專利名稱：作為蛋白激酶抑制劑的化合物和組合物的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考
本發(fā)明要求于2006年5月11日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)60/799,779的優(yōu)先權(quán)利益。該申請(qǐng)的全部公開內(nèi)容整體引入本文作為參考并用于所有目的。
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明提供了一類新的化合物、包含這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異?；蚴Э赜嘘P(guān)的疾病或紊亂、特別是涉及Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB激酶異常激活的疾病或紊亂的方法。
背景 蛋白激酶代表一大家族蛋白質(zhì)，其在調(diào)節(jié)廣泛多樣的細(xì)胞過程和維持對(duì)細(xì)胞功能的控制方面起關(guān)鍵作用。這些激酶非限定性的部分名單包括受體酪氨酸激酶，例如血小板衍生生長因子受體激酶(PDGF-R)、神經(jīng)生長因子受體trkB、Met和成纖維細(xì)胞生長因子受體FGFR3；非受體酪氨酸激酶如Abl和融合激酶BCR-Abl、Lck、Csk、Fes、Bmx和c-src；以及絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如b-RAF、c-RAF、sgk、MAP激酶(如MKK4、MKK6等)和SAPK2α、SAPK2β和SAPK3。在許多疾病狀態(tài)中已經(jīng)觀察到異常的激酶活性，包括良性和惡性增殖性紊亂以及免疫和神經(jīng)系統(tǒng)不恰當(dāng)?shù)募せ顚?dǎo)致的疾病。
本發(fā)明的新化合物抑制一種或多種蛋白激酶的活性，因此預(yù)期可用于治療與激酶相關(guān)的疾病。
發(fā)明概述 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、被保護(hù)的衍生物、單一異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物以及這類化合物的可藥用的鹽和溶劑化物(例如水合物)，
其中， A選自CR5a和N；其中R5a選自氫、C1-6烷基和C3-8雜環(huán)烴基-C0-4烷基；其中所述的R5a的雜環(huán)烴基任選被C1-6烷基取代； B選自CR5b和N；其中R5b選自氫和C1-6烷基； n選自1、2、3和4； m選自0和1； R1選自氫和-X1C(O)OR6；其中X1選自價(jià)鍵和C1-6亞烷基；且R6選自氫和C1-6烷基； R2選自C1-6烷基、C3-8雜環(huán)烴基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烴基-C0-4烷基和-X2NR7aR7b；其中X2選自價(jià)鍵和C1-6亞烷基；且R7a和R7b獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基；其中R2的任意雜環(huán)烴基任選被C1-6烷基取代； R3選自鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； R4選自-OR9、-NR8aC(O)NR8bR9、-C(O)NR8bR9、-NR8aC(O)R9、-C(O)OR8a和-C(O)NR8aX3OR9；其中X3選自價(jià)鍵和C1-6亞烷基；R8a和R8b獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基；且R9選自C1-6烷基、C6-10芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烴基和C1-10雜芳基；其中R9的任意芳基、雜芳基或環(huán)烴基任選被1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自任選被C1-6烷基取代的鹵代-C1-6烷基和C3-8雜環(huán)烴基； 或者R8b和R9與R8和R9連接的氮原子一起形成任選被C1-6烷基取代的C1-10雜環(huán)烴基。
在第二方面，本發(fā)明提供了含有與一種或多種適宜賦形劑混合的式I化合物或其N-氧化物衍生物、單一異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物或者它們的可藥用鹽的藥物組合物。
在第三方面，本發(fā)明提供了治療動(dòng)物的其中抑制激酶活性、特別是抑制Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和/或TrkB的活性可以預(yù)防、抑制或改善疾病的病理和/或癥狀的疾病的方法，該方法包括給動(dòng)物施用治療有效量的式I化合物或其N-氧化物衍生物、單一異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物或者它們的可藥用鹽。
在第四方面，本發(fā)明提供了式I化合物在制備藥物中的用途，所述的藥物用于在動(dòng)物中治療其中激酶的活性、特別是Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和/或TrkB的活性對(duì)該疾病的病理和/或癥狀起作用的疾病。
在第五方面，本發(fā)明提供了制備式I化合物及其N-氧化物衍生物、前藥衍生物、被保護(hù)的衍生物、單一異構(gòu)體及異構(gòu)體混合物以及它們的可藥用鹽的方法。
發(fā)明詳述 定義 “烷基”作為基團(tuán)和作為其它基團(tuán)(例如鹵素取代的烷基和烷氧基)的結(jié)構(gòu)元件，可以是直鏈的或支鏈的。C1-4烷氧基包括甲氧基、乙氧基等等。鹵素取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等等。
“芳基”表示含有六至十個(gè)環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)芳香環(huán)系。例如，芳基可以是苯基或萘基，優(yōu)選苯基?！皝喎蓟北硎狙苌苑蓟亩r(jià)基團(tuán)。
“雜芳基”如上文芳基中定義，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)成員為雜原子。例如雜芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
“環(huán)烴基”表示含有指定數(shù)目環(huán)原子的飽和或部分不飽和的單環(huán)、稠合雙環(huán)或橋連多環(huán)系。例如，C3-10環(huán)烴基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。
“雜環(huán)烴基”表示如本申請(qǐng)所定義的環(huán)烴基，條件是一個(gè)或多個(gè)指定的環(huán)原子被選自-O-、-N＝、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的基團(tuán)代替，其中R是氫、C1-4烷基或氮保護(hù)基。例如，被用于本申請(qǐng)來描述本發(fā)明化合物的C3-8雜環(huán)烴基包括嗎啉代基、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基(piperidinylone)、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。
“鹵素”(或鹵代基)優(yōu)選代表氯或氟，但也可以是溴或碘。
“激酶名單”是包括如下激酶的激酶名單Abl(人)、Abl(T315I)、JAK2、JAK3、ALK、JNK1α1、ALK4、KDR、Aurora-A、Lck、Blk、MAPK1、Bmx、MAPKAP-K2、BRK、MEK1、CaMKII(大鼠)、Met、CDK1/細(xì)胞周期蛋白B、p70S6K、CHK2、PAK2、CK1、PDGFRα、CK2、PDK1、c-kit、Pim-2、c-RAF、PKA(h)、CSK、PKBα、cSrc、PKCα、DYRK2、Plk3、EGFR、ROCK-I、Fes、Ron、FGFR3、Ros、Flt3、SAPK2α、Fms、SGK、Fyn、SIK、GSK3β、Syk、IGF-1R、Tie-2、IKKβ、TrKB、IR、WNK3、IRAK4、ZAP-70、ITK、AMPK(大鼠)、LIMK1、RsK2、Axl、LKB1、SAPK2β、BrSK2、Lyn(h)、SAPK3、BTK、MAPKAP-K3、SAPK4、CaMKIV、MARK1、Snk、CDK2/細(xì)胞周期蛋白A、MINK、SRPK1、CDK3/細(xì)胞周期蛋白E、MKK4(m)、TAK1、CDK5/p25、MKK6(h)、TBK1、CDK6/細(xì)胞周期蛋白D3、MLCK、TrkA、CDK7/細(xì)胞周期蛋白H/MAT1、MRCKβ、TSSK1、CHK1、MSK1、Yes、CK1d、MST2、ZIPK、c-Kit(D816V)、MuSK、DAPK2、NEK2、DDR2、NEK6、DMPK、PAK4、DRAK1、PAR-1Bα、EphA1、PDGFRβ、EphA2、Pim-1、EphA5、PKBβ、EphB2、PKCβI、EphB4、PKCδ、FGFR1、PKCη、FGFR2、PKCθ、FGFR4、PKD2、Fgr、PKG1β、Flt1、PRK2、Hck、PYK2、HIPK2、Ret、IKKα、RIPK2、IRR、ROCK-II(人)、JNK2α2、Rse、JNK3、Rsk1(h)、PI3Kγ、PI3Kδ和PI3-Kβ。根據(jù)該激酶名單(野生型和/或其突變體)篩選出本發(fā)明化合物，其抑制至少一種所述名單成員的活性。
“BCR-Abl突變體形式”表示野生型序列的單一或多個(gè)氨基酸改變。BCR-ABL的突變通過破壞蛋白質(zhì)與抑制劑(例如Gleevec等)之間的關(guān)鍵接觸點(diǎn)而發(fā)揮作用，更經(jīng)常地通過誘導(dǎo)從無活性狀態(tài)向活性狀態(tài)、也就是BCR-ABL與Gleevec不能結(jié)合的構(gòu)型的轉(zhuǎn)變而發(fā)揮作用。根據(jù)臨床樣品的分析，被發(fā)現(xiàn)與抗性表型有關(guān)的突變的總數(shù)已經(jīng)隨時(shí)間的推移緩慢但不可抗拒地增加。突變似乎聚集在四個(gè)主要的區(qū)域。一組突變(G250E、Q252R、Y253F/H、E255K/V)包括構(gòu)成ATP的磷酸-結(jié)合袢(也稱為P-袢)的氨基酸。第二組(V289A、F311L、T315I、F317L)可在Gleevec結(jié)合位點(diǎn)處發(fā)現(xiàn)，經(jīng)由氫鍵或范德華力直接與抑制劑相互作用。第三組突變(M351T、E355G)聚集在催化結(jié)構(gòu)域附近。第四組突變(H396R/P)位于活化袢中，它的構(gòu)型是控制激酶活化/失活的分子開關(guān)。在CML和ALL患者中檢測(cè)到的與Gleevec有關(guān)的BCR-ABL點(diǎn)突變包括M224V、L248V、G250E、G250R、Q252R、Q252H、Y253H、Y253F、E255K、E255V、D276G、T277A、V289A、F311L、T315I、T315N、F317L、M343T、M315T、E355G、F359V、F359A、V379I、F382L、L387M、L387F、H396P、H396R、A397P、S417Y、E459K和F486S(單個(gè)字母代碼所示的氨基酸位置是用于基因庫(GenBank)序列的那些，登錄號(hào)AAB60394，相應(yīng)于ABL型1a；Martinelli等，Haematologica/The Hematology Journal，2005年4月；90-4)。除非本發(fā)明另有規(guī)定，Bcr-Abl表示該酶的野生型和突變體形式。
“治療”涉及減輕或緩解疾病和/或其伴隨癥狀的方法。
優(yōu)選實(shí)施方案的描述 融合蛋白BCR-Abl是融合Abl原癌基因與Bcr基因的交互易位的結(jié)果。BCR-Abl則能夠通過促有絲分裂活性的增加來轉(zhuǎn)化B-細(xì)胞。這種增加導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞凋亡的敏感性降低以及導(dǎo)致改變CML祖細(xì)胞的粘附和歸巢。本發(fā)明提供了用于治療與激酶相關(guān)的疾病、特別是與Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB激酶相關(guān)的疾病的化合物、組合物和方法。例如，可以通過抑制Bcr-Abl的野生型和突變型來治療與BCR-Abl相關(guān)的白血病和其它增殖性紊亂。
在一項(xiàng)實(shí)施方案中，對(duì)式I化合物而言，A選自CR5a和N；其中R5a選自氫、甲基、嗎啉代基-丁基和甲基-哌嗪基-丙基；B選自CR5b和N；其中R5b選自氫和甲基。
在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，R1選自氫和-X1C(O)OR6；其中X1是亞甲基；和R6選自氫和乙基；和R2選自甲基、乙基、嗎啉代基-乙基、二甲基氨基-乙基、吡咯烷基-乙基、環(huán)丙基、甲基-哌啶基、環(huán)丙基-甲基、二甲基氨基-丁基、二乙基氨基-乙基、二甲基氨基-丙基、乙基-哌嗪基-乙基和二乙基氨基-丙基。
