專利名稱：：雙環(huán)取代吡唑酮偶氮類衍生物、其制備方法及其在醫(yī)藥上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種通式(I)所示新的雙環(huán)取代吡唑酮偶氮類衍生物、其制備方法以及含有該衍生物的藥物組合物、以及其作為治療劑特血小板生成素(TPO)模擬物和它們用作血小板生成和巨核細胞生成促進劑的用途。
背景技術(shù)：
：血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)，又稱為巨核細胞生長發(fā)育因子(megakaryocytegrowthanddevelopmentfactor,MGDF)，血小板生成剌激因子(thrombocytopoiesisstimulatingfactor,TSF)，c-Mpl酉己{本(c-myeloproliferativeleukemialigand,c-Mpl),mpl酉己體，megapoietin，是一禾中與產(chǎn)生血小板有關(guān)的糖蛋白(Wendling,F"et.al"Biotherapy10(4):269-77(1998);KuterD丄etal"TheOncologist;1:98-106(1996);Metcalf,Nature369:519-520(1994》。在某些情況下,TPO的活性源自TPO與TPO受體(也稱MPL)的結(jié)合。TPO受體已經(jīng)被成功克隆，也進行了氨基酸序列的測序(Vigonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.,89:5640，5644(1992))。TPO是一種332-氨基酸糖基化多肽，在調(diào)節(jié)巨核細胞生成和由骨髓巨核細胞產(chǎn)生血小板的過程中起著關(guān)鍵的作用(KuteretaI.,Proc.Nat!'Acad.Sci.USA91:11104-11108(1994);Barleyetal"Cell77:1117-1124(1994);Kaushanskyetal.,Nature369:568-571(1994);Wendlingetal.,Nature369:571-574(1994);andSauvageetal"Nature369:533-538(1994))。TPO產(chǎn)生于肝臟但主要作用于骨髓，刺激干細胞分化成為巨核細胞以及巨核細胞的增殖，多倍體化，最重要的是進入血小板身體循環(huán)分裂。TPO在血小板減少癥和大量關(guān)于增加血小板數(shù)量、大小、增加實驗動物同位素參入血小板的研究中是一種主要的調(diào)節(jié)齊i」(MetcalfNature369:519-520(1994))。TPO被認為主要通過幾個途徑影響巨核細胞生成(l)引起巨核細胞大小和數(shù)量的增加；(2)增加DNA內(nèi)含物，多倍體的形式，巨核細胞；(3)增加巨核細胞的核內(nèi)有絲分裂；(4贈加成熟的巨核細胞；(5)增加前體細胞的百分比，小乙酰膽堿酶一陽性形式的細胞，骨髓細胞。血小板是血液凝固必需的，當它的數(shù)量非常低時，病人就有出血死亡的危險。因此，TPO已經(jīng)被用于診斷和治療多種血液疾病，如主要由血小板缺陷引起的疾病。同時，TPO可以用于治療血小板減少癥，尤其是為治療癌癥和淋巴瘤而進行的化療、放療和骨髓移植?；颊咭蜓“鍦p少癥而導(dǎo)致血小板水平恢復(fù)過慢是一個嚴重的問題，因此希望可以找到一種治療血小板減少癥的活性TPO類似物。幾年前，多肽類TPO類似物的發(fā)展被報導(dǎo)。(WO96/4018,WO96/40750,W098/25965)這些多肽被設(shè)計結(jié)合并活化TPO受體，但是不具備天然TPO的序列同源性。最近幾年，一些小分子的活性TPO類似物被報導(dǎo)。包括l，4-苯并二氮雜卓-2-酮類(JP11001477)，由希夫堿配體得到的金厲絡(luò)合物(WO99/11262)，環(huán)多胺衍生物(W000/28987)，噻咪-2-基-苯酰胺類(WOOl/07423,WO01/53267),偶氮-芳基衍生物(W000/35446,WOl/17349),2-芳基-萘唑類(W001/39773,WO01/53267)和縮氨基脲衍生物(WO01/34585)。在基于細胞的體系內(nèi)，所有這些分子都能活化細胞膜上的TPO受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，一些類型能直接作用于TPO受體本身。據(jù)介紹，取代縮氮硫脲居然是非常有效的TPO受體激動劑。這一系列中一些最優(yōu)先的化合物被發(fā)現(xiàn)可以刺激TPO-responsive人類細胞系和低于1OOnM的人類骨髓培養(yǎng)液中的TPO的增殖和分化。GSK公司在專利(WO-OOl89457/WO-01089457/WO-2006064957)中報道血小板生成素類似物d加mbopag，并表現(xiàn)出了相當?shù)幕钚?。eltrombopag，本發(fā)明希望提供作為TPO模擬物而可以治療血小板減少的化合物。本發(fā)明公開了一系列化合物且更有效地用作？PO受體激動劑，是有效的TPO模擬物。
發(fā)明內(nèi)容為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種通式(I)所示的羥基-l-偶氮苯化合物，以及它們的互變異構(gòu)體、對映體、非對映體、消旋體和藥學(xué)上可接受的鹽，以及代謝產(chǎn)物和代謝前體或前藥。R選自羥基或羧酸酯；R2、R3和R4各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、鹵素、芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基進一歩被一個或多個選自烷基、鹵素、羥基、四唑、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、垸氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或垸基；n是24。優(yōu)選的，R選自羥基或羧酸酯；R^是芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基進一歩被一個或多個選自垸基、鹵素、羥基、四唑、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；R2是氫原子；R3和R4各自獨立地選自氫原子、垸基、垸氧基或鹵素；R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、垸氧基、鹵素、羥基、氨基、礎(chǔ)基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或烷基；n是24。