機(jī)可讀介質(zhì)上，如磁盤(軟盤或硬盤)、光學(xué)CD如CD-或DVD-ROM/RAM、磁帶、電存儲介質(zhì)如RAM和ROM以及這些的混合物如磁性/光學(xué)存儲介質(zhì)。
發(fā)明的試劑盒可另外包括緩沖劑、防腐劑、或者蛋白/核酸穩(wěn)定劑。試劑盒也可包括用于分析活性的對照成分，例如，對照樣品或標(biāo)準(zhǔn)?？蓪⒃噭┖械拿糠N成分封閉在單個容器內(nèi)，或者以混合物的形式封閉，所有各種容器可在單個或多個包裝內(nèi)。
可將抗體、聯(lián)合組合物及其藥物制劑包裝成便于施用和劑量均勻的劑量單位型。在根據(jù)本發(fā)明方法施用的本發(fā)明的試劑盒內(nèi)，這種劑量可被包含在單劑量或多倍劑量中。這里使用的“劑量單位形式”指適合作為受治受試者單位劑量的物理不連續(xù)的單位；每個單位含有經(jīng)過計算與藥學(xué)載體或賦形劑聯(lián)合產(chǎn)生期望療效的預(yù)定量的活性化合物。本發(fā)明提供的劑量型包括，例如，50-75mg、75-100mg、100-125mg、125-150mg、150-175mg、175-200mg或更多結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。因此，本發(fā)明的試劑盒可包括，例如，100mg單劑量或者100mg倍數(shù)的劑量。
除非有其它定義，這里使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解的相同含義。盡管在本發(fā)明的實施或試驗中可使用與這里所描述的那些類似或等同的方法和材料，但是這里描述了合適的方法和材料。
結(jié)合所有的出版物、專利和其它參考文獻(xiàn)，GenBank引文和ATCC引文的全部內(nèi)容引入作為參考。存在矛盾時以說明書，包括定義為準(zhǔn)。
如這里使用的，單數(shù)形式的“a”，“an”，和“the”包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文清楚地顯示其它含義。因此，例如，提及“LFA-1α亞基抗體”包括許多這樣的抗體，而提及“活性”或“功能”可能包括指一個或多個活性或功能，等等。
已經(jīng)描述了本發(fā)明的許多實施方案。然而，應(yīng)當(dāng)理解的是在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，可進(jìn)行各種修飾。因此，下列實施例打算用于舉例說明但不打算限定權(quán)利要求中所描述的本發(fā)明的范圍。
實施例實施例1這個實施例描述研究結(jié)合LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域的示例性單克隆抗體S6F1效果的人臨床試驗設(shè)計。
通過雜交瘤技術(shù)，使用從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(Manassas，VA)獲得的產(chǎn)生S6F1的細(xì)胞系HB-9576生產(chǎn)純化的完整小鼠單克隆IgG1S6F1抗體。將抗體在5mM磷酸鈉、1.7mM磷酸鉀、154mM氯化鈉、5％麥芽糖、pH7.4中配制成1.0mg/mL的濃度?？贵w是通過雜交瘤細(xì)胞系的發(fā)酵和擴(kuò)增產(chǎn)生足夠用于收獲的產(chǎn)物(未加工的大塊)生產(chǎn)的。使用一系列設(shè)計用于提供無污染材料的高純度抗體的純化和濃縮步驟加工和純化收獲的抗體，其無病毒或其它外來試劑。然后將大塊物質(zhì)滲濾入磷酸鹽緩沖液并進(jìn)行無菌過濾(純化的大塊)。接著將純化的大塊進(jìn)行過濾并在無菌條件下填充。根據(jù)重量使用1mg/mL的密度填充產(chǎn)物，在2-8℃貯藏。
設(shè)計用于評價通過靜脈內(nèi)注入施用的4個逐步增加的抗體劑量(0.05、0.1、0.2、和0.4mg/kg體重)的I期單中心、公開標(biāo)注、單劑量研究，以測定在HIV感染的成年人體內(nèi)的安全性、可耐受性、藥物代謝動力學(xué)、藥物動力學(xué)、以及活性。順序登記血漿HIV RNA濃度＞20,000拷貝/mL、CD4+T細(xì)胞計數(shù)200-500細(xì)胞/mm3的符合條件的受試者。在第0天通過緩慢IV(靜脈內(nèi))注入(0.5mg蛋白/分鐘)，單獨或者聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)抗HIV療法施用抗體。施用S6F1抗體后，在預(yù)定時間評價血液學(xué)、生物化學(xué)、以及臨床不利事件。初步功效評定由HIV RNA濃度，以及CD4+和CD8+T細(xì)胞計數(shù)相對基線的改變。用概要描述統(tǒng)計學(xué)分析參數(shù)。
設(shè)計Ib/II期，單中心、門診病人、公開標(biāo)注、劑量逐漸增加的研究，在12個HIV-1感染的受試者(4個受試者/劑量組)中評價S6F1抗體的3個劑量(0.3、1.0、和2.0mg/kg)。該研究有兩部分在第1天通過緩慢IV注入(1.0mg蛋白/分鐘)評價單獨注入安全性的第1部分；以及評價對相同的受試者在第8、15和22天每周一次重復(fù)注入3次的第2部分，這樣第2部分中的受試者接受總共4次每周一次的劑量。符合條件的受試者具有病毒負(fù)荷≥10,000拷貝/mL、CD4+T細(xì)胞計數(shù)為200-500細(xì)胞/mm3、以及Karnofsky等級至少70。受試者或者是首次接受治療，或者是臨床上穩(wěn)定在固定的抗病毒治療方案至少8周，并同意在研究期間保持在固定的治療方案。研究期間在預(yù)定的時間評估S6F1抗體對病毒負(fù)荷、CD4+T細(xì)胞計數(shù)、CD8+T細(xì)胞計數(shù)、藥物代謝動力學(xué)參數(shù)以及免疫原性影響的初步分析。參數(shù)用概要描述統(tǒng)計學(xué)分析。
