專(zhuān)利名稱(chēng)：一種Hsp90抑制劑Xbj-B11及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種新型的Hsp90抑制劑及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
熱休克蛋白(Heat shock protein, Hsp)是細(xì)胞在一些應(yīng)激條件，如熱休克、葡萄 糖饑餓或受到病原微生物感染時(shí)產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，在正常狀態(tài)的細(xì)胞中也廣泛存在。Hsp 是生物在進(jìn)化中表達(dá)的一組高度保守的蛋白質(zhì)家族，它們作為分子伴侶參與細(xì)胞對(duì)多種刺 激(包括冷、熱、缺氧、重金屬離子、及病毒感染等)的保護(hù)作用。Hsp主要參與細(xì)胞內(nèi)新生 肽鏈的折疊及轉(zhuǎn)運(yùn)，以及識(shí)別變性蛋白質(zhì)，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)分化、生存的功能。Hsp 不僅參與應(yīng)激保護(hù)、信號(hào)傳導(dǎo)、免疫應(yīng)答、發(fā)育分化等重要生理過(guò)程，還與許多疾病，例如感 染、自身免疫病、動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤等的形成有關(guān)。根據(jù)分子量大小可分為HsplOO、Hsp90、Hsp70、Hsp60和小Hsp五大家族。Hsp90
是細(xì)胞內(nèi)最活躍的分子伴侶之一，廣泛參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、激素應(yīng)答及轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程，其 主要功能是維持細(xì)胞蛋白質(zhì)穩(wěn)定，提高細(xì)胞對(duì)應(yīng)激的耐受性，增強(qiáng)抗氧化作用，使細(xì)胞維持 正常的生理功能。Hsp90本身并不參與靶蛋白的組成。Hsp90是胞質(zhì)蛋白，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞 中，Hsp90家族由3個(gè)成員組成胞質(zhì)伴侶Hsp90-a (可誘導(dǎo)型/主要型)和Hsp90-b (組成 型/次要型)，同功異質(zhì)體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶GRP94(葡萄糖相關(guān)蛋白94)，線粒體同族體Hsp75/ TRAPl (腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白1)。在發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)時(shí)，Hsp90可以和那些由于環(huán)境 刺激而使自身構(gòu)象發(fā)生改變的蛋白相互作用，保證蛋白進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼郫B并防止其非特異性 聚集，從而維持細(xì)胞的正常活性。蛋白質(zhì)在距膜轉(zhuǎn)運(yùn)前必須解折疊，跨膜后又要重新折疊 以形成成熟型，Hsp90作為分子伴侶具有解折疊酶功能，能識(shí)別蛋白質(zhì)解折疊后局部暴露 的疏水面，并與之結(jié)合，防止相互作用產(chǎn)生凝聚，直至跨膜運(yùn)送。腫瘤細(xì)胞中所存在的異 ?；罨c突變?cè)鲋承盘?hào)分子需與Hsp90結(jié)合穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)，以維持腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)特 性。Hsp90在腫瘤細(xì)胞中主要處于活化態(tài)(activated state)，在正常細(xì)胞中則主要處于 靜默態(tài)(latent state)。處于活化態(tài)時(shí)，Hsp90與受體蛋白及輔分子伴侶Hsp70、Hsp40、 Hop (Hsp70organizing protein)、p23、CDC37等形成復(fù)合物，維持受體蛋白處于成熟有功能 的構(gòu)象，保護(hù)受體蛋白不被蛋白酶體(proteasome)所降解。