專利名稱：Mfap3l抗原多肽、自身抗體在制備檢測腫瘤試劑中的應(yīng)用和含有該多肽的檢測試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種MFAP3L抗原多肽，更具體地說是一種腫瘤標(biāo)記物MFAP3L抗原 多肽，自身抗體在制備檢測腫瘤試劑盒中的應(yīng)用及含有該多肽的檢測試劑，屬于生 物工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
結(jié)直腸癌又稱大腸癌，在我國常見惡性腫瘤中排第五位。在過去的25年中， 隨著人民生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，其發(fā)病率呈上升趨勢，上升速度在各 種惡性腫瘤中排第一位。肝臟是結(jié)直腸癌最易發(fā)生的轉(zhuǎn)移器官，被稱為結(jié)直腸癌器 官轉(zhuǎn)移的"第一站"，它是結(jié)直腸癌患者死亡的主要原因之一。在整個病程中，約 有50%的結(jié)直腸癌發(fā)生肝轉(zhuǎn)移(同時性轉(zhuǎn)移為15%—25%，異時性轉(zhuǎn)移為20%)，并 最終死于以肝臟為主的遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移。發(fā)生這種情況的原因是多方面的，比如手術(shù)的切 除范圍不足、常規(guī)病理取材時潛在陽性淋巴結(jié)的遺漏等都可造成對腫瘤分期的低 估。但缺少較現(xiàn)行臨床標(biāo)準(zhǔn)更精確而具指導(dǎo)意義的腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)是一個更為重要的 原因，而這種情況又會直接影響到患者治療方案的制定。只有通過早期發(fā)現(xiàn)甚至預(yù) 測肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生，才有可能對腫瘤病期進(jìn)行更準(zhǔn)確的評估，盡早地進(jìn)行針對性治療， 從而提高生存率，改善預(yù)后。
目前臨床上檢測結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移主要依靠影像學(xué)技術(shù)，包括B超、CT、 MRI 和血管造影等，對肝臟轉(zhuǎn)移灶的檢出率為50%--90%。但檢出時多因轉(zhuǎn)移灶過大、 數(shù)目過多、分布太廣或與周圍血管關(guān)系過于密切而失去有效治療時機(jī)。而且對于直 徑<1的微小轉(zhuǎn)移灶，影像學(xué)技術(shù)也很難作出明確診斷。隨著免疫學(xué)和分子生物 學(xué)的發(fā)展， 一系列敏感性和特異性更強(qiáng)的檢測手段，如免疫組織化學(xué)、酶聯(lián)免疫吸
3附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、實(shí)時定量PCR(rea1-time PCR)和流式細(xì)胞儀等也被用于在外周血、 膽汁和淋巴結(jié)等樣本中檢測微量腫瘤細(xì)胞和肝臟微小轉(zhuǎn)移灶的存在。上述技術(shù)的應(yīng) 用既為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的早期診斷提供了可能，也使預(yù)測肝轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物成為 研究熱點(diǎn)。
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以全面地分析與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)變化，檢測具 有重要功能的翻譯后修飾如糖基化和磷酸化，還能鑒定具有分泌潛能的蛋白標(biāo)志 物，因此蛋白質(zhì)組學(xué)研究可以為預(yù)測肝轉(zhuǎn)移提供準(zhǔn)確敏感的分子標(biāo)記物。