實施例2這個實施例描述使用結(jié)合LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域的示例性單克隆抗體S6F1治療HIV的人臨床試驗結(jié)果。
在I期臨床試驗中通過靜脈內(nèi)注入施用4個逐漸增加的S6F1抗體劑量(0.05、0.1、0.2、和0.4mg/kg體重)測定在HIV-1感染的成年人體內(nèi)的安全性、可耐受性、藥物代謝動力學(xué)、藥物動力學(xué)以及活性。將用S6F1抗體治療的13名男性(血漿HIV RNA濃度＞20,000拷貝/mL、CD4+T細(xì)胞計數(shù)200-500細(xì)胞/mm3)順序登記為2個劑量組0.05mg/kg(n＝6)和0.1mg/kg(n＝7)。為了評論藥物代謝動力學(xué)和藥效學(xué)的實驗室試驗以及來自最初兩群人的數(shù)據(jù)，13名受試者完成治療后，中止研究登記。這些試驗的靈敏度不足以檢測在這些低劑量時所研究受試者血流中的S6F1抗體，必須重新設(shè)計試驗。
分析對完成0.05mg/kg和0.1mg/kg劑量的13名受試者的血液學(xué)、生物化學(xué)、以及不利方面的影響。評估包括從基線的改變。在表1中顯示HIV-1 RNA，、CD4+，和CD8+T細(xì)胞數(shù)量的平均基線值。
表1平均基線值

在0.05mg/kg劑量組中，在第56天HIV-1 RNA濃度是超出基線0.363log。在第56天平均CD4+T細(xì)胞計數(shù)是低于基線15細(xì)胞/mm3。在第56天平均CD8+T細(xì)胞計數(shù)發(fā)生波動，低于基線153.6細(xì)胞/mm3。
在0.1mg/kg劑量組中，在第56天HIV-1 RNA濃度是低于基線0.229log。在第56天平均CD4+T細(xì)胞計數(shù)是高于基線70.1細(xì)胞/mm3。平均CD8+T細(xì)胞計數(shù)發(fā)生波動，但從第28天開始增加直到研究結(jié)束時是高于基線107.4細(xì)胞/mm3。
由于受試者的數(shù)量相對小以及所評估的劑量低，沒有作出關(guān)于每一種劑量對功效參數(shù)影響的結(jié)論。然而，接受0.1mg/kg劑量的受試者的確在整個56天研究中的幾個時間點上HIV-1 RNA低于基線，CD4+T細(xì)胞數(shù)量增加，提示S6F1抗體可能減少CD4+T細(xì)胞的裂解因而減少HIV-1病毒負(fù)荷。
不利影響的總數(shù)是小的。13名受試者報道了31個不利事件。最普遍的不利事件是疹，其在5名受試者中發(fā)生(39％)。所有不利事件被認(rèn)為是輕度的(97％)到中等的(3％)。調(diào)查者認(rèn)為不利事件與研究藥物無關(guān)。
設(shè)計Ib/11期、單中心、門診病人、公開標(biāo)注、劑量逐漸增加的研究，根據(jù)實施例1中描述的方法在HIV-1感染的受試者中評價S6F1抗體的3個劑量，0.3、1.0、和2.0mg/kg。登記總共13名受試者。兩個受試者接受2.0mg/kg的單劑量注入，11名受試者接受4次每周一次注入(0.3mg/kg[n＝4]，1.0mg/kg[n＝4]，和2.0mg/kg[n＝3])。下面顯示S6F1抗體對病毒負(fù)荷、CD4+T細(xì)胞數(shù)量、CD8+T細(xì)胞數(shù)量、藥物代謝動力學(xué)參數(shù)以及免疫原性影響的分析。在表2中總結(jié)了研究受試者的全部數(shù)據(jù)。
表2lb/II期研究數(shù)據(jù)

平均VL減少 (0.04) 19,852


平均VL減少 (0.07)(6,742)

平均VL減少 (0.69) (15,696)2mg劑量水平組中3名受試者同意從他們最后一次注入起121到145天進(jìn)行另外的測試以測定病毒負(fù)荷。這些結(jié)果顯示在表3中。
表3長期病毒負(fù)荷值

平均VL減少(0.92) (82,836)數(shù)據(jù)的分析顯示S6F 1抗體是安全的并且是良好耐受的?？偟恼f來，報道了100個治療中緊急的不利事件(0.3mg/kg15，1.0mg/kg19，2.0mg/kg的倍數(shù)61，單獨2.0mg/kg5)。絕大多數(shù)治療中緊急的不利事件被認(rèn)為是輕度的(65％)或中等的(33％)。調(diào)查者認(rèn)為治療中緊急的不利事件中的72％與所研究的藥物有關(guān)(20％可能有關(guān)，51％很可能有關(guān)，1％明確有關(guān))。治療中緊急的不利事件沒有被認(rèn)為是嚴(yán)重的。沒有受試者因為不利事件而退出，在研究期間沒有受試者死亡。
在基線和在第8、29和50天測量HIV-1 RNA病毒負(fù)荷。隨S6F1抗體劑量的增加而發(fā)生相相相對基線的變化(log)證明劑量反應(yīng)(圖1)。
在最低劑量(0.3mg/kg)，S6F 1抗體對減少或維持HIV-1 RNA病毒負(fù)荷沒有影響。實際上，HIV-1 RNA病毒負(fù)荷在單次注入后1周(第8天)和另外3次注入后1周(第29天)增加。在1.0mg/kg劑量組，平均HIV-1 RNA病毒負(fù)荷在單次注入后1周(第8天)減少0.24log，在完成另外3次注入后1周(第29天)輕微增加。
總共5名受試者接受了2.0mg/kg S6F1抗體；2名受試者在第一天接受單次注入，3名受試者接受4次每周一次的注入。在第8天，單次注入后1周，與接受4次每周一次注入的3名受試者中HIV-1 RNA病毒負(fù)荷平均減少0.8log相比，在接受單次2.0mg/kg S6F1抗體注入的2名受試者中，HIV-1 RNA病毒負(fù)荷的平均減少是0.2log。當(dāng)考慮所有接受2.0mg/kg S6F1抗體的受試者時，在第8天HIV-1 RNA病毒負(fù)荷的平均減少是0.57log。在2.0mg/kg單次注入的受試者中，在第29天，單次注入后4周，HIV-1 RNA病毒負(fù)荷進(jìn)一步減少。在接受4次每周一次注入的2.0mg/kg受試者中，在第29天HIV-1 RNA病毒負(fù)荷減少到低于基線大約1.0log，并在最后一次注入后維持在這種低水平35天。第8天和第29天之間2.0mg/kg單劑量和多倍劑量組的HIV-1 RNA病毒負(fù)荷減少的百分率是相似的(對于單劑量和多倍劑量組分別是0.29和0.25)，這提示S6F1抗體的額外劑量似乎不能增加比率(比率這里定義為HIV-1 RNA病毒負(fù)荷隨時間過去而減少)。然而，數(shù)據(jù)顯示S6F1抗體治療停止后，S6F1抗體的額外劑量能維持病毒負(fù)荷的減少。