在另一項(xiàng)實(shí)施方案中，R4選自-NHC(O)R9、-OR9、-C(O)NHR9、-C(O)NHOR9、-C(O)OH、-C(O)N(CH3)2和吡咯烷基-羰基；其中R9是芐基、苯基、環(huán)丙基、乙基、甲氧基-丙基和苯并噻唑基；其中R9的任意苯基任選被1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自三氟甲基、乙基-哌嗪基和甲基-哌嗪基。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物選自 N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， N-乙氧基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， N-環(huán)丙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-N-(3-甲氧基-丙基)-苯甲酰胺， N-苯并噻唑-2-基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-N-(3-三氟甲基-苯基)-苯甲酰胺， 7-(2，6-二氯-苯基)-9-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 3-甲氧基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酸， N-乙基-3-甲氧基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， 3-甲氧基-N，N-二甲基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， N-乙氧基-3-甲氧基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， 7-[3-甲氧基-5-(吡咯烷-1-羰基)-苯基]-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺， 3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-5-三氟甲基-苯甲酰胺， 4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺， 7-(3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2-氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(3，5-二甲氧基-苯基)-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2-氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 2-氯-N-乙氧基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-環(huán)丙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-3-[9-(2-二甲基氨基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-5-甲氧基-3-[8-氧代-9-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， 2-氯-3-(9-環(huán)丙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-5-甲氧基-3-[9-(1-甲基-哌啶-4-基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， 2-氯-3-(9-環(huán)丙基甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-3-[9-(4-二甲基氨基-丁基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-3-[9-(2-二乙基氨基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-3-[9-(3-二甲基氨基-丙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 9-環(huán)丙基-7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 4-氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-3-[9-乙基-2-(4-嗎啉-4-基-丁基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-環(huán)丙基-3-(9-環(huán)丙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-3-{9-乙基-2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基}-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-3-[9-(3-二乙基氨基-丙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-5-甲氧基-3-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， N-乙基-3-(1-乙基-2-氧代-2，7-二氫-1H-吡唑并[3，4-h][1，6]萘啶-3-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-1-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， [7-(2-氯-3-乙基氨甲?；?5-甲氧基-苯基)-9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-3-基]-乙酸乙酯， [7-(2-氯-3-乙基氨甲?；?5-甲氧基-苯基)-9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-3-基]-乙酸， N-乙基-3-(9-乙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， N-乙基-3-甲氧基-5-[2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 9-環(huán)丙基-7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-2-甲基-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 2，4-二氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2，4-二氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-亞氨基-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 2，4-二氯-N-乙基-3-(9-乙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺， 7-(2，6-二氯-3-羥基-5-甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮， 7-(3-芐氧基-2，6-二氯-5-甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮。
其它優(yōu)選的本發(fā)明化合物在下文實(shí)施例和表I中詳述。
藥理學(xué)和效用 本發(fā)明的化合物調(diào)節(jié)激酶的活性，本身可用于治療其中激酶對(duì)該疾病病理和/或癥狀有作用的疾病或紊亂。被本文所述的化合物和組合物所抑制的以及本文所述的方法可有用對(duì)抗其的激酶的實(shí)例包括但不限于Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB。
Abelson酪氨酸激酶(即Abl，c-Abl)參與細(xì)胞周期的調(diào)控、對(duì)基因毒性應(yīng)激的細(xì)胞應(yīng)答，并通過整聯(lián)蛋白發(fā)信號(hào)來參與有關(guān)細(xì)胞環(huán)境的信息傳遞。大體上，Abl蛋白作為這樣一種細(xì)胞模塊來起復(fù)雜作用該細(xì)胞模塊整合多種胞外和胞內(nèi)來源的信號(hào)并影響關(guān)于細(xì)胞周期和凋亡的決定。Abelson酪氨酸激酶包括多種亞型衍生物，例如具有失控的酪氨酸激酶活性的嵌合融合體(癌蛋白)BCR-Abl或v-Abl。BCR-Abl在95％的慢性髓性白血病(CML)和10％的急性淋巴細(xì)胞白血病的發(fā)病機(jī)制中是重要的。STI-571(Gleevec)是致癌的BCR-Abl酪氨酸激酶的抑制劑，可用于治療慢性髓性白血病(CML)。但是，有些處于CML原始細(xì)胞危象期的患者由于BCR-Abl激酶中的突變而對(duì)STI-571有抗性。迄今為止，已報(bào)道了超過22種的突變體，最常見的是G250E、E255V、T315I、F317L和M351T。
本發(fā)明的化合物抑制abl激酶、尤其是v-abl激酶。本發(fā)明的化合物還抑制野生型BCR-Abl激酶和BCR-Abl激酶的突變體，因此適于治療BCR-Abl陽性癌癥和腫瘤疾病，例如白血病(尤其是慢性髓性白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病，其中尤其發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制)，它們還表現(xiàn)出對(duì)白血病干細(xì)胞亞群的作用以及在抽取上述細(xì)胞(例如抽取骨髓)后體外純化這些細(xì)胞和清除癌細(xì)胞后再移植這些細(xì)胞(例如經(jīng)純化骨髓細(xì)胞的再移植)的可能性。
Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)通路介導(dǎo)了對(duì)生長信號(hào)的細(xì)胞應(yīng)答。在約15％的人類癌癥中，Ras突變?yōu)橹掳┬问?。Raf家族屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它包括三個(gè)成員，A-Raf、B-Raf、C-Raf(或Raf-1)。Raf作為藥物靶點(diǎn)的焦點(diǎn)集中于Raf作為Ras的下游效應(yīng)子的關(guān)系上。但是，近來的數(shù)據(jù)顯示，B-Raf可能在特定腫瘤的形成中具有重要地位，而不需要活化的Ras等位基因(Nature 417，949-954(2002年7月1日))。特別是已經(jīng)在很大比例的惡性黑素瘤中檢測(cè)出B-Raf突變。
對(duì)黑素瘤的現(xiàn)有醫(yī)學(xué)治療效力有限，尤其是對(duì)于晚期黑素瘤而言。本發(fā)明的化合物還抑制涉及b-Raf激酶的細(xì)胞過程，提供了治療人類癌癥、尤其是黑素瘤的新的治療機(jī)會(huì)。
本發(fā)明的化合物還抑制涉及c-Raf激酶的細(xì)胞過程。c-Raf由ras癌基因活化，其在大量的人類癌癥中發(fā)生突變。因此，抑制c-Raf激酶活性能提供一條途徑來防止ras介導(dǎo)的腫瘤生長[Campbell，S.L.，Oncogene，17，1395(1998)]。
PDGF(血小板衍生生長因子)是非常常見的生長因子，它在正常生長和病理細(xì)胞增殖中均起重要作用，例如致癌作用和在血管平滑肌細(xì)胞疾病中可見，例如動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成。本發(fā)明的化合物能夠抑制PDGF受體(PDGFR)的活性，因此適于治療腫瘤疾病，例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤、前列腺腫瘤以及結(jié)腸、乳房、卵巢腫瘤。
本發(fā)明的化合物不僅可用作腫瘤抑制物質(zhì)(例如在小細(xì)胞肺癌中)，而且還可用作治療非惡性增殖性紊亂(例如動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成、銀屑病、硬皮病、纖維變性)、保護(hù)干細(xì)胞(例如抵抗化療劑如5-氟尿嘧啶的血毒素作用)和治療哮喘的藥物。本發(fā)明的化合物尤其可用于治療對(duì)抑制PDGF受體激酶有響應(yīng)的疾病。
本發(fā)明的化合物在治療移植引起的紊亂中表現(xiàn)出有用效用，例如在同種異體移植、尤其是組織排斥中，例如尤其是閉塞性細(xì)支氣管炎(OB)，即同種異體肺移植的慢性排斥。與未患OB的人相比，OB患者的支氣管肺泡灌洗液中的PDGF濃度較高。
本發(fā)明的化合物還對(duì)與血管平滑肌細(xì)胞遷移和增殖相關(guān)的疾病(其中PDGF和PDGF-R通常也起作用)有效，例如再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化。這類對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的體外和體內(nèi)作用及其結(jié)果可以通過本發(fā)明化合物的施用得到證明，還可通過觀察其對(duì)于體內(nèi)血管內(nèi)膜在機(jī)械損傷后的增厚的作用而得到證明。
神經(jīng)營養(yǎng)受體的trk家族(trkA、trkB、trkC)促進(jìn)神經(jīng)和非神經(jīng)組織的存活、生長和分化。TrkB蛋白可以在下列細(xì)胞中有表達(dá)在小腸和結(jié)腸的神經(jīng)內(nèi)分泌型細(xì)胞中、在胰腺的α細(xì)胞中、在淋巴結(jié)和脾臟的單核細(xì)胞和巨嗜細(xì)胞中以及表皮顆粒層中(Shibayama和Koizumi，1996)。TrkB蛋白的表達(dá)與Wilms腫瘤和成神經(jīng)細(xì)胞瘤的不良發(fā)展有關(guān)。而且，TkrB可以在癌性前列腺細(xì)胞中有表達(dá)，但在正常細(xì)胞中不會(huì)表達(dá)。信號(hào)通路下游的trk受體通過Shc、活化的Ras、ERK-1和ERK-2基因參與了MAPK激活級(jí)聯(lián)反應(yīng)和PLC-gammal轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(Sugimoto等，2001)。
激酶c-Src傳導(dǎo)了許多受體的致癌基因信號(hào)。例如，腫瘤中EGFR或HER2/neu的過度表達(dá)導(dǎo)致c-Src的組成性激活，它是惡性細(xì)胞所特有的，而在正常細(xì)胞中沒有。另一方面，小鼠c-Src表達(dá)的缺乏具有骨石化的表型，這說明c-Src在破骨細(xì)胞功能中起到了關(guān)鍵作用，并且可能與相關(guān)的疾病有關(guān)。
Tec家族的激酶Bmx是一種非受體蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶，控制著乳房上皮癌細(xì)胞的增殖。
成纖維細(xì)胞生長因子受體3對(duì)骨生長具有負(fù)面調(diào)節(jié)作用，并抑制軟骨細(xì)胞增殖。導(dǎo)致死亡的發(fā)育異常是成纖維細(xì)胞生長因子受體3的不同突變導(dǎo)致的，一種突變型，TDII FGFR3，具有組成性酪氨酸激酶活性，它能夠激活轉(zhuǎn)錄因子Stat1，導(dǎo)致細(xì)胞-循環(huán)抑制劑表達(dá)，生長停止和異常骨發(fā)育(Su等，Nature，1997，386，288-292)。FGFR3也經(jīng)常在多種骨髓瘤型癌癥中表達(dá)。FGFR3活性的抑制劑可用于治療T-細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥或自身免疫性疾病，包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、膠原II型關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、銀屑病、青少年型糖尿病、舍格倫病、甲狀腺疾病、肉狀瘤病、自身免疫性色素層炎、炎性腸病(節(jié)段性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎)、麩質(zhì)過敏癥(celiac disease)和重癥肌無力。