正常狀態(tài)下Hsp90表達(dá)量較低，且受細(xì)胞周期調(diào)控，主要存在于胞質(zhì)中，應(yīng)激時(shí) Hsp90迅速進(jìn)入胞核，其誘導(dǎo)合成在轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)水平上調(diào)，能提高細(xì)胞抗應(yīng)激能力。但 在腫瘤細(xì)胞中Hsp90呈現(xiàn)出持續(xù)的高誘導(dǎo)表達(dá)，這種高表達(dá)不需要熱刺激，突變或異常蛋 白質(zhì)也可以刺激其合成，這也是腫瘤細(xì)胞對(duì)Hsp90抑制劑特別敏感的原因之一。1999年，Klein首先提出了腫瘤多點(diǎn)攻擊(Multi-enzyme-targeted)理論。該理 論的核心是利用某一靶位實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)的多點(diǎn)阻斷，從而徹底摧毀腫瘤賴(lài)以生 存的整個(gè)信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)。因此，尋找有效的靶點(diǎn)是應(yīng)用于腫瘤治療的關(guān)鍵。以分子伴侶為 基礎(chǔ)的抑制劑并不與激酶本身直接作用，而是抑制維持激酶活性構(gòu)象的相關(guān)分子伴侶，通過(guò)泛素_蛋白酶體途徑導(dǎo)致大量激酶被蛋白酶體降解，使其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路失活無(wú)法 收到來(lái)自上游的信號(hào)。與傳統(tǒng)激酶直接抑制劑相比，抑制Hsp90單一靶點(diǎn)能夠同時(shí)產(chǎn)生多 路徑抗腫瘤效應(yīng)的特點(diǎn)，既能單一用藥又能減少耐藥性發(fā)生，使Hsp90成為令人興奮的腫 瘤治療分子靶點(diǎn)。另外Hsp90亦與病毒感染有密切的關(guān)系，目前已證實(shí)，病毒侵入宿主后誘導(dǎo)產(chǎn)生 的HSP可與病毒蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，這一過(guò)程可能與病毒復(fù)制相關(guān)。多種類(lèi)型的病毒感 染誘導(dǎo)宿主細(xì)胞產(chǎn)生的HSP，可在病毒復(fù)制的多個(gè)環(huán)節(jié)與病毒蛋白結(jié)合，形成HSP-病毒肽 復(fù)合物，協(xié)助病毒蛋白正確折疊、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)以及病毒裝配、成熟等，因此對(duì)病毒的復(fù)制是有 利的。有報(bào)道稱(chēng)，單純皰疹病毒可誘導(dǎo)70Kda的熱體克蛋白Hsp70，需要早期病毒蛋白的 合成但不需要病毒DNA的復(fù)制。Hsp70在非脅迫的臼齒類(lèi)的細(xì)胞中很少表達(dá)，但HSV的感染 可誘導(dǎo)它的表達(dá)，在HSV-I和HSV-2感染4小時(shí)內(nèi)就有水平的升高，在感染細(xì)胞中有Hsp70 的合成和蓄積的增加，用UV輻射過(guò)的HSV-I喪失了誘導(dǎo)Hsp70的活性，對(duì)病毒DNA的抑制 并不影響Hsp70的誘導(dǎo)，但感染后2小時(shí)以內(nèi)的蛋白合成是誘導(dǎo)Hsp70所必需的。單純皰疹病毒屬于皰疹病毒科、α皰疹病毒亞科，是最早發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)皰疹病毒，分 為I型(HSV-I)與II型(HSV-2)兩個(gè)血清型，其感染十分普遍，主要侵犯皮膚、粘膜和神經(jīng) 組織，引起人和許多動(dòng)物感染。HSV-I多感染口、唇、眼的皮膚與粘膜，以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，偶 見(jiàn)于生殖器感染；HSV-2多與生殖器感染和新生兒感染相關(guān)。目前，由于缺乏有效的病毒疫苗，藥物治療成為治療HSV感染的主要途徑。臨床常 用的治療藥物主要是無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷等核苷類(lèi)，其作用靶點(diǎn)是病毒DNA聚合酶，進(jìn)而影響病毒的 復(fù)制。