在基線和在第8、29和50天測量CD8+T細(xì)胞數(shù)量。圖2顯示S6F1抗體的每個劑量組以及所有受試者群體從基線的變化。
在CD8+T細(xì)胞數(shù)量上沒有觀察到劑量關(guān)系。在研究的整個過程中，所有組中CD8+T細(xì)胞數(shù)量都發(fā)生波動。單次注入后1周(第8天)，CD8+T細(xì)胞計數(shù)在0.3mg/kg劑量組中最高，在1.0mg/kg劑量組中最低。在研究的終點(第50天)，CD8+T細(xì)胞計數(shù)在2.0mg/kg倍數(shù)的注入組中最高(大約高于基線600細(xì)胞/mm3)，在1.0mg/kg劑量組中最低(大約低于基線300細(xì)胞/mm3)。在0.3mg/kg劑量組和單獨2.0mg/kg注入組中，CD8+T細(xì)胞計數(shù)在第50天大約高于基線100細(xì)胞/mm3。
如在圖3中所示，在整個43天的不同時間點上測量多倍劑量S6F1抗體的結(jié)合百分率。單次注入后，在所有劑量組中結(jié)合百分率是大約100％。第一次注入后，除了最低劑量0.3mg/kg之外，所有劑量組的結(jié)合程度是恒定的，其中在第6天結(jié)合開始下降。在所有多倍劑量組中，結(jié)合的百分率和持續(xù)時間隨著重復(fù)注入而減少。在2.0mg/kg單劑量組中，結(jié)合百分率大約是100％，持續(xù)15天，其后在研究的剩余時間減少到接近0％。在所有測量時間點上，所有劑量組的飽和百分率發(fā)生波動并且易變。
在基線和在第8、29和50天測量人抗小鼠抗體(HAMA)。沒有觀察到HAMA的劑量反應(yīng)對影響。在所有劑量組中，包括2.0mg/kg單劑量組，29天以前HAMA增加，在這一點上除了在2.0mg/kg多倍劑量組中HAMA繼續(xù)升高外，所有治療組中HAMA的平均水平開始下降。在2.0mg/kg多倍劑量組中觀察到相相相對基線HAMA的最大增加。HAMA的程度和時機(jī)與在2.0mg/kg和1.0mg/kg S6F1抗體劑量組中見到的結(jié)合下降一致。
I期和Ib/II期人臨床試驗的數(shù)據(jù)顯示S6F1抗體以劑量逐漸增加的方式減少HIV RNA病毒負(fù)荷，注入2.0mg/kg S6F1抗體后，病毒負(fù)荷最顯著減少。多次施用2.0mg/kg，病毒負(fù)荷增加的降低最顯著。然而，減少的程度與單次注入2.0mg/kg見到的相似，提示每周一次施用多次注入2.0mg/kg可能不會增加進(jìn)一步減少HIV RNA病毒負(fù)荷的比率，但是相反，與較低的S6F1抗體劑量相比，反而會維持病毒負(fù)荷的減少。
數(shù)據(jù)也顯示在用2.0mg/kg時觀察到的病毒負(fù)荷減少得到了CD4+T細(xì)胞計數(shù)增加的補充。這些數(shù)據(jù)因此證明2.0mg/kg S6F1抗體對病毒負(fù)荷和CD4+T細(xì)胞計數(shù)的影響。
四次注入2.0mg/kg后(第29天測量)，較基線HAMA的增加最大而結(jié)合百分率最低。這與1.0mg/kg S6F1抗體形成對照，其中，四次注入后(第29天)其較基線HAMA的增加最小，結(jié)合百分率最高。假定研究的持續(xù)時間相對短，由于HAMA和S6F1抗體的結(jié)合百分率與對HIVRNA病毒負(fù)荷和CD4+T細(xì)胞計數(shù)的影響不相關(guān)，所以很難評價HAMA對臨床功效的作用(如果有該作用的話)。
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325 330 335Thr Ser Lys Gln Asp Leu Thr Ser Phe Asn Met Glu Leu Ser Ser Ser340 345 350Gly Ile Ser Ala Asp Leu Ser Arg Gly His Ala Val Val Gly Ala Val355 360 365Gly Ala Lys Asp Trp Ala Gly Gly Phe Leu Asp Leu Lys Ala Asp Leu370 375 380Gln Asp Asp Thr Phe Ile Gly Asn Glu Pro Leu Thr Pro Glu Val Arg385 390 395 400Ala Gly Tyr Leu Gly Tyr Thr Val Thr Trp Leu Pro Ser Arg Gln Lys405 410 415Thr Ser Leu Leu Ala Ser Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Met Gly Arg420 425 430Val Leu Leu Phe Gln Glu Pro Gln Gly Gly Gly His Trp Ser Gln Val435 440 445Gln Thr Ile His Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Gly Glu Leu450 455 460Cys Gly Val Asp Val Asp Gln Asp Gly Glu Thr Glu Leu Leu Leu Ile465 470 475 480Gly Ala Pro Leu Phe Tyr Gly Glu Gln Arg Gly Gly Arg Val Phe Ile485 490 495Tyr Gln Arg Arg Gln Leu Gly Phe Glu Glu Val Ser Glu Leu Gln Gly500 505 510Asp Pro Gly Tyr Pro Leu Gly Arg Phe Gly Glu Ala Ile Thr Ala Leu515 520 525Thr Asp Ile Asn Gly Asp Gly Leu Val Asp Val Ala Val Gly Ala Pro530 535 540Leu Glu Glu Gln Gly Ala Val Tyr Ile Phe Asn Gly Arg His Gly Gly545 550 555 560