血清和糖皮質(zhì)激素-調(diào)節(jié)的激酶(SGK)的活性與紊亂的離子通道活性有關(guān)，特別是那些鈉和/或鉀通道，因此本發(fā)明化合物可以用于治療高血壓。
Lin等人((1997)J.Clin.Invest.100，82072-2078)和P.Lin(1998，PNAS 95，8829-8834)已經(jīng)證明在腺病毒感染期間或?qū)θ榉磕[瘤和黑素瘤異種移植物模型的Tie-2(Tek)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域注射期間，腫瘤生長和血管形成受到抑制，并且肺轉(zhuǎn)移降低。Tie2抑制劑可以在新血管形成不當(dāng)時(shí)使用，即，在糖尿病性視網(wǎng)膜病、慢性炎癥、銀屑病、卡波西肉瘤、黃斑變性導(dǎo)致的慢性新血管形成、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、嬰兒血管瘤和癌癥中。
Lck在T-細(xì)胞信號(hào)中起作用。缺乏Lck基因的小鼠形成胸腺細(xì)胞的能力很差。作為T-細(xì)胞信號(hào)正向激活劑的Lck功能表明Lck抑制劑可以用于治療自身免疫性疾病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
JNK類及其它MAPK類在介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)下列疾病的響應(yīng)中起作用癌癥、凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚積、免疫缺陷性疾病、自身免疫性疾病、細(xì)胞凋亡、過敏癥、骨質(zhì)疏松癥及心臟病。與JNK通路激活有關(guān)的治療靶疾病包括慢性骨髓性白血病(CML)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、骨關(guān)節(jié)炎、局部缺血、癌癥和神經(jīng)退行性疾病。由于JNK激活的重要的結(jié)果是與肝病和肝缺血有關(guān)，所以本發(fā)明化合物也可以用于治療各種肝臟疾病。JNK在心血管疾病(例如心肌梗塞或充血性心衰)中的作用已有報(bào)道，它表明JNK對(duì)各種形式的心臟應(yīng)激都會(huì)介導(dǎo)較大的響應(yīng)。已經(jīng)證明JNK級(jí)聯(lián)在T-細(xì)胞活化中也起作用，包括IL-2啟動(dòng)子的激活。所以，JNK抑制劑在改變病理性免疫響應(yīng)中具有治療價(jià)值。在各種癌癥中，JNK活化的作用也已經(jīng)被確定，從而提示了JNK抑制劑在癌癥中的可能的應(yīng)用。例如，組成性活化的JNK與HTLV-1介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生有關(guān)[Oncogene 13135-42(1996)]。JNK可能在卡波西肉瘤(KS)中也起作用。與KS增殖有關(guān)的其它細(xì)胞因子的其它增殖作用可能也是由JNK介導(dǎo)的，例如，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、IL-6及TNFα。另外，在p210BCR-ABL轉(zhuǎn)化細(xì)胞中c-jun基因的調(diào)節(jié)相應(yīng)于JNK活性，這表明JNK抑制劑在治療慢性骨髓性白血病(CML)中的作用[Blood 922450-60(1998)]。
據(jù)認(rèn)為某些異常增殖病癥與raf表達(dá)有關(guān)，所以認(rèn)為應(yīng)該對(duì)raf表達(dá)的抑制有響應(yīng)。Raf蛋白的異常高水平表達(dá)也與轉(zhuǎn)化及異常的細(xì)胞增殖有關(guān)。這些異常增殖病癥也被認(rèn)為對(duì)raf表達(dá)的抑制有響應(yīng)。例如，因?yàn)橐呀?jīng)報(bào)道所有肺癌細(xì)胞系中的60％表現(xiàn)出異常高水平的c-raf mRNA和蛋白，所以相信c-raf蛋白的表達(dá)在異常細(xì)胞增殖中起作用。異常增殖性病癥的另外的實(shí)例為過度增殖性疾病，例如癌癥、腫瘤、增生、肺纖維化、血管生成、銀屑??；動(dòng)脈粥樣硬化和血管中平滑肌細(xì)胞增殖，例如狹窄或血管成形術(shù)后的再狹窄。Raf參與其中的細(xì)胞信號(hào)通路也與以T-細(xì)胞增殖(T-細(xì)胞活化和生長)為特征的炎性疾病有關(guān)，例如，如組織移植排斥、內(nèi)毒素性休克和腎小球腎炎。
應(yīng)激活化蛋白激酶(SAPK)是蛋白激酶的一個(gè)家族，它代表了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的倒數(shù)第二步，導(dǎo)致c-jun轉(zhuǎn)錄因子的活化和c-jun調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)。c-jun尤其與基因的轉(zhuǎn)錄有關(guān)，該基因?qū)⑴cDNA修復(fù)的蛋白進(jìn)行編碼，該DNA由于基因毒性損傷而被破壞。所以，在細(xì)胞中抑制SAPK活性的藥物能夠阻止DNA修復(fù)并使得細(xì)胞對(duì)導(dǎo)致DNA破壞或抑制DNA合成并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的物質(zhì)或抑制細(xì)胞增殖的物質(zhì)敏感。
促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是保守信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的組成部分，它激活對(duì)各種細(xì)胞外信號(hào)有響應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)譯因子及其它靶分子。通過促分裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)，在具有Thr-X-Tyr序列的雙磷酸化基序上，MAPK被磷酸化作用激活。在高級(jí)真核細(xì)胞中，MAPK信號(hào)的生理學(xué)作用與細(xì)胞事件有關(guān)，例如增殖、瘤形成、發(fā)展及分化。因此，通過這些通路(尤其是通過MKK4和MKK6)調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力能夠使得與MAPK信號(hào)有關(guān)的人類疾病(例如炎性疾病、自身免疫性疾病和癌癥)的治療和預(yù)防性治療得到發(fā)展。
人核糖體S6蛋白激酶家族由至少8種成員組成(RSK1、RSK2、RSK3、RSK4、MSK1、MSK2、p70S6K和p70S6Kb)。核糖體S6蛋白激酶起重要的pleotropic功能，其中之一是在蛋白質(zhì)生物合成期間mRNA翻譯調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵作用(Eur.J.Biochem2000年11月；267(21)6321-30，Exp CellRes.1999年11月25日；253(1)100-9，Mol Cell Endocrinol.1999年5月25日；151(1-2)65-77)。S6核糖體蛋白被p70S6的磷酸化也已在細(xì)胞游動(dòng)性的調(diào)節(jié)(Immunol.Cell Biol.2000年8日；78(4)447-51)和細(xì)胞生長(Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.，2000；65101-27)中有牽連，因此可以在腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫應(yīng)答和組織修復(fù)以及其它疾病狀態(tài)中有重要意義。
SAPK′s(也稱為“jun N-末端激酶”或“JNK′s”)是代表導(dǎo)致c-jun轉(zhuǎn)錄因子活化和受c-jun調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中倒數(shù)第二步的蛋白激酶家族。確切而言，c-jun參與基因的轉(zhuǎn)錄，該基因編碼參與因遺傳毒性受損的DNA的修復(fù)的蛋白質(zhì)。抑制細(xì)胞中SAPK活性的物質(zhì)可防止DNA修復(fù)，使細(xì)胞對(duì)那些通過誘導(dǎo)DNA損傷發(fā)揮作用的癌癥治療模式敏感。
BTK在自身免疫和/或炎性疾病中起作用，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性血管炎(multiple vasculitides)、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、重癥肌無力和哮喘。由于BTK在B-細(xì)胞活化中的作用，所以BTK抑制劑可用作B-細(xì)胞介導(dǎo)的致病活性(如自身抗體產(chǎn)生)的抑制劑，并用于治療B-細(xì)胞淋巴瘤和白血病。
CHK2為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的關(guān)卡激酶家族的一員，參與了DNA損壞的監(jiān)督機(jī)制，例如環(huán)境致突變?cè)蛢?nèi)在的活性氧簇所導(dǎo)致的損壞。因此，它可以作為腫瘤抑制物和癌癥治療的靶物質(zhì)。
CSK影響了癌癥細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，特別是結(jié)腸癌。
Fes為非-受體蛋白酪氨酸激酶，它與各種細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)通路以及骨髓細(xì)胞的分化有關(guān)。Fes也是粒細(xì)胞分化機(jī)制的關(guān)鍵成分。
Flt3受體酪氨酸激酶的活性與白血病和骨髓增生異常綜合征有關(guān)。約25％的AML白血病細(xì)胞在細(xì)胞的表面上表達(dá)自磷酸化(p)FLT3酪氨酸激酶的組成性活性形式。p-FLT3的活性使得白血病細(xì)胞能夠生長和存活。急性白血病患者(其白血病細(xì)胞表達(dá)p-FLT3激酶活性)具有較差的總體臨床效果。p-FLT3激酶活性的抑制誘導(dǎo)了白血病細(xì)胞的細(xì)胞凋亡(編程性細(xì)胞死亡)。
IKKα和IKKβ的抑制劑(1和2)用于治療下列疾病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥反應(yīng)、炎性腸病、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺部疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、銀屑病、多發(fā)性硬化癥、中風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、阿爾茨海默病、腦缺血、外傷性腦損傷、帕金森病、肌萎縮性側(cè)索硬化、蛛網(wǎng)膜下出血或其它與腦內(nèi)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)炎癥介質(zhì)的過量產(chǎn)生有關(guān)的疾病或紊亂。
Met與主要的人類癌癥的大多數(shù)類型有關(guān)，其表達(dá)通常與較差的預(yù)后和轉(zhuǎn)移有關(guān)。Met抑制劑用于治療包括癌癥的疾病，例如肺癌、NSCLC(非小細(xì)胞肺癌)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內(nèi)黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門癌、胃癌、結(jié)腸癌、乳癌、婦科腫瘤(如子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、陰道癌或外陰癌)、霍奇金病、食道癌癥、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥(例如甲狀腺癌、甲狀旁腺或腎上腺癌)、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌癥、慢性或急性白血病、兒童實(shí)體瘤、淋巴細(xì)胞淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌癥(例如腎細(xì)胞癌、腎盂癌)、兒科惡性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)瘤(例如原發(fā)性CNS淋巴瘤、脊柱腫瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤或垂體腺瘤)、血癌(例如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病等)、Barrett食管(癌前綜合征)、贅生性皮膚疾病、銀屑病、蕈樣霉菌病(mycoses fungoides)和良性前列腺肥大、糖尿病相關(guān)的疾病(例如糖尿病性視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜缺血和視網(wǎng)膜新血管化)、肝硬化、心血管疾病(例如動(dòng)脈粥樣硬化)、免疫性疾病(例如自身免疫性疾病)和腎臟疾病。優(yōu)選疾病為癌癥(例如急性骨髓性白血病)和結(jié)腸直腸癌。
Nima-相關(guān)的激酶2(Nek2)為細(xì)胞循環(huán)調(diào)節(jié)的蛋白激酶，當(dāng)位于細(xì)胞中心體的有絲分裂開始時(shí)它具有最大活性。功能研究表明Nek2調(diào)節(jié)細(xì)胞中心體的分離和紡錘體的形成。在衍生自一系列人類腫瘤(包括子宮頸、卵巢、前列腺腫瘤，尤其是乳房腫瘤)的細(xì)胞系中，Nek2蛋白提高了2-5倍。
p70S6K介導(dǎo)的疾病或病癥包括但不限于增殖性疾病，例如癌癥和結(jié)節(jié)性硬化癥。