更優(yōu)選的，'R選自羥基；R,是芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基進一歩被一個或多個選自烷基、鹵素、羥基、四唑、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；R2是氫原子；R3和R4各自獨立地選自氫原子、垸基、垸氧基或鹵素；R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、垸氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或垸基；n是24。本發(fā)明中所述的藥學(xué)上可接受的鹽包括氨基乙醇鹽，膽堿季胺鹽等。本發(fā)明的典型化合物包括，但不限于-.<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>進一歩，本發(fā)明包括通式(IA)所示的化合物，其作為通式(I)化合物合成的中間體:(IA)在本發(fā)明的另一個方面，是制備中間體(IA)所示化合物的制備方法，包括以下歩驟取代的氨基苯并多元環(huán)在酸性溶液中與硝酸鈉反應(yīng)重氮化，再通過二氯亞錫還原得到肼，肼與親電的羰基化合物如乙酰乙酸乙酯、在適宜的溶劑中(如乙酸、乙醇等)加熱下縮合得到通式(IA)吡唑化合物。進一歩，本發(fā)明的另一方面是通式化合物(I)的制備方法，該方法包括:(I)通過將取代的苯胺類化合物與硝酸鈉在適宜的酸(如硝酸、硫酸、鹽酸中)重氮化，再與通式(IA)化合物在堿性(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀)溶液中發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)得到通式(I)化合物，并且接下來根據(jù)需要成鹽。本發(fā)明涉及通式(I)化合物在制備TPO調(diào)節(jié)劑中的用途，本發(fā)明涉及制備治療有需要的哺乳動物，包括人，血小板減少藥物中的用途。包括共同服用治療有效量的選自下列的藥物集落剌激因子、細胞因子、趨化因子、白細胞介素或細胞因子受體激動劑或拮抗劑、可溶的受體、受體激動劑或拮抗劑抗體或與一個或多個所述藥物具有相同的機理而起作用的肽或小分子類。本發(fā)明涉及一種藥用組合物、其包括藥物有效劑量的通式(I)化合物及其藥學(xué)上可以接收的鹽、水合物、溶劑化合物和酯。進一歩含有共同服用的治療有效量的選自下列的藥物集落刺激因子、細胞因子、趨化因子、白細胞介素或細胞因子受體激動劑。本發(fā)明涉及一種制備含有藥用載體或稀釋劑和有效量的通式(I)化合物及其藥學(xué)上可以接收的鹽、水合物、溶劑化合物和酯的藥物組合物的方法，該方法包括將通式(I)化合物與藥用載體和稀釋劑相結(jié)合。本發(fā)明涉及一種通式(I)化合物作為免疫佐劑的用途。其中免疫佐劑結(jié)合和/或免疫調(diào)節(jié)劑服用。本發(fā)明還涉及一種針對通式(I)化合物的篩選方法，包括使用細胞處理不同濃度下的權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物，收集并裂解細胞，定蛋白到相同的量，蛋白變性后，進行SDS-PAGE,轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜，分別與抗STAT3磷酸化抗體(一抗)，抗兔IgG抗體(二抗)進行雜交，最后用ECL試劑盒檢測，X光片曝光，根據(jù)相應(yīng)蛋白條帶的大小及密度，評價實施例1化合物對STAT3的激活程度。發(fā)明的詳細說明除非有相反陳述，下列用在說明書和權(quán)利要求書中的術(shù)語具有下述含義。"烷基"指飽和的脂族烴基團，包括1至20個碳原字的直鏈和支鏈基團。優(yōu)選含有1至10個碳原子的垸基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。更優(yōu)選的是含有1至4個碳原子的低級垸基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、異丁基或叔丁基等。垸基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個，獨立地選自烷基、烷氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯。"芳基"指具有至少一個芳環(huán)結(jié)構(gòu)的基團，即具有共軛的兀電子體系的芳環(huán)，包括碳環(huán)芳基、雜芳基和聯(lián)芳基。炔基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個，獨立地選自烷基、垸氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯。"雜芳基"指具有1至3個雜原子作為環(huán)原子，其余的環(huán)原子為碳的芳基，雜原子包括氧、硫和氮。所述環(huán)可以是5元或6元環(huán)。雜環(huán)芳基基團的實例包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等。雜芳基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個，獨立地選自垸基、烷氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯。"羥基"指-OH基團。"烷氧基"指-O-(烷基)和-O-(未取代的環(huán)垸基)。代表性實例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。烷氧基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基優(yōu)選為一個或多個，獨立地選自烷基、垸氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、芳基、雜芳基、羧酸或羧酸酯。"鹵素"指氟、氯、溴或碘。"氨基"指-NH2。"氰基"指-CN。"硝基"指-N02。"羧酸"指(垸基)C(=0)OH。"羧酸酯"指(烷基)C(O)O(垸基)。"藥物組合物"表示一種或多種本文所述化合物或其生理學(xué)上/藥學(xué)上可接受的鹽或前體藥物與其他化學(xué)組分的混合物，其他組分例如生理學(xué)/藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進化合物對生物體的給藥。