微絲相關(guān)蛋白3樣基因(Microfibrillar associated protein 3-like, MFAP3L)是2002年從人睪丸cDNA文庫中克隆出的一個與精子發(fā)生相關(guān)的基因，其 功能研究到目前為止尚不多見。該基因的mRNA全長1345bp，編碼45kDa和34kDa 兩種蛋白異構(gòu)體(Isoform i和2)。其中Isoform l為全長蛋白，而Isoform 2為 缺失前103個氨基酸的截斷蛋白。Southern blot結(jié)果顯示該基因在除卵巢外的人 類各種組織中都有表達(dá)，其中在睪丸中高表達(dá)，在結(jié)腸中低表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種特異性腫瘤標(biāo)志物MFAP3L抗原多肽及其衍生物。
本發(fā)明的第二目的在于提供一種特異性腫瘤標(biāo)志物MFAP3L抗原多肽制備的抗體。
本發(fā)明的再一個目的是提供該在MFAP3L抗原多肽在制備檢測腫瘤試劑盒中的 應(yīng)用及該檢測試劑。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的發(fā)明思路為利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，通過比較發(fā) 生和未發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌病人的原發(fā)灶組織樣本，鑒定出在轉(zhuǎn)移病人樣本中高 表達(dá)的微絲相關(guān)蛋白3樣蛋白(Microfibrillar associated protein 3-like， MFAP3L)。發(fā)明人制備了抗MFAP3L的多克隆抗體，通過抗體純化技術(shù)獲得了高特異性的抗體。然后利用免疫印記和免疫組化技術(shù)驗(yàn)證了該蛋白在腫瘤細(xì)胞系和組織中
的表達(dá)特征。MFAP3L在有高轉(zhuǎn)移潛能的結(jié)腸癌細(xì)胞系RKO中的表達(dá)量明顯高于低 轉(zhuǎn)移潛能的HT29細(xì)胞，而且該蛋白在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于配對正常組織， 高表達(dá)該蛋白的病例發(fā)生包括肝臟在內(nèi)的各種遠(yuǎn)端臟器轉(zhuǎn)移的幾率較高，術(shù)后五年 生存率較低(P<0.001)。因此，MFAP3L蛋白以及相應(yīng)的抗體可作為預(yù)測結(jié)直腸癌 遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移及預(yù)后的分子標(biāo)志。
本發(fā)明的具體技術(shù)方案為
一種MFAP3L抗原多肽，其具有序列表中SEQ ID No. 1所示氨基酸序列。其是 以肝臟的cDNA文庫為模板，根據(jù)MFAP3L基因序列設(shè)計特異引物，引物兩端連入 ife歷^/和歷'/7rf/Z7"酶切位點(diǎn)
上游引物 5， AGCAGGATCCATGGATCGATTGAAGAGC 3，
下游引物 5， CCCAAGCTTTTAGACATGGCTTTCGTA 3，
PCR擴(kuò)增出全長MFAP3L基因，經(jīng)雙酶切后與pET28a連接，化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì) 胞DH5a，挑單克隆提取質(zhì)粒進(jìn)行測序，驗(yàn)證序列無誤。從測序正確的陽性菌中提 取pET28a- MFAP3L質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化BL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞，篩選得到陽性克隆，lmmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。誘導(dǎo)以后的菌株經(jīng)超聲后離心，上清和沉淀分別進(jìn)行SDS-PAGE電 泳，結(jié)果顯示表達(dá)的產(chǎn)物為可溶性蛋白。大量搖菌后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，提取可溶的蛋 白過鎳柱進(jìn)行純化，300mM咪唑洗脫，SDS-PAGE電泳，切取條帶進(jìn)行MALDI-T0F/T0F 鑒定，證實(shí)表達(dá)產(chǎn)物為MFAP3L。
上述的一種MFAP3L抗原多肽的衍生序列，其是由SEQ ID No. 1所示氨基酸序 列經(jīng)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