根據(jù)前述，本發(fā)明還提供了在需要這類治療的受治療者中預(yù)防或治療上面所述的任何疾病或紊亂的方法，該方法包括對(duì)所述受治療者給予治療有效量的式I化合物或其可藥用鹽(見“給藥和藥物組合物”)。對(duì)于任何一種上述用途，所需劑量根據(jù)給藥方式、所治療的具體病癥和預(yù)期效果而變化。
給藥和藥物組合物 一般而言，可以采用任何本領(lǐng)域眾所周知的常用和可接受的給藥方式(單獨(dú)或與一種或多種治療藥組合)來施用治療有效量的本發(fā)明化合物。治療有效量可根據(jù)疾病的嚴(yán)重性、受治療者的年齡和相關(guān)健康狀況、所用化合物的效力和其它因素而有較大改變。一般而言，以約0.03至2.5mg/kg體重的日劑量全身施用可獲得滿意的結(jié)果。較大型哺乳動(dòng)物(例如人類)的指示日劑量范圍為約0.5mg至約100mg，方便地以例如一天至多四次的分開劑量或以緩釋的形式施用。適于口服給藥的單位劑量形式包含約1mg至50mg活性成分。
本發(fā)明的化合物可以作為藥物組合物通過任何常規(guī)的途徑來給藥，具體而言，經(jīng)腸內(nèi)給藥，例如口服(如以片劑或膠囊形式)；或胃腸道外給藥，例如以注射用溶液或混懸液的形式；局部給藥，例如以洗液、凝膠、軟膏或乳膏劑的形式，或以經(jīng)鼻施用或栓劑的形式。包含游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物與至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可用常規(guī)的方式通過混合、制?；虬碌姆椒ㄟM(jìn)行制備。例如，口服組合物可以是片劑或明膠膠囊，包含活性成分與a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或鈣和/或聚乙二醇；對(duì)于片劑還包含c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果期望的話，還包含d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或泡騰合劑；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。注射用組合物可以是水性等張溶液或混懸液，栓劑可以由含脂肪的乳劑或混懸劑來制備。該組合物可以是無菌的和/或含有佐劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們還可含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。適于透皮應(yīng)用的制劑包含有效量的本發(fā)明化合物和載體。載體包含可吸收的藥理學(xué)可接受的溶劑以幫助穿過宿主皮膚。例如，透皮裝置是包含背襯膜、儲(chǔ)庫和確保裝置在皮膚上的手段的繃帶劑形式，其中儲(chǔ)庫含有化合物，任選含有載體，任選有控速屏障以在延長時(shí)間內(nèi)向宿主皮膚以控制和可預(yù)定的速率傳送化合物。還可以使用基質(zhì)透皮制劑。適于局部應(yīng)用、例如用于皮膚和眼的制劑優(yōu)選是本領(lǐng)域眾所周知的水性溶液、軟膏、乳膏劑或凝膠。這些制劑可含有助溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強(qiáng)劑、緩沖劑和防腐劑。
本發(fā)明的化合物可以以治療有效量與一種或多種治療劑組合(藥物組合物)施用。例如，與其它免疫調(diào)節(jié)或抗炎物質(zhì)組合可產(chǎn)生協(xié)同作用，例如當(dāng)與以下藥物組合時(shí)環(huán)孢霉素、雷帕霉素或子囊霉素，或其免疫抑制類似物，例如環(huán)孢素A(CsA)、環(huán)孢素G、FK-506、雷帕霉素或相當(dāng)?shù)幕衔?、皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、咪唑嘌呤、甲氨蝶呤、布喹那、來氟米特、咪唑立賓、麥考酚酸、麥考酚酸嗎乙酯、15-脫氧精胍菌素，免疫抑制抗體、尤其是白細(xì)胞受體的單克隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、B7、CD45、CD58或它們的配體，或其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如CTLA41g。當(dāng)本發(fā)明的化合物與其它療法組合施用時(shí)，共同給藥的化合物的劑量自然要取決于所共用藥物的類型、所用具體藥物以及所治療病癥等而變化。
本發(fā)明還提供了藥物組合，例如藥盒，包含a)第一種藥物，它是如本文所公開的游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物，和b)至少一種共用藥物。該藥盒可以包含其施用說明書。
如本文所用的術(shù)語“共同施用”或“組合施用”等意欲囊括對(duì)單獨(dú)患者施用所選擇的治療藥物，并且意欲包括其中藥物不一定以同一施用途徑或在同一時(shí)間施用的治療方案。
如本文所用的術(shù)語“藥物組合”指將多于一種活性成分混合或合并所得的產(chǎn)品，包括活性成分的固定和非固定組合。術(shù)語“固定組合”指活性成分，例如式I化合物和共用藥物，以單一實(shí)體或劑量同時(shí)施用于患者。術(shù)語“非固定組合”指活性成分，例如式I化合物和共用藥物，以單獨(dú)的實(shí)體同時(shí)、共同或無特定時(shí)間限制地依次施用于患者，其中這種施用為患者體內(nèi)提供了兩種化合物的治療有效水平。后者還用于雞尾酒療法，例如給予3種或3種以上的活性成分。
制備本發(fā)明化合物的方法 本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的制備方法。在所述反應(yīng)中，有必要保護(hù)在終產(chǎn)物中期望存在的官能團(tuán)，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代或羧基，從而避免它們不被期望地參與反應(yīng)。常規(guī)的保護(hù)基團(tuán)可以按照標(biāo)準(zhǔn)慣例來使用，例如參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts的“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)”(Protective Groups in Organic Chemistry，約翰.威利公司(John Wileyand Sons)，1991)。
式I化合物可以通過如下述反應(yīng)流程I那樣進(jìn)行來制備 反應(yīng)流程I
其中n、m、A、B、R1、R2、R3和R4如發(fā)明概述中所定義。式I化合物可以通過使式2化合物與式3化合物在適宜溶劑(例如二噁烷、乙醇、CH3CN、DMF、2-丁醇等)和適宜堿(例如NaOEt、KtOBu、Cs2CO3、哌啶等)的存在下反應(yīng)來合成。該反應(yīng)在約100℃至約160℃的溫度下進(jìn)行，可以花費(fèi)一直到約24小時(shí)以完成反應(yīng)。將粗產(chǎn)物進(jìn)一步在乙酸酐的存在下在約100℃至約130℃的溫度范圍下進(jìn)行反應(yīng)，繼之以在約90℃至約130℃的溫度范圍下用6N HCl進(jìn)行處理，可以花費(fèi)一直到約24小時(shí)以完成反應(yīng)。
式I化合物可以通過如下述反應(yīng)流程II那樣進(jìn)行來制備 反應(yīng)流程II
其中n、m、A、B、R1、R2、R3和R4如發(fā)明概述中所定義。式I化合物可以通過使式2化合物與式4化合物在適宜溶劑(例如二噁烷、乙醇、CH3CN、DMF、2-丁醇等)和適宜堿(例如NaOEt、KtOBu、Cs2CO3、哌啶等)的存在下反應(yīng)來合成。該反應(yīng)在約100℃至約160℃的溫度下進(jìn)行，可以花費(fèi)一直到約24小時(shí)以完成反應(yīng)。
合成式I化合物的詳細(xì)實(shí)例可以在下文實(shí)施例中找到。
制造本發(fā)明化合物的其它方法 本發(fā)明化合物的可藥用酸加成鹽可以通過使化合物的游離堿形式與可藥用的無機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)來制備?；蛘?，本發(fā)明化合物的可藥用堿加成鹽可以通過使化合物的游離酸形式與可藥用的無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)來制備。
或者，本發(fā)明化合物的鹽形式可以使用起始原料或中間體的鹽來制備。
本發(fā)明化合物的游離酸或游離堿形式可以分別由相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽來制備。例如酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物可以通過用適宜的堿(如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等等)處理轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離堿。堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物可以通過用適宜的酸(如鹽酸等)處理轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離酸。
未氧化形式的本發(fā)明化合物可以由本發(fā)明化合物的N-氧化物在0℃至80℃下在適宜惰性有機(jī)溶劑(如乙腈、乙醇、二噁烷水溶液等)中通過用還原劑(如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等等)處理來制備。
本發(fā)明化合物的前藥衍生物可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法來制備(如，進(jìn)一步的細(xì)節(jié)參見Saulnier等人，(1994)，Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters，第4卷，第1985頁)。例如，適當(dāng)?shù)那八幙梢酝ㄟ^使非衍生化的本發(fā)明化合物與適宜的氨甲酰化劑(如1，1-酰氧基烷基羰基氯(carbanochloridate)、對(duì)硝基苯基碳酸酯等)反應(yīng)來制備。
本發(fā)明化合物的被保護(hù)的衍生物可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法來制備。可用于建立保護(hù)基團(tuán)以及除去它們的技術(shù)的詳細(xì)描述可參見T.W.Greene的《有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基》(“Protecting Groups in OrganicChemistry”，第三版，約翰·威利公司(John Wiley and Sons，Inc.)，1999)。
在本發(fā)明的方法中可以方便地制備或形成本發(fā)明化合物的溶劑化物(如水合物)。本發(fā)明化合物的水合物可通過采用有機(jī)溶劑如二氧芑、四氫呋喃或甲醇在水/有機(jī)溶劑混合物中重結(jié)晶來方便地制備。
還可如下制備本發(fā)明化合物的單一立體異構(gòu)體使化合物的外消旋混合物與旋光活性的拆分試劑反應(yīng)，形成一對(duì)非對(duì)映異構(gòu)化合物，分離非對(duì)映異構(gòu)體并回收旋光純的對(duì)映異構(gòu)體。當(dāng)對(duì)映異構(gòu)體的拆分可采用本發(fā)明化合物的共價(jià)非對(duì)映異構(gòu)衍生物進(jìn)行時(shí)，優(yōu)選可解離的復(fù)合物(如非對(duì)映異構(gòu)的鹽結(jié)晶)。非對(duì)映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解性、反應(yīng)活性等)，可以利用這些不同點(diǎn)來容易地加以分離。非對(duì)映異構(gòu)體可以通過色譜法來分離，或優(yōu)選通過基于溶解性差異的分離/拆分技術(shù)來分離。然后通過任何不會(huì)導(dǎo)致外消旋化的實(shí)用方法回收旋光純的對(duì)映異構(gòu)體和拆分試劑?？捎糜趶幕衔锏耐庀旌衔镏胁鸱制淞Ⅲw異構(gòu)體的技術(shù)在Jean Jacques、Andre Collet和Samuel H.Wilen的《對(duì)映異構(gòu)體、外消旋物和拆分》(“Enantiomers，Racemates and Resolutions”，約翰·威利公司(John Wiley and Sons，Inc.)，1981)中有更詳細(xì)的描述。
總的來說，式I化合物可以通過涉及以下步驟的方法來制備 (a)反應(yīng)流程I & II的步驟；及 (b)任選將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽； (c)任選將本發(fā)明化合物的鹽形式轉(zhuǎn)化為非鹽形式； (d)任選將本發(fā)明化合物的非氧化形式轉(zhuǎn)化為可藥用的N-氧化物； (e)任選將本發(fā)明化合物的N-氧化物形式轉(zhuǎn)化為其非氧化形式。
(f)任選從異構(gòu)體混合物中拆分出本發(fā)明化合物的單一異構(gòu)體； (g)任選將非衍生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的前藥衍生物；和 (h)任選將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其非衍生化形式。
關(guān)于起始原料的生產(chǎn)沒有具體描述，這些化合物是已知的，或者可類似于本領(lǐng)域公知的方法或在下文實(shí)施例中公開的方法來制備。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解上述轉(zhuǎn)化僅僅是本發(fā)明化合物的制備方法的代表性方法，也可類似地使用其它熟知的方法。
實(shí)施例 本發(fā)明還通過下列闡述本發(fā)明的式I化合物的制備的實(shí)施例進(jìn)一步被舉例，但不局限于此。
流程1
實(shí)施例1 N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
1. 4-氯-1-三異丙基甲硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
