專利名稱：通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物類生化試劑的化學(xué)制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法。
背景技術(shù)：
磷氨米酮一Phosphoramidon (又名磷酰二肽)是1972年首先由日本科學(xué)家Ume z awa等從鏈霉菌(51 trep tomyces tanashiensis)的培養(yǎng)液中分離得到的一種含磷的天然糖肽類化合物。磷氨米酮能夠在嗜熱菌蛋白酶(Thermolysin)的活性位點(diǎn)形成非常強(qiáng)的鍵合，對嗜熱菌蛋白酶有非常強(qiáng)的抑制作用。嗜熱菌蛋白酶及其家族金屬蛋白酶(Thermolysin-like proteinases, TLPs)具有良好的熱穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)切割活性,廣泛的應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞工程等眾多生物和醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。例如，嗜熱菌蛋白酶被用來進(jìn)行蛋白質(zhì)序列分析、蛋白質(zhì)純化、細(xì)胞外組織解離、肽鍵逆向合成、生物催化轉(zhuǎn)化等等。因此，作為與嗜熱菌蛋白酶配合使用的強(qiáng)力抑制劑，磷氨米酮在這些領(lǐng)域亦有著廣泛的應(yīng)用。目前，磷氨米酮作為常規(guī)的生物試劑，每年有大量的市場需求。但是該化合物依賴生物提取，需要大量從美國和日本進(jìn)口，價(jià)格相當(dāng)昂貴。由此可見，利用化學(xué)方法大量、高效的合成高純度的該天然產(chǎn)物在實(shí)際應(yīng)用方面都有著重要的意義。從磷氨米酮發(fā)現(xiàn)至今的近三十年時(shí)間里，有關(guān)該化合物化學(xué)合成方法的報(bào)道非常有限，而且產(chǎn)率非常低。目前，文獻(xiàn)報(bào)道的磷氨米酮或其糖磷酰胺結(jié)構(gòu)片段的合成有以下四種方法。1、1975年，Umezawa等以a -L-鼠李糖_1_磷酸單酯為原料，以羰基二咪唑{N, -Carbonyl diimidazole, 0)1)為縮合試劑,在干燥的DMF中與L-亮氨酸-L-組氨酸二肽反應(yīng)。粗產(chǎn)物經(jīng)纖維素和硅膠柱層析，離子交換色譜純化，最后結(jié)晶得到磷氨米酮類似物，總產(chǎn)率6%。2、1995年，法國化學(xué)家De Nanteuil等以2，3，4-三乙?；罄钐?、二氯磷酸苯酯和亮色二肽乙酯·為原料在堿性條件下在氯仿中反應(yīng)的到全保護(hù)的磷氨米酮前體。氫氧化鈉脫除全部保護(hù)基后，磷氨米酮經(jīng)反相HPLC純化，總產(chǎn)率約6%。3、2003年，清華大學(xué)的孫麒等以及2006年,美國Vanderbilt大學(xué)的Johnston等,分別報(bào)道了使用糖基1_氫亞磷酸單酯前體通過碘氧化偶聯(lián)反應(yīng)合成磷氨米酮分子結(jié)構(gòu)中糖磷酰胺片段及類似物的方法，產(chǎn)率為35%-64%。但是，這一類磷氨米酮類似物及前體極性很大，純化難度大。4、2008年,荷蘭Leiden大學(xué)的Filippov等報(bào)道了以亞磷酰胺二酯原料通過活化磷酰4，5- 二氰基咪唑中間體利用一鍋法合成磷氨米酮分子結(jié)構(gòu)中糖磷酰胺片段的方法，產(chǎn)率僅為19%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種實(shí)用、生產(chǎn)成本低、產(chǎn)率高的通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法。本發(fā)明的通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，包括以下四個(gè)步驟:
1、利用α-L-三乙酰鼠李糖，芐氧基二異丙基氨基亞磷酰氯在堿性條件下生成亞磷酰胺中間體；2、經(jīng)弱酸催化水解得到a -L-鼠李糖基-1-氫亞磷酸二酯中間體；3、利用氧化偶聯(lián)方法將與亮色二肽芐酯氮端反應(yīng)得到磷酰胺前體；4、最后采用一鍋法，氫化和去乙?；摮柞０非绑w的全部保護(hù)基，經(jīng)葡聚糖凝膠層析純化得到磷氨米酮，其合成路線如下:
權(quán)利要求
