一種利那洛肽的純化方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種利那洛肽的純化方法。本發(fā)明所述純化方法以多孔石墨化碳為固定相，結(jié)合流動(dòng)相中加入一定濃度的γ-環(huán)糊精作立體選擇劑，采用高效液相色譜法對(duì)利那洛肽粗肽進(jìn)行分離純化，然后利用高效液相色譜將純化制得的利那洛肽洗脫液中的γ-環(huán)糊精及磷酸鹽脫除并轉(zhuǎn)成醋酸鹽，凍干制得利那洛肽精肽。本發(fā)明所述純化方法操作簡(jiǎn)單，從而使得操作成本低。此外，本發(fā)明所述純化方法利那洛肽收率高，從而適合于利那洛肽的大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，并且經(jīng)純化得到的利那洛肽精肽純度可達(dá)99%以上，純度高、雜質(zhì)含量低，因此具有可觀的經(jīng)濟(jì)實(shí)用價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種利那洛肽的純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種利那洛肽的純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]便秘是一種常見病，從病因上可分為器質(zhì)性和功能性兩類。其中功能性便秘是由患者腸道蠕動(dòng)異常而非腸道發(fā)生形態(tài)學(xué)病變所引起。功能性便秘部分患者為慢傳輸型便秘和腸易激綜合征(IBS)型便秘。慢傳輸型便秘，是由于腸道收縮運(yùn)動(dòng)減弱，使糞便從盲腸到直腸的移動(dòng)減慢，或由于左半結(jié)腸的不協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)而引起。最常見于年輕女性，在青春期前后發(fā)生，其特征為排便次數(shù)減少(每周排便少于I次)，少便意，糞質(zhì)堅(jiān)硬，因而排便困難；肛直腸指檢時(shí)無糞便或觸及堅(jiān)硬糞便，而肛門外括約肌的縮肛和用力排便功能正常；全胃腸或結(jié)腸傳輸時(shí)間延長；缺乏出口梗阻型的證據(jù)，如氣囊排出試驗(yàn)和肛門直腸測(cè)壓正常。IBS屬胃腸道功能紊亂性疾病。發(fā)病多與胃腸道動(dòng)力異?；騼?nèi)臟感覺高敏感性有關(guān)，其癥狀常表現(xiàn)為腹痛、腹瀉或便秘以及腹脹、內(nèi)急等。
[0003]利那洛肽(Linaclotide)，是美國食品與藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)的一種具有新型作用機(jī)制的用于治療慢傳輸型便秘和腸易激綜合征(IBS)型便秘的口服藥物。它是一種鳥苷酸環(huán)化酶-C激動(dòng)劑，可激活腸上皮細(xì)胞頂端表面的GC-C受體，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外環(huán)鳥苷酸增多。凈效應(yīng)是氯和碳酸氫鹽分泌進(jìn)入腸腔增加，進(jìn)而導(dǎo)致液體分泌增多以及大便通過加速。利那洛肽 (15(T300yg/d)可使每周的自發(fā)性排便數(shù)量增加，改善大便性狀，減輕大便用力程度，以及便秘的嚴(yán)重程度。因此利那洛肽可作為治療功能性便秘的一線用藥之一，市場(chǎng)前景廣闊。
[0004]利那洛肽，由14個(gè)氨基酸組成的多肽，分子式為C59H79N15O21S6,分子量為1526.74。利那洛肽肽鏈中包含在Cys與Cys之間成環(huán)的三對(duì)二硫鍵(三對(duì)二硫鍵為1_6、2_10、5_13)，
其結(jié)構(gòu)式如下:
[0005]
【權(quán)利要求】
1.一種利那洛肽的純化方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1:采用高效液相色譜法對(duì)利那洛肽粗肽進(jìn)行純化，所述高效液相色譜法以多孔石墨化碳為固定相，粗肽溶液上樣后，以含有Y -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相A相，以乙腈為流動(dòng)相B相進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液； 步驟2:采用高效液相色譜法對(duì)步驟I所得洗脫液進(jìn)行轉(zhuǎn)鹽，所述高效液相色譜法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，步驟I所得洗脫液上樣后，以冰醋酸水溶液為流動(dòng)相A相，以乙腈為流動(dòng)相B相進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，凍干即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，按g/mL計(jì)，步驟I所述流動(dòng)相A相中的Y-環(huán)糊精濃度為0.2%-1.0%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟I所述流動(dòng)相A相中的磷酸鹽的摩爾濃度為10mM~30mM。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟I所述流動(dòng)相A相中的磷酸鹽選自磷酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸銨或磷酸二氫銨中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟I所述流動(dòng)相A相溶液的pH為2.0~4.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟I所述梯度按照流動(dòng)相B相的百分比為
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟2所述流動(dòng)相A相中的冰醋酸水溶液中冰醋酸的體積百分濃度為0.1%~θ.5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟2所述梯度為
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述純化方法，其特征在于，步驟2所述凍干前還包括對(duì)收集的洗脫液進(jìn)行濃縮步驟。
【文檔編號(hào)】C07K1/20GK103848893SQ201210523956
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月7日
【發(fā)明者】覃亮政, 潘俊鋒, 馬亞平, 袁建成 申請(qǐng)人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司