本發(fā)明化合物的合成方法為了完成,發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案-流程圖I(ia)取代的氨基苯并多環(huán)在酸性溶液中與硝酸鈉反應(yīng)重氮化，再通過二氯亞錫還原得到肼，肼與親電的羰基化合物如乙酰乙酸乙酯、在適宜的溶劑中(如乙酸、乙醇等)加熱下縮合得到通式(IA)吡唑化合物。流程圖II<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>取代的鄰溴苯酚經(jīng)硝酸鈉硝化得到硝基苯酚，硝基苯酚在適宜的溫度下與鹵代甲烷發(fā)生烷基化反應(yīng)得到羥基被保護的硝基苯酚，羥基被保護的硝基苯酚與取代的芳基硼酸在四(三苯基膦)鈀催化下發(fā)生Suzuki偶聯(lián)，得到取代的芳基化合物。取代的芳基化合物在氫氣氛下，鈀/碳還原得到芳基苯胺，芳基苯胺在溴化氫中去掉烷基得到去保護的苯胺?；蛘撸〈姆蓟衔镌阡寤瘹渲腥サ敉榛玫饺ケＷo的硝基化合物，硝基化合物在氫氣氛下，鈀/碳還原得到去保護的芳基苯胺。將取代的苯胺類化合物通過與硝酸鈉在適宜的酸(如硝酸、硫酸、鹽酸)中重氮化，再與通式CI/^化合物在堿性(如碳酸氫鈉、碳酸氫鉀)溶液中發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)得到通式(I)化合物。本發(fā)明另一方面涉及針對本發(fā)明通式(I)化合物的篩選方法，包括使用細胞處理不同濃度下的通式(I)化合物，收集并裂解細胞，定蛋白到相同的量，蛋白變性后，進行SDS-PAGE,轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜，分別與抗STAT3磷酸化抗體(一抗:i,抗兔IgG抗體(二抗)進行雜交，最后用ECL試劑盒檢測，X光片曝光，根據(jù)相應(yīng)蛋白條帶的大小及密度，評價通式(I)化合物對STAT3的激活程度。具體實施例方式以下結(jié)合實施例用于進一步描述本發(fā)明，但這些實施例并非限制著本發(fā)明的范圍。實施例化合物的結(jié)構(gòu)是通過核磁共振('HNMR)或質(zhì)譜(MS)來確定的。'HNMR位移(S)以百萬分之一(ppm)的單位給出。'HNMR的測定是用BrukerAVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代甲醇(CD30D)、氘代氯仿(CDCl3)，六氘代二甲基亞砜(DMSO-d6)內(nèi)標為四甲基硅垸(TMS)，化學(xué)位移是以10—、ppm)作為單位給出；MS的測定用FINNIGANLCQAd(ESI)質(zhì)譜儀(生產(chǎn)商Therm,型號FinniganLCQadvantageMAX;IC5o值的測定用NovoStar酶標儀(德國BMG公司)；薄層硅膠使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254硅膠板；柱層析一般使用煙臺黃海硅膠200300目硅膠為載體。實施例12'-羥基-3'-『(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-妣唑-4-亞基)-肼基l-聯(lián)苯基-3-羧酸二乙醇胺鹽第一步2-溴-6-硝基-苯酚將60mL濃硫酸稀釋到186mL水中，冷卻至室溫后加入硝酸鈉(79.2g，0.932mol)，保持25。C以下，滴加鄰溴苯酚la(60mL,0.516mol)，室溫反應(yīng)2小時。點板跟蹤至原料消失，加入320mL乙酸乙酯溶解析出的固體，分別用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物2-溴-6-硝基-苯酚lb(48.2g)。產(chǎn)率42.8%。MSm/z(ESi):218[M+1]。'HNMR(400MHz,CDC13):S6.88-7.02(m,1H),7.89-7.91(d,J=8Hz,1H)，8,12-8.15(m，1H),U,18(s,1H)。第二歩l-溴-2-甲氧基-3-硝基-苯將2-溴-6-硝基-苯酚lb(46.55g,0.214mol)溶解于500mL丙酮中，加入碳酸鉀(35.36g,0.256mol)和碘甲烷(20.1mL,0.32mol)，70'C加熱回流40小時。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，加入1300mL乙酸乙酯和500mL水，水相用乙酸乙酯萃取(300mLx2)，合并有機相，分別用4N鹽酸和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物1-漠-2-甲氧基-3-硝基-苯lc(44.59g)。產(chǎn)率90.0%。MSm/z(ESI):234[M+1]。鄰二少一2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-3-羧酸氮氣氛下將l-溴-2-甲氧基-3-硝基-苯lc(23.25g,0.10mol)、3-羧基苯基硼酸(19.5g,0.117moI)和四(三苯基膦)鈀(8.86g，7.7mol)溶解于100mL2N碳酸鈉溶液和500niLl,4-二氧六環(huán)的混和溶劑中，105。C加熱回流43小時。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，加入300mL6N鹽酸溶液和400mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(200mLx2)，合并有機相，用無水硫酸鍰干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產(chǎn)物2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-3-羧酸ld(53.93g)。MSm/z(ESI):272[M-1]。'HNMR(400MHz,CDC13):S3.44-3,46(d,J=8Hz,3H)，7.42-7.46(m,1H),7.63-7.67(m,1H),7.21-7.75(m,1H),7.82-7.84(m,1H),7.90-7.92(ni,1H),8.01-8.03(d,J=8Hz,1H),8.11(s,IH)。第四步2'-甲氧基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸氮氣氛下將2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-3-羧酸Id(0.48g，1.74mmol)溶解于60mL乙醇中，加入0.5g鈀-碳和甲酸銨(l.lg,17.4薩ol)，80。