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Leu Ser Val Glu Leu Ser Leu Ser Asn Leu Glu Glu Asp Ala Tyr Trp805 810 815Val Gln Leu Asp Leu His Phe Pro Pro Gly Leu Ser Phe Arg Lys Val820 825 830Glu Met Leu Lys Pro His Ser Gln Ile Pro Val Ser Cys Glu Glu Leu835 840 845Pro Glu Glu Ser Arg Leu Leu Ser Arg Ala Leu Ser Cys Asn Val Ser850 855 860Ser Pro Ile Phe Lys Ala Gly His Ser Val Ala Leu Gln Met Met Phe865 870 875 880Asn Thr Leu Val Asn Ser Ser Trp Gly Asp Ser Val Glu Leu His Ala885 890 895Asn Val Thr Cys Asn Asn Glu Asp Ser Asp Leu Leu Glu Asp Asn Ser900 905 910Ala Thr Thr Ile Ile Pro Ile Leu Tyr Pro Ile Asn Ile Leu Ile Gln915 920 925Asp Gln Glu Asp Ser Thr Leu Tyr Val Ser Phe Thr Pro Lys Gly Pro930 935 940Lys Ile His Gln Val Lys His Met Tyr Gln Val Arg Ile Gln Pro Ser945 950 955960Ile His Asp His Asn Ile Pro Thr Leu Glu Ala Val Val Gly Val Pro965 970 975Gln Pro Pro Ser Glu Gly Pro Ile Thr His Gln Trp Ser Val Gln Met980 985 990Glu Pro Pro Val Pro Cys His Tyr Glu Asp Leu Glu Arg Leu Pro Asp995 10001005Ala Ala Glu Pro Cys Leu Pro Gly Ala Leu Phe Arg Cys Pro Val Val101010151020Phe Arg Gln Glu Ile Leu Val Gln Val Ile Gly Thr Leu Glu Leu Val
1025103010351040Gly Glu Ile Glu Ala Ser Ser Met Phe Ser Leu Cys Ser Ser Leu Ser104510501055Ile Ser Phe Asn Ser Ser Lys His Phe His Leu Tyr Gly Ser Asn Ala106010651070Ser Leu Ala Gln Val Val Met Lys Val Asp Val Val Tyr Glu Lys Gln107510801085Met Leu Tyr Leu Tyr Val Leu Ser Gly Ile Gly Gly Leu Leu Leu Leu109010951100Leu Leu Ile Phe Ile Val Leu Tyr Lys Val Gly Phe Phe Lys Arg Asn1105111011151120Leu Lys Glu Lys Met Glu Ala Gly Arg Gly Val Pro Asn Gly Ile Pro112511301135Ala Glu Asp Ser Glu Gln Leu Ala Ser Gly Gln Glu Ala Gly Asp Pro114011451150Gly Cys Leu Lys Pro Leu His Glu Lys Asp Ser Glu Ser Gly Gly Gly115511601165Lys Asp1170<210>2<211>589<212>PRT<213>人<400>2Tyr Asn Leu Asp Val Arg Gly Ala Arg Ser Phe Ser Pro Pro Arg Ala1 5 10 15Gly Arg His Phe Gly Tyr Arg Val Leu Gln Val Gly Asn Gly Val Ile20 25 30Val Gly Ala Pro Gly Glu Gly Asn Ser Thr Gly Ser Leu Tyr Gln Cys
