專(zhuān)利名稱(chēng)：作為構(gòu)象限定的肽模擬物抑制劑的內(nèi)酰胺類(lèi)化合物的制作方法
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背景技術(shù)：
蛋白酶是在單一、特定肽鍵處切割蛋白質(zhì)的酶。蛋白酶可分為四大類(lèi)絲氨酸蛋白酶、硫醇或半胱氨酰蛋白酶、酸或天冬氨酰蛋白酶及金屬蛋白酶(Cuypers等，J.Biol.Chem.2577086(1982))。蛋白酶對(duì)各種生物活性都是必不可少的，如消化、血塊的形成和溶解、生殖、對(duì)外源細(xì)胞和生物體的免疫反應(yīng)等。異常蛋白水解與很多人和其它哺乳動(dòng)物的疾病有關(guān)。在許多情況下，在治療性治療動(dòng)物疾病過(guò)程中，一種或多種蛋白水解酶的功能被破壞都是有益的。
肽底物的結(jié)合部位由一系列跨越酶表面的“特異性亞部位(specificity subsite)”組成。術(shù)語(yǔ)“特異性亞部位”是指能與酶底物部分相互作用的酶表面的口袋或其它部位。在討論肽與蛋白酶相互作用時(shí)，如絲氨酸/半胱氨酸蛋白酶等，本申請(qǐng)采用Schechter和Berger的命名原則[(1967)Biochem.Biophys.Res.Commun.27157-162)]。將底物或抑制劑的各個(gè)氨基酸殘基表示為P1、P2等，而將酶對(duì)應(yīng)的亞部位表示為S1、S2等，并且從裂解反應(yīng)中產(chǎn)生的羧基端開(kāi)始標(biāo)示。底物的易裂鍵是處于底物的P1-P1′間的酰胺鍵。因此，對(duì)于Xaa3和Xaa4殘基之間斷裂的肽Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4，Xaa3殘基被稱(chēng)為P1殘基并與酶的S1亞部位結(jié)合，Xaa2被稱(chēng)為P2殘基并與S2亞部位結(jié)合，以此類(lèi)推。
舉例來(lái)說(shuō)，二肽基肽酶IV(DPIV)是一種絲氨酸蛋白酶，它優(yōu)選在倒數(shù)第二位(例如P1位)含有脯氨酸殘基的肽鏈N端二肽進(jìn)行切割。DPIV屬于一組細(xì)胞膜相關(guān)肽酶，像大部分細(xì)胞表面肽酶一樣，它是一種II型膜內(nèi)在蛋白，通過(guò)其信號(hào)序列錨定在血漿膜上。DPIV存在于各種哺乳動(dòng)物分化的上皮細(xì)胞、上皮組織、內(nèi)皮細(xì)胞、內(nèi)皮組織、造血細(xì)胞、造血組織等中，包括在CD4+T細(xì)胞表面特異性地發(fā)現(xiàn)的淋巴源性細(xì)胞和組織。DPIV已被鑒定為白細(xì)胞分化標(biāo)記。
發(fā)明概述具有多個(gè)旋轉(zhuǎn)鍵的分子可采取各種幾何排列。優(yōu)化先導(dǎo)結(jié)構(gòu)中的一種有用的修飾利用構(gòu)象限制。這可將分子鎖定在生物活性構(gòu)象中，因此通過(guò)降低鍵合熵?fù)p耗而增加生物學(xué)功能。通過(guò)在某些原子間強(qiáng)制閉環(huán)而限制這些分子的構(gòu)象，可能導(dǎo)致不同的結(jié)果。如果這種凍結(jié)的構(gòu)象不同于可變的生物活性構(gòu)象，或者加入的原子干擾這種結(jié)合，那么生物學(xué)活性可能最終消失。反之，如果閉環(huán)穩(wěn)定生物活性構(gòu)象，那么常常使生物活性顯著增加。這種機(jī)理已為本發(fā)明所證實(shí)，包括一系列內(nèi)酰胺衍生物，其中內(nèi)酰胺環(huán)被用于通過(guò)限制酰胺扭轉(zhuǎn)為反式構(gòu)象而進(jìn)行構(gòu)象限制。
本發(fā)明利用構(gòu)象限制的肽模擬物(peptide mimetics)防止二肽-過(guò)渡態(tài)類(lèi)似物抑制劑的環(huán)合，而將適當(dāng)?shù)年P(guān)鍵官能團(tuán)定位以有效抑制靶蛋白酶。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明還能通過(guò)提供改善的穩(wěn)定性，降低肽硼酸抑制劑的C端脫硼作用。
本發(fā)明的一方面提供一種具有下式結(jié)構(gòu)的蛋白酶抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽
其中R1代表H、烷基、烷氧基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、?；被?、氰基、磺?；被?、酰氧基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、條芳基或1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；R2和R3獨(dú)立代表H、低級(jí)烷基、環(huán)烷基或芳烷基，或者R2和R3與它們所連接的原子一起形成4-6元雜環(huán)；R4和R5各自獨(dú)立地代表H、鹵素或烷基，優(yōu)選H或低級(jí)烷基，或者R4和R5與它們所連接的碳原子一起形成3-6元碳環(huán)或雜環(huán)；R6是與靶蛋白酶的活性部位殘基反應(yīng)形成共價(jià)加合物的官能團(tuán)；R7不存在或者代表A環(huán)上的一個(gè)或多個(gè)取代基，所述各取代基獨(dú)立選自H、低級(jí)烷基、低級(jí)烯基、低級(jí)炔基、羥基、氧代、醚、硫醚、鹵素、羰基、硫代羰基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、疊氮基、烷基氨基、?；被?、氨基?；?、氰基、硫酸酯基、磺酸酯基、磺?；⒒酋；被?、氨基磺酰基、烷氧基羰基、酰氧基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基或1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；R8代表H、芳基、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基、雜芳烷基或1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；L不存在或者代表烷基、烯基、炔基、-(CH2)mO(CH2)m-、-(CH2)mNR2(CH2)m-和-(CH2)mS(CH2)m-；X不存在或者代表-N(R8)-、-O-和-S-；Y不存在或者代表-C(＝O)-、-C(＝S)-和-SO2-；m每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為0-10的整數(shù)；n為0-3的整數(shù)，優(yōu)選為0或1。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1代表H或低級(jí)烷基，R4代表H或低級(jí)烷基，R5代表H，n為0。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，其中X、Y和L不存在，R1為2-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈，其中脯氨酸是直接連接于式I的最左端殘基的殘基。在某些這種實(shí)施方案中，R1為2個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈，其中脯氨酸是直接連接于式I的最左端氮的殘基。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，C3和C4處的立體化學(xué)構(gòu)型分別是R和S。
在某些其它的實(shí)施方案中，R6代表硼酸、CN、-SO2Z1、-P(＝O)Z1、-P(＝R9)R10R11、-C(＝NH)NH2、-CH＝NR12或-C(＝O)-R12，其中R9代表O或S；R10代表N3、SH2、NH2、NO2或OLR13，和R11代表低級(jí)烷基、氨基、OLR13，或其藥學(xué)上可接受的鹽，或者R10和R11與它們所連接的磷原子一起形成5-8元雜環(huán)；R12代表H、烷基、烯基、炔基、-NH2、-(CH2)p-R13、-(CH2)q-OH、-(CH2)q-O-烷基、-(CH2)q-O-烯基、-(CH2)q-O-炔基、-(CH2)q-O-(CH2)p-R13、-(CH2)q-SH、-(CH2)q-S-烷基、(CH2)q-S-烯基、-(CH2)q-S-炔基、-(CH2)q-S-(CH2)p-R13、-C(O)NH2、-C(O)OR14或C(Z1)(Z2)(Z3)；R13代表H、烷基、烯基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基；R14代表H、烷基、烯基或LR13；Z1代表鹵素；Z2和Z3獨(dú)立代表H或鹵素；p每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為0-8的整數(shù)；和q每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為1-8的整數(shù)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R6代表CN、CHO或C(＝O)C(Z1)(Z2)(Z3)，其中，Z1代表鹵素，Z2和Z3代表H或鹵素。在某些這種實(shí)施方案中，R6代表C(＝O)C(Z1)(Z2)(Z3)，其中Z1代表氟，Z2和Z3代表H或氟。
在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，R6為式B(Y1)(Y2)，其中Y1和Y2獨(dú)立地為OH或能夠水解為OH的基團(tuán)(即得到硼酸)，或者與它們所連接的硼原子一起形成能水解為硼酸的5-8元環(huán)。
在某些實(shí)施方案中，所述蛋白酶抑制劑抑制DPIV，其Ki值≤50nM。
在某些實(shí)施方案中，所述抑制劑具有口服活性。
在某些實(shí)施方案中，所述抑制劑在人中的治療指數(shù)至少為2，更優(yōu)選為5、10，或者甚至為100，例如調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的治療指數(shù)。
本發(fā)明的另一方面提供一種藥物組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體和一種或多種本發(fā)明的蛋白酶抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
本發(fā)明的另一方面提供一種或多種本發(fā)明的抑制劑在制備用于體內(nèi)抑制后脯氨酸裂解酶(post-proline cleaving enzyme)的藥物中的用途。例如，可用本發(fā)明抑制劑制備用于增加后脯氨酸裂解酶(如DP-IV等)加工的一種或多種肽激素的血漿濃度的藥物。這種示例性的藥物可用于增加諸如胰高血糖素樣肽、NPY、PPY、胰泌素、GLP-1、GLP-2和GIP這類(lèi)激素的血漿濃度。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抑制劑可用于制備用于調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的藥物，如用于治療患有下列疾病的患者II型糖尿病、胰島素抵抗、葡萄糖不耐癥、高血糖癥、低血糖癥、高胰島素血癥、肥胖癥、高脂血癥或高脂蛋白血癥。
本發(fā)明的又一方面提供一種包裝藥品，它包含一種或多種本發(fā)明的蛋白酶抑制劑的制劑；藥學(xué)上可接受的載體；用文字和/或圖片表示的使用說(shuō)明書(shū)，說(shuō)明書(shū)上注明該制劑用于體內(nèi)抑制后脯氨酸裂解酶，如調(diào)節(jié)葡萄糖代謝。
所述包裝藥物還可包括如所述蛋白酶抑制劑與胰島素和/或促胰島素藥物或兩者共同配制或簡(jiǎn)單地共同包裝。
所述包裝藥物還可包括例如所述蛋白酶抑制劑與M1受體拮抗劑、催乳素抑制劑、作用于β-細(xì)胞的ATP-依賴(lài)性鉀通道的藥物、二甲雙胍和/或葡糖苷酶抑制劑共同配制或者共同包裝。
本發(fā)明還涉及在短期內(nèi)給予的治療方案的基礎(chǔ)上，使得長(zhǎng)期降低和消除至少其中一種前述疾病的改進(jìn)方法。
本發(fā)明還提供一種在長(zhǎng)期基礎(chǔ)上調(diào)節(jié)和改變脊椎動(dòng)物(包括人)的葡萄糖和脂肪生成應(yīng)答的方法。
具體地講，可將本發(fā)明化合物用于在以下一個(gè)或多個(gè)方面產(chǎn)生長(zhǎng)期持續(xù)性的有益變化人對(duì)胰島素的細(xì)胞應(yīng)答的敏感性(降低胰島素抵抗)、血胰島素水平、高胰島素血癥、血糖水平、體脂肪貯存量和血脂蛋白水平，從而為糖尿病、肥胖癥和/或動(dòng)脈粥樣硬化提供有效的治療方法。