目前廣泛使用的是以阿昔洛韋(Acyclovir，ACV)為代表的無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷類(lèi)似物，包括阿 昔洛韋、伐昔洛韋、噴昔洛韋、泛昔洛韋以及更昔洛韋。此外還有以焦磷酸鈉為代表的非核 苷類(lèi)似物。但是部分核苷類(lèi)似物如碘脫氧尿苷、三氟胸苷、阿糖腺苷及更昔洛韋等具有誘變 性，安全性低。而且在上世紀(jì)80年代ACV耐藥株就有出現(xiàn)，且在骨髓移植病人和艾滋病人 群體中更易出現(xiàn)耐藥。所以有必要尋找新作用機(jī)制的抗病毒藥物，而由于Hsp90在病毒感 染中的重要作用，也成為潛在的抗病毒靶點(diǎn)。第一個(gè)Hsp90抑制劑藥物格爾德霉素(geldanamycin，GA)是作為抗真菌藥篩選發(fā) 現(xiàn)的苯醌類(lèi)藥物。GA是一種特異的Hsp90抑制劑，在結(jié)構(gòu)上主要是由一個(gè)苯醌部分和一個(gè) 平面性大環(huán)安莎橋相連。研究揭示其抗腫瘤能力依賴(lài)于致瘤性蛋白激酶在蛋白酶體中的降 解，但是GA對(duì)腎臟、肝臟毒性較大，可能與其脫靶效應(yīng)有關(guān)。美國(guó)國(guó)家癌癥研究所篩選毒性 較低的衍生物，發(fā)現(xiàn)將GA —個(gè)側(cè)鏈進(jìn)行置換的17-烯丙氨基格爾德霉素(17-AAG)，17-AAG 具有GA全部特征，且毒性更低，保持了 Hsp90抑制作用和抗腫瘤活性。但是17-AAG水溶性 較差，不能口服，又繼而研發(fā)出GA的新的衍生物17-dimethylaminoethylamino-17-demet hoxyge ldanamyc in (17-DMAG)，該化合物表現(xiàn)出良好的水溶性和口服生物利用度，針對(duì)實(shí)體 瘤和惡性血液病已進(jìn)入II期/III期臨床試驗(yàn)。根赤殼菌素(Radicicol)是從單孢霉Bonorden中分離出來(lái)的大環(huán)類(lèi)抗生素，具 有類(lèi)似GA逆轉(zhuǎn)惡性表型的潛能，在Hsp90受體蛋白降解中起作用。根赤殼菌素可以逆轉(zhuǎn) 轉(zhuǎn)染了 v-src和v-Ha-Ras的纖維細(xì)胞的惡化程度。Radicicol結(jié)合于Hsp90的N-末端區(qū) 域，在體外有較好的抗腫瘤活性，但其在體內(nèi)沒(méi)有抗腫瘤能力，這主要是由于它的化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，進(jìn)入體內(nèi)后易降解。近年來(lái)研究表明新生霉素(Novobiocin)能顯著減少細(xì)胞內(nèi) pl85erb2、p60v-src、Raf-I和突變型p53的水平，并且點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)證明新生霉素是Hsp90 的C-端抑制劑。Neckers等研究表明香豆霉素類(lèi)的3種化合物(新生霉素、氯新生霉素、香 豆霉素Al)均顯著減少細(xì)胞內(nèi)P185erb2、p60v-src、缺氧誘導(dǎo)因子1和突變型P53的水平。 新生霉素是已在臨床使用、毒性較小的香豆素類(lèi)抗生素，有較好的藥代動(dòng)力學(xué)特征。新生霉 素是Hsp90的C-端抑制劑，對(duì)多種癌細(xì)胞有抑制作用，并能與抗癌藥聯(lián)合應(yīng)用，逆轉(zhuǎn)抗癌藥 的耐藥性，但新生霉素作為Hsp90的抑制劑所用的濃度高達(dá)700 μ M，這也限制了其做為體 內(nèi)抗腫瘤藥物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。 除上述幾種Hsp90抑制劑外，近年來(lái)又相繼合成、篩選出一些Hsp90抑制劑。PU3， 一種嘌呤骨架Hsp90抑制劑(purine-scaffold inhibitors)，是根據(jù)X-射線晶體衍射的 結(jié)果設(shè)計(jì)得到的小分子化合物，PU3的作用位點(diǎn)與GA —致，作用于Hsp90的N端ATP/ADP 結(jié)合位點(diǎn)，在抑制Hsp90受體蛋白降解和抗腫瘤能力方面也類(lèi)似GA。修飾和改善PU3形成 其衍生物，后者與Hsp90 N-末端結(jié)合，親和力是PU3的30倍，但活性沒(méi)有17-AAG那么強(qiáng)。 