專利名稱：一種紅毛七總堿的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從紅毛七根及根莖中提取紅毛七總生物堿的方法，特別涉及一種紅毛七總堿的制備工藝。
背景技術(shù)：
紅毛七(Radix et Rhizoma Leonticis)為小檗科植物類葉牡丹Leonticerobustum(Maxim.)Diels.的根及根莖，產(chǎn)于秦嶺和大巴山區(qū)，原蘇聯(lián)、日本也有分布，屬于非藥典收錄天然藥物，含木蘭花堿、塔斯品堿、N-甲基金雀花堿、右旋羽扇豆堿等生物堿。具有降壓、興奮子宮平滑肌、抗菌、抗病毒、抗炎、抗風(fēng)濕、抗痙攣等多種藥理作用，具有較大研究價值，但目前國內(nèi)研究較少。
本工藝以前，紅毛七總堿的提取工藝尚沒有成熟的技術(shù)，而已有的制備方法主要是利用萃取技術(shù)，方法繁瑣，需要用大量低極性有機溶劑，不利于工業(yè)生產(chǎn)，得到的總堿在數(shù)量上和種類上都不完全，大量制備也存在困難，這都不利于紅毛七總堿的后續(xù)研究。
已知的制備紅毛七總生物堿的方法如下取紅毛七藥材粗粉，用8倍量90％乙醇提取一次，8倍量70％乙醇提取兩次，每次2小時，提取液合并濃縮得到浸膏，再用2％鹽酸提取兩次，第一次3～4倍量，第二次1～2倍量，過濾，濾液用氯仿萃取至氯仿層幾乎無色，萃取后水層用氫氧化鈉溶液(或氨水)調(diào)pH9～10，氯仿萃取10次以上，氯仿萃取液濃縮，干燥，得到極性較小的生物堿，水層再用正丁醇萃取，得到極性大的生物堿。該方法需要用大量的氯仿和正丁醇，要萃取多次，且容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，不利于工業(yè)生產(chǎn)，而且不易萃取完全，造成浪費，用正丁醇萃取時還會引入較多極性大的雜質(zhì)(如皂苷)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種快速、簡便制備紅毛七總生物堿的制備工藝，該工藝能適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)，為紅毛七總堿的后續(xù)研究提供充足的原料，拓寬紅毛七總堿的應(yīng)用范圍。
實現(xiàn)上述目的采用的技術(shù)方案是，將紅毛七藥材粗粉用不同濃度乙醇加熱回流提取三次，減壓濃縮得到浸膏，浸膏再用稀鹽酸提取兩次，所得酸水液上陽離子交換樹脂柱，吸附流速為每小時1.1～1.3倍柱體積，洗脫工藝為先用含2％～4％氨水的甲醇洗脫，再用含1～2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫液流速為每小時0.5～0.6倍柱體積，即可得到紅毛七總堿。
本發(fā)明的工藝通過離子交換樹脂柱制備紅毛七總堿，避免了使用低極性有機溶劑，總堿得率約為原方法的2～3倍，而且可以進行工業(yè)化生產(chǎn)，可大量制備紅毛七總堿。
具體實施例方式
按照上述技術(shù)方案，本發(fā)明的紅毛七總生物堿的制備工藝，按以下步驟進行提取步驟取紅毛七根及根莖粗粉原料300重量份，先用原料8倍量的90％乙醇提取1次，然后再用原料8倍量的70％乙醇提取2次，每次提取時間2小時，合并上述提取液并濃縮，得到室溫下密度為1.32的浸膏100重量份；將得到的浸膏用稀鹽酸提取2次，第一次提取將浸膏置入12倍量的濃度為0.3～2％稀鹽酸中，攪勻后靜置2～3天，自然沉降至界面不再下降，取上清液，得第一次提取液為加入稀鹽酸量的65％；第一次提取后的沉淀物再用5倍量0.2～1％的稀鹽酸提取一次，靜置沉降2～3天，取上清液，得到加入稀鹽酸量的95％的第二次提取液；合并兩次提取液，得到的提取液總量為浸膏量的12.5倍；純化步驟將稀鹽酸提取液用LSD001型陽離子交換樹脂柱吸附分離，取樹脂72重量份(原藥材300重量份或醇提浸膏100重量份所需)，流速為每小時1.1～1.3倍柱體積，上完樣后用自來水沖洗柱子，直至水洗脫液pH6～7，棄去水洗脫液，得到純化的紅毛七總生物堿。