發(fā)明詳述I.概述本發(fā)明涉及后脯氨酸裂解酶(PPCE)抑制劑如二肽基肽酶IV抑制劑及其藥物組合物，并涉及這些抑制劑的使用方法。具體地講，本發(fā)明的抑制劑通過(guò)包含新的、構(gòu)象限制的二肽過(guò)渡態(tài)肽模擬物，比現(xiàn)有技術(shù)的那些抑制劑有了改進(jìn)，所述肽模擬物防止N-B鍵的形成和環(huán)合， 同時(shí)將氨基和硼基適當(dāng)定位以有效抑制目標(biāo)酶。這些分子的原型具有一個(gè)帶有4、5、6或7元環(huán)的內(nèi)酰胺限定的主鏈和帶有多種側(cè)鏈的親電部位。
本發(fā)明化合物突出的特點(diǎn)包括較好的治療指數(shù)，部分原因是由于能降低毒性和/或改進(jìn)對(duì)靶蛋白酶的特異性；較好的口服生物利用度；保存期延長(zhǎng)；和/或作用時(shí)間延長(zhǎng)(如單一口服劑型有效時(shí)間為4小時(shí)以上，更優(yōu)選超過(guò)8小時(shí)、12小時(shí)或16小時(shí))。
本發(fā)明化合物可用作多種疾病的治療劑，如DPIV介導(dǎo)的疾病。例如，本發(fā)明化合物可用于正調(diào)節(jié)GIP和GLP-1活性(例如增加那些激素的半壽期)、用作調(diào)節(jié)葡萄糖水平和/或代謝的治療劑，例如降低胰島素抵抗、治療高血糖癥、高胰島素血癥、肥胖癥、高脂血癥、高脂蛋白血癥(如乳糜微滴、VLDL和LDL)以及調(diào)節(jié)體脂肪和更通常調(diào)節(jié)脂質(zhì)貯存，以及更加通常改善代謝性疾病，尤其是與糖尿病、肥胖癥和/或動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)的疾病。
雖然不希望受任何具體理論的束縛，但發(fā)現(xiàn)抑制DPIV的化合物能與改善葡萄糖的耐受性相關(guān)，盡管不一定通過(guò)DPIV本身抑制所涉及的機(jī)理。的確，已表明類(lèi)似的化合物能有效降低小鼠的GLP-1受體，其表明本發(fā)明的方法不可以包括直接涉及GLP-1本身作用的機(jī)理，盡管尚未排除GLP-1可能具有其它受體。但是，根據(jù)與DPIV抑制的相關(guān)性，在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明方法利用抑制DPIV的Ki值≤50nM的藥物，更優(yōu)選≤10.0nM，甚至更優(yōu)選Ki值≤1.0nM、Ki值≤0.1nM或Ki值≤0.01nM的藥物。當(dāng)然，還包括Ki值在10-12摩爾至10-15摩爾的范圍的抑制劑。因此，為方便起見(jiàn)，雖然將本發(fā)明所述的活性藥物稱(chēng)為“DPIV抑制劑”，但應(yīng)清楚這種命名并不將本發(fā)明限定于某一具體的作用機(jī)制中。
某些本發(fā)明化合物具有延長(zhǎng)的作用期。因此，在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，選擇所述抑制劑，使得制成制劑的抑制劑的量能在單劑量給藥后至少4小時(shí)，甚至更優(yōu)選在單劑量給藥后至少8小時(shí)、甚至12或16小時(shí)，提供抑制血清PPCE(如DPIV)水平至少50％的劑量。
例如，在某些實(shí)施方案中，所述方法包括在24小時(shí)期間內(nèi)，優(yōu)選以預(yù)定的次數(shù)，以能有效改善與葡萄糖代謝疾病(如葡萄糖不耐癥、胰島素抵抗、高血糖癥、高胰島素血癥、I型糖尿病和II型糖尿病)有關(guān)的一或多項(xiàng)異常指標(biāo)的量給予DPIV抑制劑。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括以有效改善與肥胖癥有關(guān)的異常指標(biāo)的量給予DPIV抑制劑。脂肪細(xì)胞釋放激素瘦素，瘦素在血流中通過(guò)進(jìn)入大腦，并經(jīng)過(guò)那里的瘦素受體，刺激GLP-1的產(chǎn)生。而GLP-1再產(chǎn)生全應(yīng)答?，F(xiàn)主要的理論是多數(shù)肥胖人的脂肪細(xì)胞可能產(chǎn)生足量的瘦素，但瘦素不能夠正確地利用大腦中的瘦素受體，從而不能刺激產(chǎn)生GLP-1。因此，目前針對(duì)利用GLP-1制劑作為食欲抑制劑進(jìn)行了大量的研究。本發(fā)明方法提供一種在治療與肥胖癥相關(guān)的疾病中增加內(nèi)源性和異位加入的GLP-1的半壽期的方法。
在更普遍的意義中，本發(fā)明提供改變多種不同的多肽激素的藥代動(dòng)力學(xué)的方法和組合物，即通過(guò)抑制一種或多種經(jīng)DPIV或某些其它蛋白水解活性的肽激素的蛋白水解。分泌后的機(jī)制是在調(diào)節(jié)肽的整個(gè)動(dòng)態(tài)平衡中的重要元素，并且這些過(guò)程中涉及的其它酶可能是本發(fā)明方法藥理學(xué)干預(yù)的合適靶標(biāo)。
例如，本發(fā)明方法可用于增加諸如以下的其它胰高血糖素原衍生肽的半壽期腸高血糖素(對(duì)應(yīng)于PG 1-69)、泌酸調(diào)節(jié)素(PG 33-69)、腸高血糖素相關(guān)胰腺多肽(GRPP，PG 1-30)、干涉肽-2(IP-2，PG 111-122酰胺)和胰高血糖素樣肽-2(GLP-2，PG 126-158)。
GLP-2，例如，一直被確定作為負(fù)責(zé)誘發(fā)腸上皮細(xì)胞增殖的因子。例如，參見(jiàn)Drucker等(1996)PNAS 937911。本發(fā)明方法可用作治療損傷、炎癥或腸組織切除的治療方法，例如當(dāng)要求增強(qiáng)腸粘膜上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和修復(fù)時(shí)，如治療節(jié)段性回腸炎(Crohn’s disease)或炎性腸病(IBD)。
DPIV還涉及生長(zhǎng)激素釋放因子(GHRF)的代謝和失活。GHRF是同源性肽家族的一員，它包括胰高血糖素、胰泌素、血管活性腸肽(VIP)、肽組氨酸異亮氨酸(PHI)、垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)、胃抑肽(GIP)和毒蜥皮肽(helodermin)(Kubiak等，(1994)Peptide Res7153)。GHRF由下丘腦分泌，并刺激由垂體前葉釋放生長(zhǎng)激素。因此，本發(fā)明方法可用于改善某些生長(zhǎng)激素缺陷兒童的臨床治療，并可用于成人的臨床治療以改善營(yíng)養(yǎng)并改變身體組成(肌肉與脂肪)。本發(fā)明方法還可用于獸醫(yī)實(shí)踐中，例如研制產(chǎn)奶量高的家畜和快速生長(zhǎng)的瘦肉型家畜。
同樣地，本發(fā)明的DPIV抑制劑可用于改變胰泌素、VIP、PHI、PACAP、GIP和/或毒蜥皮肽的血漿半壽期。另外，本發(fā)明方法可用于改變肽YY和神經(jīng)肽Y的藥代動(dòng)力學(xué)，兩者都是胰多肽家族的成員，而DPIV一直與以改變受體選擇性的方式進(jìn)行的那些肽的過(guò)程有關(guān)。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明抑制劑可用于刺激造血功能。
在另一些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明抑制劑可用于抑制轉(zhuǎn)化細(xì)胞/組織的生長(zhǎng)或血管化，例如抑制諸如與腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移相關(guān)的細(xì)胞增殖，以及抑制在異常增殖的細(xì)胞團(tuán)中的血管生成。
在又一些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明抑制劑可用于降低免疫應(yīng)答，如作為免疫抑制劑。
在再一些其它實(shí)例中，本發(fā)明的DPIV抑制劑可用于治療CNS疾病，如中風(fēng)、腫瘤、局部缺血、帕金森病(Parkinson’s disease)、記憶減退、聽(tīng)力損失、視力損失、偏頭痛、腦損傷、脊髓損傷、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)和肌萎縮性側(cè)索硬化(具有CNS成份)。另外，DPIV抑制劑可用于治療具有更多外周性質(zhì)的疾病，包括多發(fā)性硬化和糖尿病性腎病。
本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明后脯氨酸裂解酶抑制劑(特別是DPIV抑制劑)的藥物組合物以及其在治療和/或預(yù)防可通過(guò)改變肽激素的動(dòng)態(tài)平衡改善的疾病中的用途。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抑制劑具有降血糖和抗糖尿病活性，并可用于治療以異常葡萄糖代謝(包括貯積)為標(biāo)志的疾病。在各具體實(shí)施方案中，本發(fā)明方法的組合物可用作促胰島素藥物，或者加強(qiáng)GLP-1等分子的促胰島素作用。從這方面講，本發(fā)明的某些實(shí)施方案可用于治療和/或預(yù)防各種疾病，包括一種或多種以下疾病高脂血癥、高血糖癥、肥胖癥、葡萄糖耐受性不足、胰島素抵抗和糖尿病并發(fā)癥。
通常，本發(fā)明方法的抑制劑是小分子，例如其分子量小于7500amu，優(yōu)選小于5000amu，更優(yōu)選小于2000，或者更優(yōu)選小于1000amu。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抑制劑具有口服活性。
II.定義本文所用的術(shù)語(yǔ)“高親和性”是指分子之間強(qiáng)烈的結(jié)合親和力，其解離常數(shù)KD不大于1μM。在優(yōu)選的情況下，KD小于100nM、10nM、1nM、100pM，或者甚至小于10pM。在大多數(shù)的優(yōu)選實(shí)施方案中，兩分子可共價(jià)連接(KD基本上為0)。
術(shù)語(yǔ)“boro-Ala”是指丙氨酸類(lèi)似物，其中羧基(COOH)被硼基(B(OH)2)置換。同樣地，術(shù)語(yǔ)“boro-Pro”是指脯氨酸類(lèi)似物，其中羧基(COOH)被硼基(B(OH)2)置換。更通常來(lái)講，術(shù)語(yǔ)“boro-Xaa”，其中Xaa為氨基酸殘基，是指氨基酸類(lèi)似物，其中羧基(COOH)被硼基(B(OH)2)置換。
本發(fā)明方法所治療的“患者”或“受試者”可以指病人或非人類(lèi)受試者。
術(shù)語(yǔ)“ED50”是指在50％患者中，提供臨床相關(guān)的改善或者生理測(cè)量上的變化(如葡萄糖應(yīng)答性、血細(xì)胞比容增加、腫瘤體積縮小等)的藥物劑量。
術(shù)語(yǔ)“IC50”是指抑制50％生物活性的藥物劑量，例如體內(nèi)抑制至少50％的DPIV(或其它PPCE)活性所需要的抑制劑的量。
如果化合物能刺激或引起刺激激素胰島素的合成和表達(dá)，那么該化合物被認(rèn)為具有“促胰島素活性”。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“相互作用”是指包括分子間所有的相互作用(如生物化學(xué)相互作用、化學(xué)相互作用或生物物理相互作用)，例如蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)-核酸相互作用、核酸-核酸相互作用、蛋白質(zhì)-小分子相互作用、核酸-小分子相互作用或小分子-小分子相互作用。
術(shù)語(yǔ)“LD50”是指使50％試驗(yàn)受試者死亡的藥物劑量。
術(shù)語(yǔ)“預(yù)防或治療”的治療為本領(lǐng)域所認(rèn)可，包括給予宿主一種或多種本發(fā)明的組合物。如果在有害的癥狀的臨床特征(如宿主動(dòng)物的疾病或其它有害的狀態(tài))出現(xiàn)之前給藥，這種治療是預(yù)防性的(即防止宿主產(chǎn)生有害的癥狀)，如果在有害的癥狀的特征出現(xiàn)之后給藥，這種治療是治療性的(即消除、緩解或穩(wěn)定存在的有害的癥狀或副作用)。
術(shù)語(yǔ)“預(yù)防”為本領(lǐng)域所認(rèn)可，當(dāng)涉及病癥(如局部復(fù)發(fā)(例如疼痛))、疾病(如癌癥)、并發(fā)癥(如心力衰竭)或任何其它疾病使用時(shí)，為本領(lǐng)域所熟知，包括給予能降低患者(與不接受組合物的患者相比)病癥的發(fā)病頻率或延遲病癥的發(fā)生的組合物。因此，癌癥的預(yù)防包括，例如，相對(duì)于未治療的對(duì)照群體，降低接受預(yù)防性治療的患者群體中可檢測(cè)的癌生長(zhǎng)的數(shù)量，和/或相對(duì)于未治療的對(duì)照群體，延遲治療群體可檢測(cè)的癌生長(zhǎng)的出現(xiàn)，例如通過(guò)統(tǒng)計(jì)和/或臨床顯著數(shù)量確定。感染的預(yù)防包括，例如相對(duì)于未治療的對(duì)照群體，降低治療群體感染的診斷數(shù)量，和/或相對(duì)于未治療的對(duì)照群體，延遲治療群體感染的癥狀的出現(xiàn)。疼痛的預(yù)防包括例如相對(duì)于未治療的對(duì)照群體，降低治療群體中經(jīng)歷的疼痛敏感度或者延遲疼痛發(fā)生。