C加熱回流20分鐘。點板跟蹤至原料消失，過濾，濾液減壓濃縮，干燥，得到標題產(chǎn)物2'-甲氧基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸le(0.42g)。產(chǎn)率93.3%。MSm/zCESI):242[M-1]。第五歩2'-羥基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸將2'-甲氧基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸le(2.5g,10.3mmol)溶解于100mL溴化氫水溶液(40%)中，12CTC加熱回流過夜。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸lf(2.4g)，產(chǎn)率88.8%。MSm/z(ESI):230[M+1]。[注參考文獻WO0189457]第六步5-肼基-茚滿冰浴下將5-氨基-茚滿lg(3.59g,27.0mmol)溶解于20mL濃鹽酸中，攪拌10分鐘。滴加入亞硝酸鈉(1.86g,27.0mmol)的10mL水溶液，冰浴下繼續(xù)攪拌15分鐘備用。冰鹽浴下將二水合二氯化錫(24.4g,108.0mmol)溶解于10mL濃鹽酸中，將備用中間體溶液加入其中，升至室溫反應(yīng)1.5小時。冰浴下用40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9，加入400mL乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，干燥，得到標題產(chǎn)物5-肼基-茚滿lh(2.05g)。產(chǎn)率51.3%。MSm/z(ESI):149[M+1]。第七歩2-茚滿-5-基-5-甲基-2，4-二氫-吡唑-3-酮將5-肼基-茚滿lh(2.05g,13.8mmol)溶解于50mL乙酸中，加入乙酰乙酸乙酯(1.76mL,13.8mmol)，加熱至IO(TC過夜。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物2-茚滿-5-基-5-甲基-2,4-二氫-吡唑-3-酮li(1.84g)。產(chǎn)率62.3%。MSm/z(ESI):215[M+1]。i麗MR(400MHz,CDC13):S7.69(s,1H),7.60(d,J=8.0Hz,1H),7.24(d,J=8Hz,1H)，3.44(s,2H),2.90-2.97(m,4H),3.21(s,3H),2.07-2.14(m,2H)。第八歩2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-3-羧酸冰浴下將3'-氨基-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸lf(267mg,1.16mmol)溶解于lOmL鹽酸(1N)中，滴加入亞硝酸鈉(88mg,1.28mmol)的10mL水溶液，再加入2-茚滿-5-基-5-甲基-2,4-二氫-吡唑-3-酮li(249mg,1.16mmol)，用飽和碳酸氫鈉溶液將反應(yīng)液pH調(diào)至8，加入10mL乙醇，升至室溫過夜。點板跟蹤至原料消失，過濾，干燥，用甲醇重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-3-羧酸lj(60mg)。產(chǎn)率11.4%。MSm/z(ESI):453[M-l]'HNMR(400MHz,DMSO-A):52.03-2.10(m，2H),2.34(s,3H)，2.86-2.93(m，4H),7.13-7.17(m，2H)，7.28-7.30(d,J=8.1Hz，1H)，7.60-7.82(m,5H)，7.96-7.98(d,J=8.1Hz,1H)，8.13(s,1H)，9.66(s，1H)，13.03(s,1H)，13.76(s,1H)。第九步2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-卩比唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-3-羧酸二乙醇胺鹽3(TC將2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l,5-Zl氫-吡哇-4-亞萄-肼基]-聯(lián)苯基-3-羧酸lj(454mg,1.0mmol)溶解于16mL四氫呋喃中，緩慢加入2mL水使溫度不低于28"C,過濾，濾液冷卻至室溫。氮氣氛下將乙醇胺(143mg，2.35mmol)溶解于26mL四氫呋喃中，室溫攪拌3小時。過濾，干燥，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-[(22)1^'-(1-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-1，5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基:i-聯(lián)苯基-3-羧酸二乙醇胺鹽l(553mg)。產(chǎn)率96.0%。MSm/z(ESI):453[M-1]。實施例22'-羥基-3'-「(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l，5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基l-聯(lián)苯基-4-羧酸第一步2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-4-羧酸氮氣氛下將l-溴-2-甲氧基-3-硝基-苯lc(23.3g，0.10mol)、4-羧基苯基硼酸(19.5g,0.U7mol)和四(三苯基膦)鈀(8.86g,7.7mol)溶解于100mL碳酸鈉溶液(2N)和500mLl,4-二氧六環(huán)的混和溶劑中，105'C加熱回流43小時。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，加入300mL鹽酸溶液(6N)和400mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(200mLx2)，合并有機相，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產(chǎn)物2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-4-羧酸2d(50.1g)。