向4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(3.21g，21mmol)在THF(60mL)中的于-78℃冷卻的溶液中緩慢加入n-BuLi(1.6M己烷溶液，13.8mL，22mmol)。攪拌30分鐘后，加入TIPSOTf(5.77mL，21.4mmol)。使混合物升至室溫，用水淬滅。將混合物在己烷(200mL)和鹽水之間分配。有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮。將殘余物通過柱色譜法進(jìn)行純化(硅膠，用己烷洗脫)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR 600MHz(丙酮-d6)δ 8.19(d，1H，J＝5.4Hz)，7.57(d，1H，J＝3.0Hz)，7.18(d，1H，J＝5.4Hz)，6.69(d，1H，J＝3.0Hz)，1.92(七重峰，3H，J＝7.2Hz)，1.12(d，18H，J＝7.2Hz)；MSm/z 309.2(M+1)。
2. 4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛和4-氯-1-三異丙基甲硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
向4-氯-1-三異丙基甲硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(0.90g，2.91mmol)在THF(8mL)中的于-78℃冷卻的溶液中緩慢加入仲-BuLi(1.4M己烷溶液，4.16mL，5.82mmol)。攪拌45分鐘后，于-78℃加入DMF(0.68Ml，8.74mmol)。將混合物攪拌1小時(shí)，用HCl的乙醚溶液(1M，8.73mL，8.73mmol)淬滅。使混合物溫?zé)嶂潦覝亍⒎磻?yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液堿化至pH8，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物的混合物，將其未經(jīng)任何進(jìn)一步純化用于下一反應(yīng)MS m/z 337.2(M+1)。
3. 4-乙基氨基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
將4-氯-1-三異丙基甲硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛(1g，2.97mmol)、乙胺(70wt.％水溶液，8mL，100mmol)在甲氧基乙醇(4mL)中的混合物在密閉試管中于120℃加熱。過夜后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于HCl溶液(1N，20mL)中，于50℃加熱。攪拌1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液堿化至pH＝8。過濾收集固體，用水、然后用己烷洗滌，干燥，得到標(biāo)題化合物，為固體。1H NMR 600MHz(DMSO-d6)δ 11.82(s，1H)，9.75(s，1H)，9.30(t，1H，J＝4.8Hz)，8.19(s，1H)，7.19(t，1H，J＝3.6Hz)，6.72(m，1H)，3.73-3.69(m，2H)，1.30(t，3H，J＝7.2Hz)；MS m/z 190.2(M+1)。
4. 3-(9-乙基-8-亞氨基-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酸乙酯
4-乙基氨基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛(1g，5.3mmol)和3-氰基甲基-5-甲氧基-苯甲酸乙酯(1.3g，5.8mmol)溶于乙醇(4mL)中，于室溫加入哌啶(2mL，21.2mmol)。將反應(yīng)混合物于120℃加熱并攪拌24小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物濃縮，干燥，得到粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物未經(jīng)任何進(jìn)一步純化用于下一步驟。MS m/z 391.1(M+1)。
5. 3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酸
將乙酸酐(0.123mL，1.3mmol)加入在密閉試管中的(3-(9-乙基-8-亞氨基-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[α]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酸乙酯(100mg，0.26mmol)中，于120℃加熱2.5小時(shí)。蒸發(fā)乙酸酐，加入6N HCl(3mL)，再次將混合物于105℃加熱1小時(shí)。使反應(yīng)混合物為室溫，倒入冰冷的水中。酸結(jié)晶析出，過濾。用水洗滌，干燥，得到所述產(chǎn)物。MS m/z364.2(M+1)。
6 N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
于室溫將3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酸(31mg，0.085mmol)與DIEA(444uL，0.255mmol)和HATU(48.4mg，0.126mmol)在3mL DMF中混合。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?0分鐘。向反應(yīng)混合物中加入乙胺(2M THF溶液，637uL，0.127mmol)。于室溫?cái)嚢?小時(shí)后，蒸發(fā)反應(yīng)混合物，經(jīng)制備型HPLC純化，得到褐色固體，為TFA鹽。
流程2
實(shí)施例2 3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-5-三氟甲基-苯甲酰胺
1. 4-甲基氨基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
將4-氯-1-三異丙基甲硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛(5.9g，17.5mmol)、甲胺(40wt.％水溶液，40mL)在甲氧基乙醇(10mL)中的混合物在密閉試管中于120℃加熱。過夜后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于HCl溶液(1N，20mL)中，于50℃加熱。攪拌1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液堿化至pH＝8。過濾收集固體，用水、然后用己烷洗滌，干燥，得到標(biāo)題化合物，為固體。MS m/z 176.2(M+1)。
2. 7-芐基-4-甲基氨基-7H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
向4-甲基氨基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛(0.5g，2.86mmol)在DMF中的溶液中加入Na2CO3(900mg，8.6mmol)和芐基溴(0.5mL，4.3mmol)。將反應(yīng)物于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。將反應(yīng)混合物在100mL水和100mL乙酸乙酯之間分配，用乙酸乙酯洗滌三次。合并有機(jī)相，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。將粗產(chǎn)物通過硅膠快速色譜法用甲醇在乙酸乙酯中的5％溶液洗脫進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體。1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ9.70(s，1H)，9.20(q，1H，J＝5.2Hz)，8.59(s，1H)，7.46(m，2H)，7.35(m，3H)，7.28(d，1H，J＝2.8Hz)，7.22(d，1H，J＝2.4Hz)，5.65(s，2H)，3.31(d，2H，J＝2.4Hz).MS m/z 266.2(M+1)。
3. 4-芐基-9-甲基-7-(2-甲基-5-硝基-苯基)-4，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮
將7-芐基-4-甲基氨基-7H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛(400mg，1.5mmol)、(2-甲基-5-硝基-苯基)-乙酸甲酯(350mg，1.67mmol)和碳酸銫(1.1g，3mmol)在5mL無水DMF中的混合物于120℃加熱30分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫。將反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯之間分配，用乙酸乙酯萃取三次。合并有機(jī)相，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。將粗產(chǎn)物通過硅膠快速色譜法用乙酸乙酯在己烷中的40％至100％溶液洗脫進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物，為淺黃色固體。MS m/z 426.2(M+1)。
4. 7-(5-氨基-2-甲基-苯基)-9-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮
將4-芐基-9-甲基-7-(2-甲基-5-硝基-苯基)-4，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮(590mg，1.4mmol)和200mg Pd(OH)2在20mL乙醇中的混合物在氫氣氛圍下于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過硅藻土墊。將濾液濃縮，在真空下干燥，得到固體標(biāo)題化合物。MS m/z 305.2(M+1)。
5. 3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-5-三氟甲基-苯甲酰胺
將7-(5-氨基-2-甲基-苯基)-9-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮(22mg，0.07mmol)、3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酸(24mg，0.08mmol)、HATU(30mg，0.08mmol)和DIEA(27mg，0.21mmol)在0.5mmol DMF中的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。通過旋轉(zhuǎn)蒸儀除去溶劑。將粗產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC純化，得到標(biāo)題化合物，為白色固體。1H NMR400MHz(DMSO-d6)δ 12.19(s，1H)，10.32(s，1H)，9.71(s，1H)，8.54(s，1H)，8.01(s，1H)，7.72(s，1H)，7.66(m，2H)，7.58(s，1H)，7.50(t，1H，J＝2.8Hz)，7.45(s，1H)，7.23(d，1H，J＝8.4)，7.04(s，1H)，4.06(m，2H)，3.99(s，3H)，3.55(b，2H)，3.15(m，2H)，3.06(m，4H)，2.09(s，3H)，1.20(t，3H，J＝7.2).MS m/z 589.2(M+1)。
流程3
實(shí)施例3 N-乙基-3-(1-乙基-2-氧代-2，7-二氫-1H-吡唑并[3，4-h][1，6]萘啶-3-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
1. 2-{[1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡咯-2-基氨基]-亞甲基}-丙二酸二乙酯
將丙烯腈(7.5g，141mmol)溶于THF(75mL)中，于0℃冷卻，在相同溫度下加入肼一水合物(7.41g，148mmol)。使反應(yīng)混合物達(dá)到室溫，攪拌2小時(shí)。滴加對(duì)茴香醛(20.1g，148mmol)，于室溫?cái)嚢?0小時(shí)。然后將上述反應(yīng)混合物濃縮，得到紅色油。于0℃向上述油中滴加在80mL n-BuOH中的n-BuONa，使溫度達(dá)到室溫。將反應(yīng)混合物于120℃加熱3.5小時(shí)。冷卻后，將其倒入300mL冰水中，用2×200mL Et2O萃取。收集醚層，用3×100mL 1N HCl洗滌。收集所合并的酸性層，用50％NaOH中和。將混合物再次用200mL Et2O萃取，用水洗滌。將其干燥(Na2SO4)和濃縮，得到1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑-2-基胺，為紅色油。MS m/z 204.1(M+1)。將1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑-2-基胺(1g，5.0mmol)和乙氧基亞甲基丙二酸二乙酯(1mL，5.0mmol)的混合物于120℃加熱5小時(shí)。將其冷卻，然后通過硅膠柱色譜法分離出所需化合物。MS m/z 374.2(M+1)。
2. 4-氯-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯
將2-{[1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡咯-2-基氨基]-亞甲基}-丙二酸二乙酯(1.5g，4.0mmol)用MW于200℃照射45分鐘。當(dāng)加入20mL Et2O時(shí)，環(huán)化化合物4-羥基-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯結(jié)晶析出，為白色晶體。1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 12.10(s，1H)，10.32(s，1H)，8.81(s，1H)，8.31(s，1H)，7.21(d，1H，J＝8.8Hz)，6.86(d，1H，J＝8.8)，4.39(m，2H)，4.26(m，2H)，3.72(s，3H)，1.35(t，3H，J＝7.2Hz)。MS m/z328.2(M+1)。將上述化合物與POCl3(2mL)一起在密閉試管中于80℃加熱10小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，倒在10mL冰上。然后過濾收集所出現(xiàn)的固體，用2×5mL水洗滌，得到標(biāo)題化合物，為白色固體。MS m/z 346.2(M+1)。