術(shù)語(yǔ)“治療指數(shù)”是指藥物的治療指數(shù)，定義為L(zhǎng)D50/ED50。
當(dāng)涉及本發(fā)明的治療方法時(shí)，化合物(如本發(fā)明的DPIV抑制劑)的“治療有效量”是指當(dāng)作為一要求的劑量處方服用(給予哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人)時(shí)，根據(jù)臨床上對(duì)所治療的疾病或病癥的可接受的標(biāo)準(zhǔn)或美容目的，例如任何藥物治療適用的利益/風(fēng)險(xiǎn)比，能舒緩病癥、緩解癥狀或減慢病癥的發(fā)生的制劑中的所述化合物的量。
“單一口服劑量”是提供產(chǎn)生血清濃度至少為該藥物的EC50，但小于其LD50的藥物的量的劑量。單一口服劑型的另一種劑量標(biāo)準(zhǔn)為提供產(chǎn)生血清濃度至少為該藥物的IC50，但小于其LD50所必需的藥物的量。兩種劑量標(biāo)準(zhǔn)，都優(yōu)選單一口服劑型為產(chǎn)生小于LD50至少10％，甚至更優(yōu)選小于至少50％、75％或者甚至小于該藥物L(fēng)D50的90％的血清濃度的藥物的量。
脂族鏈包括以下定義的烷基、烯基和炔基類(lèi)。直鏈脂族鏈限定于不帶分支的碳鏈基團(tuán)。本發(fā)明所用術(shù)語(yǔ)“脂族基團(tuán)”是指直鏈、支鏈或環(huán)狀脂族烴基，包括飽和及不飽和的脂族基團(tuán)，如烷基、烯基或炔基。
烷基是指具有指定碳原子數(shù)，或如果不作指定可具有最多30個(gè)碳原子的全飽和支鏈或無(wú)支鏈的碳鏈基團(tuán)。例如，1-8個(gè)碳原子的烷基是指諸如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基和辛基的基團(tuán)，以及作為這些基團(tuán)的位置異構(gòu)體的那些基團(tuán)。10-30個(gè)碳原子的烷基包括癸烷基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基、二十三烷基和二十四烷基。在優(yōu)選實(shí)施方案中，直鏈或支鏈烷基在其主鏈上具有30以下的碳原子(例如C1-C30的直鏈，C3-C30的支鏈)，優(yōu)選20以下的碳原子。同樣地，優(yōu)選的環(huán)烷基在其環(huán)結(jié)構(gòu)上具有3-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選在其環(huán)結(jié)構(gòu)上具有5、6或7個(gè)碳原子。
另外，貫穿本說(shuō)明書(shū)、實(shí)施例和權(quán)利要求書(shū)中所用的術(shù)語(yǔ)“烷基”(或“低級(jí)烷基”)是指包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，后者是指在烴主鏈的一個(gè)或多個(gè)碳上具有置換氫的取代基的烷基。這些取代基可包括，例如鹵素、羥基、羰基(如羧基、烷氧基羰基、甲?；蝓；?、硫代羰基(如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷?；?、磷酸酯、膦酸脂、次膦酸酯、氨基、酰氨基、脒基、氰基、硝基、巰基、烷硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨基磺酰基、亞磺酰氨基、磺?；?、雜環(huán)基、芳烷基或芳族或雜芳族基團(tuán)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將清楚，如果適合，取代在烴鏈上的基團(tuán)本身可被取代。例如，取代烷基的取代基可包括以下基團(tuán)的取代和未取代的形式氨基、疊氮基、亞氨基、酰胺基、磷?；?包括膦酸脂和次膦酸酯)、磺酰基(包括硫酸酯、亞磺酰氨基、氨基磺?；突撬狨?、甲硅烷基以及醚類(lèi)、烷硫基類(lèi)、羰基類(lèi)(包括酮、醛、羧酸酯和酯類(lèi))、-CF3、-CN等。取代的烷基實(shí)例在下面描述。環(huán)烷基可以進(jìn)一步被烷基、烯基、烷氧基、烷硫基、氨基烷基、羰基取代的烷基、-CF3、-CN等取代。
除非另外指定碳原子數(shù)，否則本文定義的“低級(jí)烷基”是指以上定義的烷基，但在其主鏈結(jié)構(gòu)上具有1-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有1-6個(gè)碳原子，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。同樣地，“低級(jí)烯基”和“低級(jí)炔基”具有類(lèi)似的鏈長(zhǎng)度。在本申請(qǐng)中，優(yōu)選的烷基是低級(jí)烷基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，指定的作為取代基的烷基是低級(jí)烷基。
術(shù)語(yǔ)“烷硫基”是指在其上具有連接的硫基團(tuán)如上定義的烷基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，“烷硫基”由-(S)-烷基、-(S)-烯基、-(S)-炔基和-(S)-(CH2)m-R1之一表示，其中m和R1的定義如下。代表性的烷硫基包括甲硫基、乙硫基等。
烯基是指具有指定碳原子數(shù)，或如果不作指定可具有最多26個(gè)碳原子的任何支鏈或無(wú)支鏈的不飽和碳鏈基團(tuán)；并在基團(tuán)中具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵。6-26個(gè)碳原子的烯基的實(shí)例為不同異構(gòu)體形式的己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基、十一碳烯基、十二碳烯基、十三碳烯基、十四碳烯基、十五碳烯基、十六碳烯基、十七碳烯基、十八碳烯基、十九碳烯基、二十碳烯基、二十一碳烯基、二十二碳烯基、二十三碳烯基和二十四碳烯基，其中不飽和鍵可位于基團(tuán)的任何位置，并且雙鍵可具有(Z)或(E)構(gòu)型。
炔基是指烯基范圍內(nèi)的烴基，但在基團(tuán)中具有一個(gè)或多個(gè)三鍵。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“烷氧基”或“烷氧”是指在其上帶有氧基的如上定義的烷基。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等?！懊选笔怯裳豕矁r(jià)連接的兩個(gè)烴。因此，致使該烷基的烷基取代基醚是或類(lèi)似于烷氧基，如可用-O-烷基、-O-烯基、-O-炔基、-O-(CH2)m-R1之一表示，其中m和R1的定義如下。
術(shù)語(yǔ)“胺”和“氨基”是本領(lǐng)域認(rèn)可的，是指未取代的和取代的胺，如可由以下通式代表的部分 或 其中R3、R5和R6各自獨(dú)立代表氫、烷基、烯基、-(CH2)m-R1，或者R3和R5與它們所連接的氮原子一起構(gòu)成在環(huán)結(jié)構(gòu)中具有4-8個(gè)原子的雜環(huán)；R1代表烯基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基或多環(huán)基；m為0或1-8的整數(shù)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3或R5僅有一個(gè)為羰基，例如R3、R5與氮原子一起不形成亞酰胺。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3和R5(和任選的R6)各自獨(dú)立代表氫、烷基、烯基或-(CH2)m-R1。因此，此處所用的術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”是指在其上具有連接的取代或未取代的烷基的如上定義的氨基，即R3和R5中至少一個(gè)是烷基。在某些實(shí)施方案中，氨基或烷基氨基呈堿性，是指其pKa≥7.00。相對(duì)于水，這些官能團(tuán)的質(zhì)子化形式的pKa大于7.00。
術(shù)語(yǔ)“羰基”是本領(lǐng)域認(rèn)可的，包括以下通式代表的那些部分 或 其中X為化學(xué)鍵或者代表氧或硫，R7代表氫、烷基、烯基、-(CH2)m-R1或其藥學(xué)上可接受的鹽、R8代表氫、烷基、烯基或-(CH2)m-R1，其中m和R1的定義同上。當(dāng)X為O，R7或R8不為氫，該式代表“酯”。當(dāng)X為O，R7的定義同上，此處該基團(tuán)是指“羧基”，并且尤其是當(dāng)R7為氫，該式代表“羧酸”。當(dāng)X為O，R8為氫，該式代表“甲酸酯”。通常，當(dāng)上式的氧原子被硫原子置換時(shí)，該式代表“硫代羰基”。當(dāng)X為硫，R7或R8不為氫，該式代表“硫酯”基團(tuán)。當(dāng)X為硫，R7為氫，該式代表“硫代羧酸”基團(tuán)。當(dāng)X為硫，R8為氫，該式代表“硫代甲酸酯”基團(tuán)。另一方面，當(dāng)X為化學(xué)鍵，R7不為氫，上式代表“酮”基。當(dāng)X為化學(xué)鍵，R7為氫，上式代表“醛”基。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”或“雜環(huán)基團(tuán)”是指3-10元環(huán)結(jié)構(gòu)，更優(yōu)選為3-7元環(huán)，其環(huán)結(jié)構(gòu)包括1-4個(gè)雜原子。雜環(huán)還可以是多元雜環(huán)。雜環(huán)基團(tuán)包括例如噻吩、噻蒽、呋喃、吡喃、異苯并呋喃、苯并吡喃、呫噸、吩噻、吡咯、咪唑、吡唑、異噻唑、異唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、中氮茚、異吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、2，3-二氮雜萘、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、嘧啶、菲咯啉、吩嗪、吩砒嗪、吩噻嗪、呋咱、吩嗪、吡咯烷、氧雜環(huán)戊烷(oxolane)、硫雜環(huán)戊烷(thiolane)、唑、哌啶、哌嗪、嗎啉、內(nèi)酯、內(nèi)酰胺(如氮雜環(huán)丁烷酮和吡咯烷酮)、磺內(nèi)酰胺、磺內(nèi)酯等。所述雜環(huán)可在一個(gè)或多個(gè)位置被如上所述的取代基取代，例如鹵素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、羥基、氨基、硝基、巰基、亞氨基、酰氨基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、氨磺?；喕酋；?、醚基、烷硫基、磺?；?、酮基、醛基、酯基、雜環(huán)基、芳族或雜芳族部分、-CF3、-CN等。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“取代的”是指包括有機(jī)化合物的所有允許的取代基。廣義上講，允許的取代基包括有機(jī)化合物的非環(huán)狀和環(huán)狀、支鏈和非支鏈、碳環(huán)和雜環(huán)、芳族和非芳族取代基。示例性的取代基包括例如以上所述的那些取代基。對(duì)于適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)化合物，允許的取代基可以是一個(gè)或多個(gè)并且可以是相同或不同的。對(duì)于本發(fā)明的目的，雜原子(如氮)可以具有氫取代基和/或具有滿足雜原子化合價(jià)的此處所述的有機(jī)化合物的任何允許的取代基。所述有機(jī)化合物的允許取代基不以任何方式限定本發(fā)明。
術(shù)語(yǔ)“烴基”是指由連接于氫原子的至多26個(gè)碳原子的碳鏈或碳環(huán)組成的單價(jià)烴基。該術(shù)語(yǔ)包括烷基、環(huán)烷基、烯基、炔基和芳基、具有飽和和不飽和鍵的混合物的基團(tuán)、碳環(huán)，并包括這些基團(tuán)的組合。所述烴基可以指直鏈、支鏈、環(huán)狀結(jié)構(gòu)或其組合結(jié)構(gòu)。