MSm/z(ESI):272[M-1]。鎮(zhèn)一-■匕弟一少2'-甲氧基-3'-氨基-聯(lián)苯基-4-羧酸氮氣氛下將2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-4-羧酸2d(0.48g，1.75mmol)溶解于60mL乙醇中，加入0.5g鈀-碳和甲酸銨(l.lg，17.5mmol)，80。C加熱回流20分鐘。點板跟蹤至原料消失，過濾，減壓濃縮，干燥，得到標題產(chǎn)物2'-甲氧基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸2e(0.40g)。產(chǎn)率94.0%。MSm/z(ESI):242[M-l〗。第三歩3'-氨基-2'-羥基-聯(lián)苯基-4-羧酸將2'-甲氧基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸2e(4.0g,16.4mm'ol)溶解于100mL氫溴酸溶液(48%)中，12(TC加熱回流24小時。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物3'-氨基-2''-羥基-聯(lián)苯基-4-羧酸2f(3.50g)。產(chǎn)率92.1%。MSm/z(ESI):228[M-l〗。第四歩2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-l，5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-4-羧酸冰浴下將3'-氨基-2'-羥基-聯(lián)苯基-4-羧酸2f(275mg,1.20mmol)溶解于10mL鹽酸(1N)中，滴加入亞硝酸鈉(91mg,1.32mmol)的10mL水溶液，再加入2-茚滿-5-基-5-甲基-2,4-二氫-吡唑-3-酮li(257mg,1.20mmol)，用飽和碳酸氫鈉溶液將反應(yīng)液pH調(diào)至8，加入10mL乙醇，升至室溫過夜。點板跟蹤至原料消失，過濾，干燥，用甲醇重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-基-3-甲基-5-羰基-1,5-二氫-卩比唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-4-羧酸2(83mg)。產(chǎn)率15.2%。MSm/zCESI):453[M-1]。實施例35'-氟-2'-羥基-3'-「(2Z)N'-n-茚滿-5-yl-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-卩比唑-4-亞基)-肼基l-聯(lián)苯基-3-羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>第一歩2-溴-4-氟-6-硝基-苯酚冰鹽浴下將2-溴-4-氟-苯酚3a(8.0g,41.9mmol)溶解于10mL硫酸溶液(50%)中，滴加入硝酸鈉(7.1g，83.5mmol)的24mL的硫酸溶液(25%)，室溫反應(yīng)1.5小時。點板跟蹤至原料消失，加入50mL水，用乙酸乙酯萃取(50mLx2)，合并有機相，乙酸乙酯層分別用水和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產(chǎn)物2-溴-4-氟-6-硝基-苯酚3b(8.0g)，直接用于下一步反應(yīng)，產(chǎn)率80.8%。第二歩l-溴-5-氟-2-甲氧基-3-硝基-苯將2-溴-4-氟-6-硝基-苯酚3b(24.7g,104.7mmol)和碳酸鉀(17.34g，125.6mmol)溶解于300mL丙酮中，快速加入碘甲烷(9.8mL,157.1mmol)，8CTC加熱回流22小時。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，加入200mL乙酸乙酯和200mL水，水相用乙酸乙酯萃取(IOOmLx2)，合并有機相，分別用4N鹽酸和飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物l-溴-5-氟-2-甲氧基-3-硝基-苯3c(16.18g)。產(chǎn)率61.8%。MSm/z卿)252[M+1]。NMR(CDC13):S3.99(s,3H)，7.81(d,J=8.0Hz，1H)，7.28(q，J=8.0Hz,4.0Hz，1H),7.89(q,J=8.0Hz,4.0Hz,1H)。第三步5'-氟-2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-3-羧酸氮氣氛下將l-溴-5-氟-2-甲氧基-3-硝基-苯3c(16.18g,64.7mmol)、3-羧基苯基硼酸(13.88g,77.7mmol)和四(三苯基膦)鈀(3.73g,3.2nimol)溶解于65mL碳酸鈉溶液(2N)和300mU,4-二氧六環(huán)的混和溶劑中，120'C加熱回流24小吋。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，加入150mL鹽酸溶液(6N)和200mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃収(100mLx2)，合并有機相，用無水硫酸鑌干燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到標題產(chǎn)物5'-氟-2'-甲氧基-3'-礎(chǔ)基-聯(lián)苯基-3-羧酸3d(7.86g)。產(chǎn)率41.7%。MSm/z(ESI):290[M-1]。第四歩3'-硝基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸氮氣氛下將5'-氟-2'-甲氧基-3'-硝基-聯(lián)苯基-3-羧酸3d(2.91g，10.0mtnol)溶解于10mL溴化氫水溶液(40X)中，12(TC加熱回流過夜。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物3'-硝基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸3e(2.38g)，直接用于下一歩反應(yīng)。產(chǎn)率85.7%。MSm/z(ESI):277[M-1]。