3. 4-乙基氨基-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲醛
將4-氯-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(500mg，1.45mmol)溶于15mL無水THF中，冷卻至-78℃。在相同溫度下緩慢加入LAH的THF溶液(3.6mL，1M THF溶液，3.6mmol)。攪拌3小時(shí)后，使反應(yīng)混合物達(dá)到室溫，繼續(xù)攪拌另外4小時(shí)。將反應(yīng)混合物于0℃冷卻，加入1mL MeOH:EtOAc(1:1)以破壞LAH。然后通過硅藻土塞過濾，用乙酸乙酯洗滌(2×50mL)。在真空下除去溶劑后，將粗產(chǎn)物通過硅膠柱色譜法純化，得到白色固體。MS m/z 304.1(M+1)。
然后將上述醇溶于20mL DCM中，加入MnO2(1.2，13.2mmol)。將反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物穿過硅藻土塞，用乙酸乙酯洗滌。將合并的濾液濃縮，將產(chǎn)物通過柱色譜法純化。MS m/z 302.1(M+1)。
將4-氯-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲醛(350mg，1.16mmol)、乙胺(70wt.％在水中的溶液，2mL，25mmol)的混合物在密閉試管中于120℃加熱。過夜后，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并濃縮。將殘余物溶于HCl溶液(1N，4mL)中，于50℃加熱。攪拌1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液堿化至pH＝8。過濾收集固體，用水、然后用己烷洗滌，干燥，得到標(biāo)題化合物，為固體。MS m/z 311.2(M+1)。
4. N-乙基-3-(1-乙基-2-氧代-2，7-二氫-1H-吡唑并[3，4-h][1，6]萘啶-3-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
采用與流程1所述相同的方法，由4-乙基氨基-1-(4-甲氧基-芐基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲醛合成標(biāo)題化合物。1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ 8.89(s，1H)，8.52(s，1H)，8.37(s，1H)，7.80(s，1H)，7.41(s，1H)，7.22(s，1H)，7.02(s，1H)，6.92(s，1H)，4.63(d，2H，J＝6.8Hz)，4.25(d，1H，J＝4.0Hz)，3.86(s，3H)，3.82-3.72(m，1H)，1.45(t，3H，J＝6.8Hz)，1.12(t，3H，J＝6.8Hz)；MS m/z 392.2(M+1)。
流程4
實(shí)施例4 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮
1-苯磺酰基-4-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
向Cs2CO3(36.1g，110.8mmol)在DMF(100mL)中的漿狀液中加入10.00g(55.4mmol)原料醛，攪拌15分鐘。滴加苯磺酰氯(14.1mL，111mmol)，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物用水(800mL)稀釋，過濾出灰白色沉淀，用水洗滌，在真空箱中于60℃干燥，得到所需產(chǎn)物。
2. 1-苯磺?；?4-氯-5-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶.
將醛(8.88g，27.7mmol)、乙二醇(2.00mL，35.8mmol)和TsOH·H2O(200mg)在甲苯(250mL)中的混合物用迪安-斯達(dá)克阱(Dean-Stark trap)回流過夜。將反應(yīng)混合物用NaHCO3溶液洗滌，濃縮，通過硅膠塞用己烷-EtOAc2:1洗脫進(jìn)行純化。
3. 1-苯磺?；?4-氯-5-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基-2-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
在氮?dú)庀?，?78℃將正丁基鋰(2.5M己烷溶液)(48.8mL，122mmol)滴加至二異丙胺(18.97mL，134mmol)在無水THF(200mL)中的溶液中，攪拌30分鐘。然后緩慢加入二氧戊環(huán)(8.90g24.4mmol)在100mL無水THF中的溶液，于-25℃攪拌30分鐘。向所得褐色溶液中加入碘甲烷(10.66mL，171mmol)，于-25℃攪拌2小時(shí)。加入NaHCO3濃溶液(10mL)，將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?。濃縮，加入水，用CH2Cl2萃取，干燥(Na2SO4)。通過硅膠柱純化(20-30％ EtOAc的己烷溶液)。
4. 4-氯-5-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基-2-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
將二氧戊環(huán)(5.26g，13.9mmol)在甲醇(450mL)和K2CO3在水(150mL)中的溶液回流加熱2小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物，濾出沉淀物，用水洗滌，在真空箱中于50℃干燥。
5. 4-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
向二氧戊環(huán)(4.36g，18.3mmol)在THF(240mL)中的溶液中加入在水(85mL)中的濃HCl(15mL)，于50℃攪拌2小時(shí)。蒸發(fā)THF，加入NaHCO3濃溶液至pH 9-10。過濾收集白色晶體，在真空箱中于50℃干燥，得到所需產(chǎn)物。
6. 4-氯-1-甲氧基甲基-2-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛.
將醛(3.53g，18.1mmol)加入新鮮研磨的Cs2CO3(12.06g，36.3mmol)在DMF(60mL)中的漿狀液中，于室溫?cái)嚢?5分鐘。緩慢加入MOMCl(2.75mL，36.3mmol)，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入水(600mL)，在冰上冷卻，過濾出灰白色晶體，用水洗滌。在真空中于50℃干燥。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.53(s，1H，CHO)，8.75(s，1H，H-6)，6.51(s，1H，H-3)，5.67(s，2H，CH2)，3.29(s，3H，OMe)，2.55(s，3H，Me)。
7. 1-甲氧基甲基-2-甲基-4-(2-嗎啉-4-基-乙基氨基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
將醛(476mg，2mmole)加入燒瓶中，與1mL2-嗎啉-4-基-乙基胺混合。將混合物于110℃加熱12小時(shí)，冷卻至室溫。將過量的胺在高真空下蒸餾出。將殘余物用10mL 1N HCl溶液處理，于50℃加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物用K2CO3中和至pH11，用氯仿和甲醇(20:1)萃取兩次(2×20mL)。將有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。濃縮，經(jīng)硅膠純化(氯仿/甲醇＝20:1)，得到所需產(chǎn)物。MS m/z 333.2(M+1)。
8. 7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮
將醛(330mg，1mmole)、(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-乙腈(750mg，～3mmole)、KtOBu(500mg)和3mL二噁烷的混合物置于微波反應(yīng)小瓶中。脫氣3次，重新充入氮?dú)?。將混合物在微波中?70℃加熱3000秒。冷卻至室溫，用氯仿/甲醇(20:1)萃取兩次(2×15mL)。萃取物用水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。
除去溶劑后，將殘余物用乙酸酐于110℃處理2小時(shí)。除去溶劑，將殘余物用6N HCI(3mL)處理，于100℃加熱5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用固體K2CO3中和至pH為11，于室溫?cái)嚢?0分鐘。將其用氯仿和甲醇(20:1)萃取，合并萃取液，經(jīng)Na2SO4干燥。除去溶劑后，將殘余物經(jīng)硅膠柱純化(氯仿/甲醇/三乙胺＝50:1:0.2)，得到所需產(chǎn)物。MSm/z517.1(M+1)。
流程5
實(shí)施例5 2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-1-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
1. 4-氯-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
按照實(shí)施例1步驟1-2的方法，不同的是用3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(Synthesis，1996，877)替換1H-吡咯并[2，3-b]吡啶，獲得4-氯-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛，為白色固體1H NMR 400MHz(CD3OD)δ10.40(s，1H)，8.53(s，1H)，7.18(s，1H)；MS m/z 195.0(M+1)。
2. 4-氯-1-甲氧基甲基-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
按照實(shí)施例4步驟6的方法，不同的是用4-氯-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛替換4-氯-2-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛，獲得4-氯-1-甲氧基甲基-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛，為白色固體1H NMR400MHz(CD3OD)δ 10.49(s，1H)，8.71(s，1H)，7.10(s，1H)，5.52(s，2H)，3.22(s，3H)，2.49(s，3H)；MS m/z 239.0(M+1)。
3. 4-乙基氨基-1-甲氧基甲基-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛
按照實(shí)施例1步驟3的方法，不同的是用4-氯-1-甲氧基甲基-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛替換4-氯-1-三異丙基甲硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛，獲得4-乙基氨基-1-甲氧基甲基-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛，為白色固體MS m/z 248.1(M+1)。
4. 2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-1-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
將4-乙基氨基-1-甲氧基甲基-3-甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲醛(10.9mg，0.044mmole)、2-氯-3-氰基甲基-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺、無水EtOH(0.2mL)和乙醇鈉(21％ EtOH溶液，0.4mL)的混合物于120℃油浴中加熱4小時(shí)。將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，用飽和K2CO3淬滅。將混合物用氯仿/乙醇(20:1)萃取兩次(2×15mL)、將萃取物用鹽水洗滌，經(jīng)MgSO4干燥。除去溶劑后，將殘余物用乙酸酐于120℃處理1小時(shí)。除去溶劑，將殘余物用HCl(6N，1mL)處理，于100℃加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用固體K2CO3中和至pH為11，于室溫?cái)嚢?0分鐘。將其用氯仿和甲醇(20:1)萃取，合并萃取液，經(jīng)MgSO4干燥。除去溶劑后，將殘余物經(jīng)硅膠柱純化(乙酸乙酯:己烷＝4:1)，得到所需產(chǎn)物。MS m/z 439.1(M+1)。
實(shí)施例6 [7-(2-氯-3-乙基氨甲?；?5-甲氧基-苯基)-9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-3-基]-乙酸乙酯
將2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺(7.6mg，0.018mmol)、氯乙酸乙酯(2.2mg，0.018mmol)、碳酸鉀(0.89mg，0.0064mmol)和丙酮(0.5mL)的混合物加熱至60℃達(dá)2小時(shí)。除去溶劑，加入水。將混合物用氯仿和甲醇(20:1)萃取，合并萃取液，經(jīng)MgSO4干燥。除去溶劑后，將殘余物經(jīng)硅膠柱純化(乙酸乙酯:己烷＝4:1)，得到所需產(chǎn)物。MS m/z 511.1(M+1)。取2.5mg產(chǎn)物用LiOH·H2O在THF、MeOH和H2O中于室溫水解1小時(shí)，得到所需的產(chǎn)物酸。MS m/z 483.1(M+1)。