術(shù)語(yǔ)“亞烴基”是指二價(jià)烴基。代表性實(shí)例包括亞烷基、亞苯基或亞環(huán)己基。亞烴鏈優(yōu)選為全飽和和/或具有1-10個(gè)碳原子的鏈。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“硝基”是指-NO2；術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指-F、-Cl、-Br或-I；術(shù)語(yǔ)“巰基”是指-SH；術(shù)語(yǔ)“羥基”是指-OH；術(shù)語(yǔ)“磺?；笔侵?SO2-應(yīng)清楚“取代”或“被...取代”包括暗示假設(shè)這些取代按照所取代的原子的允許的化合價(jià)，并且所述取代能得到穩(wěn)定的化合物，例如不自發(fā)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，如重排、環(huán)合、消除等。
術(shù)語(yǔ)“氨磺酰基”為本領(lǐng)域所認(rèn)可，包括可由以下通式代表的部分 其中R3和R5的定義同上。
術(shù)語(yǔ)“硫酸酯基”為本領(lǐng)域所認(rèn)可，包括可由以下通式代表的部分 其中R7的定義同上。
術(shù)語(yǔ)“亞磺酰氨基”為本領(lǐng)域所認(rèn)可，包括可由以下通式代表的部分 其中R3和R8的定義同上。
術(shù)語(yǔ)“磺酸酯基”為本領(lǐng)域所認(rèn)可，包括可由以下通式代表的部分 其中R7為電子對(duì)、氫、烷基、環(huán)烷基或芳基。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“亞砜基”或“亞磺?；笔侵缚捎梢韵峦ㄊ酱淼幕鶊F(tuán) 其中R12選自氫、烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳烷基或芳基。
可將類(lèi)似的取代加入到烯基和炔基上，產(chǎn)生例如氨基烯基、氨基炔基、酰氨基烯基、酰氨基炔基、亞氨基烯基、亞氨基炔基、硫代烯基、硫代炔基、羰基取代的烯基或炔基。
本文所用的各種表達(dá)的定義，如烷基、m、n等，當(dāng)在任何結(jié)構(gòu)中不止出現(xiàn)一次時(shí)，是指其獨(dú)立于在相同結(jié)構(gòu)中的其它任何處的定義。
“小”取代基是10個(gè)以下的原子的取代基。
術(shù)語(yǔ)“氨基酸殘基”和“肽殘基”是指沒(méi)有其羧基的-OH的氨基酸或肽分子。通常來(lái)講，本文所用的表示氨基酸和保護(hù)基的縮寫(xiě)根據(jù)IUPAC-IUB委員會(huì)生物化學(xué)命名原則命名(參見(jiàn)Biochemistry(1972)111726-1732)。例如，Met、Ile、Leu、Ala和Gly分別代表甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸和甘氨酸的“殘基”?！皻埢笔侵竿ㄟ^(guò)除去α-氨基酸的羧基的OH部分和α-氨基的H部分，衍生自該相應(yīng)的α-氨基酸的基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“氨基酸側(cè)鏈”是指排除-CH(NH2)COOH部分的氨基酸基團(tuán)，可按K.D.Kopple，″Peptides and Amino Acids″，W.A.Benjamin Inc.，New York and Amsterdam，1966，第2頁(yè)和第33頁(yè)中定義；普通氨基酸的這些側(cè)鏈的實(shí)例是-CH2CH2SCH3(甲硫氨酸的側(cè)鏈)、-CH2(CH3)-CH2CH3(異亮氨酸的側(cè)鏈)、-CH2CH(CH3)2(亮氨酸的側(cè)鏈)或者H-(甘氨酸的側(cè)鏈)。
對(duì)于大部分本發(fā)明申請(qǐng)中所用的氨基酸來(lái)講，它們都是在蛋白質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的天然存在的氨基酸，或者是這些氨基酸的天然存在的合成代謝或分解代謝的產(chǎn)物，該產(chǎn)物含有氨基和羧基。特別適合的氨基酸側(cè)鏈包括選自以下氨基酸的側(cè)鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、半胱氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、賴(lài)氨酸、精氨酸、脯氨酸、組氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，以及那些已被確定為是肽聚糖細(xì)菌細(xì)胞壁成分的氨基酸和氨基酸衍生物。
術(shù)語(yǔ)氨基酸殘基還包括此處提及的任何具體氨基酸的類(lèi)似物、衍生物和同類(lèi)物，以及C端或N端被保護(hù)的氨基酸衍生物(例如用N端或C端保護(hù)基修飾)。例如，本發(fā)明包括使用其中側(cè)鏈被加長(zhǎng)或縮短同時(shí)仍提供羧基、氨基或環(huán)化的其它活性前體官能團(tuán)的氨基酸衍生物，以及具有可變側(cè)鏈(帶有適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán))的氨基酸類(lèi)似物。例如，本發(fā)明化合物可包括諸如以下的氨基酸類(lèi)似物，例如氰基丙氨酸、刀豆氨酸、黎豆氨酸、正亮氨酸、3-磷酸絲氨酸、高絲氨酸、二羥基苯丙氨酸、5-羥基色氨酸、1-甲基組氨酸、3-甲基組氨酸、二氨基庚二酸、鳥(niǎo)氨酸或者二氨基丁酸。適合于本發(fā)明的具有側(cè)鏈的其它天然存在的氨基酸代謝物或前體將為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，均包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
當(dāng)氨基酸結(jié)構(gòu)允許立體異構(gòu)體形式時(shí)，還包括這些氨基酸的(D)和(L)立體異構(gòu)體。將本文中的氨基酸和氨基酸殘基的構(gòu)型用適當(dāng)?shù)姆?hào)(D)、(L)或(DL)表示，此外，當(dāng)不指明構(gòu)型時(shí)，該氨基酸或殘基可具有(D)、(L)或(DL)構(gòu)型。應(yīng)注意本發(fā)明某些化合物的結(jié)構(gòu)包括不對(duì)稱(chēng)碳原子。因此，應(yīng)清楚有這些不對(duì)稱(chēng)性引起的異構(gòu)體包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。可通過(guò)經(jīng)典的分離技術(shù)和立體控制合成得到這些異構(gòu)體基本純的形式。除相反表達(dá)解釋外，本申請(qǐng)目的中的命名的氨基酸都應(yīng)囊括其(D)和(L)立體異構(gòu)體。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基”是指保護(hù)活性官能團(tuán)避免進(jìn)行不合要求的化學(xué)反應(yīng)的取代基。這些保護(hù)基的實(shí)例包括羧酸和硼酸的酯、醇的醚以及醛和酮的縮醛和縮酮。例如，本文所用的術(shù)語(yǔ)“N端保護(hù)基”或“氨基保護(hù)基”是指在合成過(guò)程中可用于保護(hù)N端氨基酸或肽避免進(jìn)行不合要求的反應(yīng)的各種氨基保護(hù)基。適合的基團(tuán)的實(shí)例包括?；Ｗo(hù)基，例如甲酰基、丹磺酰基、乙?；?、苯甲?；?、三氟乙?；?、琥珀?；图籽趸牾；?；芳族氨基甲酸酯保護(hù)基，如芐氧基羰基(Cbz)；和脂族氨基甲酸酯保護(hù)基，如叔丁氧基羰基(Boc)或者9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)。
如上所述，本發(fā)明某些化合物可存在特別的幾何或立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明涵蓋所有的這些化合物，包括順式-異構(gòu)體和反式-異構(gòu)體、R-和S-對(duì)映體、非對(duì)映體、(D)-異構(gòu)體、(L)-異構(gòu)體、其消旋體混合物及其其它的混合物，所有這些都包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。另外的不對(duì)稱(chēng)碳原子可存在于取代基中，如烷基。所有這些異構(gòu)體以及其混合物都囊括在本發(fā)明中。
如果例如要求本發(fā)明化合物的一種具體的對(duì)映體，其可通過(guò)不對(duì)稱(chēng)合成或通過(guò)用手性輔助劑衍生制備，將得到的非對(duì)映體混合物分離，然后裂解輔助劑，得到所要求的純的對(duì)映體。另外，當(dāng)所述分子含有堿性官能團(tuán)(如氨基)或酸性官能團(tuán)(如羧基)時(shí)，用適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性酸或堿形成非對(duì)映體鹽，然后通過(guò)分級(jí)結(jié)晶或本領(lǐng)域已知的層析方式拆分形成的非對(duì)映體，接著回收純對(duì)映體。
本發(fā)明中，化學(xué)元素根據(jù)CAS版的元素周期表、1986-87年第67版Handbook of Chemistry and Physics中內(nèi)容確定。本發(fā)明的術(shù)語(yǔ)“烴”包括所有允許的具有至少一個(gè)氫和碳原子的化合物。廣義上講，允許的烴包括可被取代或未取代的非環(huán)狀和環(huán)狀、支鏈和非支鏈、碳環(huán)和雜環(huán)、芳族和非芳族有機(jī)化合物。
如果化合物能刺激或引起刺激激素胰島素的合成和表達(dá)，那么該化合物被認(rèn)為具有“促胰島素活性”。
應(yīng)清楚本文所述的有關(guān)適當(dāng)?shù)娜〈M合的所有的通用結(jié)構(gòu)都涵蓋在化合價(jià)和穩(wěn)定性所允許的那些實(shí)施方案中。
III.示例性實(shí)施方案
(i).化合物在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，目標(biāo)化合物是具有下式結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 R1代表H、烷基、烷氧基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、?；被?、氰基、磺?；被?、酰氧基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基或1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；R2和R3各自獨(dú)立代表H、低級(jí)烷基和芳烷基，或者R2和R3與它們所連接的原子一起形成4-6元雜環(huán)；R4和R5獨(dú)立代表H、鹵素或烷基，或者R4和R5與它們所連接的碳原子一起形成3-6元碳環(huán)或雜環(huán)；R6代表與靶蛋白酶的活性部位殘基反應(yīng)形成共價(jià)加合物的官能團(tuán)；R7不存在或者代表A環(huán)上的一個(gè)或多個(gè)取代基，所述各取代基獨(dú)立選自H、低級(jí)烷基、低級(jí)烯基、低級(jí)炔基、羥基、氧代、醚、硫醚、鹵素、羰基、硫代羰基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、疊氮基、烷基氨基、?；被?、氨基酰基、氰基、硫酸酯基、磺酸酯基、磺酰基、磺?；被被酋；⑼檠趸驶?、酰氧基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基或1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；R8代表H、芳基、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基、雜芳烷基或1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；L不存在或者代表烷基、烯基、炔基、-(CH2)mO(CH2)m- -(CH2)mNR2(CH2)m-或-(CH2)mS(CH2)m-；
X不存在或者代表-N(R8)-、-O-或-S-；Y不存在或者代表-C(＝O)-、-C(＝S)-或-SO2-；m每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為0-10的整數(shù)；n為0-3的整數(shù)，優(yōu)選為0或1。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1代表H或低級(jí)烷基，R2和R3各自獨(dú)立代表H、低級(jí)烷基或芳烷基，或者R2和R3與它們所連接的原子一起形成5元雜環(huán)，R4代表H或低級(jí)烷基，R5代表H。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，C3和C4上的立體構(gòu)型分別為R和S。
