專利名稱：一種紅霉素c的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及ー種紅霉素C的制備方法。
背景技術(shù)：
紅霉素(erythromycin, Er)是ー類大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,主要包括紅霉素A(ErA)、紅霉素B(ErB)和紅霉素C(ErC)，其中以紅霉素A的抗菌活力最強(qiáng)，B、C抗菌活力較低。故而，醫(yī)療上用的大部分都為紅霉素A，而把紅霉素B、C作為雜質(zhì)對待。因此，在紅霉素藥品生產(chǎn)過程中，需要對其中的紅霉素A、B、C進(jìn)行測定，從而確定藥品的藥效。《中國藥典》2010版紅霉素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，規(guī)定用高效液相色譜法對相關(guān)物質(zhì)紅霉素C進(jìn)行測定，該方法在測定時(shí)規(guī)定“按紅霉素C、紅霉素A、雜質(zhì)I、紅霉素B、紅霉素烯醇醚峰的順序出峰(必要時(shí)，用紅霉素C、紅霉素B、紅霉素烯醇醚對照品進(jìn)行峰定位)”，其弊端是， ①方法中規(guī)定了出峰順序，如果以此做為定性依據(jù)，操作中會有錯(cuò)誤的結(jié)果，因?yàn)樵诩t霉素C附近,還有另ー雜質(zhì)N-去甲基紅霉素，這就會使檢驗(yàn)人員無法確定哪個(gè)是紅霉素C，哪個(gè)是N-去甲基紅霉素； 中國藥品標(biāo)準(zhǔn)品唯一的法定機(jī)構(gòu)中國藥品生物制品檢定研究院未對社會公開銷售紅霉素C，這使得檢驗(yàn)人員無法對紅霉素C準(zhǔn)確定性。目前，歐洲藥典委員專門出售紅霉素C純品，用此產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)紅霉素C的準(zhǔn)確定性，但是該產(chǎn)品到貨價(jià)格比較貴，約1700 2000元/支(每支50mg)，不利于普及使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種紅霉素C的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的所采取的技術(shù)方案為
一種從紅霉素中制備紅霉素C的方法，其特征是將含紅霉素C較高的紅霉素樣品溶液注入高效液相色譜儀中，收集紅霉素C溶液。將分離出來的紅霉素C溶液加至陽離子交換柱上，加水沖洗后，再用甲醇洗脫，收集洗脫液，加熱使甲醇揮發(fā)至干，即得紅霉素C純品。上述高效液相色譜條件為以磷酸鹽溶液-こ腈為流動相，上述流動相體系中磷酸鹽溶液、こ腈體積比為40 60 60 40，磷酸鹽溶液配制方法為取磷酸氫ニ鉀8 9g，加水 1000ml，用 20% 磷酸調(diào)節(jié) pH 值為 8. O 8. 4， 使用 Sinochrom 300A ODS-AP IOum制備柱，流動相流速為70 80ml/min，檢測波長為210nm。上述紅霉素C溶液收集前，可用歐洲藥典委員會紅霉素C標(biāo)準(zhǔn)品配制的對照溶液注入高效液相色譜儀，確定紅霉素C的出峰時(shí)間。上述陽離子交換柱使用前需進(jìn)行活化，其特征在于上述用陽離子交換柱進(jìn)行純化時(shí)，先用2%的鹽酸對陽離子交換柱進(jìn)行活化，活化后用水沖洗至pH為中性。在上述體系中，磷酸鹽溶液、こ腈體積比為45 55 :55 45時(shí)，所得紅霉素C的純度高達(dá)90% 100%。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、通過本方法可制備出紅霉素C純品，以它作為紅霉素C定性的對照品，從而解決了《中國藥典》2010版紅霉素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，只規(guī)定各組分出峰順序，且中國藥品生物制品研究所未向社會銷售紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品，檢驗(yàn)人員在檢測過程中對紅霉素C準(zhǔn)確定性的困難。2、本發(fā)明エ藝簡便，所生產(chǎn)的紅霉素C純品價(jià)格比從歐洲購買價(jià)格低。本發(fā)明エ藝簡便，所生產(chǎn)的產(chǎn)品價(jià)格低，純度高，滿足市場需求，同時(shí)為未來市場的普及使用奠定了基礎(chǔ)。


圖I為本發(fā)明エ藝流程圖。
具體實(shí)施方式

下述紅霉素C取自寧夏啟元藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的紅霉素。實(shí)施例I
I紅霉素C的分離
I. I色譜條件色譜柱Sinochrom 300A ODS-AP IOum ;流動相以磷酸鹽溶液(取磷酸氫ニ鉀8. 7g，加水1000ml，用20%磷酸調(diào)節(jié)pH值至8. 2)-こ腈(45 55)為流動相；流速75 ml/min ;檢測波長:210nm。I. 2儀器型號大連依利特P230制備液相色譜儀。I. 3溶液制備