一種能與上述MFAP3L抗原多肽特異性結(jié)合的抗體。免疫兔子并利用親和層析 技術(shù)純化血清獲得了兔源多克隆抗體。免疫印記試驗(yàn)顯示該蛋白在高轉(zhuǎn)移潛能的結(jié) 腸癌細(xì)胞系RK0中的表達(dá)明顯高于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系HT29，而免疫組化(IHC)檢測顯 示，在另外105對結(jié)直腸癌和正常組織樣本中MFAP3L蛋白在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于配對正常組織，而且高表達(dá)該蛋白的病例發(fā)生包括肝臟在內(nèi)的各種遠(yuǎn)端臟器 轉(zhuǎn)移的幾率較高，術(shù)后五年生存率較低(P〈0.001)。
MFAP3L抗原及抗體在制備檢測腫瘤試劑中的應(yīng)用。本發(fā)明提出的MFAP3L抗體 制備的免疫組化檢測試劑可以用于檢測和診斷腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后監(jiān)控。具有很好的臨 床應(yīng)用價值。
一種檢測腫瘤的試劑，其含有所述由MFAP3L抗原多肽產(chǎn)生的特異性抗體。其 他成分為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的免疫組化用試劑，在此不一一贅述。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及有益效果
(1) 本發(fā)明MFAP3L抗原多肽具有極強(qiáng)的特異性，為特異性的腫瘤標(biāo)志物。
(2) 本發(fā)明克隆了其全長并且制備了對應(yīng)的抗體，兼具免疫反應(yīng)的高特異性 和高敏感性；其可以制備檢測腫瘤尤其是結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的試劑盒，檢測效 率高，使用方便，該試劑盒具有較高的應(yīng)用價值。
(3) 在腫瘤生物學(xué)研究中，本發(fā)明表達(dá)的抗原可應(yīng)用于研究蛋白質(zhì)的相互作 用等，產(chǎn)生的抗體可應(yīng)用于Western blotting,免疫熒光和免疫組化等。
(4) 此外，本發(fā)明還可以作為新藥研發(fā)的靶標(biāo)，為抗腫瘤藥物研發(fā)提供新的 研究素材。


圖1是MFAP3L的雙向電泳結(jié)果。
圖2是MFAP3L的二級質(zhì)譜鑒定結(jié)果。
圖3是利用多克隆抗體和免疫印記技術(shù)在結(jié)腸癌細(xì)胞系中檢測MFAP3L的表達(dá)。 圖4是利用多克隆抗體和免疫組化技術(shù)在結(jié)直腸癌標(biāo)本中檢測MFAP3L的表達(dá)。
具體實(shí)施例方式
材料來源
本發(fā)明具體實(shí)施方式
所用胃癌組織標(biāo)本來源于北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院組織標(biāo)本
庫。手術(shù)前停止供血30分鐘，切除的新鮮胃癌組織與其對應(yīng)的癌旁組織經(jīng)生理鹽水洗滌后，放入液氮保存。標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)，并有患者知情同意書。
實(shí)施例l MFAP3L抗原多肽的制備
1、 蛋白質(zhì)的提取
液氮凍存的組織經(jīng)金屬研缽研磨后，采用1(WTCA/丙酮沉淀靜置2h，采用4°C、 35000g、離心15min，棄上清。沉淀經(jīng)-2(TC預(yù)冷的丙酮清洗三次，最后一次棄上 清后真空干燥，用lysis buffer (8M urea， 4% CHAPS, 0.5% Ampholyte (3-10)， 20mMTris pH8. 5， 用時加入2raMEDTA， lmM PMSF， lOmMDTT, Protease Inhibitor Cocktail)復(fù)溶，超聲5分鐘，采用15。C、 40000g、離心30 min，取上清作為實(shí) 驗(yàn)所用蛋白。
2、 蛋白質(zhì)的分離