重復(fù)以上實(shí)施例中所描述的操作，使用適當(dāng)?shù)脑?，獲得如表1中所確定的下列式I化合物。
表1













分析 對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行分析，以測(cè)定它們與親本32D細(xì)胞相比選擇性抑制表達(dá)BCR-Abl的32D細(xì)胞(32D-p210)增殖的能力。測(cè)試選擇性抑制這些BCR-Abl轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖的化合物對(duì)表達(dá)野生型或突變形式的BCR-Abl的Ba/F3細(xì)胞的抗增殖能力。另外，對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行分析，以測(cè)定它們抑制Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB激酶的能力。
BCR-Abl依賴性細(xì)胞增殖的抑制(高流通量法) 所用鼠細(xì)胞系是用BCR-Abl cDNA轉(zhuǎn)化的32D造血祖細(xì)胞系(32D-p210)。這些細(xì)胞維持在補(bǔ)充有50μg/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素和200mM L-谷氨酰胺的RPMI/10％胎牛血清(RPMI/FCS)中。未經(jīng)轉(zhuǎn)化的32D細(xì)胞添加15％WEHI條件培養(yǎng)基作為IL-3來源而類似地維持。
將50μl 32D或32D-p210細(xì)胞混懸液鋪在Greiner384孔微板(黑)中，密度為5000個(gè)細(xì)胞/孔。每孔加入50μl測(cè)試化合物(1mM，DMSO儲(chǔ)備液)(包括作為陽性對(duì)照的STI571)。細(xì)胞在37℃、5％二氧化碳條件下孵育72小時(shí)。每孔加入10μl 60％ Alamar Blue溶液(泰克診斷公司(Tekdiagnostics))，細(xì)胞另外孵育24小時(shí)。使用AcquestTM系統(tǒng)(分子裝置公司(Molecular Devices))對(duì)熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長530nm，發(fā)射波長580nm)進(jìn)行定量。
BCR-Abl依賴性細(xì)胞增殖的抑制 將32D-p210細(xì)胞鋪在96孔TC板中，密度為15000個(gè)細(xì)胞/每孔。每孔加入50μl測(cè)試化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為40μM)(包括作為陽性對(duì)照的STI571)。細(xì)胞在37℃、5％二氧化碳條件下孵育48小時(shí)后，每孔加入15μl MTT(普洛麥格(Promega)公司)，細(xì)胞另外孵育5小時(shí)。采用分光光度法對(duì)570nm處的光密度進(jìn)行定量，IC50值，即50％抑制所需的化合物濃度，由劑量-響應(yīng)曲線確定。
對(duì)細(xì)胞周期分布的作用 將32D或32D-p210細(xì)胞鋪在6孔TC板中，每孔5ml培養(yǎng)基、2.5×106個(gè)細(xì)胞，加入1或10μM測(cè)試化合物(包括作為對(duì)照的STI571)。繼而將細(xì)胞在37℃、5％二氧化碳條件下孵育24或48小時(shí)。取2ml細(xì)胞混懸液用PBS洗滌，在70％乙醇中固定1小時(shí)，并用PBS/EDTA/RNase A處理30分鐘。加入碘化丙啶(Cf＝10μg/ml)，使用FACScaliburTM系統(tǒng)(碧迪生物科學(xué)公司(BD Biosciences))以流式細(xì)胞法對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量。本發(fā)明的測(cè)試化合物證明對(duì)32D-p210細(xì)胞有凋亡作用，但不誘導(dǎo)32D親本細(xì)胞凋亡。
對(duì)細(xì)胞BCR-Abl自磷酸化的作用 BCR-Abl自磷酸化使用c-abl特異性捕獲抗體和抗磷酸酪氨酸抗體通過捕獲ELISA進(jìn)行定量。將32D-p210細(xì)胞鋪在96孔TC板中，每孔2×105個(gè)細(xì)胞、50μl培養(yǎng)基。每孔加入50μl測(cè)試化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為10μM)(包括作為陽性對(duì)照的STI571)。細(xì)胞在37℃、5％二氧化碳條件下孵育90分鐘。繼而將細(xì)胞用150μl含有蛋白水解酶和磷酸酶抑制劑的溶解緩沖液(50mM Tris-HCl(pH7.4)，150mM NaCl，5mM EDTA，1mMEGTA和1％ NP-40)在冰上處理1小時(shí)。將50μl細(xì)胞溶解物加入預(yù)先涂有抗abl特異性抗體并封閉的96孔光學(xué)板(optiplate)中。將板在4℃孵育4小時(shí)。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入50μl堿性磷酸酶結(jié)合的抗磷酸酪氨酸抗體，將板進(jìn)一步在4℃孵育過夜。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入90μl發(fā)光底物，采用AcquestTM系統(tǒng)(分子裝置公司(MolecularDevices))對(duì)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行定量。本發(fā)明的抑制表達(dá)BCR-Abl的細(xì)胞增殖的測(cè)試化合物以劑量依賴的方式抑制細(xì)胞BCR-Abl自磷酸化。
對(duì)表達(dá)BCR-Abl突變形式的細(xì)胞的增殖的作用 測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)表達(dá)野生型或突變形式的BCR-Abl(G250E、E225V、T315I、F317L、M351T)(使得對(duì)STI571耐藥或敏感性較低)的Ba/F3細(xì)胞的抗增殖作用。如上所述(在不含IL3的培養(yǎng)基中)，在10、3.3、1.1和0.37μM濃度測(cè)試這些化合物對(duì)表達(dá)BCR-Abl突變體的細(xì)胞和對(duì)未轉(zhuǎn)化細(xì)胞的抗增殖作用。由如上所述獲得的劑量-響應(yīng)曲線，確定了對(duì)未轉(zhuǎn)化細(xì)胞無毒性的化合物的IC50值。
FGFR3(酶測(cè)定法) 利用純化FGFR3(Upstate)進(jìn)行激酶活性測(cè)定，最終體積為10μL，其中含有0.25μg/mL酶的激酶緩沖溶液(30mM Tris-HCl pH7.5，15mMMgCl2，4.5mM MnCl2，15μM Na3VO4和50μg/mL BSA)和底物(5μg/mL生物素-聚-EY(Glu，Tyr)(CIS-US公司)和3μM ATP)。制備兩種溶液將5μL第一種溶液(含有在激酶緩沖液中的FGFR3酶)首先分配在384-格式

(珀金埃爾默公司(PerkinElmer))中，然后加入50nL化合物的DMSO溶液，然后向每孔加入5μL第二種溶液，其中含有在激酶緩沖液中的底物(聚-EY)和ATP。將反應(yīng)物于室溫溫育1小時(shí)，加入10μL HTRF檢測(cè)混合物終止反應(yīng)，所述混合物含有30mM Tris-HCl pH7.5、0.5M KF、50mM ETDA、0.2mg/mL BSA、15μg/mL鏈霉抗生物素-XL665(CIS-US公司)和150ng/mL穴狀化合物綴合的抗-磷酸酪氨酸抗體(CIS-US公司)。于室溫溫育1小時(shí)以允許鏈霉抗生物素-生物素相互作用后，在Analyst GT(分子裝置公司(Molecular Devices Corp.))上讀取時(shí)間分辨熒光信號(hào)。通過對(duì)每種化合物在12種濃度(從50μM按1:3稀釋至0.28nM)下的抑制百分比進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算得IC50值。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物的IC50范圍為10nM至2μM。
FGFR3(細(xì)胞測(cè)定法) 測(cè)試本發(fā)明化合物抑制轉(zhuǎn)化Ba/F3-TEL-FGFR3細(xì)胞增殖的能力，這種增殖依賴于FGFR3細(xì)胞激酶活性。將Ba/F3-TEL-FGFR3在用作培養(yǎng)基的補(bǔ)充有10％胎牛血清的RPMI 1640中培養(yǎng)至800,000細(xì)胞/mL混懸液。將50μL細(xì)胞培養(yǎng)基混懸液分配在384-孔格式平板中，密度為5000個(gè)細(xì)胞/孔。將本發(fā)明化合物溶解和稀釋在二甲基亞砜(DMSO)中。在DMSO中進(jìn)行十二點(diǎn)1:3系列稀釋，所得濃度梯度通常從10mM至0.05μM。向細(xì)胞加入50nL稀釋化合物，在細(xì)胞培養(yǎng)溫育器中溫育48小時(shí)。向細(xì)胞加入最終濃度為10％的

(特克診斷系統(tǒng)公司(TREK DiagnosticSystems))，其可用于監(jiān)測(cè)由增殖細(xì)胞所產(chǎn)生的還原性環(huán)境。在37℃細(xì)胞培養(yǎng)溫育器中溫育另外4小時(shí)后，在Analyst GT(分子裝置公司(MolecularDevices Corp.))上對(duì)來自被還原的

的熒光信號(hào)(激發(fā)波長530nm，發(fā)射波長580nm)進(jìn)行定量。通過對(duì)每種化合物在12種濃度下的抑制百分比進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算得IC50值。
FLT3和PDGFRβ(細(xì)胞測(cè)定法) 利用與上述FGFR3細(xì)胞活性所述相同的方法，除了分別使用Ba/F3-FLT3-ITD和Ba/F3-Tel-PDGFRβ代替Ba/F3-TEL-FGFR3，測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)FLT3和PDGFRβ細(xì)胞活性的作用。
b-Raf-酶測(cè)定法 測(cè)試本發(fā)明化合物抑制b-RAF活性的能力。在黑色壁和透明底的384孔MaxiSorp板(NUNC)中進(jìn)行測(cè)定。在DPBS中稀釋底物IκBα(1:750)并在各孔中加入15μL。在4℃下將板培養(yǎng)過夜并采用EMBLA板洗滌器、用TBST(25mM Tris，pH8.0，150mM NaCl和0.05％吐溫-20)洗滌3次。在室溫下，將板用Superblock(15μL/孔)封閉3小時(shí)，用TBST洗滌3次并拍干(pat-dried)。將含有20μM ATP(10μL)的測(cè)定緩沖液加到各孔中，然后加入100nL或500nL化合物。將B-RAF在測(cè)定緩沖液中稀釋(1μL稀釋至25μl)中并將10μl稀釋的B-RAF加到各孔中(0.4μg/孔)。在室溫下將該板培養(yǎng)2.5小時(shí)。通過用TBST洗滌該板6次來終止激酶反應(yīng)。在Superblock中稀釋Phosph-IκBα(Ser32/36)抗體(1:10,000)并將15μL加到各孔中。將板在4℃下培養(yǎng)過夜并用TBST洗滌6次。在Superblock中稀釋AP-結(jié)合的羊-抗-鼠IgG(1:1,500)并將15μL加到各孔中。在室溫下培養(yǎng)該板1小時(shí)并用TBST洗滌6次。在各孔中加入15μL Attophos AP熒光底物(普洛麥格(Promega)公司)并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。在Acquest或Analyst GT上采用熒光強(qiáng)度程序讀板(激發(fā)波長455nm，發(fā)射波長580nm)。
b-Raf-細(xì)胞測(cè)定法 在A375細(xì)胞中測(cè)試本發(fā)明化合物抑制MEK磷酸化的能力。A375細(xì)胞系(ATCC)衍生自人黑素瘤患者，它在B-Raf基因上具有V599E突變。由于B-Raf突變，磷酸化MEK的水平上升。在沒有血清的介質(zhì)中，于37℃將亞匯合到匯合的A375細(xì)胞與化合物一起培養(yǎng)2小時(shí)。然后用冷PBS洗滌細(xì)胞一次，用含有1％TritonX100的細(xì)胞溶解緩沖液裂解細(xì)胞。離心后，上層液用SDS-PAGE處理，然后轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上。將膜用抗-磷酸-MEK抗體(ser217/221)(細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)公司(Cell Signaling))進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。通過硝基纖維素膜上磷酸-MEK帶的密度監(jiān)測(cè)磷酸化MEK的量。
Upstate KinaseProfilerTM-放射酶濾膜結(jié)合分析 評(píng)價(jià)本發(fā)明的化合物抑制激酶名單中單個(gè)成員的能力。按這類方案以終濃度為10μM對(duì)化合物進(jìn)行測(cè)試，一式兩份。注意，激酶緩沖組合物和底物對(duì)于“Upstate KinaseProfilerTM”名單中所包括的不同激酶是不同的。在冰上，將激酶緩沖液(2.5μl，10×，需要時(shí)含有MnCl2)、活性激酶(0.001-0.01單位；2.5μL)、在激酶緩沖液中的特異性或聚(Glu4-Tyr)肽(5-500μM或0.1mg/ml)以及激酶緩沖液(50μM；5μl)在艾本德(eppendorf)管中混合。加入Mg/ATP混合液(10μL；67.5(或33.75)mM MgCl2，450(或225)μM ATP和1μCi/μl[γ-32P]-ATP(3000Ci/mmol))，反應(yīng)物在30℃孵育約10分鐘。將反應(yīng)混合物在2cm×2cm P81(磷酸纖維素，用于帶正電荷的肽底物)或Whatman 1號(hào)(用于聚(Glu4-Tyr)肽底物)的正方形紙上點(diǎn)樣。用于分析的正方形紙用0.75％磷酸洗滌4次，每次5分鐘，并用丙酮沖洗一次(5分鐘)。將正方形紙移入閃爍小瓶中，加入5ml閃爍合劑，摻入肽底物的32P(cpm)用Beckman閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行定量。計(jì)算每個(gè)反應(yīng)的抑制百分率。