在某些其它實(shí)施方案中，R6代表氰基、硼酸、-SO2Z1、-P(＝O)Z1、-P(＝R9)R10R11、-C(＝NH)NH2、-CH＝NR12或-C(＝O)-R12，其中R9代表O或S；R10代表N3、SH2、NH2、NO2或OLR13，和R11代表低級(jí)烷基、氨基、OLR13或者藥學(xué)上可接受的鹽，或者R10和R11與它們所連接的磷原子一起形成5-8元雜環(huán)；R12代表H、烷基、烯基、炔基、-(CH2)p-R13、-(CH2)q-OH、-(CH2)q-O-烷基、-(CH2)q-O-烯基、-(CH2)q-O-炔基、-(CH2)q-O-(CH2)p-R13、-(CH2)q-SH、-(CH2)q-S-烷基、(CH2)q-S-烯基、-(CH2)q-S-炔基、-(CH2)q-S-(CH2)p-R13、-C(O)C(O)NH2、-C(O)C(O)OR14或C(Z1)(Z2)(Z3)；R13代表H、烷基、烯基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或雜環(huán)基；R14代表H、烷基、烯基或LR13；Z1代表鹵素；Z2和Z3獨(dú)立代表H或鹵素；p每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為0-8的整數(shù)；和q每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為1-8的整數(shù)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R6代表CN、CHO或C(＝O)C(Z1)(Z2)(Z3)，其中，Z1代表鹵素，Z2和Z3代表H或鹵素。在某些這種實(shí)施方案中，R6代表C(＝O)C(Z1)(Z2)(Z3)，其中Z1代表氟，Z2和Z3代表H或氟。
在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，R6為式B(Y1)(Y2)，其中Y1和Y2獨(dú)立地為OH或能夠水解為OH的基團(tuán)(即得到硼酸)，或者與它們所連接的硼原子一起形成能水解為硼酸的5-8元環(huán)。
示例性結(jié)構(gòu)包括 在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明抑制劑是DPIV抑制劑，其抑制DPIV的Ki值≤10nM，更優(yōu)選Ki值≤1.0，甚至更優(yōu)選Ki值為0.1，以及更優(yōu)選Ki值≤0.01nM。還包括抑制劑Ki值在10-12摩爾至10-15摩爾的范圍。
通常，本發(fā)明方法的抑制劑是小分子，例如其分子量小于7500amu，優(yōu)選小于5000amu，更優(yōu)選小于2000，或者更優(yōu)選小于1000amu。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抑制劑具有口服活性。
本發(fā)明的另一方面涉及二肽基肽酶抑制劑(特別是DPIV抑制劑)的藥物組合物以及其在治療和/或預(yù)防可通過(guò)改變肽激素的動(dòng)態(tài)平衡而得以改善的疾病中的用途。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抑制劑具有降血糖和抗糖尿病活性，并可用于治療以異常葡萄糖代謝(包括貯積)為標(biāo)志的疾病。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明方法的組合物可用作促胰島素藥物，或者加強(qiáng)GLP-1等分子的促胰島素作用。從這方面講，本發(fā)明的方法可用于治療和/或預(yù)防各種疾病，包括一種或多種以下疾病高脂血癥、高血糖癥、肥胖癥、葡萄糖耐受性不足、胰島素抵抗和糖尿病并發(fā)癥。
例如，在某些實(shí)施方案中，所述方法包括在24小時(shí)期間內(nèi)，以預(yù)定的時(shí)間間隔，以能有效改善與葡萄糖代謝疾病(如葡萄糖不耐癥、胰島素抵抗、高血糖癥、高胰島素血癥、I型糖尿病和II型糖尿病)有關(guān)的一或多項(xiàng)異常指標(biāo)的量給予抑制劑。抑制劑的有效量可為患者每千克體重約0.01mg、0.1mg、1mg、10mg、30mg、50mg、70mg、100mg、150mg、200mg、500mg或1000mg。
(ii).GLP-1效應(yīng)的激動(dòng)作用在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明方法中所用的抑制劑具有降低血糖水平、減輕肥胖、緩解葡萄糖耐量減低、抑制肝糖再生、降低脂質(zhì)水平和抑制醛糖還原酶的能力。因此，它們可用于預(yù)防和/或治療高血糖癥、肥胖癥、高脂血癥、糖尿病并發(fā)癥(包括視網(wǎng)膜病、腎病、神經(jīng)病、白內(nèi)障、冠狀動(dòng)脈病和動(dòng)脈粥樣硬化)以及肥胖癥相關(guān)的高血壓和骨質(zhì)疏松癥。
糖尿病是一種特征為高血糖癥的疾病，其由胰島素分泌相對(duì)或絕對(duì)降低、胰島素敏感性降低或胰島素抵抗所引起。這種疾病的發(fā)病率和死亡率由血管、腎和神經(jīng)的并發(fā)癥決定。臨床上用口服葡萄糖耐量試驗(yàn)診斷該病。在口服葡萄糖耐量試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)患者對(duì)葡萄糖承載和對(duì)抗的生理反應(yīng)。在攝入葡萄糖后，評(píng)估患者對(duì)葡萄糖對(duì)抗的生理反應(yīng)。通常，可通過(guò)在一定時(shí)間內(nèi)的幾個(gè)預(yù)測(cè)點(diǎn)上測(cè)定患者的血糖水平(患者血漿、血清或全血中的葡萄糖濃度)進(jìn)行。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種激動(dòng)GLP-1作用的方法?，F(xiàn)已確定GLP-1的同工型(GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36))具有促胰島素活性，即它們調(diào)節(jié)葡萄糖代謝，所述GLP-1的同工型源于腸和后腦內(nèi)的前胰高血糖素原(preproglucagon)。DPIV切割所述同工型使肽失活。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抑制劑可通過(guò)干擾生物活性的GLP-1肽來(lái)激動(dòng)促胰島素活性。
(iii).其它肽激素效應(yīng)的激動(dòng)作用在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明藥物可用于激動(dòng)(例如模擬或加強(qiáng))肽激素(如GLP-2、GIP和NPY)的活性。
為進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明提供一種激動(dòng)GLP-2的作用的方法。已確定GLP-2作為營(yíng)養(yǎng)劑可促進(jìn)胃腸組織的生長(zhǎng)。GLP-2的效應(yīng)的標(biāo)志是增強(qiáng)小腸的生長(zhǎng)，因此，在此稱(chēng)為“促小腸”作用劑。已知DPIV切割GLP-2，使之轉(zhuǎn)化成無(wú)生物活性的肽。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，DPIV的抑制干擾GLP-2的降解，由此增加該激素的血漿半壽期。
在其它實(shí)施方案中，可用本發(fā)明方法增加諸如以下的其它胰高血糖素原衍生肽的半壽期腸高血糖素、泌酸調(diào)節(jié)素、腸高血糖素相關(guān)胰腺多肽(GRPP)和/或干涉肽-2(IP-2)。例如，腸高血糖素已被證實(shí)能引起腸粘膜的增殖，還能抑制胃的蠕動(dòng)，因此，已被闡明可用作消化道疾病的治療劑，從而構(gòu)成本發(fā)明的主要方面。
因此，一方面，本發(fā)明涉及抑制劑促進(jìn)胃腸組織(特別是小腸組織)生長(zhǎng)和增殖的治療用途及相關(guān)用途。例如，可將本發(fā)明方法用作部分治療方案，用于治療腸道組織的損傷、炎癥或切除，例如當(dāng)要求增強(qiáng)腸粘膜上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和修復(fù)時(shí)。
對(duì)于小腸組織，可對(duì)比未治療的對(duì)照組，通過(guò)小腸質(zhì)量和長(zhǎng)度的增加方便的測(cè)定這種生長(zhǎng)。本發(fā)明抑制劑對(duì)小腸的作用也可通過(guò)腸腺加小腸絨毛軸的高度的增加證明。在此將這種活性稱(chēng)為“促小腸”活性。本發(fā)明方法的功效還可根據(jù)腸腺細(xì)胞增殖的增強(qiáng)和/或小腸上皮細(xì)胞凋亡的降低來(lái)檢測(cè)。相對(duì)于空腸(包括末梢空腸和特別的近側(cè)空腸)以及末梢回腸，這些細(xì)胞作用最為明顯。當(dāng)用化合物治療(或遺傳工程表達(dá)其本身)時(shí)，如果試驗(yàn)動(dòng)物呈現(xiàn)明顯的小腸質(zhì)量增加、腸腺加小腸絨毛軸的高度增加、或者腸腺細(xì)胞增殖的增強(qiáng)、或者小腸上皮細(xì)胞凋亡降低，那么認(rèn)定該化合物具有“促小腸”活性。測(cè)定這種胃腸道生長(zhǎng)的適合的模型在美國(guó)專(zhuān)利5,834,428中描述。
通常來(lái)講，受益于小腸質(zhì)量增加及隨之產(chǎn)生的小腸粘膜功能增加的患者是用本發(fā)明方法治療的候選者。可治療的具體病癥包括各種形式的口炎性腹瀉，包括由小麥的α-麥醇溶蛋白的毒性反應(yīng)導(dǎo)致的腹腔口炎性腹瀉，其標(biāo)志是腸絨毛的大量喪失；由感染導(dǎo)致的熱帶口炎性腹瀉，其標(biāo)志是腸絨毛的部分變平；低丙種球蛋白血癥性口炎性腹瀉，其通常發(fā)現(xiàn)于患有常見(jiàn)可變性免疫缺陷或低丙種球蛋白血癥的患者中，其標(biāo)志是腸絨毛高度明顯降低。這種治療的治療功效可通過(guò)腸的活組織切片檢查腸絨毛的形態(tài)學(xué)、通過(guò)營(yíng)養(yǎng)吸收的生化評(píng)價(jià)、通過(guò)患者體重增加或者通過(guò)緩解與這些癥病相關(guān)的癥狀來(lái)監(jiān)測(cè)。可通過(guò)本發(fā)明方法治療的或者可用本發(fā)明方法預(yù)防的其它病癥包括放射性腸炎、感染性或感染后腸炎、局限性腸炎(節(jié)段性回腸炎(Crohn’s disease))、毒性藥物或其它化療藥物引起的小腸損傷以及具有短腸綜合征的患者。
更通常來(lái)講，本發(fā)明提供一種治療消化道疾病的治療方法。本文所用的術(shù)語(yǔ)“消化道”是指食物經(jīng)過(guò)的管道，包括胃和腸。本文所用的術(shù)語(yǔ)“消化道疾病”是指伴隨消化道粘膜性質(zhì)或數(shù)量上異常的疾病，包括例如潰瘍或炎性疾?。幌忍煨曰颢@得性消化和吸收疾病，包括吸收障礙綜合征；由腸道的粘膜屏障功能喪失引起的疾??；蛋白損失性胃腸病。所述潰瘍性疾病包括，例如胃潰瘍、十二指腸潰瘍、小腸潰瘍、結(jié)腸潰瘍和直腸潰瘍。炎性疾病包括，例如食道炎、胃炎、十二指腸炎、腸炎、結(jié)腸炎、節(jié)段性回腸炎、直腸炎、胃腸貝切特氏病、放射性腸炎、放射性結(jié)腸炎、放射性直腸炎、腸炎和藥物性腸炎。吸收障礙綜合征包括特發(fā)性吸收障礙綜合征，如二糖酶分解缺乏癥、葡萄糖-半乳糖吸收障礙、果糖吸收障礙；繼發(fā)性吸收障礙綜合征，如在靜脈或胃腸外營(yíng)養(yǎng)或基本飲食通過(guò)的消化道中的粘膜萎縮所引起的疾病、小腸的切除和分流引起的疾病，如短腸綜合征、盲管綜合征；消化不良的吸收障礙綜合征，如胃切除引起的疾病，如傾倒綜合征。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“消化道疾病的治療劑”是指預(yù)防和治療消化道疾病的藥物，包括例如消化道潰瘍的治療劑、炎癥性消化道疾病的治療劑、消化道粘膜萎縮的治療劑、消化道創(chuàng)傷的治療劑、消化道功能的改善劑，包括粘膜屏障功能的復(fù)原劑和消化和吸收功能的改善劑。潰瘍包括消化性潰瘍和侵蝕以及急性潰瘍，稱(chēng)之為急性粘膜病變。
本發(fā)明方法因?yàn)槟艽龠M(jìn)腸粘膜的增殖，所以可用于治療和預(yù)防消化和吸收缺陷的病理病癥，即治療和預(yù)防粘膜萎縮、或治療消化道組織的發(fā)育不良和手術(shù)切除引起的這些組織的損失，以及改善消化和吸收功能。另外，可用本發(fā)明方法治療由炎性疾病(如腸炎、節(jié)段性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)導(dǎo)致的病理性粘膜病癥，而且還用于治療手術(shù)后消化道功能的降低(例如傾倒綜合征)以及用于治療與抑制胃蠕動(dòng)和食物從胃迅速遷移到空腸關(guān)聯(lián)的十二指腸潰瘍。另外，腸高血糖素可有效地用于促進(jìn)手術(shù)侵襲的痊愈以及改善消化道的功能。因此，本發(fā)明還提供治療消化道粘膜萎縮的藥物、治療消化道傷口的藥物以及改善消化道功能的藥物，包含作為活性成分的腸高血糖素。