1.一種通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，其特征在于:它包括以下四個(gè)步驟: (I)、利用a -L-三乙酰鼠李糖，芐氧基二異丙基氨基亞磷酰氯在堿性條件下生成亞磷酰胺中間體；(2)、經(jīng)酸催化水解得到a -L-鼠李糖基-1-氫亞磷酸二酯中間體；(3)、利用氧化偶聯(lián)方法將與亮色二肽芐酯氮端反應(yīng)得到磷酰胺前體；(4)、最后采用一鍋法，氫化和去乙酰化脫除磷酰胺前體的全部保護(hù)基，經(jīng)葡聚糖凝膠層析純化得到磷氨米酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，其特征在于:步驟(I)中，a-L-三乙酰鼠李糖與芐氧基二異丙基氨基亞磷酰氯的摩爾比例為1:1_3，縛酸用的有機(jī)堿為:三甲胺、三乙胺、三正丙胺、三異丙胺、三正丁胺、三異丁胺、三戊胺、三己胺、三辛胺、甲基嗎啉、於甲基環(huán)己胺、1，4-二甲基哌嗪、二異丙基乙基胺、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0] i^一碳-7-烯中的任意一種，鼠李糖與有機(jī)堿的摩爾比例為1: 1-5，反應(yīng)溶劑為無水二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、乙醚、乙腈、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)中的任意一種，反應(yīng)溫度在-80°C至+80°C，反應(yīng)時(shí)間在30分鐘至3小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，其特征在于:步驟(2)中，亞磷酰胺中間體水解反應(yīng)中使用的酸性催化劑為:1"-四氮唑、4，5-二氰基咪唑、1，2，4-三氮唑、4-硝基苯酚、於羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑、咪唑鹽酸鹽、甲基咪唑鹽酸鹽、吡啶鹽酸鹽、吡啶對甲苯磺酸鹽、三乙胺鹽酸鹽中的任意一種，反應(yīng)溶劑為乙腈、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)中的任意一種，反應(yīng)溫度在-50 °C至+80 °C，反應(yīng)時(shí)間在10分鐘至2小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，其特征在于:步驟(3)中，氧化偶聯(lián)反應(yīng)中使用的氧化劑為:四氯化碳、六氯乙烷、四溴化碳、溴代琥珀酰亞胺、碘中的任意一種，氫亞磷酸二酯與氧化劑的摩爾比為1:5_30，有機(jī)堿為三甲胺、三乙胺、三正丙胺、三異丙胺、三正丁胺、三異丁胺、三戊胺、三己胺、三辛胺、甲基嗎啉、於甲基環(huán)己胺、1，4-二甲基哌嗪、二異丙基乙基胺、1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯、吡啶、2，6- 二甲基吡啶中的任意一種，中間體氫亞磷酸二酯與有機(jī)堿的摩爾比例為1:2-20 ;反應(yīng)溶劑為二氯甲烷、1，2_ 二氯乙烷、氯仿、乙醚、乙腈、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)中的任意一種，反應(yīng)溫度在-50 °(:至+80 °C，反應(yīng)時(shí)間在15分鐘至3小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，其特征在于:步驟(4)中，反應(yīng)中使用的溶劑為:無水甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、乙腈、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)中的任意一種，氫氣反應(yīng)的壓力在1-5大氣壓，催化劑可使用磷酰胺前體5%-10%重量比例的5%-10%的鈀碳或鈀碳酸鈣或鈀氧化鋁或雷尼鎳，反應(yīng)時(shí)間在1-5小時(shí)，溫度在O °(:至50 °C之間，脫乙?；磻?yīng)中使用的有機(jī)堿為甲醇鈉、碳酸鉀、氨/甲醇溶液中的一種，磷酰胺前體與有機(jī)堿的摩爾比例為1:5-50，反應(yīng)時(shí)間在3-10小時(shí)，溫度在0-50℃。
全文摘要
一種通過氫亞磷酸二酯中間體合成磷氨米酮的方法，包括以下步驟利用α-L-三乙酰鼠李糖，芐氧基二異丙基氨基亞磷酰氯在堿性條件下生成亞磷酰胺中間體；經(jīng)弱酸催化水解得到α-L-鼠李糖基-1-氫亞磷酸二酯中間體；利用氧化偶聯(lián)方法將與亮色二肽芐酯氮端反應(yīng)得到磷酰胺前體；最后“一鍋法”氫化和去乙?；摮柞０非绑w的全部保護(hù)基，經(jīng)葡聚糖凝膠層析純化得到高純度磷氨米酮。本發(fā)明通過對L-鼠李糖、亞磷?；噭┖土辽娜齻€(gè)合成片段的保護(hù)基進(jìn)行設(shè)計(jì)與優(yōu)化，最大程度地簡化產(chǎn)物前體脫除保護(hù)的步驟，并利用新型氫亞磷酸二酯中間體和氧化偶聯(lián)的方法極大提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率，為磷氨米酮的化學(xué)合成建立了一種新的方法。
文檔編號(hào)C07K1/16GK103242432SQ20131020473
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月7日
發(fā)明者孫麒, 龔珊珊, 楊慶昆, 蒲守智, 劉國棟, 多樹旺, 肖強(qiáng) 申請人:江西科技師范大學(xué)