然而，該衍生物不表現(xiàn)特異的細(xì)胞間累積，而這種特性對(duì)于更疏水的GA衍生物來(lái)說(shuō)是典型 的。IPI-504(17-AAG對(duì)苯二酚)，主要針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的治療，目前已進(jìn)入臨床I期實(shí)驗(yàn)。 該化合物具有高度水溶性，在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)變?yōu)?7-AAG的活性形式，其抗癌機(jī)制現(xiàn)在還在研 究中。NVP-AUY922是異惡唑衍生物，也屬于小分子Hsp90抑制劑，對(duì)于ER和ERBB2-陽(yáng)性的 乳腺癌患者有潛在的治療作用。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種新型的Hsp90抑制劑。本發(fā)明的另一目的在于提供上述Hsp90抑制劑的制備方法。本發(fā)明的再一目的在于提供上述Hsp90抑制劑的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種Hsp90抑制劑，是2-(4-乙酰氧環(huán)己氨基)_4_(1_(3，6，6_三甲 基-4-氧-4,5,6,7-四氫吲唑))苯甲酰胺(2- (4-acetyloxycyclohexylamino) ~4~ (3 ,6,6-trimethyl-4-oxo-4,5,6,7-tetrahydro-lH-indazol-l-yl)benzamide),代號(hào)為 Xbj-Bll，其結(jié)構(gòu)式如式I所示。
權(quán)利要求
一種Hsp90抑制劑，其特征在于所述Hsp90抑制劑是2 (4 乙酰氧環(huán)己氨基) 4 (1 (3，6，6 三甲基 4 氧 4，5，6，7 四氫吲唑))苯甲酰胺，其結(jié)構(gòu)式如式I所示FDA0000027719040000011.tif
2.權(quán)利要求1所述一種Hsp90抑制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟 將式II所示化合物與乙酸以5mol IL的比例混合，加入N，N' -二環(huán)己基碳二酰亞 胺，20 30°C下攪拌反應(yīng)10 15h ；反應(yīng)結(jié)束后濾去不溶物，將濾液進(jìn)行萃取，把萃取得到 的有機(jī)層洗滌、干燥、減壓除去溶劑，再將產(chǎn)物純化，得到式I所示的Hsp90抑制劑；
3.權(quán)利要求1所述一種Hsp90抑制劑的應(yīng)用，其特征在于所述Hsp90抑制劑用于制 備抗腫瘤或抗病毒的藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種Hsp90抑制劑的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為白血病、宮 頸癌、乳腺癌、人喉上皮癌或者惡性黑色素瘤。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種Hsp90抑制劑的應(yīng)用，其特征在于所述病毒為單純皰疹 病毒。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新型的Hsp90抑制劑及其制備方法與應(yīng)用。該Hsp90抑制劑是2-(4-乙酰氧環(huán)己氨基)-4-(1-(3，6，6-三甲基-4-氧-4，5，6，7-四氫吲唑))苯甲酰胺。這種Hsp90抑制劑能有效抑制白血病、宮頸癌、乳腺癌、人喉上皮癌和惡性黑色素瘤等癌細(xì)胞的增殖，并能有效抑制單純皰疹病毒的活性，對(duì)正常細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度較大，僅對(duì)癌細(xì)胞具有特異性的抑制作用。
文檔編號(hào)C07D231/56GK101955461SQ20101029961
公開(kāi)日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月8日
發(fā)明者周小萍, 夏敏, 張美英, 林文輝, 王一飛, 邢國(guó)文, 錢(qián)垂文, 鞠懷強(qiáng) 申請(qǐng)人:廣州暨南生物醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)基地有限公司