提取的蛋白質(zhì)經(jīng)過Bradford法定量后，采用雙向電泳進(jìn)行分離。 一相采用的 是18cm 3-10L膠條，聚焦過程設(shè)置如下0V*4h， 50V*8h， 500V*lh， 1000V*lh， 8000V*lh，最后保持8000伏直至總伏小時數(shù)達(dá)60，000伏小時。聚焦好的一相膠條 經(jīng)分別含有1%DTT和2. 5%IAM平衡液平衡15分鐘后，轉(zhuǎn)移至二相12% SDS-PAGE 進(jìn)行分離。電泳結(jié)束后采用銀染顯色，可見每塊雙向電泳凝膠上大約有IOOO個染 色斑點(diǎn)。斑點(diǎn)分布較為均勻，染色深度合適。沒有橫紋和縱紋的脫尾，表明聚焦情 況很好。
3、 雙向電泳
提取的蛋白質(zhì)經(jīng)過Bradford法定量后，采用雙向電泳進(jìn)行分離。 一相采用的 是18cra 3-10L膠條，聚焦過程設(shè)置如下0V*4h， 50V*8h， 500V*lh， 1000V*lh， 8000V*lh，最后保持8000伏直至總伏小時數(shù)達(dá)60，000伏小時。聚焦好的一相膠條 經(jīng)分別含有1%DTT和2. 5%IAM平衡液平衡15分鐘后，轉(zhuǎn)移至二相12% SDS-PAGE 進(jìn)行分離。電泳結(jié)束后采用銀染顯色。
4、 膠圖分析和質(zhì)譜鑒定
銀染的膠圖經(jīng)掃描儀掃描后，采用ImageMaster 2D Platinum分析軟件進(jìn)行了分析，設(shè)定3倍以上的光密度差異為閾值。切取找到的差異蛋白點(diǎn)，進(jìn)行膠內(nèi)的酶切消化，
經(jīng)MALDI-TOF/TOF鑒定。其中一個差異點(diǎn)被鑒定為MFAP3L。圖1指示的是MFAP3L 在2D膠中的蛋白點(diǎn)，圖2顯示的是質(zhì)譜鑒定結(jié)果，包括一級質(zhì)譜PMF結(jié)果和二級 質(zhì)譜肽段信息。
5、 MFAP3L全長蛋白的克隆，表達(dá)和純化
以肝臟的cDNA文庫為模板，根據(jù)MFAP3L基因序列設(shè)計特異引物，引物兩端連 入As朋y/和歷77o777酶切位點(diǎn)
上游引物 5， AGCAGGATCCATGGATCGATTGAAGAGC 3，
下游引物 5' CCCAAGCTTTTAGACATGGCTTTCGTA 3，
PCR擴(kuò)增出全長MFAP3L基因，(PCR參數(shù)95°C 5min; 94°C 30s 54°C 30s 72 °C lmin,共40個循環(huán)；72。C后延伸lOmin)經(jīng)雙酶切后與pET28a連接，化學(xué)轉(zhuǎn)化 感受態(tài)細(xì)胞DH5a，挑單克隆提取質(zhì)粒進(jìn)行測序，驗(yàn)證序列無誤。從測序正確的陽 性菌中提取pET28a-MFAP3L質(zhì)粒，(TIANGEN BIOTECH公司試劑盒)轉(zhuǎn)化BL21 (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞，抗生素篩選得到陽性克隆，加入lmmol/L IPTG誘導(dǎo)4小時。誘導(dǎo)以 后的菌株經(jīng)超聲后離心，上清和沉淀分別進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)果顯示表達(dá)的產(chǎn) 物為可溶性蛋白。
大量搖菌后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，提取可溶的蛋白經(jīng)Ni-NAT親和層析柱進(jìn)行結(jié)合， 300raM咪唑洗脫MFAP3L蛋白，SDS-PAGE電泳，切取條帶進(jìn)行MALDI-T0F/T0F鑒定， 證實(shí)表達(dá)產(chǎn)物為MFAP3L。 實(shí)施例2 MFAP3L抗原多肽抗體的制備
我們將經(jīng)Ni-NAT親和層析純化得到MFAP3L蛋白，通過在新西蘭白兔脊柱兩側(cè) 多點(diǎn)注射，第一次免疫，注射500ug蛋白，以后劑量減半，每周注射一次，共免疫 四次。最后，取兔的全血，分離血清，分裝保存。采用抗體純化技術(shù)(CNBr-activated S印harose 4B)將多抗純化后，通過免疫組化和Western blot驗(yàn)證多抗的特異性 和檢測MFAP3L蛋白的表達(dá)特征。實(shí)施例3 MFAP3L特異性抗體檢測試劑用于結(jié)直腸癌生物學(xué)行為的判斷