第五歩3'-氨基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸將3'-硝基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸3e(417mg,1.5mmol)溶解于60mL乙醇中，加入0.5g鈀-碳和甲酸銨(0.95g,1.5mmol)，80'C加熱回流20分鐘。點板跟蹤至原料消失，過濾，減壓濃縮，干燥，得到標題產(chǎn)物3'-氨基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸3f(339mg)。產(chǎn)率91.5%。MSm/z(ESI):246[M-1]。第六步5'-氟-2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-yl-3-甲基-5-羰基-l，5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-3-羧酸冰浴下將3'-氨基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸3f(296mg,1.20mmol)溶解于lOmL鹽酸(1N)中，滴加入亞硝酸鈉(91mg,1.32mmol)的10mL水溶液，再加入2-茚滿-5-基-5-甲基-2,4-二氫-卩比唑-3-酮li(257nig,1.20mmo1)，用飽和碳酸氫鈉溶液將反應(yīng)液pH調(diào)至8，加入10mL乙醇，升至室溫過夜。點板跟蹤至原料消失，過濾，干燥，用甲醇重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物5'-氟-2'-羥基-3'-[(2Z)N'-(l-茚滿-5-yl-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基]-聯(lián)苯基-3-羧酸3(87mg)。產(chǎn)率14.1%。MSm/z(ESI):471[M-1]。實施例4202'-羥基-3W(2Z)N'-「3-甲基-5-羰基-l-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-l,5-二氫-吡唑-4-亞基肼基}-聯(lián)苯基-3-羧酸果一歩2-肼基-5，6,7,8-四氫-萘冰浴下將2-氨基-5,6,7,8-四氫-萘4g(3.68g,25.0mniol)溶解于20mL濃鹽酸中，攪拌10分鐘。滴加入亞硝酸鈉(1.72g,25.0mmol)的10mL水溶液，冰浴下繼續(xù)攪拌15分鐘備用。冰鹽浴下將二水合二氯化錫(22.6g,100mmol)溶解于10mL濃鹽酸中，將備用中間體溶液加入其中，升至室溫反應(yīng)1.5小時。冰浴下用40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9，加入400mL乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，干燥，得到標題產(chǎn)物2-肼基-5,6，7,8-四氫-萘4h(2.19g)。產(chǎn)率53.7%。MSm/z(ESI):163[M+1]。第二步5-甲基-2-(5,6，7,8-四氫-萘-2-基)-2，4-二氫-吡唑-3-酮將2-肼基-5,6,7,8-四氫-萘4h(2.0g，12.3mmol)溶解于50mL乙酸中，再加入乙酰乙酸乙酯(1.57mL,12.3mmo1)，加熱至IO(TC過夜。點板跟蹤至原料消失，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物5-甲基-2-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-2,4-二氫-卩比唑-3-酉同4i(1.58g)。產(chǎn)率56.2%。MSm/z(ESI):457[2M+1]。H'NMR(CDCl3):S7.54-7.58(m，2H),57.08-7.10(d,J=8Hz,1H)，S3.43(s,2H),52.77-2,8l(m,4H)，S2.21(s，3H),S1.80-1.83(m,4H).第三歩2'-羥基-3'-((2Z)N'-[3-甲基-5-羰基-l-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-1,5-二氫-吡唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-3-羧酸冰浴下將3'-氨基-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸lf(250mg,1.09mmol)溶解于10mL鹽酸(1N)中，滴加入亞硝酸鈉(82mg,1.2mmol)的10mL水溶液，再加入5-甲基-2-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-2,4-二氫-吡唑-3-酮4i(249nig,1.09mmol)，用飽和碳酸氫鈉溶液將反應(yīng)液pH調(diào)至8，加入10niL乙醇，升至室溫過夜。點板跟蹤至原料消失，過濾，干燥，用甲醇重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-U2Z)N'-[3-甲基-5-羰基-1-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-1，5-二氫-吡唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-3-羧酸4(59mg)。產(chǎn)率11.6%。MSm/z(ESI):467[M-1]。實施例52'-羥基-3'-R2Z)N'-r3-甲基-5-羰基-l-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-l,5-二氫-吡唑-4-亞基1-肼基}-聯(lián)苯基-4-羧酸2'-羥基-3'-{(2Z)N，-[3-甲基-5-羰基-l-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-l,5-二氫-P比唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-4-羧酸冰浴下將3'-氨基-2'-羥基-聯(lián)苯基-4-羧酸2f(250mg,1.09mmol)溶解于10mL鹽酸(1N)中，滴加入亞硝酸鈉(82mg,1.2mmol)的10mL水溶液，再加入5-甲基-2-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-2，4-二氫-吡唑-3-酮4i(249mg,1.09mmol)，用飽和碳酸氫鈉溶液將反應(yīng)液pH調(diào)至8，加入10mL乙醇，升至室溫過夜。