35 40 45Gln Ser Gly Thr Gly His Cys Leu Pro Val Thr Leu Arg Gly Ser Asn50 55 60Tyr Thr Ser Lys Tyr Leu Gly Met Thr Leu Ala Thr Asp Pro Thr Asp65 70 75 80Gly Ser Ile Leu Ala Cys Asp Pro Gly Leu Ser Arg Thr Cys Asp Gln85 90 95Asn Thr Tyr Leu Ser Gly Leu Cys Tyr Leu Phe Arg Gln Asn Leu Gln100 105 110Gly Pro Met Leu Gln Gly Arg Pro Gly Phe Gln Glu Cys Ile Lys Gly115 120 125Asn Val Asp Leu Val Phe Leu Phe Asp Gly Ser Met Ser Leu Gln Pro130 135 140Asp Glu Phe Gln Lys Ile Leu Asp Phe Met Lys Asp Val Met Lys Lys145 150 155 160Leu Ser Asn Thr Ser Tyr Gln Phe Ala Ala Val Gln Phe Ser Thr Ser165 170 175Tyr Lys Thr Glu Phe Asp Phe Ser Asp Tyr Val Lys Trp Lys Asp Pro180 185 190Asp Ala Leu Leu Lys His Val Lys His Met Leu Leu Leu Thr Asn Thr195 200 205Phe Gly Ala Ile Asn Tyr Val Ala Thr Glu Val Phe Arg Glu Glu Leu210 215 220Gly Ala Arg Pro Asp Ala Thr Lys Val Leu Ile Ile Ile Thr Asp Gly225 230 235 240Glu Ala Thr Asp Ser Gly Asn Ile Asp Ala Ala Lys Asp Ile Ile Arg245 250 255Tyr Ile Ile Gly Ile Gly Lys His Phe Gln Thr Lys Glu Ser Gln Glu260 265 270
Thr Leu His Lys Phe Ala Ser Lys Pro Ala Ser Glu Phe Val Lys Ile275 280 285Leu Asp Thr Phe Glu Lys Leu Lys Asp Leu Phe Thr Glu Leu Gln Lys290 295 300Lys Ile Tyr Val Ile Glu Gly Thr Ser Lys Gln Asp Leu Thr Ser Phe305 310 315 320Asn Met Glu Leu Ser Ser Ser Gly Ile Ser Ala Asp Leu Ser Arg Gly325 330 335His Ala Val Val Gly Ala Val Gly Ala Lys Asp Trp Ala Gly Gly Phe340 345 350Leu Asp Leu Lys Ala Asp Leu Gln Asp Asp Thr Phe Ile Gly Asn Glu355 360 365Pro Leu Thr Pro Glu Val Arg Ala Gly Tyr Leu Gly Tyr Thr Val Thr370 375 380Trp Leu Pro Ser Arg Gln Lys Thr Ser Leu Leu Ala Ser Gly Ala Pro385 390 395 400Arg Tyr Gln His Met Gly Arg Val Leu Leu Phe Gln Glu Pro Gln Gly405 410 415Gly Gly His Trp Ser Gln Val Gln Thr Ile His Gly Thr Gln Ile Gly420 425 430Ser Tyr Phe Gly Gly Glu Leu Cys Gly Val Asp Val Asp Gln Asp Gly435 440 445Glu Thr Glu Leu Leu Leu Ile Gly Ala Pro Leu Phe Tyr Gly Glu Gln450 455 460Arg Gly Gly Arg Val Phe Ile Tyr Gln Arg Arg Gln Leu Gly Phe Glu465 470 475 480Glu Val Ser Glu Leu Gln Gly Asp Pro Gly Tyr Pro Leu Gly Arg Phe485 490 495Gly Glu Ala Ile Thr Ala Leu Thr Asp Ile Asn Gly Asp Gly Leu Val500 505 510
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1.治療患有或有患與CD4+T細(xì)胞數(shù)量減少相關(guān)的或由其所致生理狀況風(fēng)險的受試者的方法，包括向受試者施用高于1mg/kg體重的結(jié)合LFA-1α亞基(CD11a)的抗體。
2.權(quán)利要求1的方法，其中施用的抗體量包括高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述的抗體抑制S6F1或TS2/4抗體與LFA-1α亞基的結(jié)合。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體結(jié)合S6F1或TS2/4抗體所結(jié)合的表位。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述表位包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域。
6.權(quán)利要求4的方法，其中所述的抗體是S6F1或TS2/4的人源化形式。
7.權(quán)利要求4的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或者一部分。
8.權(quán)利要求4的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者一部分。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述抗體包括S6F1。
11.權(quán)利要求9的方法，其中所述抗體包括TS2/4。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述的抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列。