同樣地，本發(fā)明的抑制劑可用于改變胰泌素、VIP、PHI、PACAP、GIP和/或毒蜥皮肽的血漿半壽期。另外，本發(fā)明方法可用于改變肽YY和神經(jīng)肽Y的藥代動(dòng)力學(xué)，兩者都是胰多肽家族的成員，而DPIV一直與以改變受體選擇性的方式進(jìn)行的那些肽的過(guò)程有關(guān)。
現(xiàn)認(rèn)為神經(jīng)肽Y(NPY)在調(diào)節(jié)血管平滑肌正常伸縮性以及調(diào)節(jié)血壓中發(fā)揮作用。NPY還能降低心臟的收縮性。NPY還是已知的功能最強(qiáng)的食欲刺激劑(Wilding等，(1992)J Endocrinology132299-302)。中樞性喚起攝取食物(刺激食欲)的作用主要由NPY Y1受體介導(dǎo)，并能引起體脂肪貯存的增加和肥胖(Stanley等，(1989)Physiology andBehavior46173-177)。
本發(fā)明治療厭食癥的方法包括給予宿主受試者能刺激食欲和增加體脂肪貯存，由此基本緩解厭食癥癥狀的有效量的抑制劑。
治療低血壓的方法包括給予宿主受試者能介導(dǎo)血管收縮和升高血壓，由此基本緩解低血壓癥狀的有效量的本發(fā)明抑制劑。
DPIV還涉及生長(zhǎng)激素釋放因子(GHRF)的代謝和失活。GHRF是同源性肽家族的一員，它包括胰高血糖素、胰泌素、血管活性腸肽(VIP)、肽組氨酸異亮氨酸(PHI)、垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)、胃抑肽(GIP)和毒蜥皮肽(Kubiak等，(1994)Peptide Res7153)。GHRF由下丘腦分泌，并刺激由垂體前葉釋放生長(zhǎng)激素(GH)。因此，本發(fā)明方法可用于改善某些生長(zhǎng)激素缺陷兒童的臨床治療，并可用于成人的臨床治療以改善營(yíng)養(yǎng)并改變身體組成(肌肉與脂肪)。本發(fā)明方法還可用于獸醫(yī)實(shí)踐中，例如研制產(chǎn)奶量高的家畜和快速生長(zhǎng)的瘦肉型家畜。
(iv).促胰島素活性試驗(yàn)在選擇適用于本發(fā)明方法的化合物時(shí)，注意到化合物的促胰島素性質(zhì)可通過(guò)將所述化合物提供給動(dòng)物細(xì)胞或者給動(dòng)物注射該化合物，然后監(jiān)測(cè)免疫反應(yīng)性胰島素(IRI)分別進(jìn)入動(dòng)物的中膜或循環(huán)系統(tǒng)來(lái)測(cè)定。IRI的存在可通過(guò)使用可特異性檢測(cè)胰島素的放射性免疫試驗(yàn)來(lái)測(cè)定。
db/db小鼠是一種患有遺傳性肥胖癥和糖尿病的小鼠。該db/db小鼠患有高血糖癥和高胰島素血癥并伴有肥胖癥，因此，用作肥胖2型糖尿病(NIDDM)的模型。db/db小鼠購(gòu)自例如The Jackson Laboratories(Bar Harbor，Me.)。在示例性的實(shí)施方案中，治療方案中的小鼠包括抑制劑組和對(duì)照組，在給予各動(dòng)物用藥前和用藥后某時(shí)間(如60分鐘)，取眶下竇血制備血樣。然后通過(guò)任何的幾種常規(guī)技術(shù)測(cè)定血糖，如使用血糖儀。比較對(duì)照組和抑制劑給藥組動(dòng)物的血糖水平。
外源性GLP-1的代謝結(jié)果還取決于非糖尿病或II型糖尿病患者以及確定的候選抑制劑的作用。例如，可聯(lián)合使用高壓液相色譜(HPLC)、特異性放射免疫試驗(yàn)(RIA)以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，測(cè)定GLP-1完整的生物學(xué)活性及其代謝物。參見(jiàn)，例如Deacon等，(1995)Diabetes441126-1131。例如，在給予GLP-1后，使用NH2端檢測(cè)的RIA或ELISA測(cè)定該全肽，同時(shí)這些試驗(yàn)和COOH端特異性的RIA之間的濃度之差使得測(cè)定了NH2端截短的代謝物。無(wú)抑制劑情況下，皮下GLP-1以時(shí)間依賴(lài)方式快速降解，形成在HPLC上與GLP-1(9-36)酰胺共同洗脫并具有相同免疫反應(yīng)性性質(zhì)的代謝物。例如，將GLP-1皮下給予糖尿病患者(n＝8)后30分鐘，經(jīng)COOH端RIA測(cè)定，代謝物在血漿免疫反應(yīng)性中增加88.5+1.9％，它高于在健康受試者中測(cè)定的水平(78.4+3.2％；n＝8；P＜0.05)。參見(jiàn)Deacon等，出處同上。靜脈輸注的GLP-1也顯著降解。
(v).聯(lián)合給藥本發(fā)明的另一方面提供一種聯(lián)合療法，其中將一種或多種其它的治療劑與所述蛋白酶抑制劑一同給藥。這種聯(lián)合療法可通過(guò)將治療的各組分同時(shí)、序貫或獨(dú)立給藥實(shí)現(xiàn)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，可將抑制劑與胰島素或其它促胰島素藥物共同給藥，其它促胰島素藥物例如GLP-1、肽激素、如GLP-2、GIP或NPY，或者可引起所述藥物和肽激素異位表達(dá)的基因治療載體。在某些實(shí)施方案中，所述藥物和肽激素可以是天然存在或合成的肽激素的各種變體，其中已被添加、缺失或取代了一個(gè)或多個(gè)氨基酸。
在另一說(shuō)明性的實(shí)施方案中，可將本發(fā)明抑制劑與M1受體拮抗劑聯(lián)合給藥。類(lèi)膽堿能藥物是有效的胰島素釋放的調(diào)節(jié)劑，其通過(guò)蕈毒堿受體發(fā)揮作用。另外，使用這種藥物可具有降低膽固醇水平同時(shí)增加HDL水平的附加的益處。適合的蕈毒堿受體拮抗劑包括直接或間接阻斷蕈毒堿膽堿能受體的活化的物質(zhì)。優(yōu)選這些物質(zhì)對(duì)M1受體具有選擇性(或者以促進(jìn)這種選擇性的量應(yīng)用)。非限制性的實(shí)例包括季銨(如甲胺太林、異丙脫銨和丙胺太林)、叔胺(例如雙環(huán)胺和東莨菪堿)和三環(huán)胺(如替侖西平)。優(yōu)選哌侖西平和甲基東莨菪堿。其它適合的蕈毒堿受體拮抗劑包括苯扎托品(由Merck提供的COGENTIN)、hexahydro-sila-difenidol鹽酸鹽(HHSID鹽酸鹽，公開(kāi)于Lambrecht等(1989)Trends in Pharmacol.Sci.10(增刊)60；(+/-)-3-奎寧環(huán)基呫噸-9-羧酸半草酸鹽(QNX-半草酸鹽；Birdsall等，Trends inPharmacol.Sci.4459，1983；替侖西平二鹽酸鹽(Coruzzi等，(1989)Arch.Int Pharmacodyn.Ther.302232；Kawashima等(1990)Gen.Pharmacol.2117)以及阿托品。一般根據(jù)以上所述最優(yōu)化所述蕈毒堿受體拮抗劑的劑量。在脂質(zhì)代謝疾病的情況下，最優(yōu)化的劑量可能必須獨(dú)立于是否根據(jù)脂質(zhì)代謝應(yīng)答性期限安排的給藥時(shí)間。
在調(diào)節(jié)胰島素和脂質(zhì)代謝和減少前述疾病方面，本發(fā)明抑制劑還可與催乳激素抑制劑協(xié)同作用，如d2多巴胺激動(dòng)劑(如溴隱亭)。因此，本發(fā)明方法可包括將抑制催乳激素的麥角生物堿等催乳激素抑制劑和抑制催乳激素的多巴胺激動(dòng)劑聯(lián)合使用。適合的化合物的實(shí)例包括2-溴-α-麥角隱亭、6-甲基-8β-羰基芐氧基氨基乙基-10-α-麥角新堿、8-?；被溄切聣A、6-甲基-8-α-(N-?；?氨基-9-麥角新堿、6-甲基-8-α-(N-苯基乙?；?氨基-9-麥角新堿、麥角柯寧堿、9，10-二氫麥角柯寧堿、D-2-鹵代-6-烷基-8-取代的麥角新堿、D-2-溴-6-甲基-8-氰基甲基麥角新堿、卡比多巴、芐絲肼和其它多巴脫羧酶抑制劑、L-多巴、多巴胺及其無(wú)毒性鹽。
還可將本發(fā)明的抑制劑與作用于β-細(xì)胞的ATP-依賴(lài)性鉀通道的藥物聯(lián)合使用，如格列本脲、格列吡嗪、格列齊特和AG-EE 623 ZW。所述抑制劑還利于與其它口服藥物聯(lián)合使用，如二甲雙胍和相關(guān)的化合物或葡糖苷酶抑制劑(如阿卡波糖)。
(vi).藥物組合物根據(jù)本領(lǐng)域熟知的因素，依據(jù)所治療的疾病和患者的年齡、病癥和體重，可將按本發(fā)明所述制備的抑制劑以各種形式進(jìn)行給藥。例如，當(dāng)將所述化合物口服給予時(shí)，可將其制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑或糖漿劑；進(jìn)行胃腸外給藥時(shí)，可將它們制成注射劑(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)、滴注制劑或栓劑。對(duì)于眼粘膜途徑應(yīng)用，可將它們制成滴眼劑或眼用軟膏?？赏ㄟ^(guò)常規(guī)途徑制備這些制劑，并且如果需要，可將活性成份與任何如下的常規(guī)添加劑混合，如賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、助溶劑、助懸劑、乳化劑或者包衣劑。雖然劑量隨病癥、患者的年齡和體重、所治療或預(yù)防的疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性、給藥途徑以及藥物的形式而變化，但通常來(lái)講，對(duì)于成人患者，推薦的所述化合物的日劑量為0.01-2000mg，可將其以單劑量或分劑量進(jìn)行給藥。
給藥的準(zhǔn)確時(shí)間和/或就治療效果來(lái)講對(duì)所給藥的患者產(chǎn)生最大有效效果的抑制劑的量將依據(jù)具體的化合物的活性、藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度、患者的生理?xiàng)l件(包括年齡、性別、疾病類(lèi)型和階段、通常的身體情況、所給劑量的反應(yīng)和藥物的類(lèi)型)、給藥途徑等變化。但是，以上指導(dǎo)原則可用作精密調(diào)整治療的基礎(chǔ)，例如確定給藥的最適時(shí)間和/或量，這將只需要由監(jiān)測(cè)患者和調(diào)節(jié)劑量和/或時(shí)間組成的常規(guī)試驗(yàn)。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指在合理的醫(yī)療判斷范圍內(nèi)適用于接觸人體組織和動(dòng)物組織而沒(méi)有過(guò)度的毒性、刺激性、變態(tài)反應(yīng)或其它問(wèn)題或并發(fā)癥、而且具有合理利益/風(fēng)險(xiǎn)比的那些配體、物質(zhì)、組合物和/或劑型。
本文所用的短語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”是指藥學(xué)上可接受的物質(zhì)、組合物或溶媒，如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包囊材料。各載體必須是“可接受的”，即各載體與制劑的其它組分要相容，并對(duì)患者無(wú)損害。可用作藥學(xué)上可接受的載體的某些物質(zhì)的實(shí)例包括(1)糖類(lèi)，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉類(lèi)，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)粉狀西黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，如可可脂和栓劑用蠟；(9)油類(lèi)，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二元醇類(lèi)，如丙二醇；(11)多元醇類(lèi)，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯類(lèi)，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無(wú)熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖液；和(21)用于藥物制劑的其它無(wú)毒相容性物質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是無(wú)熱原的，即當(dāng)給予患者時(shí)不產(chǎn)生明顯的體溫升高。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指所述抑制劑的相對(duì)無(wú)毒的、無(wú)機(jī)和有機(jī)的酸加成鹽。這些鹽可在所述抑制劑的最后分離和純化過(guò)程中原位制備，或者通過(guò)使純的游離堿形式的抑制劑與適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)，然后分離形成的鹽來(lái)分離制備。代表性的鹽包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、萘甲酸鹽、甲磺酸鹽、葡糖庚酸鹽、乳二糖酸鹽和十二烷基磺酸鹽等(參見(jiàn)例如Berge等(1977)″Pharmaceutical Salts″，J Pharm.Sci.661-19)。