點板跟蹤至原料消失，過濾，干燥，用甲醇重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-((2Z)N'-[3-甲基-5-羰基-1-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-1,5-二氫-吡唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-4-羧酸5(63mg)。產(chǎn)率12.4%。MSm/z(ESI):467[M-1]。實施例65'-氟-2'-羥基-K(2Z)N'-「3-甲基-5-oxo-l-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-l,5-二氫-吡唑-4-亞基l-肼基l-聯(lián)苯基-3-羧酸2'-羥基-3'-((2Z)N'-[3-甲基-5-羰基-l-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-1,5-二氫-吡唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-4-羧酸冰浴下將3'-氨基-5'-氟-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸3f(250mg,1.01mmol)溶解于10mL鹽酸(1N)中，滴加入亞硝酸鈉(77mg,1.12mmol)的10mL水溶液，再加入5-甲基-2-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-2,4-二氫-0比唑-3-酉同4i(230mg，1.01mmol)，用飽和碳酸氫鈉溶液將反應(yīng)液pH調(diào)至8，加入10mL乙醇，升至室溫過夜。點板跟蹤至原料消失，過濾，干燥，用甲醇重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-{(22),[3-甲基-5-羰基-1-(5,6,7,8-四氫-萘-2-基)-1,5-二氫-批唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-4-羧酸6(64mg)。產(chǎn)率13.1%。MSm/z(ESI):485[M-1]。實施例73'-r(2Z)N'-(l-雙環(huán)r4.2.01八碳-l(6),2,4-三烯-3-基-3-甲基-5-羰基-l，5-二氫-卩比唑-4-亞基)-肼基l-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸將原料雙環(huán)[4.2.0]八碳-l(6),2，4-三烯(根據(jù)文獻Synthesis.,1970,2(2),82-3制備而成)硝化后氫化還原得到3-氨基-雙環(huán)[4.2.0]八碳-1(6),2,4-三烯，按照實施例1中第六步至第七歩相同的方法得到化合物2-雙環(huán)[4.2.0]八碳-l(6),2，4-三烯-3-基-5-甲基-2,4-二氫-P比唑-3-酮。使用實施例1中第五步中所得到的化合物2'-羥基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸lf作原料，按照本發(fā)明實施例1第八步所述相同方式進行該原料與2-雙環(huán)[4.2.0]八碳-1(6),2,4-三烯-3-基-5-甲基-2,4-二氫-吡唑-3-酮的反應(yīng)，則得到標題產(chǎn)物3'-[(2Z)N'-(l-雙環(huán)[4.2.0]八碳-l(6)，2，4-三烯-3-基-3-甲基-5-羰基-l,5-二氫-吡唑-4-亞基)-肼基]-2'-羥基-聯(lián)苯基-3-羧酸7。MSm/z(ESI):439.5[M-1]。實施例82'-羥基-3W(2Z)N'-[3-甲基-1-(1-甲基-茚滿-5-基V5-羰基-1,5-二氫-吡(味-4-亞基卜肼基}-聯(lián)苯基-3-羧酸將原料l-甲基-茚滿(根據(jù)文獻JOC.,1984,49(22),4226-37制備而成)硝化后氫化還原得到1-甲基-5-氨基-茚滿，按照實施例1中第六歩至第七歩相同的方法得到化合物5-甲基-2-(1-甲基-茚滿-5-基)-2,4-二氫-P比唑-3-酮。使用上述第五歩中所得到的化合物2'-羥基-3'-氨基-聯(lián)苯基-3-羧酸lf作原料，按照本發(fā)明實施例1第八歩所述相同方式進行該原料與5-甲基-2-(1-甲基-茚滿-5-基)-2，4-二氫-吡唑-3-酮的反應(yīng)，則得到標題產(chǎn)物2'-羥基-3'-K2Z)N'-[3-甲基-l-(l-甲基-茚滿-5-基)-5-羰基-1,5-二氫-吡唑-4-亞基]-肼基}-聯(lián)苯基-3-羧酸8。MSni/z(ESI):467,5[M-1]。測試例生物學(xué)評價實施例9TPO系列化合物對32D-Mpl細胞中STAT3的激活作用1.摘要觀察TPO系列化合物(實施例l)對體外培養(yǎng)的已轉(zhuǎn)染TPO受體Mpl的32D-Mpl小鼠前淋巴B細胞中STAT3的激活作用。實驗用0.01^M,0.03pM,O.UiM,0.3^M,1pM的實施例l化合物以及TPO-EoA處理細胞后，用Westernblot方法評價并比較各個化合物的作用大小。實驗發(fā)現(xiàn)實施例l的活性與TPO-EoA相當。2.試驗?zāi)康脑u價TPO系列化合物實施例1對32D-Mpl細胞中STAT3的激活作用大小。3.試驗試劑、藥物及儀器RPMI-1640購自GibcoBRL公司；胎牛血清購自Hyclone公司；抗STAT3磷酸化抗體購自Cel.lsignaling公司；抗兔lgG二抗，硝酸纖維素膜，以及ECL檢測試劑盒2購自Amershan公司；其他試劑購自Sigma公司4.試驗方法32D-Mpl細胞用0.01^VI，0.03|_iM,0.1jxM，0.3pM,1^M的各個化合物處理，然后，收集并裂解細胞，定蛋白到相同的量。蛋白變性后，進行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜，分別與抗STAT3磷酸化抗休(一抗)，抗兔IgG抗體(二抗)雜交，最后用ECL試劑盒檢測，X光片曝光。根據(jù)相應(yīng)蛋白條帶的大小及密度，評價實施例1化合物對STAT3的激活程度。5.結(jié)果化合物TPO活性EC50值<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>權(quán)利要求1.