13.權(quán)利要求12的方法，其中亞序列包括Fab、Fab′、(Fab)2、Fv或scFv。
14.權(quán)利要求1的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基的抗體是人源化形式。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述的人源化形式具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述的抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體。
18.權(quán)利要求1方法，其中所述的抗體是全身施用。
19.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括施用一個或多個額外劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。
20.權(quán)利要求19的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是低于1mg/kg體重的量。
21.權(quán)利要求19的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是高于1mg/kg體重的量。
22.一種增加受試者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞數(shù)量的方法，包括施用于受試者高于1mg/kg體重量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD11a)的抗體。
23.權(quán)利要求22的方法，其中施用抗體的量包括高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多。
24.權(quán)利要求22的方法，其中所述的抗體抑制S6F1或TS2/4抗體與LFA-1α亞基的結(jié)合。
25.權(quán)利要求22的方法，其中所述抗體結(jié)合S6F1或TS2/4抗體所結(jié)合的表位。
26.權(quán)利要求22的方法，其中所述表位包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域。
27.權(quán)利要求28的方法，其中所述的抗體是S6F1或TS2/4的人源化形式。
28.權(quán)利要求22的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或者一部分。
29.權(quán)利要求22的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者一部分。
30.權(quán)利要求22的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述抗體包括S6F1。
32.權(quán)利要求30的方法，其中所述抗體包括TS2/4。
33.權(quán)利要求22的方法，其中所述的抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述的亞序列包括Fab、Fab′、(Fab)2、Fv或scFv。
35.權(quán)利要求22的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基的抗體包括S6F1或TS2/4的人源化形式。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述的人源化形式具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
37.權(quán)利要求22的方法，其中所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
38.權(quán)利要求22的方法，其中所述的抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體。
39.權(quán)利要求22的方法，其中所述的抗體是全身施用。
40.權(quán)利要求22的方法，進(jìn)一步包括施用一個或多個額外劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。
41.權(quán)利要求40的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是低于1mg/kg體重的量。
42.權(quán)利要求40的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是高于1mg/kg體重的量。
43.一種抑制或預(yù)防受試者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞數(shù)量減少的方法，包括施用于受試者高于1mg/kg體重量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD11a)的抗體。
44.權(quán)利要求43的方法，其中施用抗體的量包括高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多。
45.權(quán)利要求43的方法，其中所述的抗體抑制S6F1或TS2/4抗體與LFA-1α亞基的結(jié)合。
46.權(quán)利要求43的方法，其中所述抗體結(jié)合S6F1或TS2/4抗體所結(jié)合的表位。
47.權(quán)利要求46的方法，其中所述表位包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域。