1、 免疫印記實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞系提取蛋白質(zhì)，分光光度計定量，取100ug上樣，行12%聚丙烯酰胺凝膠 電泳，電泳結(jié)束后立即進(jìn)行電轉(zhuǎn)移，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，冰浴中90mA恒流 轉(zhuǎn)移2小時，膜用蒸餾水洗凈后涼干，封于塑料代中，4'C保存。雜交過程如下 膜以PBST浸濕，加PBST配制5。/。脫脂奶粉封閉，室溫?fù)u床上搖2小時，4t:過夜， PBST洗膜后加入1: 1000多克隆抗體，室溫下孵育2小時，洗膜后加入l: 4000 的羊抗兔IgG的二抗(用HRP標(biāo)記)，孵育1小時，再次PBST洗膜，使用ECLPlus Western Blotting Detection Reagents發(fā)光，X片曝光。圖3顯示的是MFAP3L 多克隆抗體的免疫印記結(jié)果，條帶清晰，特異性較好。裸鼠脾臟種植肝轉(zhuǎn)移模型顯 示高表達(dá)該蛋白的結(jié)腸癌細(xì)胞系RK0的原位增殖能力(脾臟)和肝轉(zhuǎn)移能力(肝臟) 都明顯強(qiáng)于該蛋白低表達(dá)的HT29細(xì)胞。
2、 免疫組化實(shí)驗(yàn)
采用ABC法，細(xì)胞系滴片后2%甲醛固定，0.3%&02甲醇室溫IO分鐘，PBS洗3 次X5分鐘。滴加一抗(l: 50)，濕盒4。C過夜，PBS洗3次X5分鐘，滴加二抗l: 200稀釋，室溫孵育30分鐘，PBS洗3次X5分鐘，滴加三抗1: 400稀釋，室溫 孵育30分鐘，PBS洗3次X5分鐘，DAB-H必顯色，鏡下控制3-5分鐘，PBS漂洗， 終止顯色，蘇木素復(fù)染45秒，1%鹽酸酒精分色，溫?zé)岬淖詠硭疀_洗反藍(lán)，95%和 100。/。乙醇脫水各5分鐘，二甲苯透明，中性樹膠封片。如圖4所示，圖4顯示MFAP3L 抗體在胞漿和胞核中都有著色，在發(fā)生轉(zhuǎn)移的病人腫瘤組織(左圖)中的著色明顯強(qiáng) 于正常結(jié)腸組織(右圖)和未發(fā)生轉(zhuǎn)移病人的腫瘤組織(中圖)。該結(jié)果表明此抗 體可在免疫組化試驗(yàn)中特異地檢測MFAP3L蛋白，而該蛋白在發(fā)生轉(zhuǎn)移的病人腫瘤 組織中特異性高表達(dá)。 實(shí)施例4 MFAP3L特異性抗體制備試劑 兔源MFAP3L特異性抗體，抗兔二抗，DAB顯色試劑。
9〈110〉中國科學(xué)院北京基因組研究所
<120> MFAP3L抗原多肽、自身抗體在制備檢測腫瘤試劑中的應(yīng)用和含有該多肽的
檢測試劑 〈130〉 <160〉 1
〈170〉 Patentln version 3.5
<210〉 1 〈211〉 409 〈212〉 PRT <213>人工序列 〈400〉 1 Met Asp Arg Leu 1
Pro Phe Leu lie 20
Asn Ser Thr Leu 35
lie lie Ala Arg 50
Leu lie Asn Cys 65
10
Lys Ser His Leu Thr Val Cys Phe Leu Pro Ser Val
5 10 15
Leu Val Ser Thr Leu Ala Thr Ala Lys Ser Val Thr
25 30 Asn Gly Thr Asn Val Val Leu Gly Ser Val Pro Val
40 45 Thr Asp His lie lie Val Lys Glu Gly Asn Ser Ala
55 60 Ser Val Tyr Gly lie Pro Asp Pro Gin Phe Lys Trp 70 75 80Tyr Asn Ser lie Gly Lys Leu Leu Lys Glu Glu Glu Asp Glu Lys Glu
85 90 95
Arg Gly Gly Gly Lys Trp Gin Met His Asp Ser Gly Leu Leu Asn lie
100 105 110
Thr Lys Val Ser Phe Ser Asp Arg Gly Lys Tyr Thr Cys Val Ala Ser
115 120 125
Asn lie Tyr Gly Thr Val Asn Asn Thr Val Thr Leu Arg Val lie Phe
130 135 140
Thr Ser Gly Asp Met Gly Val Tyr Tyr Met Val Val Cys Leu Val Ala 145 150 155 160
Phe Thr lie Val Met Val Leu Asn lie Thr Arg Leu Cys Met Met Ser
165 170 175