一種由通式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化合物或酯其中R選自羥基或羧酸酯；R1、R2、R3和R4各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、鹵素、芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基進一步被一個或多個選自烷基、鹵素、羥基、四唑基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或烷基；n是2～4。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化合物或酯，其中R選自羥基或羧酸酯；Ri是芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基進一歩被一個或多個選自烷基、卣素、羥基、四唑基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；R2是氫原子；R3和R4各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基或鹵素；R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或烷基；n是24。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化合物或酯，其中R選自羥基；R!是芳基或雜芳基，其中芳基或雜芳基進一歩被一個或多個選自烷基、^素、羥基、四唑基、羧酸或羧酸酯的取代基所取代；R2是氫原子；R3和FU各自獨立地選自氫原子、垸基、烷氧基或鹵素-,R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、烷基、垸氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或烷基；n是24。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化合物或酯，其中該化合物選自<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑化合物或酯，所述的鹽包括氨基乙醇鹽和膽堿季胺鹽。6.通式(IA)所示的化合物，其作為通式(I)化合物合成的中間體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>g中R5、R6和R7各自獨立地選自氫原子、垸基、烷氧基、鹵素、羥基、氨基、硝基、氰基、羧酸或羧酸酯；R8和R9各自獨立地選自氫原子或垸基；n是24。7.根據(jù)權(quán)利要求6所示的中間體(IA)的制備方法，該方法包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>取代的氨基苯并多元環(huán)在酸性溶液中與硝酸鈉反應(yīng)重氮化，再通過二氯亞錫還原得到肼，肼與羰基化合物在溶劑中加熱下縮合得到通式(IA)化合物。'8.根據(jù)權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物的制備方法，該方法包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(I)通過將取代的苯胺類化合物與硝酸鈉在酸中重氮化，再與通式(IA)化合物在堿性溶液中發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)得到通式(I)化合物，然后根據(jù)需要成鹽。9.一種根據(jù)權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物或其鹽、水合物、溶劑化合物或酯在制備TPO調(diào)節(jié)劑中的用途。10.—種權(quán)利耍求1所示的通式(I)化合物或其鹽、水合物、溶劑化合物或酯在制備治療有需要的哺乳動物血小板減少藥物中的用途。11.一種藥物組合物，其包括藥物有效劑量的如權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物及其藥學(xué)上可以接收的鹽、水合物、溶劑化合物或酯及藥用載體和稀釋劑。12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，其中所述哺乳動物為人。13.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的用途，其中所述藥物進一歩與選自下列的藥物聯(lián)合使用集落刺激因子、細胞因子、趨化因子、白細胞介素或細胞因子受體激動劑或拮抗劑、可溶的受體、受體激動劑或拮抗劑抗體或與一個或多個與所述藥物具有相同的作用機理的肽或小分子類物質(zhì)。14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，進一歩含有共同服用的治療有效量的選自下列的藥物集落刺激因子、細胞因子、趨化因子、白細胞介素或細胞因子受體激動劑。15.,—種權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物在制備免疫佐劑中的用途。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的用途，其中所述免疫佐劑與免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用。17.—種針對權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物的篩選方法，包括使用細胞處理不同濃度下的權(quán)利要求1所示的通式(I)化合物，收集并裂解細胞，定蛋白到相同的量，蛋白變性后，進行SDS-PAGE,轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜，分別與抗STAT3磷酸化抗體(一抗)，抗兔IgG抗體(二抗)進行雜交，最后用ECL試劑盒檢測，X光片曝光，根據(jù)相應(yīng)蛋白條帶的大小及密度，評價通式(I)化合物對STAT3的激活程度。全文摘要本發(fā)明涉及一種由通式(I)表示的雙環(huán)取代吡唑酮偶氮類衍生物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化合物或酯、其制備方法及其在醫(yī)藥上的應(yīng)用。文檔編號C07D231/46GK101481352SQ20081000034公開日2009年7月15日申請日期2008年1月10日優(yōu)先權(quán)日2008年1月10日發(fā)明者呂賀軍,鄧炳初申請人:上海恒瑞醫(yī)藥有限公司