48.權(quán)利要求46的方法，其中所述的抗體是S6F1或TS2/4的人源化形式。
49.權(quán)利要求46的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或者一部分。
50.權(quán)利要求46的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者一部分。
51.權(quán)利要求43的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
52.權(quán)利要求51的方法，其中所述抗體包括S6F1。
53.權(quán)利要求51的方法，其中所述抗體包括TS2/4。
54.權(quán)利要求43的方法，其中所述的抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所述的亞序列包括Fab、Fab′、(Fab)2、Fv或scFv。
56.權(quán)利要求43的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基的抗體包括S6F1或TS2/4的人源化形式。
57.權(quán)利要求56的方法，其中所述的人源化形式具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
58.權(quán)利要求43的方法，其中所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
59.權(quán)利要求43的方法，其中所述的抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體。
60.權(quán)利要求43的方法，其中所述的抗體是全身施用。
61.權(quán)利要求43的方法，進(jìn)一步包括施用一個或多個額外劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。
62.權(quán)利要求61的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是低于1mg/kg體重的量。
63.權(quán)利要求61的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是高于1mg/kg體重的量。
64.一種治療患有或有患可用結(jié)合LFA-1α亞基(CD11a)的抗體治療的生理狀況風(fēng)險受試者的方法，包括施用于受試者高于1mg/kg體重量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD11a)的抗體。
65.權(quán)利要求64的方法，其中施用抗體的量包括高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多。
66.權(quán)利要求64的方法，其中所述的抗體抑制S6F1或TS2/4抗體與LFA-1α亞基的結(jié)合。
67.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗體結(jié)合S6F1或TS2/4抗體所結(jié)合的表位。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述表位包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域。
69.權(quán)利要求67的方法，其中所述的抗體是S6F1或TS2/4的人源化形式。
70.權(quán)利要求67的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或者一部分。
71.權(quán)利要求67的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者一部分。
72.權(quán)利要求64的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
73.權(quán)利要求72的方法，其中所述抗體包括S6F1。
74.權(quán)利要求72的方法，其中所述抗體包括TS2/4。
75.權(quán)利要求64的方法，其中所述的抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列。
76.權(quán)利要求75的方法，其中所述的亞序列包括Fab、Fab′、(Fab)2、Fv或scFv。
77.權(quán)利要求64的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基的抗體包括S6F1或TS2/4的人源化形式。
78.權(quán)利要求77的方法，其中所述的人源化形式具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
79.權(quán)利要求64的方法，其中所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
80.權(quán)利要求64的方法，其中所述的抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體。
81.權(quán)利要求64的方法，其中所述的抗體是全身施用。
82.權(quán)利要求64的方法，進(jìn)一步包括施用一個或多個額外劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。
83.權(quán)利要求82的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是低于1mg/kg體重的量。
84.權(quán)利要求82的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是高于1mg/kg體重的量。