在其它情況下，本發(fā)明方法中所用的抑制劑可含有一個(gè)或多個(gè)酸性官能團(tuán)，因此能夠與藥學(xué)上可接受的堿形成藥學(xué)上可接受的鹽。這些情況下，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指抑制劑的相對(duì)無(wú)毒性的無(wú)機(jī)和有機(jī)堿加成鹽。這些鹽同樣可在抑制劑的最后分離和純化過(guò)程中原位制備、或者通過(guò)使純化的游離酸形式的抑制劑與適合的堿反應(yīng)制備，適合的堿如藥學(xué)上可接受的金屬陽(yáng)離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽、氨或藥學(xué)上可接受的有機(jī)伯、仲或叔胺。代表性的堿金屬或堿土金屬鹽包括鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和鋁鹽等。用于形成堿加成鹽的代表性的有機(jī)胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(參見(jiàn)例如Berge等，出處同上)。
組合物中還可存在潤(rùn)濕劑、乳化劑和潤(rùn)滑劑，如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和香味劑、防腐劑和抗氧劑。
藥學(xué)上可接受的抗氧劑的實(shí)例包括(1)水溶性抗氧劑，如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)脂溶性抗氧劑，如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁羥茴醚(BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒(méi)食子酸丙酯、α-生育酚等；(3)金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
本發(fā)明方法中所用的制劑包括那些適于口服、鼻腔、局部(包括頰內(nèi)和舌下)、直腸、陰道、氣霧和/或胃腸外給藥的劑型。這些劑型一般為單位劑量形式，可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域中熟知的任何方法制備。與載體物質(zhì)混合產(chǎn)生單一劑型的活性成份的量將根據(jù)所治療的宿主和具體的給藥方式而定。與載體物質(zhì)混合產(chǎn)生單一劑型的活性成份的量通常為產(chǎn)生治療效應(yīng)的化合物的量。通常，以100％計(jì)，活性成份用量范圍約為1％-99％，優(yōu)選約5％-70％，最優(yōu)選約10％-30％。
制備這些劑型和組合物的方法包括將抑制劑與載體以及任選的一種或多種輔助成份混合的步驟。通常，通過(guò)將配體與液體載體或者細(xì)微固體載體、或者兩種載體均勻而密切地混合在一起，然后，必要時(shí)，使產(chǎn)物成型，從而制備所述制劑。
適于口服給藥的劑型可以是膠囊劑、扁囊劑、丸劑、片劑、錠劑(使用矯味基質(zhì)，通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠)、粉劑、顆粒劑形式，或者作為水性或非水性液體中的溶液或混懸液形式、或者作為水包油或油包水液體乳劑形式、或者作為酏劑或糖漿劑形式、或者作為糊劑形式(使用惰性基質(zhì)，如明膠或甘油、或蔗糖和阿拉伯膠)和/或漱口劑等，上述各劑型均包含預(yù)定量的作為活性成份的抑制劑。還可將化合物以推注劑、干藥糖劑或糊劑形式給藥。
在口服固體劑型中(膠囊劑、片劑、丸劑、錠劑、粉劑、顆粒劑等)，可將所述活性組分與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體混合，如檸檬酸鈉、磷酸二鈣和/或任何下列組分(1)填充劑或增量劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合劑，如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)增濕劑，如甘油；(4)崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉、木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉；(5)溶液延遲劑，如石蠟；(6)吸收加速劑，如季銨化合物；(7)潤(rùn)濕劑，如乙?；己蛦斡仓岣视椭?8)吸收劑，如高嶺土和皂土；(9)潤(rùn)滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉及其混合物；和(10)著色劑。就膠囊劑、片劑和丸劑而言，所述藥物組合物還可包含緩沖劑。使用諸如乳糖或奶糖以及高分子量的聚乙二醇等賦形劑，還將類(lèi)似類(lèi)型的固體組合物用作為軟和硬填充明膠膠囊的填充劑。
片劑可通過(guò)任選與一種或多種附加的組分壓制或模制制備。壓制片可采用以下物質(zhì)制備粘合劑(如明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如淀粉乙醇酸鈉或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑。可以在適合的機(jī)器中，通過(guò)使用潤(rùn)濕的所述粉狀肽或肽模擬物與惰性液體稀釋劑的混合物進(jìn)行模制，制備模制片劑。
可用包衣和殼，如腸衣和制劑領(lǐng)域熟知的其它包衣，任選將片劑和其它諸如錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型刻痕或制備包衣片。還可將它們制成提供緩釋或控釋其中活性組分的劑型，采用諸如不同比例的以提供所要求的釋放方式的羥丙基甲基纖維素、其它的聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球。這些制劑的滅菌可通過(guò)例如經(jīng)保留細(xì)菌的濾器過(guò)濾或者通過(guò)將滅菌劑加入到無(wú)菌固體組合物進(jìn)行，所述無(wú)菌固體組合物在使用前將其溶解于無(wú)菌水或其它無(wú)菌注射用溶媒中使用。這些組合物還可任選含有乳濁劑，或者可以是僅在或優(yōu)先在胃腸道的某一部分，任選以延遲的方式釋放活性組分的組合物。可使用的包埋組合物的實(shí)例包括聚合物和蠟。還可將活性成分制成微囊形式，如果適合，可含有一種或多種上述的賦形劑。
口服液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除活性成分外，所述液體劑型可包含本領(lǐng)域常用的液體稀釋劑，如水或其它溶劑、助溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油類(lèi)(特別是棉籽油、花生油、玉米油、麥芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脂肪酸山梨醇酯及其混合物。
除惰性稀釋劑外，口服組合物還可包括諸如以下添加劑潤(rùn)濕劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、矯味劑、著色劑、香味劑和防腐劑。
除活性成分外，混懸劑可包含懸浮劑，如乙氧基化異硬脂基醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤(rùn)土、瓊脂和西黃蓍膠及其混合物。
直腸和陰道給藥的制劑可以為栓劑形式，其可通過(guò)將一種或多種抑制劑與一種或多種適合的非刺激性的賦形劑或載體(例如包括可可脂、聚乙二醇、栓劑用蠟或水楊酸鹽)混合制備，所述栓劑室溫下為固體，但在體溫下為液體，因此可在直腸或陰道內(nèi)融化并釋放活性劑。
適于陰道給藥的制劑還包括陰道栓劑、棉塞、霜?jiǎng)?、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑，其包含本領(lǐng)域適合此類(lèi)的載體。
抑制劑的局部或經(jīng)皮給藥的劑型包括粉劑、噴霧劑、軟膏劑、糊劑、霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠劑、溶液劑、貼劑和吸入劑?？稍跓o(wú)菌條件下，將活性成分與藥學(xué)上可接受的載體以及可能需要的任何防腐劑、緩沖劑或拋射劑混合。
軟膏劑、糊劑、霜?jiǎng)┖湍z劑除含有抑制劑外，還可含有賦形劑，如動(dòng)物和植物脂肪、油類(lèi)、蠟類(lèi)、石蠟、淀粉、西黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨潤(rùn)土、硅酸、滑石粉和氧化鋅及其混合物。
除含有抑制劑外，粉劑和噴霧劑還可含有賦形劑，如乳糖、滑石粉、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末及這些物質(zhì)的混合物。噴霧劑還可含有常用的拋射劑，如氯氟烴和揮發(fā)性未取代的烴，如丁烷和丙烷。
所述抑制劑還可經(jīng)氣霧劑給藥。這可通過(guò)制備含有所述化合物的氣霧劑水溶液、脂質(zhì)體制劑或固體顆粒實(shí)現(xiàn)?？墒褂梅撬?如碳氟拋射劑)的混懸液。優(yōu)選聲波噴霧器，原因是它們最小程度地使藥物暴露于可引起化合物降解的剪應(yīng)力下。
通常來(lái)講，水性氣霧劑可通過(guò)將所述藥物與常規(guī)藥學(xué)上可接受的載體和穩(wěn)定劑的水溶液或懸浮液制成制劑來(lái)制備。載體和穩(wěn)定劑隨所要求的具體化合物而變化，但通常包括非離子型表面活性劑(吐溫類(lèi)、普朗尼克類(lèi)或聚乙二醇)、無(wú)毒的蛋白質(zhì)(血清白蛋白)、山梨聚糖酯、油酸、卵磷脂、氨基酸(如甘氨酸)、緩沖液、鹽、糖或糖醇。氣霧劑通常用等張溶液制備。
經(jīng)皮貼劑具有控制抑制劑轉(zhuǎn)運(yùn)至體內(nèi)的附加的優(yōu)點(diǎn)。這種劑型可通過(guò)將所述藥物溶解或分散于適當(dāng)?shù)娜苊街兄苽?。還可用吸收增強(qiáng)劑增強(qiáng)抑制劑透過(guò)皮膚的流動(dòng)。這種流動(dòng)速率受提供的膜控制速率或分散所述肽模擬物于聚合物基質(zhì)或凝膠的速率所控制。
本發(fā)明范圍內(nèi)還包括眼用制劑、眼用軟膏劑、粉劑、溶液劑等。
適用于胃腸外給藥的本發(fā)明藥物組合物包括一種或多種抑制劑和與之混合的一種或多種藥學(xué)上可接受的無(wú)菌等滲水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液，或者使用前可配制成無(wú)菌注射溶液或分散液的無(wú)菌粉末，其可包含抗氧劑、緩沖劑、抗菌劑、使該制劑與所指定的受體的血液等滲的溶質(zhì)、或者懸浮劑或增稠劑。
可用于本發(fā)明藥物組合物中的適合的水性和非水性載體的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其適合的混合物、植物油類(lèi)(如橄欖油)和注射用有機(jī)酯(如油酸乙酯)。諸如通過(guò)使用包衣物質(zhì)(如卵磷脂)、通過(guò)保持分散液中所要求的顆粒體積以及通過(guò)使用表面活性劑，可保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。
這些組合物還可包括添加劑，如防腐劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑和分散劑。預(yù)防微生物的作用可通過(guò)加入各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑保證，如加入對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。還可能在組合物中要求加入包括等滲劑，如糖、氯化鈉等。另外，可通過(guò)加入延遲釋放的試劑(如單硬脂酸鋁和明膠)，可將所述注射藥物延遲釋放。
在某些情況下，為延長(zhǎng)藥效，最好延緩藥物從皮下或肌內(nèi)注射的吸收。這可通過(guò)使用具有水溶性差的晶體或無(wú)定型物的液體混懸液實(shí)現(xiàn)。然后，該藥物的吸收速率取決于其溶出率，而溶出率又取決于晶體大小和晶型?；蛘?，通過(guò)將經(jīng)胃腸外給予的藥物溶解或懸浮于油性溶媒中，達(dá)到藥物的延遲吸收。