洗脫步驟純化的紅毛七總生物堿先用6～8倍柱體積含2～4％氨水的甲醇洗脫，再用4～5倍柱體積含1～2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫液流速控制在每小時0.5～0.6倍柱體積，洗脫過程中用碘化鉍鉀試劑檢測是否洗脫完全；收集洗脫液，合并，減壓濃縮，減壓干燥，得到紅毛七總堿粗品6.5～10重量份。
以下是發(fā)明人給出的實施例。
實驗例1上樣流速的考察將2％鹽酸提取液(每12.5ml提取液相當(dāng)于1g浸膏或3g原藥材)上樣于LSD001型陽離子交換樹脂柱(樹脂重80g，柱體積100ml，柱徑∶柱高＝1∶2)的過程中，分別采用不同的流速，以改良碘化鉍鉀試劑檢測，考察了上樣流速與吸附量的關(guān)系，結(jié)果如下上樣流速折合原藥材量上樣體積(ml) 折合浸膏量(g)(ml.min-1)(g)1 2200 176 5282 1700 136 4083 1300 104 312
結(jié)果表明上樣液流速與上樣量呈負相關(guān)，流速越大，吸附量越小。考慮到1ml.min-1流速太小，耗時較長，而流速大于3ml.min-1時，吸附量又偏低，耗用樹脂量大，所以上樣時采用2ml.min-1的流速，即上樣流速為每小時1.2倍柱體積。
實驗例2洗脫溶劑的考察將已交換于LSD001型陽離子交換樹脂柱(樹脂重80g，柱體積100ml，柱徑∶柱高＝1∶2)上的紅毛七總生物堿，分別采用以下系統(tǒng)進行洗脫(1)含不同濃度氨水的甲醇系統(tǒng)；(2)含2％鹽酸的甲醇系統(tǒng)；(3)先用含鹽酸的甲醇后用含氨水的甲醇系統(tǒng)；(4)先用含氨水的甲醇后用含鹽酸的甲醇系統(tǒng)；以改良碘化鉍鉀試劑檢測，考察了不同洗脫系統(tǒng)的洗脫效率，洗脫流速采用2ml.min-1，其結(jié)果如下洗脫系統(tǒng)(1)分別用含2％，5％，10％，20％氨水的甲醇洗脫，洗脫效率無明顯差別，可見柱上有一條深紅色帶被洗下，洗脫至10倍柱體積時都不能將生物堿完全洗下，碘化鉍鉀試劑反應(yīng)陽性，樹脂顏色仍較深，呈暗紅色。
洗脫系統(tǒng)(2)采用含2％鹽酸的甲醇系統(tǒng)洗脫，洗脫至3倍柱體積時洗脫液顏色由深紅色變?yōu)闇\黃色，但洗下的生物堿量較少，洗脫至10倍柱體積，樹脂柱顏色仍呈深紅色，未能洗下更多生物堿。
洗脫系統(tǒng)(3)先用4倍柱體積的含2％鹽酸的甲醇洗脫，再用含2％氨水的甲醇洗脫，共洗脫至12倍柱體積時，洗脫液碘化鉍鉀試劑反應(yīng)陽性，樹脂顏色較深，洗脫效果不夠理想。
洗脫系統(tǒng)(4)先用8倍柱體積的含2％氨水的甲醇洗脫，再用4倍柱體積的含2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫后樹脂柱顏色明顯變淺，呈紅黃色，最終洗脫液碘化鉍鉀試劑反應(yīng)陰性，洗脫效果較好。
結(jié)果表明，洗脫系統(tǒng)(4)洗脫較完全，洗脫效率較高，所以選用洗脫系統(tǒng)(4)洗脫LSD001型陽離子交換樹脂上吸附的紅毛七總生物堿，即先用6倍柱體積的含2％氨水的甲醇洗脫，再用4倍柱體積含2％鹽酸的甲醇系統(tǒng)進行洗脫。
實施例1取紅毛七醇提浸膏(密度約為1.32(室溫))250g，用稀鹽酸提取兩次，第一次用12倍量2％稀鹽酸，第二次用5倍量1％稀鹽酸，靜置沉降，得上清液共3100ml，取2200ml上LSD001型陽離子交換樹脂柱。樹脂重約80g(柱體積100ml，柱徑∶柱高＝1∶2)，上樣流速為每小時0.6倍柱體積，上完樣后用自來水沖洗柱子，至水洗脫液pH6～7，棄去水洗脫液；先用8倍柱體積的含2％氨水的甲醇洗脫，再用4倍柱體積的含2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫液流速應(yīng)控制在每小時0.5～0.6倍柱體積，洗脫過程中用碘化鉍鉀試劑檢測是否洗脫完全。收集洗脫液，合并，減壓濃縮，減壓干燥，得到紅毛七總堿粗品20.5g。