85.一種治療接觸HIV或有接觸HIV風(fēng)險受試者的方法，包括施用于受試者高于1mg/kg體重量的結(jié)合LFA-1α亞基(CD11a)的抗體。
86.權(quán)利要求85的方法，其中施用抗體的量包括高于1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多。
87.權(quán)利要求85的方法，其中受試者對HIV感染無癥狀或者有癥狀。
88.權(quán)利要求85的方法，其中受試者以前沒有接觸HIV。
89.權(quán)利要求85的方法，其中所述的抗體抑制S6F1或TS2/4抗體與LFA-1α亞基的結(jié)合。
90.權(quán)利要求85的方法，其中所述抗體結(jié)合S6F1或TS2/4抗體所結(jié)合的表位。
91.權(quán)利要求90的方法，其中所述表位包括LFA-1α亞基β螺旋槳式結(jié)構(gòu)域。
92.權(quán)利要求90的方法，其中所述的抗體是S6F1或TS2/4的人源化形式。
93.權(quán)利要求90的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到57位氨基酸的全部或者一部分。
94.權(quán)利要求90的方法，其中所述的表位位于表示為SEQ ID NO2的LFA-1α亞基的1到5、5到10、10到15、15到20、20到25、25到30、35到40、40到45、45到50、50到55或50到57位氨基酸的全部或者一部分。
95.權(quán)利要求85的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
96.權(quán)利要求95的方法，其中所述抗體包括S6F1。
97.權(quán)利要求95的方法，其中所述抗體包括TS2/4。
98.權(quán)利要求85的方法，其中所述的抗體是含有兩個可變鏈和兩個恒定區(qū)的全長抗體的亞序列。
99.權(quán)利要求98的方法，其中所述的亞序列包括Fab、Fab′、(Fab)2、Fv或scFv。
100.權(quán)利要求85的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基的抗體包括S6F1或TS2/4的人源化形式。
101.權(quán)利要求100的方法，其中所述的人源化形式具有一個或多個氨基酸的取代、添加或缺失，條件是所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
102.權(quán)利要求85的方法，其中所述的抗體對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力。
103.權(quán)利要求85的方法，其中所述的抗體包括對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體。
104.權(quán)利要求85的方法，其中所述的抗體是全身施用。
105.權(quán)利要求85的方法，進(jìn)一步包括施用一個或多個額外劑量的結(jié)合LFA-1α亞基的抗體。
106.權(quán)利要求105的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是低于1mg/kg體重的量。
107.權(quán)利要求105的方法，其中結(jié)合LFA-1α亞基抗體的一個或多個額外劑量是高于1mg/kg體重的量。
108.一種組合物，包括100mg或更多S6F1、TS2/4抗體、其人源化形式或其亞序列、以及藥學(xué)可接受的載體。
109.一種組合物，包括100mg或更多對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體，以及藥學(xué)可接受載體。
110.權(quán)利要求108和109的組合物，進(jìn)一步包括施用于受試者1.25到1.5、1.5到1.75、1.78到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多量的組合物的使用說明。
111.一種包括權(quán)利要求108或109的組合物的試劑盒，所述的組合物以單一單位劑量形式施用于受試者。
112.權(quán)利要求111的試劑盒，包括100mg或更多S6F1、TS2/4抗體、其人源化形式或亞序列的多倍單位劑量形式。
113.權(quán)利要求112的試劑盒，包括100mg或更多對LFA-1α亞基或LFA-1α亞基中的表位具有S6F1或TS2/4的結(jié)合親和力的約1-3、2-5、5-10、10-50或10-100內(nèi)的結(jié)合親和力的完全人抗體，以及藥學(xué)可接受載體的多倍單位劑量形式。
114.權(quán)利要求108或109的組合物或者權(quán)利要求111或112的試劑盒，其中所述的組合物存在于安瓿、小瓶、瓶或注射器中。
115.權(quán)利要求108或109的組合物或者權(quán)利要求111或112的試劑盒，進(jìn)一步包括施用于受試者高于1mg/kg體重組合物的使用說明。
116.權(quán)利要求111或112的試劑盒，進(jìn)一步包括施用于受試者1.25到1.5、1.5到1.75、1.75到2.0、2.0到2.5、2.5到3.0、3.0到5.0mg/kg體重，或者更多量組合物的使用說明。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療LFA－1α亞基相關(guān)的生理狀況以及可通過與LFA－1α亞基相結(jié)合的抗體所治療疾病，如HIV的抗體和方法。
文檔編號C07K16/28GK1703240SQ03825429
公開日2005年11月30日 申請日期2003年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月27日
發(fā)明者P·M·卡普斯泰, R·H·路易斯 申請人:愛滋病研究有限責(zé)任公司