注射用貯庫(kù)劑型可通過(guò)將抑制劑加于生物降解聚合物(如聚交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide))中形成微囊制備。根據(jù)藥物與聚合物的比率以及所用的具體聚合物的性質(zhì)，可以控制藥物釋放的速率。其它可生物降解的聚合物的實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。貯庫(kù)型注射制劑還可通過(guò)將藥物包封在與體內(nèi)組織相容的脂質(zhì)體或微乳中制備。
當(dāng)將本發(fā)明的抑制劑作為藥物給予人和動(dòng)物時(shí)，可將所述抑制劑本身或者作為藥物組合物給予，所述藥物組合物含有例如0.1-99.5％(更優(yōu)選0.5-90％)的活性成份以及藥學(xué)上可接受的載體。
可將所述藥物制劑經(jīng)口服、胃腸外、局部或直腸給藥。當(dāng)然，它們是以適于各自給藥途徑的形式給出。例如，可將它們以片劑或膠囊劑形式、通過(guò)注射、吸入、洗眼液、軟膏、栓劑、輸液給藥；通過(guò)洗液或軟膏局部給藥；通過(guò)栓劑給藥。優(yōu)選口服給藥。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“胃腸外給藥”和“胃腸外給予”是指不是胃腸內(nèi)和局部給藥的給藥方式，通常通過(guò)注射給藥，包括但不限于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)和胸骨內(nèi)注射及輸注。
本文中所用術(shù)語(yǔ)“全身給藥”、“外周給藥”是指將配體、藥物或其它物質(zhì)不直接給予中樞神經(jīng)系統(tǒng)，而使其進(jìn)入患者系統(tǒng)內(nèi)，以此進(jìn)行代謝和其它類(lèi)似過(guò)程，例如，皮下注射給藥。
可將這些抑制劑通過(guò)以下任何適合的給藥途徑給予所治療的人和其它動(dòng)物，所述途徑包括口服、鼻內(nèi)、經(jīng)諸如噴霧、直腸、陰道內(nèi)、胃腸外、腦池內(nèi)以及局部途徑，如以粉劑、軟膏劑或滴劑途徑，包括頰內(nèi)和舌下途徑。
除可選擇給藥途徑外，還可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法，將可用于適合的水合物形式的所述抑制劑和/或本發(fā)明的藥物組合物制成藥學(xué)上可接受的劑型。
可改變本發(fā)明藥物組合物中活性組分的準(zhǔn)確劑量水平，以得到能對(duì)具體患者、組合物和給藥方式達(dá)到所要求的治療反應(yīng)，同時(shí)對(duì)患者不產(chǎn)生毒性的所述活性組分的量。
VI實(shí)施例現(xiàn)正概述的本發(fā)明很易通過(guò)下列實(shí)施例進(jìn)一步清楚，所包括的實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明的某些方面和實(shí)施方案之目的，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1DPIV抑制試驗(yàn)抑制劑溶液的制備將3-5mg抑制劑溶解于pH 2溶液(0.01N HCl)中，使得該溶液的濃度等于1mg/10μl。然后將10μl該溶液樣品加入到990μl的pH 8緩沖液(0.1M HEPES，0.14M NaCl)中，之后將該溶液室溫放置過(guò)夜。
酶溶液的制備將20μl的DPIV(濃度2.5μM)稀釋到40mL的pH 8緩沖液中。
底物溶液的制備將2.0mg的L-丙氨酰-L脯氨酸-對(duì)硝基酰苯胺溶解于20mL的pH 8緩沖液中。
將250μl酶溶液加入到96孔板的#B1至#H1、#A2至#H2以及#A3至#H3孔中，同時(shí)在#A1中加入250μl pH8緩沖液代替酶溶液。然后將90μl pH8緩沖液加入5列孔中(從孔#A5至#H5)。
然后通過(guò)向#A5孔中加入抑制劑溶液進(jìn)行1∶10稀釋?zhuān)瑢⒃撊芤撼浞只旌?，然后?A5孔中的10μl溶液轉(zhuǎn)移至#B5中。再將#B5中的溶液充分混合，然后將#B5孔中的10μl溶液轉(zhuǎn)移至#C5中。再將#C5中的溶液充分混合，然后將#C5孔中的10μl溶液轉(zhuǎn)移至#D5中。再將#D5中的溶液充分混合，然后將#D5孔中的10μl溶液轉(zhuǎn)移至#E5中。再將#E5中的溶液充分混合，然后將#E5孔中的1 0μl溶液轉(zhuǎn)移至#F5中。再將#F5中的溶液充分混合，然后將#F5孔中的10μl溶液轉(zhuǎn)移至#G5中。再將#G5中的溶液充分混合，然后將#G5孔中的10μl溶液轉(zhuǎn)移至#H5中。
將H5中的30μl等分溶液轉(zhuǎn)移至H行的#H3中，將內(nèi)容物充分混合。對(duì)G、F、E、D、C、B和A行重復(fù)進(jìn)行類(lèi)似的操作。然后在搖板器上將該板振搖5分鐘，隨后在室溫下將該板孵育5分鐘。
待該板被孵育后，立即向各孔中加入30μl底物，#A1除外。然后將該板置于搖板器上5分鐘，隨后在室溫下將該板孵育25分鐘。然后立即在410nm波長(zhǎng)處讀取吸光度。
采用上述試驗(yàn)，在pH 8處測(cè)定的化合物的IC50值如下所示
化合物IC50A 11μMB 40nMC 0.34μMD 34nME 23nMF 69μMG 6.7nMI 25nMJ 1.9nMK 36nMM 2.6nMN 3.0nMO 0.63μMP 2.1nMQ 9.9nMIV.等同實(shí)施方案本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到或者能夠確定采用常規(guī)的實(shí)驗(yàn)，即可得到本文所述的本發(fā)明具體實(shí)施方案很多等同實(shí)施方案。這些等同實(shí)施方案的內(nèi)容涵蓋在所附權(quán)利要求書(shū)中。
以上引用的所有參考文獻(xiàn)和出版物均通過(guò)引用結(jié)合到本文之中作為參考。
權(quán)利要求
1.一種具有下式結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1選自H、烷基、烷氧基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、?；被⑶杌?、磺?；被?、酰氧基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基和1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；R2和R3獨(dú)立選自H、低級(jí)烷基、環(huán)烷基和芳烷基；或者R2和R3與它們所連接的原子一起形成4-6元雜環(huán)；R4和R5獨(dú)立選自H、鹵素和烷基，或者R4和R5與它們所連接的碳原子一起形成3-6元碳環(huán)或雜環(huán)；R6為與靶蛋白酶的活性部位殘基反應(yīng)形成共價(jià)加合物的官能團(tuán)；R7不存在或者為A環(huán)上的一個(gè)或多個(gè)取代基，所述各取代基獨(dú)立選自H、低級(jí)烷基、低級(jí)烯基、低級(jí)炔基、羥基、氧代、醚、硫醚、鹵素、羰基、硫代羰基、氨基、酰氨基、氰基、硝基、疊氮基、烷基氨基、酰基氨基、氨基酰基、氰基、硫酸酯基、磺酸酯基、磺?；?、磺?；被?、氨基磺?；⑼檠趸驶?、酰氧基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基和1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；R8選自H、芳基、烷基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜芳基、雜芳烷基和1-8個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈；L不存在或者選自烷基、烯基、炔基、-(CH2)mO(CH2)m-、-(CH2)mNR2(CH2)m-和-(CH2)mS(CH2)m-；X不存在或者選自-N(R8)-、-O-和-S-；Y不存在或者選自-C(＝O)-、-C(＝S)-和-SO2-；m每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為0-10的整數(shù)；n為0-3的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R6選自氰基、硼酸、-SO2Z1、-P(＝O)Z1、-P(＝R9)R10R11、-C(＝NH)NH2、-CH＝NR12和-C(＝O)-R12，其中R9為O或S；R10選自N3、SH2、NH2、NO2和OLR13，和R11選自低級(jí)烷基、氨基、OLR13，或者R10和R11與它們所連接的磷原子一起形成5-8元雜環(huán)；R12選自H、烷基、烯基、炔基、-(CH2)p-R13、-(CH2)q-OH、-(CH2)q-O-烷基、-(CH2)q-O-烯基、-(CH2)q-O-炔基、-(CH2)q-O-(CH2)p-R13、-(CH2)q-SH、-(CH2)q-S-烷基、-(CH2)q-S-烯基、-(CH2)q-S-炔基、-(CH2)q-S-(CH2)p-R13、-C(O)NH2、-C(O)OR14和C(Z1)(Z2)(Z3)；R13選自H、烷基、烯基、芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基和雜環(huán)基；R14選自H、烷基、烯基和LR13；Z1為鹵素；Z2和Z3獨(dú)立選自H或鹵素；p每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為0-8的整數(shù)；q每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地為1-8的整數(shù)。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R6為式-B(Y1)(Y2)基團(tuán)，其中Y1和Y2獨(dú)立地為OH或者為能水解為OH的基團(tuán)，或者與它們所連接的硼原子一起形成能夠水解為硼酸的5-8元環(huán)。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是蛋白酶抑制劑。
5.權(quán)利要求5的抑制劑，其中所述蛋白酶抑制劑抑制二肽基肽酶IV(DPIV)，其Ki≤50nM。
6.具有口服活性的權(quán)利要求1的化合物。
7.一種藥物組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
8.權(quán)利要求1的化合物在制備用于抑制后脯氨酸裂解酶的藥物中的用途。
9.權(quán)利要求9的用途，其中所述化合物增加肽激素的血漿濃度，所述肽激素選自胰高血糖素樣肽、神經(jīng)肽Y(NPY)、PPY、胰泌素、胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)、胰高血糖素樣肽-2(GLP-2)和胃抑肽(GIP)。
10.權(quán)利要求1的化合物在制備用于調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的藥物中的用途。
11.權(quán)利要求11的用途，用于調(diào)節(jié)患有下列疾病的患者的葡萄糖代謝II型糖尿病、胰島素抵抗、葡萄糖不耐癥、高血糖癥、低血糖癥、高胰島素血癥、肥胖癥、高脂血癥或高脂蛋白血癥。
12.一種抑制后脯氨酸裂解酶的蛋白水解活性的方法，該方法包括使所述酶與權(quán)利要求1的化合物接觸。
13.一種包裝藥品，它包含權(quán)利要求1的化合物的制劑和使用說(shuō)明書(shū)，說(shuō)明書(shū)上注明該制劑用于抑制后脯氨酸裂解酶。
14.一種包裝藥品，它包含權(quán)利要求1的化合物的制劑和使用說(shuō)明書(shū)，說(shuō)明書(shū)上注明該制劑用于調(diào)節(jié)葡萄糖代謝。
15.權(quán)利要求15的包裝藥品，其中可將所述化合物與胰島素、促胰島素藥物或它們兩者共同配制或共同包裝。
16.權(quán)利要求15的包裝藥品，其中可將所述化合物與一種或多種M1受體拮抗劑、催乳素抑制劑、作用于β-細(xì)胞的ATP-依賴(lài)性鉀通道的藥物、二甲雙胍和葡糖苷酶抑制劑共同配制或者共同包裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及后脯氨酸裂解酶抑制劑如二肽基肽酶IV抑制劑及其藥物組合物，并涉及這些抑制劑的使用方法。具體地講，本發(fā)明的抑制劑在該抑制劑的主鏈上摻入了內(nèi)酯環(huán)。本發(fā)明化合物具有較好的治療指數(shù)，部分原因是由于能降低毒性和/或改進(jìn)對(duì)靶蛋白酶的特異性。
文檔編號(hào)C07D207/26GK101090885SQ200580012500
公開(kāi)日2007年12月19日 申請(qǐng)日期2005年2月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月23日
發(fā)明者W·W·巴喬夫欽, H·-S·賴(lài), 吳問(wèn)根 申請(qǐng)人:塔夫茨大學(xué)信托人