游離形式或可藥用鹽形式的式I化合物顯示出有價(jià)值的藥理性質(zhì)，例如在本申請(qǐng)中所描述的體外試驗(yàn)所顯示的那樣。例如，對(duì)于野生型BCR-Abl和G250E、E255V、T315I、F317L和M351T BCR-Abl突變體而言，優(yōu)選式I化合物的IC50為1×10-10至1×10-5M，優(yōu)選在500nM、250nM、100nM和50nM以下。10μM濃度的式I化合物優(yōu)選顯示出在50％以上、優(yōu)選在約70％以上的對(duì)抗Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和/或TrkB激酶的抑制百分比。
應(yīng)當(dāng)理解，本文所述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅僅用于解釋說明的目的，它們的各種變通或變化方法將提示給本領(lǐng)域技術(shù)人員，并且被包括在本申請(qǐng)的宗旨和范圍以及所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。本文引用的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)引入本文作為所有目的的參考。
權(quán)利要求
1.式I化合物及其藥用鹽，
其中，
A選自CR5a和N；其中R5a選自氫、C1-6烷基和C3-8雜環(huán)烴基-C0-4烷基；其中所述的R5a的雜環(huán)烴基任選被C1-6烷基取代；
B選自CR5b和N；其中R5b選自氫和C1-6烷基；
n選自1、2、3和4；
m選自0和1；
R1選自氫和-X1C(O)OR6；其中X1選自價(jià)鍵和C1-6亞烷基；且R6選自氫和C1-6烷基；
R2選自C1-6烷基、C3-8雜環(huán)烴基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烴基-C0-4烷基和-X2NR7aR7b；其中X2選自價(jià)鍵和C1-6亞烷基；且R7a和R7b獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基；其中R2的任意雜環(huán)烴基任選被C1-6烷基取代；
R3選自鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R4選自-OR9、-NR8aC(O)NR8bR9、-C(O)NR8bR9、-NR8aC(O)R9、-C(O)OR8a和-C(O)NR8aX3OR9；其中X3選自價(jià)鍵和C1-6亞烷基；R8a和R8b獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基；且R9選自C1-6烷基、C6-10芳基-C0-4烷基、C3-12環(huán)烴基和C1-10雜芳基；其中R9的任意芳基、雜芳基或環(huán)烴基任選被1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自任選被C1-6烷基取代的鹵代-C1-6烷基和C3-8雜環(huán)烴基；
或者R8b和R9與R8和R9連接的氮原子一起形成任選被C1-6烷基取代的C1-10雜環(huán)烴基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中A選自CR5a和N；其中R5a選自氫、甲基、嗎啉代基-丁基和甲基-哌嗪基-丙基；和B選自CR5b和N；其中R5b選自氫和甲基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1選自氫和-X1C(O)OR6；其中X1是亞甲基；和R6選自氫和乙基；和R2選自甲基、乙基、嗎啉代基-乙基、二甲基氨基-乙基、吡咯烷基-乙基、環(huán)丙基、甲基-哌啶基、環(huán)丙基-甲基、二甲基氨基-丁基、二乙基氨基-乙基、二甲基氨基-丙基、乙基-哌嗪基-乙基和二乙基氨基-丙基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R4選自-NHC(O)R9、-OR9、-C(O)NHR9、-C(O)NHOR9、-C(O)OH、-C(O)N(CH3)2和吡咯烷基-羰基；其中R9是芐基、苯基、環(huán)丙基、乙基、甲氧基-丙基和苯并噻唑基；其中R9的任意苯基任選被1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立地選自三氟甲基、乙基-哌嗪基和甲基-哌嗪基。
5.權(quán)利要求4的化合物，選自
N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
N-乙氧基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
N-環(huán)丙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-N-(3-甲氧基-丙基)-苯甲酰胺，
N-苯并噻唑-2-基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-N-(3-三氟甲基-苯基)-苯甲酰胺，
7-(2，6-二氯-苯基)-9-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
3-甲氧基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酸，
N-乙基-3-甲氧基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
3-甲氧基-N，N-二甲基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
N-乙氧基-3-甲氧基-5-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
7-[3-甲氧基-5-(吡咯烷-1-羰基)-苯基]-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺，
3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-5-三氟甲基-苯甲酰胺，
4-(4-乙基-哌嗪-1-基甲基)-N-[4-甲基-3-(9-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺，
7-(3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2-氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(3，5-二甲氧基-苯基)-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2-氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
2-氯-N-乙氧基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-環(huán)丙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-3-[9-(2-二甲基氨基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-5-甲氧基-3-[8-氧代-9-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
2-氯-3-(9-環(huán)丙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-5-甲氧基-3-[9-(1-甲基-哌啶-4-基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
2-氯-3-(9-環(huán)丙基甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-3-[9-(4-二甲基氨基-丁基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-3-[9-(2-二乙基氨基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-3-[9-(3-二甲基氨基-丙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
9-環(huán)丙基-7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
4-氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-3-[9-乙基-2-(4-嗎啉-4-基-丁基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-環(huán)丙基-3-(9-環(huán)丙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-3-{9-乙基-2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基}-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-3-[9-(3-二乙基氨基-丙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-N-乙基-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-5-甲氧基-3-[9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
N-乙基-3-(1-乙基-2-氧代-2，7-二氫-1H-吡唑并[3，4-h][1，6]萘啶-3-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2-氯-N-乙基-3-(9-乙基-1-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
[7-(2-氯-3-乙基氨甲?；?5-甲氧基-苯基)-9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-3-基]-乙酸乙酯，
[7-(2-氯-3-乙基氨甲?；?5-甲氧基-苯基)-9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-3-基]-乙酸，
N-乙基-3-(9-乙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
N-乙基-3-甲氧基-5-[2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-8-氧代-8，9-二氫-3H-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基]-苯甲酰胺，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-9-(2-嗎啉-4-基-乙基)-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
9-環(huán)丙基-7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-2-甲基-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基-苯基)-9-[2-(4-乙基-哌嗪-1-基)-乙基]-3，9-二氫-1，3，4，9-四氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
2，4-二氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2，4-二氯-N-乙基-3-(9-乙基-8-亞氨基-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
2，4-二氯-N-乙基-3-(9-乙基-2-甲基-8-氧代-8，9-二氫-3H-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-7-基)-5-甲氧基-苯甲酰胺，
7-(2，6-二氯-3-羥基-5-甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮，
7-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯基)-9-乙基-3H-咪唑并[4，5-h][1，6]萘啶-8(9H)-酮，和
7-(3-芐氧基-2，6-二氯-5-甲氧基-苯基)-9-乙基-2-甲基-3，9-二氫-3，4，9-三氮雜-環(huán)戊二烯并[a]萘-8-酮。
6.藥物組合物，包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物和可藥用的賦形劑。
7.治療動(dòng)物的其中抑制激酶活性可預(yù)防、抑制或改善該疾病的病理和/或癥狀的疾病的方法，該方法包括給所述動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中的激酶選自Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB。
9.權(quán)利要求1的化合物在制備藥物中的用途，所述的藥物用于在動(dòng)物中治療其中Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB的激酶活性對(duì)該疾病的病理和/或癥狀起作用的疾病。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類新的化合物、包含這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物來治療或預(yù)防與激酶活性異?；蚴Э赜嘘P(guān)的疾病或紊亂、特別是涉及Abl、Bcr-Abl、Bcr-Abl(T315I)、ALK、BLK、BMX、BRK、C-kit、c-RAF、CSK、c-SRC、EGFR、Fes、FGFR3、Flt3、Fms、Fyn、IGF-1R、IR、JAK(2)、JAK(3)、KDR、Lck、NLK、p70S6K、PDGFRα、Ros、SAPK2α、SGK、SIK、Syk、Tie2和TrkB激酶異常激活的疾病或紊亂的方法。
文檔編號(hào)C07D471/14GK101437822SQ200780016605
公開日2009年5月20日 申請(qǐng)日期2007年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月11日
發(fā)明者任平達(dá), 吳報(bào)根, 張國寶, 謝永平, B·奧克拉姆, V·尼庫林, 霞 王, 崔夏洵 申請(qǐng)人:Irm責(zé)任有限公司