實施例2取紅毛七醇提浸膏(密度約為1.32(室溫))200g，用稀鹽酸提取兩次，第一次12倍量2％稀鹽酸，第二次5倍量1％稀鹽酸，靜置沉降，得上清液共2500ml，取1700ml上LSD001型陽離子交換樹脂柱。樹脂重約80g(柱體積100ml，柱徑∶柱高＝1∶2)上樣流速為每小時1.2倍柱體積，上完樣后用自來水沖洗柱子，至水洗脫液pH6～7，棄去水洗脫液；先用6倍柱體積的含2％氨水的甲醇洗脫，再用4倍柱體積的含2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫液流速應(yīng)控制在每小時0.5～0.6倍柱體積，洗脫過程中用碘化鉍鉀試劑檢測是否洗脫完全。收集洗脫液，合并，減壓濃縮，減壓干燥，得到紅毛七總堿粗品13g。
實施例3取紅毛七醇提浸膏(密度約為1.32(室溫))150g，用稀鹽酸提取兩次，第一次12倍量2％稀鹽酸，第二次5倍量1％稀鹽酸，靜置沉降，得上清液共1800ml，取1300ml上LSD001型陽離子交換樹脂柱。樹脂重約80g(柱體積100ml，柱徑∶柱高＝1∶2)上樣流速為每小時1.8倍柱體積，上完樣后用自來水沖洗柱子，至水洗脫液pH6～7，棄去水洗脫液；先用6倍柱體積的含2％氨水的甲醇洗脫，再用4倍柱體積的含2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫流速應(yīng)控制在每小時0.5～0.6倍柱體積，洗脫過程中用碘化鉍鉀試劑檢測是否洗脫完全。收集洗脫液，合并，減壓濃縮，減壓干燥，得到紅毛七總堿粗品12.7g。
權(quán)利要求
1.一種紅毛七總生物堿的制備工藝，原料選用紅毛七根及根莖，其特征在于，包括下列步驟提取步驟取紅毛七根及根莖粗粉原料300重量份，先用原料8倍量的90％乙醇提取1次，然后再用原料8倍量的70％乙醇提取2次，每次提取時間2小時，合并上述提取液并濃縮，得到室溫下密度為1.32的浸膏100重量份；將得到的浸膏用稀鹽酸提取2次，第一次提取將浸膏置入12倍量的濃度為0.3～2％稀鹽酸中，攪勻后靜置2～3天，自然沉降至界面不再下降，取上清液，得到加入稀鹽酸量的65％的第一次提取液；第一次提取后的沉淀物再用5倍量0.2～1％的稀鹽酸提取一次，靜置沉降2～3天，取上清液，得到加入稀鹽酸量的95％的第二次提取液；合并兩次提取液，得到的提取液總量為浸膏量的12.5倍；純化步驟將稀鹽酸提取液用LSD001型陽離子交換樹脂柱吸附分離，取樹脂72重量份，流速為每小時1.1～1.3倍柱體積，上完樣后用自來水沖洗柱子，直至水洗脫液pH6～7，棄去水洗脫液，得到純化的紅毛七總生物堿；洗脫步驟純化的紅毛七總生物堿先用6～8倍柱體積含2～4％氨水的甲醇洗脫，再用4～5倍柱體積含1～2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫液流速控制在每小時0.5～0.6倍柱體積，洗脫過程中用碘化鉍鉀試劑檢測是否洗脫完全；收集洗脫液，合并，減壓濃縮，減壓干燥，得到紅毛七總堿粗品6.5～10重量份。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紅毛七總生物堿的提取工藝，原料選用紅毛七根及根莖，紅毛七藥材經(jīng)乙醇提取和酸水提取后，酸水提取液再經(jīng)陽離子交換樹脂柱吸附，上樣液流速為每小時1.1～1.3倍柱體積，水洗至近中性后，再依次分別用含2％～4％氨水的甲醇和含1～2％鹽酸的甲醇洗脫，洗脫液流速為每小時0.5～0.6倍柱體積，合并洗脫液，濃縮，得到紅毛七總生物堿浸膏。
文檔編號C07D221/18GK1616472SQ20041007312
公開日2005年5月18日 申請日期2004年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月29日
發(fā)明者賀浪沖, 何強, 李義平, 李翠芹, 王娜, 陳方 申請人:西安交通大學(xué)