Ser His Leu Lys Lys Thr Glu Lys Ala lie Asn Glu Phe Phe Arg Thr
180 185 190
Glu Gly Ala Glu Lys Leu Gin Lys Ala Phe Glu lie Ala Lys Arg lie
195 200 205
Pro lie lie Thr Ser Ala Lys Thr Leu Glu Leu Ala Lys Val Thr Gin
210 215 220
Phe Lys Thr Met Glu Phe Ala Arg Tyr lie Glu Glu Leu Ala Arg Ser 225 230 235 240
Val Pro Leu Pro Pro Leu lie Met Asn Cys Arg Thr lie Met Glu Glu
245 250 255
lie Met Glu Val Val Gly Leu Glu Glu Gin Gly Gin Asn Phe Val Arg
260 265 270
His Thr Pro Glu Gly Gin Glu Ala Ala Asp Arg Asp Glu Val Tyr Thrlie Pro 290 Ala Ser 305
275
Asn Ser Leu Lys
Arg 295
280
Ser Asp
285
Ser Pro Ala Ala Asp Ser Asp 300
Ser Leu His Glu Gin Pro Gin 310
Gin lie Ala lie 315
Lys Veil Ser 320
Val His Pro Gin Ser Lys Lys Glu His Ala Asp Asp Gin Glu Gly Gly
335
Leu Ser Ala Glu His 350
Thr Glu Leu
Ser Pro Glu 355
Gin Ser 325 Val Lys 340
Thr Ala
Gin Phe Glu Val Lys Asp Val
Glu Pro
Glu Glu 345 Ser Thr 360
Ala Asp 330
Thr Glu
Asn Val Thr Ser 365
Thr Ser Glu Glu Pro Thr Pro Val Glu Val Pro Asp Lys Val Leu Pro
370 375 380
Pro Ala Tyr Leu Glu Ala Thr Glu Pro Ala Val Thr His Asp Lys Asn 385 390 395 400
Thr Cys lie lie Tyr Glu Ser His Val 40權(quán)利要求
1、一種MFAP3L抗原多肽，其特征在于，其具有序列表中SEQ ID No.1所示氨基酸序列。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種MFAP3L抗原多肽，其特征在于，其是由SEQ ID No. 1所示氨基酸序列經(jīng)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
3、 一種能與權(quán)利要求1所述MFAP3L抗原多肽特異性結(jié)合的抗體。
4、 MFAP3L抗原多肽在制備檢測腫瘤試劑中的應(yīng)用。
5、 一種檢測腫瘤的試劑，其特征在于，其含有權(quán)利要求3所述的MFAP3L特異性抗體。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的檢測腫瘤試劑，其特征在于，所述腫瘤為結(jié)直腸癌。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種腫瘤標(biāo)志物MFAP3L抗原多肽，其具有序列表中SEQ IDNo.1所示氨基酸序列。本發(fā)明還公開了用其基因克隆表達(dá)該蛋白，制備該蛋白的特異性抗體，并且進(jìn)行結(jié)腸癌生物學(xué)行為判斷的方法。由本方法制備的MFAP3L抗原多肽及其抗體可用于制備檢測腫瘤試劑以及藥物靶標(biāo)的研發(fā)。本發(fā)明公開的檢測腫瘤試劑檢測效率高、使用方便，具有很高的應(yīng)用價值。
文檔編號C07K16/18GK101684152SQ200810223508
公開日2010年3月31日 申請日期2008年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月28日
發(fā)明者劉斯奇, 呂有勇, 濱 康, 軍 張, 徐寧志, 李文梅, 王洪義, 蕊 邢, 邵建敏, 郝純毅 申請人:中國科學(xué)院北京基因組研究所