樣品溶液制備抽取ー批紅霉素C含量較高的樣品，準(zhǔn)確稱取I. 0￡，加こ腈IOml使溶解，加流動相稀釋至200 ml,搖勻，即可。對照溶液制備精密稱取歐洲藥典紅霉素C對照品10mg，置50ml容量瓶中，カロIOmlこ腈使溶解，加流動相稀釋至刻度。I. 4溶液分離取對照溶液IOml注入液相色譜儀，記錄色譜圖，確定紅霉素C保留時(shí)間。再取樣品溶液10ml，注入液相色譜儀進(jìn)行分離，在紅霉素C對照品出峰起始時(shí)間，開始收集紅霉素C溶液，至紅霉素峰尾部結(jié)束，置4°C左右冰箱中保存。反復(fù)收集若干次，合并。2紅霉素C純化取陽離子交換樹脂，裝于直徑約為20mm玻璃柱中，高度約30cm，用200ml2%HCl進(jìn)行活化，再用純化水沖洗至pH顯中性。取20ml紅霉素C收集液加至陽離子交換樹脂柱上,加陽離子交換柱體積300ml的純化水沖洗，再用200ml甲醇洗脫。收集洗脫液，加熱使甲醇揮發(fā)至干，即得紅霉素C純品。3紅霉素C含量測定取自制紅霉素C純品，按《中國藥典》2010版紅霉素含量測定方法色譜條件，以歐洲藥典委員會紅霉素C對照品為參考，對自制紅霉素C含量進(jìn)行測定，測得其含量為93. 2%。實(shí)施例2
I紅霉素C的分離
I.I色譜條件色譜柱Sinochrom 300A ODS-AP IOum,;流動相以磷酸鹽溶液(取磷酸氫ニ鉀8. 7g，加水1000ml，用20%磷酸調(diào)節(jié)pH值至8. 2)-こ腈(50 :50)為流動相;流速80 ml/min ;檢測波長210nm。I. 2儀器型號大連依利特P230制備液相色譜儀。I. 3溶液制備樣品溶液制備抽取ー批紅霉素C含量較高的樣品，準(zhǔn)確稱取I. 0￡，加こ腈IOml使溶解，加流動相稀釋至200 ml,搖勻，即可。對照溶液制備精密稱取歐洲藥典紅霉素C對照品10mg，置50ml容量瓶中，カロIOmlこ腈使溶解，加流動相稀釋至刻度。I. 4溶液分離取對照溶液IOml注入液相色譜儀，記錄色譜圖，確定紅霉素C保留時(shí)間。再取樣品溶液10ml，注入液相色譜儀進(jìn)行分離，在紅霉素C對照品出峰起始時(shí)間，開始收集紅霉素C溶液，至紅霉素峰尾部結(jié)束，置4°C左右冰箱中保存。反復(fù)收集若干次，合并。2紅霉素C純化取陽離子交換樹脂，裝于直徑約為20mm玻璃柱中，高度約30cm，用200ml2%HCl進(jìn)行活化，再用純化水沖洗至pH顯中性。取20ml紅霉素C收集液加至陽離 子交換樹脂柱上,加陽離子交換柱體積300ml的純化水沖洗，再用200ml甲醇洗脫。收集洗脫液，加熱使甲醇揮發(fā)至干，即得紅霉素C純品。3紅霉素C含量測定取自制紅霉素C純品，按《中國藥典》2010版紅霉素含量測定方法色譜條件，以歐洲藥典委員會紅霉素C對照品為參考，對自制紅霉素C含量進(jìn)行測定，測得其含量為95. 6%。
權(quán)利要求
1.一種紅霉素C的制備方法，其特征是將含紅霉素C較高的紅霉素樣品溶液注入高效液相色譜儀中，收集紅霉素C溶液；將分離出來的紅霉素C溶液加至陽離子交換柱上，加水沖洗后，再用甲醇洗脫，收集洗脫液，加熱使甲醇揮發(fā)至干，即得紅霉素C純品。
2.按照權(quán)利要求I所述的紅霉素C的制備方法，其特征在于上述高效液相色譜的色譜條件為 流動相體積比為40 60 60 40的磷酸鹽溶液-乙腈； 色譜柱Sinochrom 300A ODS-AP IOum ； 流動相流速70 80ml/min ； 檢測波長210nm。
3.按照權(quán)利要求2所述的紅霉素C的制備方法，其特征在于所述流動相為體積比為45 55 :55 45的磷酸鹽溶液-乙腈。
4.按照權(quán)利要求I所述的紅霉素C的制備方法，其特征在于上述紅霉素C溶液收集前，可用歐洲藥典委員會紅霉素C標(biāo)準(zhǔn)品配制的對照溶液注入高效液相色譜儀，確定紅霉素C的出峰時(shí)間。
5.按照權(quán)利要求I所述的紅霉素C的制備方法，其特征在于上述陽離子交換柱在使用前，先用2%的鹽酸對陽離子交換柱進(jìn)行活化，活化后用水沖洗至pH為中性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紅霉素C的制備方法，該方法是以將含紅霉素C較高的紅霉素樣品溶液注入高效液相色譜儀中，收集紅霉素C溶液；將分離出來的紅霉素C溶液加至陽離子交換柱上，加水沖洗后，再用甲醇洗脫，收集洗脫液，加熱使甲醇揮發(fā)至干，即得紅霉素C純品。通過本發(fā)明的方法可制備出紅霉素C純品，以它作為紅霉素C定性的對照品，可實(shí)現(xiàn)紅霉素C的準(zhǔn)確定性。本發(fā)明工藝簡便，所生產(chǎn)的產(chǎn)品價(jià)格低，純度高，滿足市場需求，同時(shí)為未來市場的普及使用奠定了基礎(chǔ)。
文檔編號C07H17/08GK102659879SQ20121011729
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月20日
發(fā)明者李學(xué)兵, 鄒學(xué)鋒 申請人:寧夏啟元藥業(yè)有限公司